El dogma central de la Biología Molecular
Replicación
Transcripción
• En la transcripción, la
información almacenada en
forma de DNA, es transferida
al RNA.
Traducción
Proteína
1
Lehninger. Principios de Bioquímica
TRANSCRIPCIÓN
•Durante la transcripción, los
enzimas RNA polimerasas
sintetizan RNA utilizando DNA
como molde.
•Durante la transcripción, el
DNA no se transforma en
RNA.
2
TRANSCRIPCIÓN
•La molécula de DNA de hebra doble es un archivo de la información.
•Las moléculas de RNA de hebra simple son transportadores de la información
3
RNA
•El RNA es un polímero lineal formado por
ribonucleótidos unidos entre sí por enlaces
fosfodiéster 5’-3’.
•El azúcar es ribosa.
•Las bases nitrogenadas que lo componen son
adenina, uracilo, citosina y guanina.
•Las moléculas de RNA son monocatenarias pero
pueden existir apareamientos de bases A-U y C-G
dentro de la misma cadena debido a la existencia
de horquillas y bucles.
•El DNA de hebra simple puede hibridar con RNA
mediante los siguientes emparejamientos:
A-U
T-A
C-G
G-C 4
TIPOS DE RNA
• RNA mensajero (mRNA). Transporta la
información genética desde el DNA hasta los
ribosomas.
• RNA ribosómico (rRNA). Constituye los ribosomas.
80% del RNA total.
• RNA de transferencia (tRNA). Transporta los
aminoácidos durante la síntesis de proteínas.
• Otros tipos (microRNA, siRNA, snRNA, snoRNA).
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CONCEPTO DE GEN
• Un gen está formado por uno o varios fragmentos de DNA
que contienen la información necesaria para que se sintetice
una molécula funcional.
• Muchos genes codifican proteínas, pero otros codifican
rRNA, tRNA u otros tipos de RNA.
• Los genes están formados por regiones codificadoras y
regiones no codificadoras. Intrones: secuencias no
codificadoras que interrumpen las secuencias codificadoras.
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Un mismo gen puede dar lugar a miles de moléculas idénticas de RNA o a
una sola molécula de RNA dependiendo de las necesidades de la célula en
cada momento.
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GENES SIN INTRONES
•La mayoría de los genes procariotas carecen de intrones
gen gen gen
DNA
Transcripción Transcripción Transcripción
mRNA tRNA rRNA
RNA
Traducción
Proteína
Proteína 8
GENES CON INTRONES
• En eucariotas existen frecuentemente porciones
internas del gen que no se ven reflejadas en el RNA
maduro a pesar de que sí se han transcrito. Estas
zonas también forman parte del gen y se denominan
intrones.
• Las zonas del gen que sí aparecen reflejadas en el
RNA maduro se denominan exones.
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DISTRIBUCIÓN DE EXONES E INTRONES DE
LOS GENES HUMANOS FACE-1 Y FACE-2
FACE-1
I II III IV V VI VII VIII IX X
0 10 20 30 40 kb
FACE-2
I II III IV V VI VII VIII
I II III IV VVI VII VIII
0 1 2 3 4 kb
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GENES CON INTRONES
•En eucariotas, existen genes con y sin intrones
Exón Exón Exón Exón
DNA (gen)
Intrón Intrón Intrón
Transcripción
RNA
(Transcrito primario)
Procesamiento o “splicing”
RNA maduro
(mRNA, rRNA, tRNA)
Traducción (si es mRNA)
Proteína 11
MENSAJEROS MONOCISTRÓNICOS Y
POLICISTRÓNICOS
• Los mRNAs procariotas son frecuentemente policistrónicos: contienen la
información codificante de varias proteínas independientes.
• Los mRNA eucariotas suelen ser monocistrónicos: codifican una única proteína.
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TRANSCRIPCIÓN
• Síntesis de RNA usando DNA como molde.
• Catalizada por RNA polimerasas.
• Dirección de síntesis 5’-3’.
• Síntesis favorecida por la hidrólisis de PPi
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TRANSCRIPCIÓN
+1
5’-AATGCACGGACTAAGCTTAGCTACGAA-3’ Cadena codificadora
3’-TTACGTGCCTGATTCGAATCGATGCTT-5’ Cadena molde
Transcripción
5’-AAUGCACGGACUAAGCUUAGCUACGAA-3’ RNA
•La secuencia del RNA es la misma que la de la cadena codificadora del DNA pero
con U en lugar de T.
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Información genética en el genoma
•Algunos RNAs están codificados por una hebra del cromosoma y otros por
la hebra complementaria.
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REACCIÓN CATALIZADA POR LA RNA
POLIMERASA
RNA RNA
Cadena molde de DNA
Cadena molde de DNA
•Se produce un ataque nucleofílico del grupo 3’-OH del extremo de la
cadena de RNA sobre el fosfato más interno del NTP recién llegado.
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CARACTERÍSTICAS DE LAS RNA POLIMERASAS
• Requieren:
- Un molde. El molde preferente es una cadena de DNA perteneciente a
un dúplex.
- Los 4 NTPs (ATP, UTP, CTP y GTP).
-Un ión metálico divalente: Mg2+.
• No requieren iniciador o “primer”. Pueden sintetizar RNA “de novo”.
• No tienen actividad nucleasa y, por tanto, no corrigen errores.
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RNA POLIMERASAS EN PROCARIOTAS
• La RNA polimerasa cataliza las siguientes etapas de la transcripción:
1. Iniciación
2. Elongación
3. Terminación
• Realiza las siguientes funciones:
1. Localiza en el DNA los centros de iniciación o promotores de la
transcripción (elementos cis).
2. Desenrolla un tramo corto de DNA dúplex para producir un molde de
DNA de hebra simple.
3. Cataliza la formación del enlace fosfodiéster.
4. Localiza las señales de terminación de la transcripción del gen.
5. Interacciona con proteínas activadoras y represoras de la velocidad de
transcripción (elementos trans).
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PROMOTORES EN PROCARIOTAS
•Región -10, denominada caja TATA. Secuencia consenso TATAAT.
•Región -35. Secuencia consenso TTGACA.
•La orientación de la secuencia promotora determina inequívocamente la
dirección del movimiento de la RNA polimerasa. 19
INICIO DE LA TRANSCRIPCIÓN
•Unión de la RNA polimerasa a la secuencia
promotora, situada a la izquierda del extremo 5’
del gen en la hebra codificadora.
•Desenrollamiento del DNA por la propia RNA
polimerasa. Mantiene desenrollados unos 17 pb.
•Burbuja de transcripción: complejo entre la
RNA polimerasa y el DNA desenrollado.
•Formación del primer enlace fosfodiéster entre
2 NTPs emparejados con los nucleótidos +1 y +2
de la cadena molde del DNA.
•Liberación de la subunidad s tras incorporarse
aproximadamente 10 nucleótidos
20
21
ELONGACIÓN
RNA polimerasa
enrollado Hebra molde Hebra desenrollado
codificante
Punto de
Hélice híbrida elongación
RNA-DNA
RNA en
crecimiento
Desplazamiento
de la polimerasa
•La burbuja de transcripción se va desplazando a lo largo del DNA.
•A medida que el RNA va creciendo por su extremo 3’, se va despegando del
DNA por su extremo 5’. La hélice híbrida DNA-RNA es de unos 8 pb y la
región de DNA desenrollado es de 17 pb.
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SECUENCIA DE TERMINACIÓN
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TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS
Núcleo
Transcrito
primario
Procesamiento
Citosol
Transporte
Ribosoma
Ribosoma
Proteína
naciente Proteína
naciente
PROCARIOTA EUCARIOTA
• En procariotas, la transcripción y la traducción se llevan a cabo en el
citoplasma mientras que en eucariotas la transcripción se realiza en el
núcleo y la traducción en el citoplasma.
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TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS
• En procariotas, hay una sola RNA polimerasa mientras que
en eucariotas hay 3 tipos de RNA polimerasa dentro de cada
célula:
• RNA polimerasa I. Sintetiza los RNAs ribosómicos.
• RNA polimerasa II. Sintetiza los mRNAs.
• RNA polimerasa III. Sintetiza los tRNAs, un rRNA y algunos
otros RNAs especializados.
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TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS
Activador transcripcional
Enhancer Unión de Inicio de la transcripción
(sitio de unión •Factores de transcripción generales,
del activador) •RNA polimerasa II,
•Complejo mediador,
•complejo remodelador de cromatina,
•Histona acetilasas
• La iniciación de la transcripción por la RNA polimerasa II requiere factores de
iniciación basales y además: Activadores transcripcionales, un complejo
proteico Mediador y Enzimas modificadoras de la cromatina 26
PROCESAMIENTOS POST-TRANSCRIPCIONALES
• Son modificaciones que sufren los transcritos
primarios.
• Transcrito primario es la molécula directamente
sintetizada por la RNA polimerasa antes de sufrir
ninguna modificación.
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MODIFICACIONES POST-TRANSCRIPCIONALES
EN EUCARIOTAS
• Todos los transcritos primarios en eucariotas sufren
modificaciones.
• Los mRNAs son los que sufren modificaciones más
amplias:
– A) Adición de “cap” al extremo 5’.
– B) Adición de una cola de poli(A) al extremo 3’.
– C) Splicing (maduración por corte y unión). Eliminación
de intrones.
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ADICIÓN DE 5’-CAP AL mRNA
5’ del RNA en síntesis
5’ 3’
pppN1N2...
fosfatasa
Pi
ppN1N2... 7-metil-guanosina unida por un
GTP guanilil enlace 5’,5’- trifosfato a la ribosa
del primer nucleótido de los
PPi transferasa
mRNAs eucariotas.
GpppN1N2...
metil •Estabilizan el mRNA y lo
(+)
transferasa protegen de 5’-exonucleasas.
CH3-GpppN1N2...
•Identifican los mRNAs, facilitan
metil su procesamiento y transporte.
transferasa
(+) •Facilitan la traducción porque
CH3-GpppN1N2... sirven de anclaje a los ribosomas.
│ │
H3C CH3
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Lehninger. Principios de Bioquímica
ADICIÓN DE LA COLA DE POLI(A) AL
EXTREMO 3’ DEL mRNA
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SPLICING
Los pre-mRNAs contienen secuencias conservadas cortas
requeridas para el splicing:
•(5’)GU, al comienzo del intrón
•(3’)AG, al final del intrón
• A en el punto de ramificación, 20-50 nt antes del final 31
Los componentes fundamentales de la maquinaria de splicing
son 5 ribonucleoproteínas (snRNPs), complejos de 5 RNAs
nucleares pequeños (snRNAs, U1, U2, U4, U5 y U6) con
proteínas específicas.
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Splicing de los mRNAs eucariotas por el espliceosoma
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SPLICING ALTERNATIVO
• En muchos genes el splicing puede producirse de varias
formas, utilizando unos sitios de splicing u otros y dando
lugar a mRNAs maduros que codifican distintas variantes
proteicas. 34
