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Análisis Cinético de Enzimas y Inhibidores

El documento presenta 6 experimentos sobre cinética enzimática. En el primer experimento se determinan los parámetros cinéticos Vm y Km de la glucosa-6P hidrolasa a través de gráficos de Michaelis-Menten y Lineweaver-Burk. El segundo experimento representa los datos en un gráfico de Woolf-Augustinsson para determinar Vm y Km. El tercer experimento identifica tipos de inhibición mediante gráficos de velocidad frente a sustrato. El cuarto experimento calcula la constante de disociación Ki

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GUIA DE TRABAJO N° 6

1. Se hizo un seguimiento de la actividad de glucosa-6P hidrolasa, en extracto de

tejido cerebral de cobayo, obteniéndose los siguientes resultados :

[S] nM v nM/lt
1 x 10-5 150

2 x 10-5 256

1 x 10-4 600

3 x 10-4 770

5 x 10-4 818

A) Determine los parámetros cinéticos, Vm y Km de manera directa con un

gráfico Michaelis Menten y compare los resultados obtenidos con un gráfico L-
B
B) Observe el gráfico L-B construido, qué influiría más en la línea obtenida, una
desviación en la velocidad observada a una concentración de 1 x 10 -5 nM o a
una concentración 3 x 10-4nM

2. Con los mismos datos represente un gráfico de WAH en la siguiente cuadrícula

Dtermine Vm y Km . Saque al menos dos conclusiones

V
800

0 40 80
120 600 160 200 V/[S]
(x10-5)

3. En la siguiente tabla se indican las

velocidades de 400 una reacción
enzimática a distintas
concentraciones de
sustrato a) en ausencia de inhibidor
200
y (b) y (c) en presencia de una cantidad constante de dos tipos de inhibidor . Se
solicita:

a) Representar directamente y de forma gráfica los datos de V respecto a [S] en la

cuadrícula adjunta
b) Identifique cada tipo de inhibidor presente y sus contantes cinéticas.

[S] mM Vel (a) Vel (b) Vel (c)

nM/lt nM/lt nM/lt
1 2,5 1,17 0,77
2 4,0 2,10 1,25

5 6,3 4,0 2,0

10 7,6 5,7 2,5

20 9,0 7,2 2,86

c) Aplique un gráfico adicional . a su criterio para determinar constantes cinéticas

y reafirme su conclusión al identificar cada tipo de inhibidor

4. Determine la Constante de disociación Ki para la reacción obtenida como producto

de la acción de concentraciones ascendentes de un nuevo plaguicida que inhibe a
la acetil colinesterasa , si los datos de su experiencia son los siguientes

[INH] [S] 1mM [S] 3mM

mM v 1/v v 1/v

1 1.82 0.55 4 0.25

2 1.43 0.70 3.33 0.3

5 0.87 1.15 2.22 0.45

10 0.53 1.89 1.43 0.70

5. En la siguiente tabla se indican las velocidades de una reacción enzimática en

unidades arbitrarias . Represente la gráfica directa de % de velocidad máxima
versus concentración de sustrato

[S] % Vm
(unidades arbitrarias)
5 6
10 16

20 38

30 58

40 76

50 90

100 97

a) Qué conclusiones puede sacar de la cinética obtenida?

6. En el siguiente experimento con la enzima fosfatasa ácida de semillas de trigo

germinadas se varió la concentración de la enzima en cubeta a dos concentraciones
de sustrato y se obtuvieron los resultados siguientes:

Construya un gráfico que evidencie el comportamiento de la reacción en función a la cantidad de

enzima añadida

a) Que pasa si se divide la velocidad registrada entre la cantidad de enzima añadida al

ensayo…. Conoce algún concepto relacionado a ello ?
[Link] la Constante de disociación Ki para la reacción obtenida como producto de la
acción de concentraciones ascendentes de un nuevo plaguicida que inhibe a la acetil
colinesterasa , si los datos de su experiencia son los siguientes