Ana María García Cepero MsC. PhD.

• La terapia génica
• Es la introducción de ADN en un paciente para tratar una
enfermedad genética.
• El ADN que se introduce por lo general contiene un gen que actúa para
corregir los efectos de una mutación causante de enfermedad.
• En este caso el nuevo DNA o gen actúa como un medicamento
• Es una técnica experimental para la “corrección de genes
defectuosos”, alterando así el curso de una enfermedad.
• Se utiliza para combatir enfermedades genéticas hereditarias
• Se ha aplicado para la manipulación genética de animales o
humanos
• En áreas como la terapia del cáncer, enfermedades monogénicas,
enfermedades infecciosas, enfermedades vasculares, enfermedades
autoinmunes, entre otras.
• La terapia génica
• Para el desarrollo de trabajos de investigación o la aplicación de
tratamientos con terapia génica se requiere permisos de entidades
regulatorias
• Comité Asesor de ADN Recombinante (RAC) es el órgano de control en
temas de terapia génica del Instituto Nacional de Salud (NIH, USA).
- Recombinant DNA Advisory Committee - NIH
[Link]
• Al 2014 numerosas investigaciones en trastornos genéticos y otras
enfermedades se encuentran actualmente en diversas etapas de
ensayos clínicos.

- Anemia falciforme
 [Link]

• La terapia génica
/full/10.1002/jgm.3015
• La terapia génica
• La terapia génica
• algunos protocolos de terapia génica han sido, aprobados y
publicado para uso clínico por los entes reguladores

[Link]
• La terapia génica
• Enfoques de terapia génica (Según tipo de célula a tratar)
• Terapia génica somática
• Las células somáticas son las células no reproductivas de un organismo
(distintos de células sexuales)
• Células sanguíneas, células de médula ósea, células intestinales etc.
• Implica la inserción de genes funcionales y expresables en el genoma de
una célula somática con el objetivo de corregir una enfermedad
genética.
• La corrección de la enfermedad genética es permanente.
• No será heredada por la descendencia del paciente
• Cualquier efecto será restringido sólo al paciente individual.
• Terapia génica germinal
• Las células reproductivas (esperma u óvulos) de un organismo constituyen
la línea de células germinales.
• Introducción de genes funcionales
en este tipo de células integrándolos
a en sus genomas.
• Es heredable (Pasa a generaciones
posteriores).
• Se utiliza para evitar transmitir
defectos genéticos a la descendencia
• Por razones técnicas, de seguridad y
éticas, esta terapia no se utiliza.
• Principios de la terapia génica
• La corrección funcional de un gen defecto se puede llevar a
cabo por tres métodos:
1. Reemplazando el gen defectuoso por el gen correcto
2. Corrección del gen defectuoso
3. Aumento de la presencia del gen
• Aumento del número de copias del gen (adicionar copia del gen)
• Aumento en los niveles de expresión del gen (mejorar/adicionar
promotores)
• Este último el más efectivo
• Principios de la terapia génica
• Los pasos implicados en la terapia génica:
1. Identificación y caracterización del gen a intervenir.
• El primer paso es identificar el defecto genético y crear
un vector con la copia funcional del gene para ser
clonado.
2. Elección del vector.
• Selección del sistema más adecuado de entrega del gen:
• Viral
• Plásmido

[Link]
• Principios de la terapia génica
• Los pasos implicados en la
terapia génica:
3. Clonación del gen.
• El vector-gen debe estar diseñado
para permitir la expresión
apropiada del gen en el interior
del paciente.
4. Elección del método de
administración. In vivo Ex vitro

• El gen funcional se transfiere al

paciente, en un vector
adecuado con un método
adecuado de la entrega.
• Hay dos tipos de terapia génicas
A. Terapia génica in Ex vivo
(Entrega basada en células)
B. Terapia génica in In vivo (Entrega
directa)
A. Tipos de terapia génicas: In vivo Ex vivo

• Terapia génica Ex vivo

• Implica la transferencia
de genes en células
cultivadas que luego son
reintroducidas en el paciente
• El proceso de introducción
de los genes en las células se se
realiza fuera del paciente
• Esta técnica consiste en
los siguientes pasos:
1. Clonación del gen que suplirá las funciones del gen defectuoso en un
vector adecuado
2. Aislamiento de las células
• Tejidos seleccionados (de médula ósea, células madre) con defecto genético
de un paciente que se quiere restaurar.
3. Crecimiento de las células en cultivo.
4. Introducción del gen terapéutico para corregir el gen defectuoso.
5. Selección y crecimiento de las células corregidas genéticamente
6. Trasplante de las células modificadas al paciente.
• No desarrolla reacciones inmunológicas adversas y es bastante eficaz
• Son células propias del paciente
B. Tipos de terapia génicas:
• Terapia génica In vivo
• La entrega de los genes se hace directamente en las células de un tejido
en particular
• Esta técnica consiste en
1. Clonación del gen defectuoso en vector adecuado
2. Introducción del vector en el tejido del paciente
In vivo Ex vivo
• Vehículos de transferencia de genes
• Virales
a) Retrovirus
b) Adenovirus
c) Virus adeno-asociado (AAV)
• Vectores no virales (en liposomas).
a) Plásmidos
b) Otros vectores (Experimentales)
• Ribozimas (experimental)
• Oligonucleótidos (RNA antisentido y RNA de interferencia).
• CRISPR/Cas9
• La terapia génica - Historia
• A principios de 1900, la deficiencia de adenosina deaminasa (ADA),
se registró como la primera condición que debía tratarse con terapia
génica.
• La deficiencia ADA, es un desorden autosómico recesivo hereditario, que
daña el sistema inmune y causa la enfermedad denominada
Inmunodeficiencia Combinada Severa” (SCID).
• Las personas con SCID carecen de protección inmune a prácticamente
todos a las bacterias, virus y hongos.
• Son propensos a las infecciones repetidas y persistentes que pueden ser muy
graves o potencialmente mortales.
• Estas infecciones son causadas a menudo por los organismos "oportunistas" que
generalmente no provocan enfermedades en las personas con un sistema
inmune normal.
• Se diagnosticadas en los primeros 6 meses de vida.
• Sin tratamiento, estos bebés generalmente no sobreviven más allá de los
2 años
• La transferencia de genes terapéuticos en las células madre en el ámbito
clínico se intentó por primera vez para esta condición en los 80´.
• El tratamiento de esta enfermedad con terapia génica fue un hito en la historia
médica.
• Ejemplos y referentes de la terapia génica para tratamiento
de enfermedades genéticas
• Tratamiento de la deficiencia de adenosina deaminasa
• La inmunodeficiencia severa combinada (SCID) o enfermedad del chico de
la burbuja El chico de la burbuja de plástico (1976)
• 8 de 10 niños tratados por terapia génica son curados
• Como se hace el tratamiento?
• Corta duración Terapia de entrega basada en células o Ex vivo
• Inoculación
frecuente de células
modificadas
• Ejemplos y referentes de la terapia génica para tratamiento
de enfermedades genéticas
• La hipercolesterolemia familiar
• Los pacientes carecen receptores de la lipoproteína de baja densidad (LDL)
en sus células del hígado.
• Como resultado, el colesterol LDL no se metaboliza en el hígado, dando
lugar a enfermedades arterial de bloqueo e infarto.
• Como tratarlos?
Terapia de entrega basada en células o Ex vivo

Vector retroviral

Los hepatocitos
tratados se
establecen en
el hígado
• Ejemplos y referentes de la terapia génica para tratamiento
de enfermedades genéticas
• Tratamiento de la fibrosis quística (CF)
• Es una enfermedad genética fatal
• Se caracterizada por la acumulación de
moco en el tracto respiratorio y los
pulmones.
• Las vías respiratorias y los pulmones se
deshidratan y quedan con un moco espeso
y pegajoso
• Los pacientes son altamente susceptibles
a las infecciones bacterianas en los
pulmones.
• Enfermedad asociada con la proteína transmembrana reguladora de
la fibrosis quística (CFTR), la cual no es activa en estos pacientes
• Como tratarlo?
1. Transferencia génica usando Virus Asociados a Adenovirus como vector
2. Transferencia génica medida por liposomas catiónicos
En ambos casos es terapia de entrega directa o In vivo
 • Ejemplos y referentes de la terapia génica para tratamiento
de enfermedades genéticas
• Tratamiento de la fibrosis quística (CF)
En ambos casos es terapia de entrega directa o In vivo
1. [Link]
génica usando
Virus
Asociados a
Adenovirus
como vector
• Ejemplos y referentes de la terapia génica para tratamiento
de enfermedades genéticas
• Tratamiento del Cáncer
• La terapia génica es una alternativa de tratamiento e incluye varios
acercamientos
1. Uso del factor de necrosis tumoral
• Es una proteína producida por los macrófagos humanos que proporcionan
defensa contra las células cancerosas.
• Uso de un tipo especial de células del sistema inmune, los linfocitos
infiltrantes de tumor (TIL), mejorar la capacidad de lucha contra el cáncer.

Terapia de
entrega basada
en células o Ex
vivo
• Ejemplos y referentes de la terapia génica para tratamiento
de enfermedades genéticas
• Tratamiento del Cáncer
• La terapia génica es una alternativa de tratamiento e incluye varios
acercamientos
2. Terapia génica suicida
• Se trata de transferir a las células tumorales un gen que codifique una
proteína capaz de activar un pro-fármaco inactivo que luego será activado.
Terapia de entrega directa • Se usa como profarmaco el Ganciclovir
o In vivo • Se usa el gen de la timidín-kinasa (TK)
Timidín-kinasa • Fosforila el ganciclovir a ganciclovir-
trifosfato
• Interfiere con la replicación del ADN
ganciclovir-trifosfato y provocar la muerte de las células
que están dividiéndose
• Con el efecto espectador (bystander),
la timidín-kinasa producida en unas
células puede pasar a las células
vecinas, matando las células
Ganciclivir circundantes
• Tumores cerebrales
• Tumores hepáticos
• Ejemplos y referentes de la terapia génica para
tratamiento de enfermedades genéticas
• Tratamiento del Cáncer
• La terapia génica es una alternativa de tratamiento
e incluye varios acercamientos
3. Terapia de reemplazo de genes
• Uso de sistemas de vectores para reemplazar un gen
dañado por un gen normal.
• El gen llamado p53 codifica para una proteína con un peso
molecular de 53 kilodaltons
• p53 se considera un gen supresor de tumor, ya que la
proteína que codifica se une con el ADN e inhibe la
replicación.
• Las células tumorales de varios tejidos (diferentes tipos de
tumores) tienen genes alterados de p53
• Se considera un factor causante del desarrollo tumoral.
• Uso de sistema de adenovirus con el gen p53 normal
• Terapia de entrega directa o In vivo