UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
Escuela de Microbiología
Microbiología Industrial y Ambiental
Asignatura: Biología celular y laboratorio
Informe N° VI
Docente:
Preparado por:
Medellín, Colombia
2019-1
RESULTADOS CRUDOS:
Tabla 1: Valoración de CO2 producido en glucólisis, en diversos tiempos, con diferentes
monosacáridos y disacáridos.
Burbujas de CO2 liberados en glucólisis de monosacáridos y disacáridos por S.
cerevisiae (mm de burbuja).
Tiemp Control Glucos Fructos Galactos Sacaros Maltos Lactos Glucos
o (min) negativ a a a a a a a+
o NaF
0 3 7 10 6 12 1 3 0,5
10 4 40 45 10 43 1 4 4
20 7 65 68* 15 65 4 7 6
30 10 68* 68* 19 68* 8 8 6
40 10 68* 68* 20 68* 9 9 6
50 11 68* 68* 20 68* 10 11 6
*: Se consumió el sustrato en su totalidad.
RESULTADOS PROCESADOS:
Gráfica 1: CO2 producido en glucólisis por S. cerevisiae vs. Tiempo.
CO2 producido en glucólisis vs. Tiempo.
80
70
Control negativo
Producción de CO2 (mm)
60
Glucosa
50 Fructosa
Galactosa
40
Sacarosa
30 Maltosa
20 Lactosa
Glucosa + NaF
10
0
0 10 20 30 40 50 60
Tiempo (min)
ANÁLISIS DE RESULTADOS:
Saccharomyces cerevisiae es un microorganismo facultativo, que cuenta con la capacidad
de realizar fermentación en ausencia de oxígeno, o también la pueden llevar a cabo en un
proceso más complejo, donde al saturarse la célula con sustrato, en condiciones aerobias se
llega a un efecto Crabtree, en el cual al encontrarse el microorganismo bajo estrés, prefiere
realizar una oxidación incompleta de ese sustrato presente (1).
S. cerevisiae permite estudiar el proceso de glucólisis, siendo directamente proporcional a
la liberación de burbujas del CO2, ya que en su ruta fermentativa alcohólica, hay un
proceso de descarboxilación del Piruvato, donde se libera CO2 al medio, dándose de esta
forma:
Glucosa 2 Piruvato 2 Aceltaldehído 2 Etanol
+
2NAD+ 2NADH co2 2NADH 2NAD
En la gráfica 1 se logran evidenciar el efecto que tienen los monosacáridos: glucosa,
fructosa y galactosa, y los disacáridos: sacarosa, maltosa y lactosa, mientras que el control
negativo está compuesto por levadura con agua destilada, y la valoración de inhibición
enzimática de la glucólisis de caracteriza con el tubo que contiene además del
microorganismo y la glucosa, un fluoruro: NaF. Inicialmente para analizar el proceso que
se da en el control negativo, como se mencionó anteriormente se debe tener en cuenta que
el microorganismo en una levadura comercial, la cual entre otras cosas, cuenta en sus
componentes con almidón de maíz, el cual de por sí ya está funcionando como una fuente
de Carbono y energía para realizar el proceso de fermentación, que se activa
enzimáticamente cuando se le agrega algún líquido, en este caso, al contar con agua
destilada, se está fomentando un proceso de fermentación, aunque se va a dar mucho más
lento que la de los mono y disacáridos, ya que el almidón es una macromolécula compuesta
por dos polisacáridos; de esta forma, a pesar de evidenciarse una leve producción de CO2,
sigue siendo un buen criterio como control negativo, en este caso. La actividad
fermentativa sobre los monosacáridos se comprobó más evidente en fructosa, ya que en la
ruta metabólica de la glucólisis, la fructosa entra a fosforilarse como Fructosa 6 fosfato,
ahorrando la fosforilación e isomerización de la glucosa, por esto se esperaba, y se ratificó,
un proceso metabólico más rápido, donde la liberación de CO2 en tiempo, era mayor; en
cuanto a la galactosa, aunque es un monosacárido, su proceso se da un poco más lento, ya
que requiere de varios pasos preliminares para entrar a la glucólisis, entre ellos está la
actividad de varias enzimas como B-galactosidasa, galactokinasa, galactosa-1-fosfato
uridiltransferasa y fosfoglucomutasa, este proceso se conoce como la ruta Leloir, que entra
a la ruta de glucólisis como glucosa 6 fosfato. (2) Por otro lado, los disacáridos de por sí
presentan un paso adicional, ya que el enlace glucosídico que une los monosácaridos se
debe romper (hidrolizar), independiente de cuáles sean estos monosacáridos por los que
esté compuesto, aquel proceso enzimático se lleva a cabo por hidrolasas; la sacarosa es un
disacárido compuesto por fructosa y glucosa, al romperse el enlace glucosídico por la
acción de invertasa, quedan estos dos monosacáridos que ingresan muy fácilmente a la
glucólisis, como se mencionó antes, la fructosa entra más rápido que la glucosa, de esta
forma, la sacarosa se evidencia como uno de los sustratos más eficientes, a pesar de que
debe contar con una hidrolasa en su expresión enzimática. La maltosa y lactosa, requiere de
enzimas maltasa y lactasa, correspondientes para cada una, aunque conocemos que la
maltosa es un disacáridos de dos glucosas, y se esperaría que estas tengan una buena
eficiencia en glucólisis, se debe tener en cuenta que el microorganismo no tiene todos sus
genes “activos” en todo momento, así que, al encontrarse en un medio con maltosa o
lactosa, este se puede tardar cierto tiempo en activar aquellas enzimas que funcionan para el
metabolismo de los sustratos, por esto se dio un proceso menos eficiente en ambos
disacáridos. En el tubo que contaba con glucosa y NaF, se esperaba un rango de inhibición
significante, el cual se comprobó, ya que en comparación con el tubo que contenía solo
glucosa, la diferencia es de hasta 10 veces más, así se reitera que la presencia de fluoruros,
inhibe la actividad de la Enolasa, enzima que transforma el 2- Fosfoglicerato a PEP,
evitando la formación de Piruvato, y por ende, no le da lugar a la fermentación; este NaF es
eficiente, debido a que inhibe a nivel enzimático de forma competitiva, es decir, compite
con el sustrato que usa la Enolasa, por el sitio activo, pero también se debe tener en cuenta
que se da una unión no covalente, reversible, y por ello se alcanza a evidenciar una leve
producción de CO2. (3)
• ¿Cómo es la ruta metabólica de la fermentación alcohólica?
La fermentación alcohólica parte de la fosforilación a nivel de sustrato en la glucólisis,
donde la glucosa pasa por diversas reacciones y produce 2 moléculas de Piruvato, que al
mismo tiempo están proporcionando poder reductor en forma de NADH. A partir de allí el
proceso de respiración aerobia o anaerobia no es posible, debido a la ausencia de un aceptor
final de electrones, por los Piruvato se descarboxilan y producen 2 acetaldehído, los cuales
sufren un proceso de deshidrogenación y producen 2 Etanol, en este proceso se utiliza el
poder reductor NADH que se había obtenido antes, y este actúa como un donador de
electrones, mientras que un compuesto orgánico, proveniente del mismo sustrato, actúa
como aceptor de electrones.
• ¿Cuáles son las reacciones más importantes que regulan esta ruta?
Además de las reacciones que regulan la glucólisis, las cuales se dan en: hexoquinasas,
fosfofructoquinasa y piruvato quinasa, las principales reacciones de la fermentación
alcohólica son:
- La descarboxilación del piruvato: donde el piruvato reacciona con la enzima
piruvato descarboxilasa y produce CO2 y acetaldehído.
- La deshidrogenación del acetaldehído: El acetaldehído reacciona con el NADH y
por medio de la enzima acetaldehído deshidrogenasa produce etanol.
• ¿En qué paso se forman las triosas y cuál es la enzima que allí actúa?
Las triosas se forman en la glucólisis, previo a la fase de generación de ATP, siendo la
reacción 4, donde la enzima aldolasa, permite la fragmentación en triosas de la Fructosa 1,6
bifosfato.
• ¿Cómo se llama la enzima alostérica que regula la glicólisis?
La glucolisis se ve regulada por varias enzimas alostéricas, la más importante es la
Fosfofructoquinasa-1, la cual reacciona con la fructosa 6-fosfato y produce Fructosa-1,6-
bisfosfato.
• ¿Qué otras reacciones pueden sufrir el ácido pirúvico además de la ocurrida aquí?
Además de la fermentación alcohólica es posible encontrar distintos tipos de fermentación,
entre los cuales se encuentra:
-Láctica: la cual produce ácido láctico, esta es producto de la fermentación de la lactosa.
-Acética: Produce ácido acético.
-Butírica: Produce ácido butírico.
Adicionalmente es en condiciones de respiración, es decir con presencia de un aceptor final
de electrones, el Piruvato se puede dirigir como intermediario metabólica, y acoplarse al
Ciclo de Krebs, de donde eventualmente se llegará a una CTE y se dará la fosforilación
oxidativa, que en condiciones aerobias presentaría como residuo CO2 + H2O
• ¿Nombre otros inhibidores de la ruta glucolítica, diciendo en qué lugar actúan, qué
enzimas afectan y cómo se clasifica?
-Ácido dicloro-acético: Inhibe la actividad enzimática de la enzima piruvato
deshidrogenasa kinasa.
-Yodo acetato: Inhibe la actividad de la enzima gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa,
esta inhibición es reversible y afecta la velocidad de la glicolisis.
-Arseniato: Este inhibidor interactúa con proteínas que contengan grupos tioles. En el caso
de la glicolisis, forma un complejo con el 3P glicerato, esto impide la síntesis de ATP.
CONCLUSIONES:
- El metabolismo y rendimiento de diversos monosacáridos y polisacáridos, en la
glucólisis, y eventualmente la fermentación, dependen de la capacidad enzimática
de un microorganismo, para transformar estos sustratos e ingresarlos a la ruta.
- La fructosa se podría clasificar como el sustrato más óptimo para realizar un
proceso de fosforilación a nivel de sustrato, ya que comprende un proceso rápido y
eficiente para obtención de metabolitos, que puede ser el etanol.
- A pesar de que la fermentación es un proceso con un rendimiento energético mucho
más bajo que el de una respiración, en condiciones adecuadas se puede dar al cabo
de minutos, y de igual forma se produce energía, usada para procesos de biosíntesis
y producción de biomasa.
BIBLIOGRAFÍA:
1. Reacciones metabólicas. METABOLISMO. [En línea]. Disponible en:
[Link]
[Link]
2. Cómo hacer levadura en polvo. Eva Muerde La Manzana. [En línea]. Disponible en:
[Link]
lactosa-y-regulacion-del-operon-lac-de-lactobacillus-casei/iv-1-transporte-y-metabolismo-
de-la-lactosa-en-bacterias-lacticas/iv-1-1-ruta-de-leloir/
3. Metabolismo de glúcidos. Degradación de glúcidos. [En línea] Disponible en:
[Link]
