FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ASIGNATURA: ANALISIS CLINICO II
TEMA: COLESTEROL TOTAL
DOCENTE: MG. ELISA DIONISIO.
TURNO: NOCHE CICLO: VII
INTEGRANTE:
AYLLÓN CHAMBERGO, HANS.
CHOQUEHUANCA POMA, LIZ.
CUBAS VÁSQUEZ DEILI.
GUERRA LEÓN, MARY CRUZ.
HUAPAYA CHAHUA, MARY CRUZ.
LLANTOY GAVILAN, SHEYLA.
MORALES RODRÍGUEZ, EDGAR.
POMA ZANABRIA, KARINA.
VILA RODAS, ANA.
2020
¿QUE ES EL COLESTEROL?
Es el esteroide más abundante
presente en los animales, se
encuentra en tejido blando y
plasma, ya sea en forma libre o
combinado con un acido graso
de cadena larga, en forma de
colesteril éster para su
almacenamiento. Se transporta
en el plasma por medio de
lipoproteínas.
IMPORTANCIA DEL COLESTEROL
Base fundamental para la formación de las membranas de las células.
En nuestros órganos es la materia prima, para la síntesis de hormonas como son los
estrógenos, testosterona.
Presentes en la formación de hormonas corticoides, implicadas en procesos fisiológicos
como regular la inflamación, el sistema inmunitario, metabolismo de los hidratos de
carbono y respuesta frente al estrés.
Es precursor de los ácidos biliares, sustancias que forman parte de la bilis, cuya función es
facilitar la digestión de los alimentos grasos.
ESTRUCTURA DEL COLESTEROL
El colesterol y sus derivados provienen de una
El colesterol, los ácidos biliares, las hormonas
molécula cíclica formada por 3 anillos
esteroideas tiene esta estructura en común
hexagonales ABC y un anillo pentagonal por eso
es CICLOPENTANOPERHIDROFENANTRENO.
ESTRUCTURA DELCOLESTEROL
• Dos radicales metilo radicales en las
posiciones C-10 y C-13.
• Una cadena alifática ramificada de 8
carbonos en la posición C-17.
• Un grupo hidroxilo en la posición C-3.
• Una doble enlace entre los carbonos C-5 y
C-6.
Lo mas importante en la estructura del
colesterol radica en el C- 3 posee dos líneas un
OH ó un H.
El Colesterol se sintetiza principalmente en el
Hígado
El Colesterol se sintetiza a partir de
Acetil- CoA y el NADPH
Las enzimas que catalizan la síntesis de
Colesterol se localizan en el Citosol y en
el Retículo
endoplasmático.
La síntesis del Colesterol se dan en
4 etapas
1. Síntesis del Mevalonato
2. Conversión del Mevalonatoen 2 unidades de Isopreno
3. Isoprenos activados (6 unidades) se condensan
para formar Escualeno.
[Link]ón del Escualenoen el núcleo esteroide de
4 anillos
Valores Normales de colesterol
Valores Normales de Triacilgicerido
Hipercolesterolemia Hipocolesterolemia
Colesterol
Enfermeda
des
Coronarias Obesidad
MATERIALES Y EQUIPOS:
• Pipetas
• Tubos de ensayo 13x100mm.
• Gradillas.
• Jeringas descartables x 5 mL., aguja hipodérmica estéril.
• Algodón, ligadura.
• Agua destilada.
• Micro pipetas de 0 a 50uL.Y 1000uL.
• Punteras amarillas y azules
• Centrifuga.
• Espectrofotómetro.
Reactivo:
• Set de reactivo para colesterol
(enzimático)
COMPOSICIÓN DEL COLESTEROL TOTAL (CHOD - PAD)
• Reactivos:
Conservados entre 2° y 8°C. y protegidos de la luz, estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
• Composición del Reactivo Enzimático:
Buffer Pipes pH 7.3 50 mM
Colesterol éster hidrolasa > 150 U/l
Colesterol oxidasa (recombinate) > 100 U/l
Peroxidasa > 1000 U/l
4-Aminoantipirina 0.4 mM
Ácido p-hidroxibenzoico 10 mM
Azida sódica 0.1 g/dL
Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.
PROCEDIMIEN
TO:
Se ubica la vena Se coloca la ligadura, se procede a Se introduce la aguja con el bisel
prominente del brazo. realizar la asepsia con alcohol y algodón hacia arriba en ángulo de 45°.
para evitar cualquier contaminación.
Se lleva la sangre recolectada a Se obtiene sangre venosa aprox. 4
Se obtiene la muestra y la centrifuga por 10” a 3000 ml.
se utiliza el suero. RPM.
TÉCNICA OPERATORIA: EN TRES TUBOS DE ENSAYO
AGREGAR LOS SIGUIENTE.
Blanco Estándar Muestra
Reactivo 1mL 1mL 1mL Mezclar e incubar a
Enzimático temperatura
ambiente
10 ----- -----
por 10 minutos.
Agua destilada
uL -
Solución ----- 10 -----
estándar uL
Suero sanguíneo ----- ----- 10 uL
TUBO BLANCO
En el tubo de
ensayo
agregaremos
1mL de Reactivo
enzimático
TUBO ESTANDAR
TUBO
DESCONOCIDO
dicionamos 10
uL de solución
Agregamos 1mL de Reactivo A estándar.
enzimático en el tubo.
Agregamos 1mL
de Reactivo Adicionar 10 uL de
enzimático en el suero sanguíneo.
tubo. Mezclar cada uno
de los tubos.
Se formará una coloración
rosada. Luego se lleva a
leer al espectrofotómetro.
1. Blanco
2. Reactivo más el estándar
3. Reactivo más la muestra.
Colocaremos en las cubetas. El blanco, el estándar, y la muestra.
Primero se coloca el blanco, luego el estándar y luego la muestra. Leer las absorbancias a 505 nm. Llevando a
cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo.
Cálculos: Ejemplo:
Abs. Muestra 0,257
Colesterol (mg/dL) = ------------------- x 200 Colesterol (mg/dL) = ----------- x 200
Abs. Standár 0,482
Colesterol = 106.639 mg/dL
FUNDAMENTE USTED LA
1.
REACCIÓN QUÍMICA QUE SE
PRODUCE CON EL REACTIVO
ENZIMÁTICO
El colesterol por acción de las enzimas. La primera libera el colesterol de las esteres del colesterol;
y la segunda, oxida el colesterol libre produciéndose peróxido de hidrogeno. El cual la enzima
reacciona con el sistema cromogénico dando origen a un compuesto CEHque absorbe a 505 nm.
Colesterol Ester Colesterol + ácidos grasos
CHOD
Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H2O2
PAP
2H2O2 + 4-AAP + p-HBA Comp. Coloreado + 4H2O
2. ¿Que otros ensayos químicos conoce usted para
realizar la determinación de colesterol sanguino ?
Fórmula de Friedewald
El método DIRECTO más usado como referencia para determinar
el LDL-C en el plasma es la ultracentrifugación y la cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC), pero es costoso y requiere
mucho tiempo. Otros métodos para la determinación incluyen la
electroforesis y los métodos de precipitación.
3. ¿QUÉ ENFERMEDADES GENÉTICAS PUEDE
INCREMENTAR EL NIVEL DE COLESTEROL
SANGUÍNEO?
aumento de los niveles de colesterol total en sangre
HIPERCOLESTEROLEMIA: por encima de los niveles estimados 200mg/dl.
DISBETALIPOPROTEINEMIA: altas cantidades de colesterol y triglicéridos
HIPERTRIGLICERIDEMIA: exceso de triglicéridos
HIPERLIPIDEMIA: aumento de concentración plasmática
4. ¿QUE LIPOPROTEÍNAS TRANSPORTAN EL
LDL (lipoproteína de baja densidad)
COLESTEROL?
• Síntesis en el hígado
• Transporta colesterol
• Del hígado a la periferia
• Apolipoproteina ApoB-100
• Apo C-II y Apo E
• Colesterol malo/oxida en la periferia –
oxLDL
HDL(lipoproteínas de alta densidad)
• Síntesis en hígado e intestino
• Colesterol bueno
• Reservorio circulante de apoliproteinas ApoC-
II y ApoE
• Llevan colesterol periférico al hígado
• Fosfolipoproteina como principal componente
