INFORME DE LABORATORIO N° 4
FACTORES QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA
TUBO Procedimiento Resultado
TUBO En el tubo de ensayo I se agregó:
I ● 1ml de Solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer fosfato 0.1M pH 6.6
● 1,4 ml de Solución de NaCl al 2 %
● 2,6 ml de Agua destilada
Se mezcló y colocó a incubación por cinco minutos a 37 °C.
Se mezcló por inversión y continuó la incubación por 20 minutos
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo I se agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
TUBO En el tubo de ensayo II se agregó:
II ● 1 ml de solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer fosfato 0.1M pH 6.6
● 3,4 ml de Agua destilada
Se mezcló y colocó a incubación por cinco minutos a 37 °C.
Se agregó:
● 0,6 ml de Amilasa Salival al 0.25%
Se mezcló por inversión y continuó la incubación por 20 minutos
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo II se agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
TUBO En el tubo de ensayo III se agregó:
III ● 2 ml de solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer fosfato 0.1M pH 6.6
● 1,4 ml de Solución de NaCl al 2 %
● 1 ml de Agua destilada
Se mezcló y colocó a incubación por cinco minutos a 37 °C.
Se agregó:
● 0,6 ml de Amilasa Salival al 0.25%
Se mezcló por inversión y continuó la incubación por 20 minutos
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo III se
agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
TUBO En el tubo de ensayo IV se agregó:
IV ● 1 ml de solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer acetato 0.1M pH 4.6
● 1,4 ml de Solución de NaCl al 2 %
● 2 ml de Agua destilada
Se mezcló y colocó a incubación por cinco minutos a 37 °C.
Se agregó:
● 0,6 ml de Amilasa Salival al 0.25%
Se mezcló por inversión y continuó la incubación por 20 minutos
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo IV se
agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
TUBO En el tubo de ensayo V se agregó:
V ● 1 ml de solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer fosfato 0.1M pH 6.6
● 1,4 ml de Solución de NaCl al 2 %
● 2 ml de Agua destilada
Se mezcló y colocó a incubación por cinco minutos a 37 °C.
Se agregó:
● 0,6 ml de Amilasa Salival al 0.25%
Se mezcló por inversión y continuó la incubación por 20 minutos
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo V se
agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
TUBO En el tubo de ensayo VI se agregó:
VI ● 1 ml de solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer borato 0.1M pH 9.0
● 1,4 ml de Solución de NaCl al 2 %
● 2 ml de Agua destilada
Se mezcló y colocó a incubación por cinco minutos a 37 °C.
Se agregó:
● 0,6 ml de Amilasa Salival al 0.25%
Se mezcló por inversión y continuó la incubación por 20 minutos
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo VI se
agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
TUBO En el tubo de ensayo VII se agregó:
VII ● 1 ml de solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer fosfato 0.1M pH 6.6
● 1,4 ml de Solución de NaCl al 2 %
● 2.4 ml de Agua destilada
Se mezcló y colocó a incubación por cinco minutos a 37 °C.
Se agregó:
● 0,2 ml de Amilasa Salival al 0.25%
Se mezcló por inversión y continuó la incubación por 20 minutos
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo VII se
agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
TUBO En el tubo de ensayo VIII se agregó:
VIII ● 1 ml de solución de almidón al 1 %
● 5 ml de Buffer fosfato 0.1M pH 6.6
● 1,4 ml de Solución de NaCl al 2 %
● 2.0 ml de Agua destilada
El tubo VIII se puso en agua helada entre 0° y 4° por cinco
minutos.
Se agregó:
● 0,6 ml de Amilasa Salival al 0.25%
Se mezcló por inversión y continuó en agua helada por 20
minutos.
Se preparó un segundo sistema de tubos y en el tubo VII se
agregó:
● 0.5 ml del incubado
● 5 ml de HCl 0.05N
● 0,5 ml de Solución iodada
SISTEMA C:
TUBO Se agregó:
III ● 1 ml de incubado del tubo III
● 1ml de solución cúprico alcalina
Se mezcló por inversión y se colocó en baño de agua hirviendo
por 8 minutos.
Se enfrió el tubo con agua corriente
TUBO Se agregó:
V ● 1 ml de incubado del tubo V
● 1 ml de solución cúprico alcalina
Se mezcló por inversión y se colocó en baño de agua hirviendo
por 8 minutos.
Se enfrió el tubo con agua corriente
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál fueron los objetivos de la práctica?
● Evidenciar la influencia de los factores (iones activadores, pH, concentración
de enzima, concentración de sustrato, tiempo y temperatura) sobre la
velocidad de la reacción enzimática de degradación de almidón catalizada
por la enzima amilasa salival.
● Demostrar la actividad enzimática de la enzima amilasa salival bajo
condiciones específicas verificando el sustrato residual y productos
formados.
2. Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la
práctica:
● Variable independiente: Factores: pH (Buffer fosfato 0.1M pH 6.6 ▪ Buffer
acetato 0.1M pH 4.6 ▪ Buffer borato 0.1M pH 9.0), temperatura (37°C, 0-4°C),
concentración de amilasa salival, concentración de almidón, presencia de ión
activador Cl (NaCl).
● Variable dependiente: Actividad enzimática evidenciada por el color que
toma la solución.
3. Identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y
señale sus principales características.
● Enzima: Amilasa Salival
● Sustrato: Almidón
● Ión activador: Cl
4. ¿Cómo se puede evidenciar la presencia del sustrato residual en la práctica
realizada?
● Utilizamos la Prueba del Yodo, el yodo al unirse a cadenas hélices de
polisacáridos como el almidón, causa la aparición de un color azul en la
solución, distinta a la coloración amarilla por el yodo en agua. Por tanto, con
esta prueba, podemos saber si la enzima amilasa salival, encargada de
degradar el almidón, ha reaccionado o no; indicando así el color azul que no
ha reaccionado, es decir que existe sustrato residual (almidón) y el color
amarillo que sí lo ha hecho.
5. ¿Cómo se puede evidenciar los productos formados en la reacción enzimática
observada?
● Los productos del catabolismo del almidón son los azúcares reductores,
maltosa e isomaltosa; si la amilasa salival ha actuado sobre el almidón y ha
formado los productos entonces al utilizar una solución sulfato cúprica
alcalina, el cobre se va a reducir, por una transferencia de electrones por
parte del aldehído de los azúcares, y se va a precipitar formando como óxido
cuproso color naranja; sin embargo, si la enzima no ha catalizado la reacción
y no hay presencia de productos, la solución adquiere un color celeste.
6. Confeccione una lista de los factores fisicoquímicos que intervienen
modificando la velocidad enzimática en cada uno de los tubos empleados en la
práctica.
● Tubo I: Ausencia de enzima. No actividad.
● Tubo II: Ausencia de activador (NaCl). No actividad.
● Tubo III: Aumento de concentración de sustrato. Aumento de la velocidad.
● Tubo IV: pH ácido. Desnaturalización de enzima. No actividad.
● Tubo V: pH óptimo. Actividad.
● Tubo VI: pH básico. Desnaturalización de enzima. No actividad.
● Tubo VII: Disminución concentración de enzima.
● Tubo VIII: Disminución temperatura. Desnaturalización de enzima. No
actividad.
7. ¿Cuál fue el pH óptimo para que la enzima empleada en la práctica pudiera
actuar?
● pH 6,6.
8. ¿Qué función cumple el ácido clorhídrico al 0.05N empleado en la práctica?
● El HCl proporciona el medio adecuado para que pueda reaccionar el yodo
con el almidón.
DISCUSIÓN
En la práctica de laboratorio evidenciamos la influencia de factores (iones activadores, pH,
concentración de enzima, concentración de sustrato, tiempo y temperatura) sobre la
velocidad de la reacción enzimática de degradación de almidón catalizada por la enzima
amilasa salival, lo cual se hizo a través de la observación en el cambio de color de las
soluciones. Así, cuando la solución se tiñe de azul oscuro es porque el almidón se unió a la
solución yodada, esto quiere decir que no hay actividad enzimática (ya sea por ausencia de
enzima (tubo I), ausencia de activador (tubo II), desnaturalización de la enzima (tubo IV, VI,
VIII) o disminución de la concentración de enzima (tubo VII)). Asimismo, cuando la solución
se tiñe de naranja es porque los azúcares reductores, maltosa y glucosa, producto de la
acción enzimática de la amilasa, han reaccionadocon la solución cúprica
CONCLUSIÓN
La presencia de sustrato residual y producto, nos indican el grado de actividad enzimática
modificada por factores que modifican su velocidad como la concentración de enzima,
concentración de sustrato, la presencia de iones activadores, el pH y la temperatura.
REFERENCIAS
Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
