UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE
CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA
INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
Integrantes: Omar Arias, Gabriela Ayala, David Flores Fecha: 18/06/2020
Carolina Panchana, Alexandra Paredes
Materia: Diseño de Procesos NRC: 6337
TALLER No.2
I. Ejercicio 10.1: Filtración bacteriana
Una suspensión de células de Bacillus subtilis es filtrada bajo presión constante para la recuperación de
proteasa. Se utiliza un filtro a escala piloto para medir las propiedades de filtración. El área del filtro es de
0,25 m2, la caída de presión es de 360 mmHg, y la viscosidad del filtrado es de 4,0 cP. La suspensión
celular deposita 22 g de torta por litro de filtrado. Se miden los siguientes datos:
Tiempo (min) 2 3 6 10 15 20
Volumen del 10.8 12.1 18.0 21.8 28.4 32.0
fitrado (L)
a) Determinar la resistencia específica de la torta y la resistencia del medio filtrante.
Análisis:
A: área del filtro Tiempo, t(s) Volumen de t/Vf (s m-3)
V f : volumen filtrado filtrado, Vf (m3)
t: tiempo de filtrado
120 0.0108 1.11 x 104
∆ p : caída de presión a través del
filtro 180 0.0121 1.49 x 104
μf : viscosidad del filtrado
360 0.0180 2.00 x 104
M c: masa total de sólidos en la torta
α : resistencia específica de la torta 600 0.0218 2.75 x 104
r m : resistencia del medio filtrante 900 0.0284 3.17 x 104
𝑐: g de torta por litro de filtrado
1200 0.0320 3.75 x 104
K 1=¿ 1.18 x 106 sm-6
K 2=¿ -363 sm-3
40000
35000 f(x) = 1176919.34 x − 363.13
R² = 0.98
t/Vf (s m-3)
30000
25000
20000
15000
10000
5000
0
0.01 0.01 0.02 Vf (m3)
0.02 0.03 0.03 0.04
DATOS:
K 1=1.18 × 106 s m−6
A=10.25 m2
∆ p=360 mmHg
μf =4.0 cP
C = 22 g L−1
-3
-363 sm
Procedimiento:
μf α C 2 A2 ∆ p K1
De K 1= despejo α =
2 A2 ∆ p μf C
1.333× 102 kg m−1 s2
α=
2(0.25 m2)2 360mmHg | 1 mmHg |
(1.18 ×106 s m−6 )
10−3 kg m−1 s−1
4.0 cP | 1 cP |
(22 g L−1
1000 L
|1m 3
∙
1 kg
||
1000 g
) |
α =8.0 × 1010 mkg−1
μ f rm 2 A2 ∆ p K 1
De K 2= despejo r m =
A∆ p μf C
r m =0
Respuesta: La resistencia específica de la torta es de 8 x 1010 m kg−1 y la resistencia del medio
filtrante es cero.
b) ¿Cuál es el tamaño requerido del filtro para procesar 4000 L de células suspendidas en 30 min a
una caída de presión de 360 mmHg?
t
7.5 ×10−3 min L−1 1000 L 2 60 s
K 1=
Vf
vf
K 1=
4000 L
x
1m 3 (
x(
1 min
)=)
K 1=1.13 x 10 2 s m−6
II. Ejercicio 10.4 Centrifugación de levaduras
Las células de levadura deben separarse de un caldo de fermentación. Suponga que las células son
esféricas con un diámetro de 5 µm y una densidad de 1.06 g/cm3. La viscosidad del caldo de cultivo es
1.36x10-3 N*s*m-2. A la temperatura de separación, la densidad del fluido de suspensión es de 0,997
g/cm3. Se deben tratar 500 litros de caldo cada hora.
a) Especifique Σ para una centrífuga apiladora de discos de tamaño adecuado
g
∗1 kg
cm3 100 cm 3
P p=1.06
1000 g
∗
1m ( )
=1060 kg /m3
g
∗1 kg
cm3 100 cm 3
Pf =0.997
1000 g
∗
1m (=997 kg/m 3 )
L
∗1 m3
h
∗1 h
1000 L m3
Q=500 =1.39∗1 0−4
3600 s s
D p=5 µm=5∗10−6 m
10−3 kg m−1 s−1 1000 L 1 kg
2
A=
4 cP ( 1cP )
8 ×1010 mk g−1( 22 g L−1 ×
1m 3
×
1000 g
)
2 6 1.333 ×102 kg m−1 s−2
2 ( 1.13× 10 s m ) 360 mmHg×
A2=649.129m4 1 mmHg
A¿ 25.478 m 2
Ns kg −3 kg
Considerando que: 1 =1 , µ=1.36∗10
m 2
ms ms
kg
( 1060−997 )
P −Pf m3 ( m m
u g= p
18 µ
D p2 g=
kg ( )
5∗10−6 m ) 9.8 2 =6.31∗10−7
s s
(
18 1.36∗10−3
ms )
Sustituimos en:
m3
−4
1.39∗10
Q s
Σ= = =110 m2
2u g m
(
2 6.31∗10−7
s )
b) El pequeño tamaño y la baja densidad de las células microbianas son inconvenientes en la
centrifugación. Si en vez de levadura se separaran del líquido del cultivo partículas de cuarzo
0,1 mm de diámetro y 2.0 de gravedad específica. ¿En cuánto se reduce Σ?
2.0 g
∗1 kg
g c m3 100 cm 3 kg
ρ p =2.0
cm 3
=
1000 g
∗ (
1m
=2000 3
m )
D p=0.1mm=0.1 x 10−3 m
La velocidad de sedimentación de la partícula de cuarzo es:
ρ p−ρ f 2 ( 2000−997 ) kg /m3 2 m m
u g= D p g= ∗( 0.1 x 10−3 ) ∗9.8 2 =4.02 x 10−3
18 μ kg s s
18(1.36 x 10−3 )
ms
Q 1.39 x 10−4 m3 /s
Σ= = =0.017 m2
2u g −3 m
2(4.02 x 10 )
s
Sabemos que el factor sigma de las células de levadura es 110 m 2
110
=6470
0.017
Por lo que el factor sigma para las partículas de cuarzo se reducen en un factor de 6470
III. Ejercicio 10.5
Se suspenden pequeñas partículas de alimentos con un diámetro de 10-2 mm y densidad de 1,03 g cm-3
en un líquido de densidad 1,00 g cm-3. La viscosidad del líquido es 1,25 mPa s. Se utiliza una centrífuga
de cubeta tubular de 70 cm de longitud y radio de 11,5 cm para separar las partículas. Si la centrífuga
funciona a 10 000 rpm, calcule el caudal de alimentación límite (m3/s) que permite separar las partículas
de alimentos.
g 1 kg 100 cm 3 kg
ρ p =1.03
cm 3
∙
1000 g(∙
1 m )=1030 3
m
D p=10−2 mm=10−5 m
2 π rad 1 min
ω=10000 rpm∙ ∙ =1047,2 rad s−1
1 rev 60 s
Para la velocidad de sedimentación de la partícula:
ρ p−ρ f 2 ( 1030−1000 ) kg m−3 2 m m
μ g= D p g= ∙ ( 10−5 m ) ∙ 9.8 2 =1,307 x 10−6
18 μ −3 −1 −1
18(1. 25 x 10 kg m s ) s s
Para determinar el factor sigma:
2 2
2 π ω 2 b r 2 2 π ( 1047,2 s ) 0,70 m ( 0,115 m )
−1
Σ= = =6,506 ×103 m 2
g 9,8 ms−2
Entonces:
Q=2 μ g Σ=0.017 m3 s−1
Respuesta: El flujo de alimentación límite para separar las partículas debe ser 0.017 m 3s-1.
IV. Ejercicio 10.6 Ampliación de la centrífuga de pila de discos
Se prueba una centrífuga de pila de disco a escala piloto para la recuperación de bacterias. La centrífuga
contiene 25 discos con diámetros interno y externo de 2 cm y 10 cm, respectivamente. El ángulo de
medio cono es de 35°. Cuando se opera a una velocidad de 3000 rpm con una velocidad de alimentación
de 3.5 litros min-1, se recupera el 70% de las células. ¿Si se va a utilizar una centrífuga más grande para el
tratamiento industrial de 80 litros min-1, qué velocidad de funcionamiento se requiere para lograr el
mismo rendimiento de sedimentación si la centrífuga más grande contiene 55 discos con un diámetro
externo de 15 cm, un diámetro interno de 4,7 cm y medio ángulo de cono 45°?
Datos:
Escala Piloto Escalado: Mismo rendimiento.
n 25 discos 55 discos
Diámetro interior (d2) 2 cm 4.7 cm
Diámetro exterior (d1) 10 cm 15 cm
θ 35° 45°
ω 3000 rpm
Q1 3.5 L/min
Q2 80 L/min
Resolución:
2
min−1∗1 min (
2 π ω 2 ( n−1 ) 3 3
∑ ¿ 3 g tan θ (r 2−r 1 )=
2 π 2 (
π∗3000
60 s
25−1 ) )
( ( 0.05 m )3−( 0.01 m )3 ) =89.64 m2
1 m
3∗9.8 2 tan 35 °
s
Escalado:
Q 80 L /min
∑ ¿ Q2 ∑ ¿ 3.5 L /min
2
∗89.64 m =2048.9 m
2
2 1 1
m
3 g ∑ tan θ 3∗9.8 2
∗tan 35°∗2048.9 m2
s
ω 2= 1
3 3
= 3 3
2 π ( N −1 ) ( r 2−r 1 ) 2 π ( 55−1 ) ( ( 0.075 m ) −( 0.0235 m ) )
ω=√ 4.34∗105 s−2=658.79 s−1
rad
∗1 rev
s
∗60 s
2 πrad
ω=658.78 =6290.98 rpm
1 min
Respuesta: Para llegar al mismo rendimiento se necesita una velocidad de operación de 6290.98 rpm.
V. Ejercicio 10.7 Centrifugación de levadura y restos celulares
Se utiliza una centrífuga de cubeta tubular para concentrar una suspensión de levadura genéticamente
modificada que contiene una nueva proteína recombinante. A una velocidad de 12 000 rpm, la centrífuga
trata 3 Lmin-1 de caldo con resultados satisfactorios. Se propone utilizar la misma centrífuga para separar
los desechos celulares del homogeneizado producido por la interrupción mecánica de la levadura. Si el
tamaño promedio de los desechos es un tercio del de la levadura y la viscosidad del homogeneizado es
cinco veces mayor que la suspensión celular, ¿qué caudal puede manejarse si la centrífuga funciona a la
misma velocidad?
Datos:
Levadura: Dp1, µ1, Q1
Suspensión Celular: Dp2, µ2, Q2
Dp2 = 1/3 Dp1
µ2 = 5 µ 1
Q1 = 3 L/min
Resolución:
Suspensión de levadura:
18 µ 1 Q1
∑¿2 2
1 ( p p− p f ) D p 1 g
Restos celulares:
18 µ Q2
∑ ¿ 2 p − p2 2
2 ( p f ) Dp2 g
Se considera:
∑ ¿ Σ2
1
18 µ1 Q 1 18 µ2 Q 2
2
=
2 ( p p − pf ) D g p1 2 ( p p −p f ) D 2p 2 g
Se supone que las densidades de partículas y fluidas son las mismas:
µ1 Q 1 µ2 Q2
2
=
D p1 D2p 2
2
1
Q 2=
µ1 D 2
p2
∗Q 1=
µ1 ( D
3 p1 ) ∗3 L/min ¿ 0.067 L /min
2 2
µ2 D p1 5 µ1 D p 1
Respuesta: A la misma velocidad se puede tratar un caudal a 0.067 L/min.
VI. Ejercicio: Homogenizador Manton Gaulin
Se dispersa la bacteria Micrococcus a 5°C en un homogenizador Manton Gaulin que opera a presiones
comprendidas entre 200 y 550 kg cm-2.los datos para la separación de la proteína en función del número
de pasos a través del homogenizador son los siguientes:
Caída de presión (kg.cm2)
200 300 400 500 550
Número de %proteína separada
pasos
1 5 13,5 23,3 36 42
2 9,5 23,5 40 58,5 66
3 14 33,5 52,5 75 83,7
4 18 43 66,6 82,5 88,5
5 22 47,5 73 88,5 94,5
6 26 55 79,5 91, -
a) ¿Cuántos pasos se necesitan para alcanzar una separación del 80% de la proteína si se
trabaja con una presión de 460 kg cm-2?
b) Calcular la presión necesaria para separar el 70% de la proteína en sólo dos pasos.
Datos:
Valores de la tabla: % de proteína separada
Presiones: 200-500 kg cm-2
Análisis
Transformar los valores de porcentaje a la cantidad de proteína disponible para la separación mediante la
siguiente fórmula:
Rm 100
=
Rm−R 100−%Proteinarelease
Caída de presión (kg.cm2)
200 300 400 500 550
Número de 100
pasos 100−%Proteina release
1 1,05 1,16 1,30 1,56 1,72
2 1,10 1,31 1,67 2,41 2,94
3 1,16 1,50 2,11 4,00 6,13
4 1,22 1,75 2,99 5,71 8,70
5 1,28 1,90 3,70 8,70 18,18
6 1,35 2,22 4,88 11,11
Graficar para determinar las pendientes
20.00
18.00 f(x) = 3.87 x − 4.07
R² = 0.87
16.00
14.00
12.00
Rm(Rm-R)
10.00 f(x) = 1.95 x − 1.25
R² = 0.97
8.00
6.00
4.00 f(x) = 0.71 x + 0.29
R² = 0.96
2.00
f(x) = 0.21 x + 0.9
f(x)
R² ==0.99
0.06 x + 0.99
0.00
0 1 R² = 1 2 3 4 5 6 7
Número de pasos
Caída de presión (kg.cm-2)
200 300 400 500 550
kpx 0,05 0,13 0,27 0,41 0,58
Log-Log plot
0.7
0.6
0.5 f(x) = 0 x − 0.28
0.4 R² = 0.95
[kp]^x
0.3
0.2
0.1
0
150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
Presión p(Kgfcm-2)
Siendo:
kp ∝ =1,17E-0,7 x 2,37
Donde x=p (presión), por lo tanto para este sistema la Ecuación es:
Rm
Ec . ln( Rm−R )=kNp ∝
Rm
ln (
Rm−R )
2,37
=1,17E-0,7 x N
Despejando N tenemos
Rm
N=
ln ( Rm−R ) ; p=460 kgf . cm 2
2,37
1,17E-0,7 p
N=4,6
a) Respuesta: Por lo tanto, el 80% de la liberación de proteínas se logra en 5 pases a través del
homogeneizador
Para la liberación del 70% de las proteínas se sustituye N=2
Rm
p2,37=
ln ( Rm−R )
−7
1,71 x 10 N
100
p2,37=
ln ( 100−7 )
−7
1,71 x 10 N
p2,37=3,52 x 10 6
kgf
p=578
c m2
b) Respuesta: Las características de homogeneización medidas a presiones entre 200 y 500
Kgf/cm2 se aplican a la presión más alta de 578 Kgf/cm2
VII. Ejercicio: Escalado de la Cromatografía de Gel
La cromatografía de gel se utiliza para la purificación a escala comercial de un toxoide proteináceo de la
difteria procedente de Corynebacterium diphtheriae sobrenadante. En el laboratorio se empaqueta una
pequeña columna de 1.5 cm de diámetro interior y 0.4 m de altura con 10 g de gel Sephadex seco. El
volumen de huecos es de 23 ml. Se inyecta a la columna una muestra que contiene el toxoide e impurezas.
Con un caudal de líquido de 14 ml/min, el volumen de elución para el toxoide es de 29 ml y el volumen
de elución para la impureza principal 45 ml. Para la cromatografía de gel a gran escala se dispone de una
columna de 0.6 m de altura y 0.5 m de diámetro. Se utiliza el mismo tipo de relleno y la fracción de
huecos y la relación de volumen de poros a volumen total de lecho se mantienen iguales que la columna
de pruebas. El caudal de líquido en la columna grande se escala en proporción al área de la sección
transversal de manera que el régimen de flujo en ambas columnas puede suponerse idéntico. El valor de
ganancia de agua para el relleno facilitado por el fabricante es 0.0035 m3/kg gel seco.
Datos
Columna pequeña Columna a gran escala
D1=1.5 cm D1=0.5 m
H1=0.4 m H1=0.6 m
gel seco=10 g gel seco=10 g
Volúmenes huecos=23 mL Volúmenes huecos=23 mL
Caudal muestra=14 ml/min Valor de ganancia de agua=0.0035 m3/kg gel
V. elución tox= 29 mL seco.
V. elución imp= 45 mL
a) ¿Qué molécula es mayor, la del toxoide de la difteria o a de la impureza?
El volumen de elución para el toxoide es menor que para la impureza. Por lo tanto, como el
toxoide permanece en la columna por un tiempo más corto debe ser la molécula más grande.
b) Determinar los coeficientes de reparto para el toxoide y para la impureza
El volumen de poro interno se calcula utilizando
Ve−Vo
Kp
Vi
1 Kg m 3 106 mL
V i=aW r=10 g |
1000 g
0.0035 |(
Kg 1 m 3 )|
=35 mL |
Como Vo = 23 ml, los coeficientes de partición para el toxoide y la impureza se pueden
determinar utilizando los volúmenes de elución medidos y la ecuación.
(Ve−Vo) ( 29−23 ) mL
Toxoide K p= = =0.171
Vi 35 mL
(Ve−Vo) ( 45−23 ) mL
Impureza= = =0.620
Vi 35 mL
La toxicidad es de 0.171 y la impureza de 0.629
c) ¿Calcular los volúmenes de elución en la columna a escala comercial?
El volumen total de la columna de laboratorio de diámetro interno
Dc1 = 1.5 cm = 0.015 y altura H1=0.4 m
Dc2=0.5m y altura H2=0.6 m
D c1 2 0.015 m 2
V T 1 =π
2( ) H 1=π
2 ( )
0.4 m=7.07 x 10−5 m3
2 2 0.5 m 2
V T 2 =π ()
2
H 2=π (
2 )
0.6 m=0.118 m 3
Si la fracción vacía en la columna grande es la misma que en la columna pequeña
1 m3
V o 2=
V o1
V =
23 mL | |
106 mL
( 0.118 m3 ) =0.0384 m 3
V T 1 T 2 7.07 x 10−5 m 3
Si la fracción de volumen de poros también es la misma
1 m3
V i 2=
V i1
V T 2=
35 mL |106 mL
−5 3
|
( 0.118 m3 )=0.0584 m3
VT1 7.07 x 10 m
Si la columna a gran escala se opera con las mismas condiciones de empaquetamiento y flujo, se
puede suponer que los coeficientes de partición son los mismos
Toxoide
V e 2=K p V i 2+V o 2=0.171 ( 0.0583 m3 ) + 0.0384 m3=0.0484 m3
Impurezas
V e 2=K p V i 2+V o 2=0.629 ( 0.0583 m3 )+ 0.0384 m 3=0.0751 m3
La toxicidad es de 0.0484m 3 y la impureza de 0.071m 3
d) ¿Cuál es el caudal volumétrico en la columna grande?
El caudal de líquido se escala proporcionalmente al área de la sección transversal de la columna.
Dc 2 2
π
2( ) mL 1 m3 0.5 m 2 m3
V 2=V 1
π
Dc 1 2
( )
=14
| |(
min 10 6 0.015 m
=0.0156 )
min
2
m3
El caudal volumétrico es 0.0156
min
e) ¿Calcular el tiempo de retención para el toxoide en la columna grande?
El tiempo de retención es igual al volumen de elución dividido por el caudal volumétrico
V e2 0.0484 m3
tR= = =3.1 min
V2 m3
0.0156
min
