INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
PRACTICA No. 11
“ OBTENCION DE GLUCOGENO APARTIR DE HIGADO DE
RATA Y SU CARACTERIZAION QUIMICA”
EQUIPO: Muñoz Camacho Alondra Amaranto. Núñez Reséndiz Gilberto. Sección: 2 Grupo 3FM1
INTRODUCCION.
Todas las manifestaciones vitales requieren energía,
la cual se obtiene de la oxidación gradual de los
alimentos a través de reacciones de óxido-reducción,
es decir, reacciones en las cuales se transfieren Imagen1.- Actividad del sistema de citocromo y
electrones o hidrógenos desde un compuesto, el citocromo oxidasa
donador de electrones o agente reductor, a un
aceptor de electrones o agente oxidante. Las
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
reacciones de óxido-reducción llevadas a cabo por la
célula son catalizadas por enzimas que actúan como La actividad del sistema de citocromos y
intermediarios hasta llegar al aceptor final de citocromo
electrones que es el oxígeno. oxidasa. Se enumeraron 8 tubos, en el tubo no.
1 se tornó de una coloración café debido a que
OBJETIVOS el reactivo de N,N dimetil p-fenilendiamina una
Determinar la actividad de algunas enzimas vez oxidado se puede polimerizar tornándose
que participan en reacciones de óxido- de un pigmento color café en presencia de la
reducción y discutir la importancia de los SDH-CIT, en el caso de tubo 2 se presenció
cofactores y el efecto de algunos inhibidores. una coloración violeta claro por la presencia de
la N,N dimetil p-fenilendiamina con el agua
RESULTADOS como tal no se llevó a cabo una reacción en
este tubo, en el tubo 3 se presentó una
GRADO DE
DECOLORA Tabala1.-Resultados de la actividad de coloración del extracto ya que se agregó KCN
TUBO N° CIÓN
deshidrogenasa Succínica lo que bloqueo o inhibió la reacción y no se
1 ++
2 /
llegará al azul de indofenol, en el tubo 4 se
3 ++ tomó de igual manera la coloración del extracto,
4 +++ en el tubo 5 se presenció el color violeta
5 ++ gracias a la
6 +++ presencia del alfa naftol y los demás reactivos
7 ++++
cabe
mencionar que se llevó a cabo una buena
Imagen1.- A eso la coloración transparente del tubo reacción
debido a que no hubo una debido a la ausencia del KCN el cual no inhibió
la
enzima que llevará a cabo la reacción para la reacción, en el tubo 6 al no contener ninguna
enzima se tornó transparente, en el tubo 7
pudimos observar una coloración un tanto
opaca en comparación con el tubo 6, la
coloración esperada debía ser rosa cabe
mencionar que en este tubo se agregaron todos
los reactivos menos agua por lo cual en primera
la reacción no se llevó a cabo por la presencia
del inhibidor y al no tener un medio de
disolución que era el agua se tornó de un color
opaco, por último en el tubo 8 no se llevó a
1
cabo ninguna reacción por
formación del azul de indofenol. La aparición de la N,N-dimetil-p-
fenilendiamina permite determinar la
El KCN es un inhibidor de tipo irreversible tiene como reacción de óxido-reducción en el
función principal bloquear e inhibir la cadena complejo de la citocromo y citocromo
oxidasa.
transportadora de electrones, algo que cabe
mencionar es que la reacción del sistema de BIBLIOGRAFÍA.
citocromos y citocromos oxidasa el donador de Mckee, J.R. Bioquímica. La base molecular. 3 a
electrones en estas reacciones es la p-
fenilendiamina que en presencia del alfa naftol se Edición, McGraw-Hill. España. 2003. Páginas
condensa para producir un compuesto colorido el consultadas: 243, 301-305
cual es llamado como azul de indofenol.
En la actividad de la deshidrogenasa succínica, se Voet, D., Voet, J. &Charlotte, W. (2009).
enumeraron 7 tubos y se agregaron los reactivos Fundamentos de Bioquímica. Buenos
correspondientes. En el tubo 1 y el tubo 7 se redujo Aires:Médica Panamericana.
por completo, evidenciando el azul de metileno
incoloro, y haciendo notar el tubo del color del
extracto, pues contenía todos los reactivos para
poderse llevar a cabo la reacción completa, sólo que Lehninger, A.L. Principios de bioquímica. 4 a
el tubo 1 lo hizo primero que el tubo 7, y así le Edición. 2001
siguieron en orden el tubo 6 y 5. El tubo 4 llevó a
cabo la reacción mucho más lenta que los demás
tubos, requería más tiempo para que ésta fuera
visible en la decoloración del azul de metileno
(colorante reducido).
El tubo 2 funcionó como tubo testigo, pues en éste
no hubo reacción, ya que no contaba con el malo
nato de sodio ni con SDH-CIT, al no haber extracto,
no se produjo la reacción. Todo esto evidencia la
actividad de la deshidrogenasa succínica, al igual
que el tubo 3 que no reaccionó por la falta de
succinato de sodio (donador de e-) y malonato de
sodio.
Un aspecto muy importante en el desarrollo de estas
técnicas fue el aceite agregado en cada tubo, esto
fue con la finalidad de que no se reoxidan el azul de
metileno en presencia de oxígeno. Cumplió una
función de “tapón” que no permitía el paso de
oxígeno actividad de la deshidrogenasa succínica.
CONCLUSIÓN.
La reacción de la deshidrogenasa succínica
produce FADH2 y esto permite poner en
evidencia la actividad de la enzima cuando se
acopla con la reducción del azul de metileno.
La N, N-dimetil-p-fenilendiamina actúa como
donador artificial de electrones en la actividad
de la citocromo c oxidasa
El KCN es un inhibidor de tipo irreversible, en
el complejo de la citocromo c oxidasa
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