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Fase Normal y Reversa en HPLC

El documento discute la importancia de filtrar y desgasificar la fase móvil y la muestra en cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC) para evitar dañar el equipo. También describe los métodos comunes de desgasificación y las diferencias entre cromatografía en fase normal y reversa con respecto a las fases estacionaria y móvil y el orden de elución. Explica que reducir la concentración de agua en una fase móvil agua-metanol reduciría el tiempo de retención de la

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Juan Antonio Serrano Guerrero
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Fase Normal y Reversa en HPLC

El documento discute la importancia de filtrar y desgasificar la fase móvil y la muestra en cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC) para evitar dañar el equipo. También describe los métodos comunes de desgasificación y las diferencias entre cromatografía en fase normal y reversa con respecto a las fases estacionaria y móvil y el orden de elución. Explica que reducir la concentración de agua en una fase móvil agua-metanol reduciría el tiempo de retención de la

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1.

¿Cuál es la importancia de filtrar y desgasificar la fase


móvil y la muestra?
R= Es importante debido a que tanto las partículas como el
gas, perjudican el sistema HPLC estropeando partes del
equipo y causando que tenga menor vida útil.
2. Mencionar los métodos de desgasificación más
frecuentemente utilizados en HPLC
R= Sonificazión, Agitación y Helio Sparging (Burbujeo de
Helio).
3. ¿En que difiere la cromatografía en fase normal de la
cromatografía de fase reversa en cuanto a la fase
estacionaria, fase móvil y orden de elución?
R= En que en la cromatografía en fase normal la fase
estacionaria es polar, la fase móvil es no polar (apolar) y
primero eluyen los compuestos no polares, debido a su
afinidad con la fase móvil. Mientras que en una cromatografía
en fase reversa la fase estacionaria es no polar, la fase móvil
es polar y los compuestos que eluyen primero son los
polares, debido también a su afinidad por la fase móvil.
4. Si se cambiara la composición de la fase móvil agua-
metanol (35:65) a (25:75), ¿Qué sucedería en cuanto al
tiempo de retención? y ¿Por qué?
R= En caso de disminuir la concentración de agua, el tiempo
de retención disminuiría, debido a que la fase móvil seria mas
no polar y la cafeína eluiría mas rápido ya que sería más afín
a la fase móvil. En caso contrario de aumentar la
concentración del agua, el tiempo de retención seria mayor,
ya que la fase móvil sería más polar y por ende menos afín a
la cafeína haciendo que esta tarde más tiempo en eluir.
5. ¿Cuál es la cantidad máxima de cafeína que puede ser
ingerida en un día?
R=200 mg/L para bebidas, congelados, polvos, jarabes,
concentrados y concentrados de manufactura.

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