1.
EXAMEN EN FRESCO
Los exámenes en fresco permiten visualizar los microorganismos sin necesidad de fijarlos ni
teñirlos, y por tanto vivos. Los microorganismos en general no presentan demasiado contraste
respecto al medio que les rodea. A pesar de ello es posible verlos sin necesidad de teñirlos
gracias a la refringencia que despiden y sobre todo a su capacidad de movimiento en medios
líquidos.
La visualización de bacterias en fresco puede realizarse mediante la técnica de la gota
pendiente. Consiste en colocar una gota de la solución con la bacteria en suspensión en un
cubreobjetos que se coloca invertido sobre un portaobjetos excavado. Observar en el
microscopio con el objetivo de 40X, pueden detectarse las bacterias en movimiento por la
refringencia que desprenden. Es una técnica que apenas se utiliza en el diagnóstico
microbiológico, porque ofrece muy poca información en cuanto a la estructura y composición
de las bacterias. Solamente puede tener utilidad en la comprobación de la motilidad de los
microorganismos. Los exámenes en fresco si constituyen un arma potente de diagnóstico en las
infecciones producidas por parásitos intestinales. Pueden detectarse huevos, quistes y
trofozoitos que por sus características morfológicas pueden generar por si solas un diagnóstico
definitivo. Las muestras de heces deben pretratarse antes de realizar la preparación en fresco
con el fin de aclarar y concentrar los parásitos. Las infecciones producidas por Tricomonas
vaginalis, un protozoo flagelado responsable de infecciones urogenitales, también se
diagnostican mediante la visualización en examen en fresco directo del exudado uretral.
Para realizar el examen en fresco de la muestra es aconsejable tener en cuenta la consistencia
de las heces, por lo que diferenciaremos entre heces de consistencia líquida o diarreica y heces
de consistencia normal.
1.1 HECES DE CONSISTENCIA LÍQUIDA O DIARREICA
Para el estudio de las heces diarreicas debemos colocar una gota de la muestra entre un
portaobjetos y un cubreobjetos y observarla al microscopio utilizando el objetivo de 40X. Las
estructuras que observaremos son, principalmente formas móviles:
Trofozoitos de Amebas
Trofozoitos Giardias
Trofozoitos de Balantidium
Sangre y pus
1.2 HECES DE CONSISTENCIA NORMAL
Cuando la consistencia de las heces es normal, debemos mezclar una pequeña cantidad de
heces con una gota de suero fisiológico sobre un portaobjetos. Con una varilla debemos
homogeneizar la mezcla lo máximo posible. La observación al microscopio tenemos que hacerla
con el objetivo de 10X y con el de 40X. Con el objetivo de 10X podremos visualizar huevos y
larvas de Helmintos. Con el objetivo de 40X, y si además añadimos una gota de Lugol,
observaremos:
Quistes de Amebas
Quistes de Giardias
Quistes de Balantidium
Levaduras
Isospora y otros
El uso de Lugol facilita la visualización de estas estructuras considerablemente, por lo que es
aconsejable utilizarlo si está a nuestra disposición.
MÉTODO DE WILLIS
Este método está recomendado para la investigación de protozoos y helmintos. La técnica
consiste en:
1. Extraer una muestra de heces de aproximadamente el tamaño de un garbanzo y
colocarla en un tubo de boca estrecha
2. Añadir una pequeña cantidad de solución de cloruro sódico a saturación para disolver la
muestra. Una vez disuelta la muestra debemos llenar el recipiente hasta el borde con la
misma solución.
3. Colocamos un portaobjeto sobre el extremo del recipiente de tal forma que contacte
con el líquido intentando no dejar burbujas de aire entre porta y líquido.
4. A los 15-20 minutos, retiramos el porta y colocamos un cubre para poder observarlo al
microscopio.
El principio de esta técnica se basa en que los huevos de helmintos tienen un peso específico
menor que el de la solución saturada de cloruro sódico por lo que tienden a subir y pegarse en
el portaobjetos.
Bibliografía
Beltrán Fabián de Estrada, M; Tello Casanova, R; Naquira Velarde, C. Manual de
procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de los parásitos intestinales. Lima:
Ministerio de Sanidad; 2003.
Lidangalia Nha Guti Madwalli; Dhibuku Dha Lâyo Kudziva Madhuly; A Buku Go Kamba A
Mababyi. Manual de Laboratorio Clínico. Mozambique: Unitat de Medicina Tropical i
Salut
