LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
QCB.EH ROSARIO SALAZAR RIOJAS
SERVICIO DE HEMATOLOGIA
1
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
1. El color y los colorantes HEMATOLOGICOS
2. El color y las estructuras celulares
3. Problemas TECNICOS en las tinciones
4. Casos de morfología
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
¿Qué es un COLOR?
Es la longitud de onda del espectro de
LUZ VISIBLE que absorbe y refleja un
cuerpo
Espectro de la luz visible:
380 nm........Violeta
780 nm..........Rojo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Un cuerpo es BLANCO cuando “refleja”
todas las longitudes de onda
Un cuerpo NEGRO “absorbe” todas las
longitudes de onda
Un cuerpo ROJO “absorbe” todas las
longitudes de onda menos las rojas
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
BASOFILO NEUTROFILO
¿Qué es un COLORANTE?
Un colorante es una sustancia
con capacidad de transmitir
un color a un sustrato
Debe penetrar e interactuar
con las estructuras
moleculares de las células
HEMATIES PLAQUETAS
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Las estructuras celulares que
vamos a teñir deben ser
tratadas previamente,
mediante la FIJACION
La FIJACION es un proceso físico-
químico que inmoviliza
determinadas estructuras
celulares, y que permite que
puedan ser posteriormente
coloreadas sin ser arrastradas en
el proceso
EOSINOFILOS 6
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Durante la FIJACION se producen varios fenómenos:
Se “coagulan” las proteínas celulares conservando su
arquitectura
Pueden perderse algunas sustancias no esenciales para la
interpretación citomorfológica; los alcoholes disuelven las
grasas
Las extensiones sanguíneas se pueden fijar con calor
seco, alcoholes, formaldehído, acetona, etc. El mejor
fijador para morfología es el metanol (alcohol metílico)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
¿QUE PRETENDEMOS CON LAS TINCIONES?
1. Identificar las células
2. Identificar sus estructuras internas
Densidad de la cromatina
Presencia de nucléolos
Citoplasma: Características
Granulación
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CELULA PLASMATICA (LINFOCITO B): A LA IZQUIERDA IMAGEN AL MICROSCOPIO
ELECTRONICO Y A LA DERECHA UN ESQUEMA DE LA MISMA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
MITOCONDRIAS
NUCLEO
APARATO DE GOLGI
RETICULO ENDOPLASMICO
CON RIBOSOMAS
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
NUCLEO
CONTIENE ADN Y PROTEINAS
ESPECIFICAS
SU MAYOR O MENOR
DENSIDAD, EQUIVALENTE A
MAS O MENOS MADUREZ, SE
TRADUCE POR UNA
COLORACIÓN +/– INTENSA
LA PRESENCIA DE
NUCLEOLOS (ACUMULACION
DE ARN PROPIA DE CELULAS
INMADURAS) SE VE COMO
UNA ZONA CLARA RODEADA
DE UN HALO MAS INTENSO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
RETICULO ENDOPLASMICO
RUGOSO
ES EL LUGAR DONDE SE
SINTETIZAN LAS PROTEINAS
DE LAS CELULAS
ES MUY RICO EN ARN
(RIBOSOMAS) CUYO
CARACTER ACIDO ATRAE A
LOS COLORANTES BASICOS
A VECES MUESTRA
DILATACIONES QUE AL
MICROSCOPIO PARECEN
PEQUEÑAS VACUOLAS
SU PRODUCCION SE ENVIA AL
APARATO DE GOLGI, Y DE
ESTE AL EXTERIOR
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
ESTRUCTURAS GRANULARES
MITOCONDRIAS
LISOSOMAS
CENTRIOLOS
GRANULOS DE GLUCOGENO
VACUOLAS
OTRAS
SE OBSERVAN CON EL
MICROSCOPIO OPTICO COMO
GRANULOS, MAS O MENOS
GRANDES, QUE ADQUIEREN
DISTINTA COLORACION SEGUN
SU CONTENIDO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
¿QUÉ “COLOR” TRANSMITE UN COLORANTE?
NEUTROFILO
1. El suyo propio
2. Un color distinto: metacromasia
3. Más de un color: alocromasia
BASOFILO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
¿COMO “TRANSMITE” EL COLOR?
Coloración = impregnación del sustrato
Reacción química = citoquímica
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
MECANISMO USUAL DE COLORACION
ATRACCION ELECTROSTATICA
+ -
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Coloración: Afinidad de carga eléctrica del
colorante por el sustrato celular
Directa: Se produce una unión electro
polar entre colorante y sustrato
Indirecta: El colorante necesita una
“pieza de unión” intermedia, a la que se
denomina “mordiente”
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Los “mordientes” suelen ser metales: aluminio,
molibdeno, cromo, vanadio, etc
Colorante Mordiente Sustrato
El conjunto colorante + mordiente se
denomina “laca”
Ejemplo: Tanto la Hematoxilina como el
Rojo Nuclear emplean el Aluminio como
mordiente
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Coloración “progresiva”
Se añade al sustrato celular el colorante muy diluido
(por ej. al 1%), y se deja durante tiempos diferentes
en distintas muestras. Se observa la tinción de
distintas estructuras de manera progresiva
Coloración “regresiva”
Partiendo del colorante muy concentrado, se
enjuagan gradualmente las muestras
(“diferenciación”) hasta lograr la mejor visualización
de determinadas estructuras celulares
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
METACROMASIA
Fenómeno tintorial en el que un colorante
determinado tiñe a un sustrato celular en un color
diferente al propio
AZUL DE TOLUIDINA
Tiñe de color ROSA los gránulos de los basófilos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
METACROMASIA
Los gránulos de los BASOFILOS
contienen mucopolisacáridos
ácidos con grupos sulfatos [-] a
menos de 5 Å unos de otros
Las moléculas de Azul de
Toluidina (intensamente básicas
+) se unen apretadamente
configurando una tonalidad final
rosada (fenómeno de basofilia)
BASOFILO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
GRUPO CROMOFORO: son grupos de átomos en
resonancia (e- en vibración) que predisponen a
la molécula a ser colorante
FRACCION CROMOGENA: constituyen la mayor
parte de la molécula, a la que da color (“peso y
densidad”)
GRUPO AUXOCROMO: portador de la carga
eléctrica, positiva o negativa, que se une al
sustrato
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
ANILINA
O2N - - NH2+ / Cl-
cromóforo cromógeno auxócromo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
Grupos cromóforos: -NO (nitroso)
-NO2 (nitro)
-N=N- (azo)
-C=S (tio)
Son grupos atómicos en resonancia (nubes de electrones en
vibración), que confieren una “aptitud” colorante a la molécula.
Aportan el color de base: morado en el caso de la anilina
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
Fracción cromógena
Anillo bencénico
Cuanto mayor sea el peso de esta fracción mas intensa
será la acción colorante
Pueden ser cíclicos (derivados de Benceno, Antraceno o
Naftaleno) o Acíclicos (Etil, Metil,...)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PARTES DE UN COLORANTE
Grupos auxócromos
Catiónicos (+): Amina primaria –NH2
Amina secundaria -NH-
Derivados arílicos y alquílicos
Aniónicos (-): Carboxilo –COOH
Sulfónico –SO3H
Oxidrilo –OH
Fosfórico PO4H3
Nota: Actúan como lugar de “enganche” al sustrato celular. Para ser
“activos” deben hallarse como sales solubles (sódicas, potásicas,
cloruros, sulfatos, etc)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES BASICOS
Los AUXOCROMOS CATIONICOS o
básicos (+) se salifican con los ácidos BASOFILO
(-) del sustrato:
BASOFILIA
afinidad del sustrato celular [-] por
colorantes básicos [+]
BASOFILIA INTENSA
EN EL CITOPLASMA27DE
UN PLASMOCITO
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES ACIDOS
Los AUXOCROMOS ANIONICOS o
ácidos (-) se salifican con las
sustancias básicas (+) contenidas en
las estructuras celulares:
ACIDOFILIA
afinidad del sustrato celular [+] por EOSINOFILO
colorantes ácidos [-]
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Sus moléculas contienen AUXOCROMOS CATIONICOS Y
ANIONICOS, que les permite presentar acidofilia y basofilia
según los sustratos celulares sobre los que se fija. Ejemplo:
Eosinato de azul de metileno
[+]/Cl- [-]/Na+
- +
BASOFILIA CELULA ACIDOFILIA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Suelen emplearse diluidos en
soluciones alcohólicas (metanol con
frecuencia), en las que existe un
equilibrio entre los iones [+] y [-]
NEUTROFILO
Ejemplo: El eosinato de azul de metileno tiñe los núcleos
de las células reaccionando con los ácidos nucleicos
(azul de metileno[+]) y con las nucleoproteínas
(eosinato[-])
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Variando el pH del medio en el
que interaccionan el colorante y
los sustratos celulares, se puede
modificar la afinidad y por tanto
la coloración final
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
Las proteínas celulares contiene grupos aminos y grupos
ácidos:
Cualquier proteína a un pH inferior a su punto
isoeléctrico (PI) se carga [+], con lo que tendrá mayor
afinidad por los colorantes ácidos [aniónicos -].
Por el contrario, si elevamos el pH por encima de su PI
se pondrán de manifiesto sus cargas [-], aumentando su
avidez por los colorantes básicos [catiónicos +].
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORANTES NEUTROS
HEMOGLOBINA: proteína eritrocitaria rica en grupos ácidos
(-COO-) y amino (-NH2). La tinción de MGG proporciones
varias coloraciones:
= Sepia (beige claro), a pH 7 - 7.2
= Rosa a rojo, a pH 6.4 – 6.8 (útil si policromasia)
= Gris-azulada, a pH 7.2 – 7.6
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
pH 7.4
pH 6.8
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
NEUTROFILO
COLORANTES NEUTROS
Normalmente para teñir extensiones de
citologías sanguíneas se emplean
colorantes “químicamente neutros”, con
los que se obtiene una:
TINCION PANCROMATICA,
ó una TINCION PANOPTICA
LINFOCITO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
En 1.891, ROMANOVSKI empleó una
solución acuosa de Azul de Metileno
para teñir una muestra de sangre con
Plasmodios, en la que habían
aparecido colonias de hongos
después de 3-4 meses.
Sorprendido, observó que los núcleos
de los polimorfo nucleares adquirían
un tono rojo púrpura, mientras el
citoplasma permanecía más o menos
azulado.
TINCION NORMAL CON AZUL DE
METILENO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
AZUL DE METILENO CH3
N+ auxócromo
CH3
S N cromóforo
cromógeno
CH3
N+
auxócromo
CH3
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
AZUL
AZUL DE METILENO
AZUL-VIOLETA
-CH3
AZUR B
VIOLETA-ROJO
-CH3
AZUR A
ROJO OSCURO
-CH3
VIOLETA DE METILENO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
El azul de metileno y
sus derivados
aportan 3 colores
principales:
Rojo
Azul
Violeta
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCION PANCROMATICA
Una SOLUCION UNICA,
compuesta por varios
colorantes y sus derivados
químicos en solución aportan
toda una gama de colores
NEUTROFILIA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANCROMATICAS
De los trabajos de ROMANOVSKI, y de otros autores como
LEISHMAN, WRIGTH, GIEMSA, TRIBONDEAU, etc, derivan las
actuales tinciones pancromáticas, basadas en diversas
combinaciones de:
Azul de metileno y sus derivados (azures)
Eosina
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANCROMATICAS
COLORANTE DE WRIGHT: Resulta de la demetilación del Azul
de Metileno (AM) en un medio muy alcalino (CO3HNa) y a 1
atmósfera de presión, obteniéndose sucesivamente una
mezcla de:
Azul de Metileno
+ Azur B (I)
+ Azur A (II)
+ Violeta de Metileno
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS
Empleo sucesivo de 2
o más soluciones
colorantes.
En general son de
mayor calidad
cromática que las
tinciones
pancromáticas
Ejemplo: La Tinción de
May-Grünwald-Giemsa
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS
COLORACION DE MAY-GRÜNWALD-GIEMSA
(o panóptica de Pappenheim)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS
GIEMSA: - Eosinato de Azur II (azur A)
- Azur II al 0.76% en glicerina y metanol
MAY-GRÜNWALD (*): Eosinato de AM al 0.2% en
metanol
(*): Eosinato de Azul de Metileno (una molécula de Eosina
unida a dos de Azul de Metileno) al 0.2-0.25% en metanol
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TINCIONES PANOPTICAS
FIJACION: metanol
MAY-GRÜNWALD
PRECOLORACION: AM
+ eosina
GIEMSA COLORACION FINAL
NOTAS: La adición de pequeñas cantidades de GLICERINA a la solución de
Giemsa aumenta la ionización del colorante y su disponibilidad, y por otra parte
disminuye la formación de precipitados cuando la tinción es prolongada.
Si además se añade una gota de ACETONA (x 20 cc de sol. de Giemsa) se
mejora la penetrabilidad del colorante, hecho muy útil cuando existe una gran
densidad celular 46
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
EL COLOR DE LAS ESTRUCTURAS CELULARES
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Para COMUNICAR lo que vemos al microscopio
debemos reconocer determinadas
CARACTERISITCAS de las células teñidas, e
informar en términos concretos que definan
situaciones de normalidad o de anormalidad.
Vamos a tratar a continuación sobre la
TERMINOLOGIA que debemos usar para expresar
nuestros resultados
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Componentes moleculares implicados en la
química de las coloraciones
Acidos Nucleicos Ac. Fosfórico: anión principal
Nucleoproteínas Alcalinidad de HIS, ARG y LIS
Lípidos (fosfo-) Ácidos, básicos o neutros
Carbohidratos En su mayoría acídicos
(+): alcalino, carácter básico, pH elevado (>7), catión
(-): carácter ácido, pH bajo (<7), anión 49
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORACION CELULAR
Fijando con metanol y coloreando con
AM/derivados y Eosina, se tiñen:
CROMATINA NUCLEAR
el ADN tiene avidez por el azul de metileno y ERITROBLASTO
MADURO
sus derivados, adquiriendo una tonalidad
violeta oscura-negruzca, más intensa cuanto
más maduro es el núcleo y más compacto.
Las nucleoproteínas son ricas en histonas y
protamina (+), por lo que tienen afinidad por
la eosina, que aporta una tonalidad roja.
ERITROBLASTO
INMADURO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORACION CELULAR
= HEMOGLOBINA de los hematíes: ya hemos
visto que esta proteína tiene numerosas
cargas eléctricas (+) y también (-). Esto da
lugar a que pequeñas variaciones en el pH de
la tinción modifica su basofilia/acidofilia
= GRANULOS NEUTROFILOS: toman las
moléculas de eosinato de AM sin disociar,
completas
= GRANULOS BASOFILOS: debido a su
contenido ácido (heparina) poseen alta
afinidad por el AM.
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
COLORACION CELULAR POLIMORFONUCLEAR
= GRANULOS EOSINOFILOS: su
contenido fuertemente básico atrae
únicamente a colorantes ácidos,
como la eosina
= VACUOLAS: cuando su contenido
es graso puede ser disuelto por el
alcohol usado como fijador, y
aparecen como estructuras vacías
MONOCITO
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
BASOFILIA BASOFILIA
GRANULAR DIFUSA
BASOFILIA
La GRANULACION del basófilo (-COO-) tiene afinidad por los
colorantes alcalinos (+). Igual ocurre en la basofilia difusa de las
células plasmática, ricas en ARN (-COO-)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
BASOFILIA
ANILINA
O2N - - NH2+ / Cl-
cromóforo cromógeno auxócromo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
BASOFILIA
AZUL DE METILENO CH3
N+ auxócromo
CH3
S N cromóforo
cromógeno
CH3
N
auxócromo
CH3
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
AZUROFILIA
A veces se comenta erróneamente que el Azul de
Metileno produce metacromasia, y no es cierto.
Se trata en realidad del fenómeno de AZUROFILIA,
coloración violeta-rojiza y no azul como sería de
esperar, debida a la presencia de pequeñas cantidades
de derivados trimetilados del A.M., denominados Azur
I (o Azur B).
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
AZUROFILIA
La GRANULACION del mielocito neutrófilo es típicamente
azurófila, igual que la de algunos linfocitos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
ACIDOFILIA
EOSINA
cromógeno COO-/Na+
auxócromo
Br
ACIDOFILIA
Na+/O- O
Br Br
auxócromo cromóforo 58
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
ACIDOFILIA
La GRANULACION del eosinófilo (proteínas catiónicas [+]) tiene
avidez por los colorantes ácidos [-](como la eosina)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
HIPOCROMIA
FALTA DE INTENSIDAD en la coloración: en la
imagen la “hipocromia” típica de la falta de
Hb en la anemia ferropénica
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
HIPERCROMIA
REFUERZO DE LA TINCION: en la imagen el
núcleo del eritroblasto es hipercromático
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TERMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
ANISOCROMIA
Distinta “intensidad” de la coloración en el
mismo tipo de células
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
TORMINOS DE USO HABITUAL SOBRE COLORACION
POLICROMASIA
Distinto color en el mismo tipo celular
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Redondeado Hendido Lobulado
Linfocito Linfocito Polimorfonuclear
hendido Neutrófilo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Arriñonado Irregular Bilobulado
Monocito Monocito Eosinófilo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Centrado Excéntrico
Eritroblasto Cél. Plasmática
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Cromatina de
Cromatina laxa Cromatina densa
densidad media
Blasto Monocito (cromatina Eritroblasto
indiferenciado “peinada”)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL NUCLEO
Dos
Un nucléolo >2 nucléolos
nucléolos
Mononucleosis Blasto maligno Blasto maligno
Infecciosa
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL CITOPLASMA
INTENSAMENTE BASOFILO
Es decir contiene sustancias con gran
avidez por los colorantes básicos. Y
PLASMOCITO
concretamente las células con gran
actividad de síntesis poseen una gran
basofilia debido a la presencia en el
citoplasma de ARN, que contiene
abundantes grupos fosfóricos (PO3-).
LINFOCITO
“ACTIVADO”
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL CITOPLASMA
DE BASOFILIA MEDIA
Como ocurre en los linfocitos
ligeramente activados o en los
promielocitos
LINFOCITO T ACTIVADO
(MONONUCLEOSIS I.)
70
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DEL CITOPLASMA
Bordes netos Bordes irregulares
Linfocito activado Linfocito
(mononucleosis inf.)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CARACTERISTICAS DE LA GRANULACION
Eosinófila (ó Basófila Neutrófila
acidófila) (mixta)
Granulocito Granulocito Granulocito
Eosinófilo Basófilo Neutrófilo
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Vamos a revisar brevemente algunos defectos comunes
en las tinciones de rutina que se realizan en los
laboratorios de Hematología
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Las extensiones de sangre
para examen morfológico se
deben de realizar
inmediatamente después de
la extracción de la muestra
en EDTA.
Cuando pasan más de 2 o 3
horas, comienzan a aparecer
fenómenos degenerativos en
las células.
CELULA NO IDENTIFICABLE, CON EL
NUCLEO EN DEGENERACION
(CARIOLISIS) 74
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
La solución de
fijación
precoloración se
ha derramado,
secándose en la
zona dejada al
descubierto
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Fijación
defectuosa y
depósitos de
colorantes en
torno a los
hematíes
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Precipitados de
colorante en
“halo” entre las
células
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Defecto en la fijación: es imposible distinguir la morfología de los
eritrocitos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Extensión insuficientemente seca, y
mal fijada por el alcohol
79
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Entre otros
excesos se
observa una
sobre-tinción que
impide reconocer
las características
de la cromatina de
los núcleos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
La cantidad
de solución
fijadora-
colorante es
deficiente
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
Solución de
lavado con
suciedad que
dificulta la
visión
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
T. PANCROMATICA
DEFICIENTE: EXCESO
DE COLORANTE QUE
IMPIDE VER LA
CROMATINA NUCLEAR Y
SUCIEDAD
T. PANCROMATICA
CORRECTA
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
LA GRANULACION ESPECIFICA LA GRANULACION SECUNDARIA
DEL BASOFILO SE HA PERDIDO DEL BASOFILO MUESTRA SU
PARCIALMENTE. AL SER SU TIPICA COLORACION NEGRUZCA
CONTENIDO SOLUBLE EN AGUA, DEBIDO A LA AVIDEZ DE LA
UN EXCESO DE LAVADO LA HA HEPARINA (ACIDO) POR EL AZUL
ELIMINADO DE METILENO (BASE)
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
PROBLEMAS TECNICOS
En las tinciones que usamos, ya hemos comentado que
el color se logra por una atracción electrostática,
estableciéndose enlaces químicos estables aunque no
muy fuertes.
Por ello un lavado excesivo, combinado o no con una
cantidad insuficiente de solución colorante, puede
conducir a una decoloración más o menos intensa
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
SOLUCIONES A LOS PROBLEMAS TECNICOS
Limpieza de los portaobjetos
Eter / Alcohol [1:1]
pH del agua destilada: 7-7.2
Hervir o tamponar
Secado de las extensiones
Mínimo 2 horas; óptimo 24 h
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
SOLUCIONES A LOS PROBLEMAS TECNICOS
Sobrecarga de color: precipitados
Glicerina
Suciedad de fondo
Lavar con A.D.
Conservación
Cubrir con DPX
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
CASOS DE MORFOLOGIA
88
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 1: Linfocito Bordes
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 2: Eosinófilo Bordes
Gránulos
90
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 3: Mielocito Bordes
Gránulos
91
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 4: Neutr. Bordes
Banda
Gránulos
92
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 5: Linfocito Bordes
Gránulos
93
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 6: Basófilo Bordes
Gránulos
94
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 7: Neutr. Bordes
Segmentado
Gránulos
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LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 8: Monocito Bordes
Gránulos
96
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 9: Blasto Bordes
Gránulos
97
LOS COLORANTES HEMATOLOGICOS
Núcleo
Forma
Cromatina
Nucléolos
Citoplasma
Coloración
Fig. 10: Linfocito Bordes
Gránulos
98
