UNIVERSIDAD RAFAEL LANDÍVAR
Facultad de Ingeniería
Laboratorio de Bioquímica
Manual de Prácticas - Interciclo 2016
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA
El laboratorio de Bioquímica tiene como propósito introducir al estudiante de ingeniería a la
experimentación química biológica como parte del proceso de consolidación de conocimientos teóricos
adquiridos en los cursos básicos. Se imparte simultáneamente con el curso teórico.
Objetivo del Laboratorio
Que el alumno comprenda la importancia de la investigación experimental, tanto para la generación de
nuevo conocimiento, como para la confirmación de conocimientos teóricos adquiridos a través del
aprendizaje en el aula, así como la importancia de seguir las medidas de seguridad al estar dentro de un
laboratorio de Química
Cronograma de Prácticas
Sesión No. Número de Fecha Nombre de la Práctica
Práctica
NA NA 26 y 27 de mayo Inscripción, asignación de grupos y entrega
cristalería
1 1 30 de mayo al 4 de Introducción General
junio Reconocimiento de Glúcidos
2 2 06 al 11 de junio Tipos Fundamentales de Proteínas Lácteas
3 3 13 al 18 de junio Actividad Enzimática de la Catalasa
4 4 20 al 25 de junio Extracción e Identificación Cualitativa de
Lípidos
5 5 27 de junio al 02 de Purificación y Caracterización del ADN de la
julio cebolla
NA NA 04 al 08 de julio Entrega de notas finales de laboratorio
INSTRUCCIONES GENERALES
Los días 26 y 27 de mayo, los estudiantes deberán presentarse con el encargado del laboratorio a fin de
proceder con lo siguiente:
Registro de alumnos para distribución de los grupos de laboratorio
Asignación de los grupos de laboratorio y mesas de trabajo
Entrega de cristalería y firma de hoja de responsabilidad.
SESION 1 EN ADELANTE:
Se realizarán varias prácticas de laboratorio, las cuales estarán estructuradas de la siguiente manera:
Actividad Tiempo
Ingreso y entrega de pre práctica, cuaderno de laboratorio y reporte post práctica 5 minutos
Realización del examen corto 15 minutos
Instrucciones generales de la practica 5 minutos
Realización de la practica de laboratorio 55 minutos
Limpieza y almacenamiento del equipo de laboratorio 10 minutos
En la sesión 1, se hará una introducción general del curso antes de iniciar la práctica correspondiente.
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1. MATERIAL DE LABORATORIO
El estudiante cuenta en la mesa de trabajo asignada con un mueble con equipo y cristalería de
laboratorio, del cual es responsable. Al inicio y al final de cada sesión, el estudiante debe revisar su
mueble para cerciorarse que todo esté completo y en buen estado y en caso contrario, debe reportarlo
con el auxiliar antes de iniciar la práctica.
Antes de retirarse del laboratorio, deberá solicitar al auxiliar del laboratorio que revise su equipo y
cristalería para autorizarle la salida. Todo estudiante que quiebre o dañe algún material, aparato o
equipo, debe reponerlo en un máximo de 15 días calendario, siempre y cuando cumpla con las
especificaciones del equipo dañado y presentando la factura de compra respectiva.
2. REQUISITOS PARA REALIZAR LAS PRÁCTICAS
Es importante que el estudiante tenga presente, que debe cumplir con los siguientes requisitos para la
realización de las prácticas, de otra manera se le anotará una ausencia injustificada:
a. Bata de algodón (manga larga y debajo de las rodillas)
b. Lentes de seguridad
c. Zapato bajo cerrado (preferible zapato de seguridad)
d. Vestimenta adecuada (según reglamento, Anexo 1)
e. Pre Laboratorio
f. Cuaderno o Folder de Laboratorio (de acuerdo a lo que le indique el auxiliar del laboratorio)
g. Manual de Laboratorio
3. ASISTENCIA - COMPORTAMIENTO LABORATORIO
La asistencia es obligatoria, se pierde el derecho de ingresar al laboratorio (y se pierde el derecho de
examen final del curso) con más de 2 ausencias justificadas o injustificadas. Si un estudiante falta a una
sesión de laboratorio, no tendrá derecho a reponer, aunque la ausencia sea justificada. Se considera una
ausencia justificada presentar una excusa por trabajo o certificado médico.
En todas las prácticas de laboratorios se evaluará la aplicación correcta de las reglas de seguridad y las
técnicas de laboratorio, dominio de la teoría, objetivos y procedimientos de la práctica a realizar y
comportamiento personal dentro del mismo.
VER EN ANEXO 1 el REGLAMENTO DE LABORATORIOS PARA ESTUDIANTES, TESISTAS E
INVESTIGADORES, que aplica en toda práctica de laboratorio.
NOTA: Si un estudiante comete fraude en alguno de los componentes de la evaluación y desarrollo de la
práctica, se actuará conforme al REGLAMENTO DE NORMAS DE CONVIVENCIA de la URL.
4. EVALUACIÓN
La nota de cada práctica se obtiene de la siguiente forma:
Exámenes cortos (16%):
Los exámenes cortos evalúan el aspecto teórico, procedimiento, reglas y normas de seguridad,
técnicas y equipo de laboratorio, tratamiento estadístico de datos. El examen puede ser oral o
escrito.
Cuaderno o Folder (4%)
El cuaderno o Folder es donde anotará todas sus observaciones y los resultados de la práctica,
éste debe ser de pasta dura (no de espiral) y debe contener los siguientes elementos:
o Fecha, número y nombre de la práctica
o Objetivos: general y específicos
o Diagrama de flujo con metodología (realizado con M. Office Visio)
3
o Hojas de seguridad (MSDS) de los reactivos empleados en cada práctica
o Reacciones
o Preguntas Pre-Práctica (si aplica)
Reporte de laboratorio (80%):
El informe de laboratorio debe elaborarse de acuerdo con el formato dado para cada práctica y
entregarse en la siguiente sesión o cuando el instructor se lo indique. El reporte se divide en dos
partes:
o Pre Laboratorio (20%)
o Post Laboratorio (80%)
Distribución de nota del reporte de laboratorio 1
Parte A Parte B
Punto
Contenido s Contenido Puntos
Índice 0 Abstract 10
Introducción 3 Resultados 10
Fundamento teórico 10 Discusión de resultados 32
Objetivos 3 Conclusiones 15
Metodología 3 Bibliografía 1
Apéndice1
Bibliografía 1 12
(incluye desde 8.1 a 8.5)
TOTAL 20 TOTAL 80
Distribución de Nota Total
Actividad Puntos
5 Exámenes Cortos (3.2 puntos cada uno) 16
5 Pre Laboratorios (3.2 puntos cada uno) 16
5 Post Laboratorios (12.8 puntos cada uno) 64
Cuaderno o Folder de Laboratorio 4
TOTAL 100
1
Consultar ANEXO 2 la GUÍA PARA LA ELABORACIÓN DE REPORTES CIENTÍFICOS Y TÉCNICOS
(ADAPTACIÓN DEL MANUAL DE REPORTE DE QUÍMICA GENERAL) – URL.
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PRÁCTICA No. 1
RECONOCIMIENTO DE GLUCIDOS
I. OBJETIVOS
1. Identificación de glúcidos.
2. Hidrólisis del enlace de un disacárido
II. PREPRACTICA
Revisar conceptos relacionados
III. EQUIPO Y REACTIVOS
REACTIVOS EQUIPO Y MATERIALES
Glucosa 1% Tubos de
Maltosa 1% ensayo
Lactosa 1% Gradilla
Sacarosa 1% Beackers
Almidón 1% Mechero
Reactivos de Fehling A y Fehling B Pinza para
Lugol tubos de ensayo
HCl diluido 20%
Bicarbonato de sodio 10%
IV. PROCEDIMIENTO
1. INVESTIGACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES (REACCIÓN DE FEHLING)
a. Colocar 3 cc de cada uno de los glúcidos en tubos de ensayo debidamente identificados.
b. Añadir 1 cc del reactivo Fehling A y 1 cc del reactivo Fehling B a cada tubo de ensayo. El
líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul.
c. Colocar los tubos de ensayo en baño de María o directamente en un mechero de
laboratorio (esto último con ayuda de una pinza para sujetar el tubo de ensayo y con
mucho cuidado).
d. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo.
e. La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso.
f. Anote los resultados e identifique los azúcares que tienen carácter reductor.
Indique cuál es la base de la reacción de Fehling y la reacción que se lleva a cabo para
identificar los azúcares reductores. Así mismo indique qué glúcidos dan una reacción positiva y/o
negativa y la razón.
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2. IDENTIFICACIÓN DE POLISACÁRIDOS – ALMIDÓN (REACCIÓN DEL LUGOL)
a. Colocar en tubos de ensayo debidamente identificados, 3 cc de cada uno de los glúcidos
a investigar.
b. Añadir a cada tubo de ensayo 1 gota de Lugol.
c. Observar los resultados. Si la solución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta,
la reacción es positiva.
Explique el motivo por el que el almidón da una reacción positiva en presencia de yodo y luego
proceda a realizar la siguiente prueba:
a. Sostenga con una pinza el tubo de ensayo con el almidón y el lugol, que le habrá dado
una coloración violeta y caliéntelo a la llama con precaución, luego déjelo enfriar.
b. Vuelva a calentar y enfriar el tubo cuantas veces quiera.
c. Anote, discuta y justifique el resultado.
Explique el por qué esta reacción solo ocurre en frio e indique si se considera a la reacción del
almidón con yodo como una reacción verdadera. Justifique su respuesta.
3. HIDRÓLISIS DE AZUCARES NO REDUCTORES
a. Colocar 3 cc de una muestra de sacarosa en un tubo de ensayo y añadirle 10 gotas de
ácido clorhídrico al 10%.
b. Calentar el tubo de ensayo a la llama del mechero durante un par de minutos.
c. Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling (ver nota).
d. Observe el resultado.
Nota: Se recomienda neutralizar con bicarbonato antes de realizar la reacción de Fehling, debido
a que se obtienen mejores resultados en un medio que no sea ácido.
Responda lo siguiente:
1. Cuál es la razón por la que en la actividad número 1, la sacarosa da negativa la reacción
de Fehling?
2. Cuál es la razón por la que en esta actividad, después del tratamiento con ácido
clorhídrico (HCl) en caliente, se obtiene una reacción positiva con la prueba de Fehling?
V. POSTPRACTICA:
Preparar y entregar Reporte Final
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PRACTICA No. 2
TIPOS FUNDAMENTALES DE PROTEINAS LACTEAS
l. OBJETIVOS
1. Conocer los constituyentes de la leche y llevar a cabo una separación adecuada de los mismos.
2. Identificar las principales proteínas presentes en la leche.
II. INSTRUCCIONES PRE-PRÁCTICA
Estudie la composición de la leche y la forma de separar sus componentes.
III. EQUIPO Y REACTIVOS
EQUIPO REACTIVOS Y MATERIALES
2 probetas de 50 cc Leche (alumnos)
2 vasos de precipitados de 50 cc Ácido clorhídrico concentrado
2 matraces de 250 cc Hidróxido de sodio 6 M
1 varilla de agitación Sulfato de magnesio en solución
1 vidrio de reloj concentrada
1 espátula Éter
1 potenciómetro o papel pH Acetona
1 balanza
1 plancha de calentamiento
1 soporte
2 embudos de separación
1 termómetro de 0-150 °C
IV. PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO A
1. Coloque 50 cc de leche en un vaso de precipitados tarado y pese la muestra
2. Anote el valor de pH de la muestra.
3. Acidifique la leche con HCl concentrado gota a gota hasta alcanzar un pH de 4.6
4. Anote las observaciones.
5. Separe el precipitado del filtrado usando embudo y papel filtro.
6. Identifique el recipiente donde se recoge el suero y guárdelo para su uso posterior.
7. Transfiera el precipitado a un vaso de precipitados y agregue 10 cc de éter.
8. Agite la muestra con el objeto de mezclar ambas fases.
9. Repita el procedimiento con dos alícuotas de éter de 10 cc cada una.
10. Al sólido residual agregue 15 cc de acetona y homogenice la mezcla. Decante sobre papel filtro
tarado. Deseche el filtrado y repita el procedimiento con 15 cc más de acetona.
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11. Transfiera el papel filtro con el precipitado del paso 10 a un vidrio de reloj y deje secar al
ambiente.
12. Pese cuando el sólido esté seco.
13. Al filtrado reservado en el paso 6, mida el pH y agregue NaOH 6 M gota a gota hasta obtener un
pH de 8.
14. Agregue unas gotas de solución saturada de sulfato de magnesio hasta observar el precipitado
coagulado.
15. Separe el precipitado y péselo cuando esté seco.
PRODEDIMIENTO B
1. Tome una alícuota de 50 cc de leche y colóquela en un vaso de precipitados.
2. Ebullir la muestra durante 30 minutos.
3. Acidifique con HCl gota a gota hasta un valor de pH 4.6. Observe la formación de un precipitado.
4. Separe las fases por decantación y realice los pasos 7 a 12 de la parte del PROCEDIMIENTO A
V. POST PRÁCTICA
1. Complete y prepare el Reporte Final
2. Identifique las fases y compuestos obtenidos en cada uno de los pasos
3. Calcule el % peso/volumen (respecto de la muestra de leche) de cada uno de los compuestos
separados e identificados.
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PRACTICA No. 3
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
I. OBJETIVO
1. Determinar la actividad catalítica de la enzima catalasa.
II. PREPRACTICA
Investigar sobre Catalasa: qué es, dónde se encuentra y cómo se puede acelerar su descomposición.
III. EQUIPO Y REACTIVOS
EQUIPO REACTIVOS Y MATERIALES
Cuchillo para cortar hígado y papas (alumnos) Hígado de pollo (alumnos)
Pipetas Papas (alumnos)
Vaso de precipitados Peróxido de hidrógeno 30%
Kitazatos con tapón de hule
Manguera para adaptar al kitazato y ver la salida
de oxigeno dentro de un beacker con agua
IV. PROCEDIMIENTO
1. Colocar en un vaso de precipitados trozos pequeños de hígado de pollo.
2. Agregar 1 cc de Peróxido de hidrógeno a los pedazos de hígado.
3. Observar los cambios del porcentaje de oxígeno
4. Lavar el vaso de precipitados y repetir el procedimiento con pedazos de papa.
VI. POSTPRACTICA
1. Explique el comportamiento del oxígeno.
2. ¿Qué indica la liberación de oxígeno?
3. Compare los resultados de las dos mediciones y estime cuál muestra produjo más oxígeno.
4. Determine qué reacción química se llevó a cabo en los experimentos.
5. ¿Cómo podría demostrar, sin usar un sensor, que el gas liberado es oxígeno?
6. Investigar qué influencia tienen los peroxisomas en la reacción química con el peróxido de
hidrógeno.
7. Investigar cuál es la importancia de la catalasa para el organismo.
8. Piense cómo explicaría el concepto de enzima a partir de un ejemplo cotidiano.
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PRÁCTICA No. 4
EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN CUALITATIVA DE LÍPIDOS
I. OBJETIVOS
1. Extraer y caracterizar la lecitina y el colesterol de yema de huevo.
2. Determinar cualitativamente la presencia de colina, fosfatos y glicerol en un hidrolizado de
lecitina.
II. PREPRÁCTICA
Revisar conceptos relacionados: Lípidos, clasificación general de los lípidos y funciones,
colesterol, lecitinas, colina, fosfatos y glicerol.
Consultar antes de la práctica:
1. Es saponificable el colesterol? Justifique su respuesta.
2. Cuáles deben ser los valores promedio del colesterol total, triglicéridos y lipoproteínas
(VLDL, LDL, HDL)?. Son los mismos para todas las edades?
3. De cuáles compuestos es precursor el colesterol?
4. En qué órgano y a partir de qué compuesto se sintetiza el colesterol en los humanos?
III. EQUIPO Y REACTIVOS
EQUIPO REACTIVOS Y MATERIALES
Mortero Yema de huevo cocida (alumnos)
Manta de calentamiento Mezcla etanol:éter 2:1
Vaso de precipitado de 100 cc Mezcla cloroformo:etanol 2:1
Balanza Ácido sulfúrico concentrado
Embudo Ácido molíbdico
Erlenmeyer Ácido ascórbico 1 mg/cc recién
Varilla de vidrio preparado
Pipetas Agua de bromo
Probeta de 25 cc Naftol al 5%
Tubos de ensayo Anhídrido acético
Gradilla para tubos de ensayo Éter
Papel filtro Acetona
IV. PROCEDIMIENTO
1. Pesar media yema de huevo cocido.
2. Adicionar 20 cc de una mezcla de etanol:éter 2:1. Macere en un mortero, deje en reposo 10
minutos con agitación ocasional.
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3. Filtrar la solución. Recoger el filtrado en un vaso de precipitado de 100 cc.
4. Evapore el filtrado en baño de María usando una manta de calentamiento. Pesar los lípidos
totales.
5. Posteriormente, disolver los lípidos totales en 5 cc de éter, adicionar a esta solución 15 cc de
acetona. El precipitado obtenido es el contenido de Lecitina en la yema. Aglomere el
precipitado de Lecitina. Decante y filtre de nuevo.
6. Evaporar y pesar el precipitado de Lecitina. Guardar el sobrenadante (Triglicéridos +
Colesterol) para el análisis de colesterol.
7. Después de pesar el precipitado de Lecitina, disuélvalo nuevamente en 10 cc de una mezcla
de etanol:éter 2:1, filtre y realice la siguiente prueba:
7.1. Identificación de Fosfatos: Transfiera 1 cc del filtrado a un tubo de ensayo y adicione 1
cc de ácido molíbdico, agite y deje reposar por 3 minutos. Adicionar 1 cc de solución de
ácido ascórbico y observe la formación de un color azul.
7.2. Detección de Colina: Transfiera 1 cc de filtrado a un tubo de ensayo y caliente
suavemente en un mechero o en un baño de agua hirviendo. La trimetilamina liberada
se caracteriza por un olor a pescado.
7.3. Identificación de Glicerol: Transfiera 2 cc de filtrado a un tubo de ensayo y adicione 2 cc
de agua de bromo, agitar. Calentar en la campana para expulsar el exceso de bromo.
Tomar 0.4 cc de esta solución + 0.1 cc de solución de naftol al 5% en etanol y agitar.
Adicionar 40 gotas de ácido sulfúrico. Calentar 2 minutos en baño de María y enfriar.
Observar la aparición de coloración verde.
8. Identificación de Colesterol con el reactivo de Liberman Burchard:
8.1. Transfiera 2 cc del sobrenadante del paso 6 a un tubo de ensayo y añada 10 gotas de
anhídrido acético y 2 gotas de ácido sulfúrico concentrado. La aparición de una
coloración verde es indicadora de la presencia de colesterol.
V. POSTPRÁCTICA
Completar y entregar el Reporte Final
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PRÁCTICA 5
PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DEL ADN DE LA CEBOLLA
I. OBJETIVOS
1. Purificar el ADN de células vegetales.
2. Observar la estructura fibrilar del ADN.
II. PREPRÁCTICA
Revisar conceptos relacionados: Ácido desoxirribonucleico, ácidos nucleicos, propiedades físicas
de ácidos nucleicos, componentes.
III. EQUIPO Y REACTIVOS
EQUIPO REACTIVOS Y MATERIALES
Vaso de precipitado Una cebolla grande fresca (alumnos)
Tubos de ensayo Agua desionizada
Gradilla para tubos de ensayo EDTA
Varilla de vidrio Dodecilsulfato de sodio (SDS) al
Micropipetas automáticas 0.1%
Puntas desechables Difenilamina
Agitador y magnetos agitar Etanol al 95%
Ácido sulfúrico concentrado
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES STOCK Y BUFFER:
1. Solución de lisis: Mezclar 0.1% de SDS con una solución 25 mM de EDTA, pH=8.
2. Reactivo de difenilamina: Disolver 1 g de Difenilamina en 100 cc de ácido acético glacial y
adicionar 2.75 cc de ácido sulfúrico concentrado.
IV. PROCEDIMIENTO
1. Descascarar una cebolla de tamaño medio.
2. Rajar la cebolla, pesar 50 g y adicionar 100 cc de solución de lisis.
3. Mezclar a temperatura ambiente por 10 a 20 minutos.
4. Filtrar la suspensión en un embudo que contenga algodón, recogiendo el filtrado en una
probeta. Anotar el volumen.
5. Transferir 4 cc del filtrado y colocar en un tubo de ensayo. Adicionar 8 cc de etanol al 95%
(se debe adicionar gota a gota) procurando no mezclar ambas soluciones. Observar la
formación de un precipitado blanco. Con la ayuda de una varilla de vidrio enrollar el
precipitado.
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6. Transferir el material a otro tubo de ensayo y adicionar 0.5 cc de agua. A esta solución
adicionar 1.5 cc de reactivo de difenilamina.
7. En otro tubo de ensayo adicionar 0.5 cc de agua y1.5 cc de reactivo de difenilamina.
8. Colocar los dos tubos en baño de María fuerte por 10 minutos. Comparar los resultados
obtenidos.
9. El volumen restante del filtrado debe ser transferido a un vaso de precipitado y adicionar dos
volúmenes de etanol a 95%. Transferir el precipitado obtenido a un tubo de ensayo.
10. Disolver el precipitado en 5 cc de agua con ayuda de la varilla de vidrio. Dividir esta solución
en dos tubos para observar las diferencias de viscosidad en las diferentes condiciones.
11. Pipetear la solución de uno de los tubos con una pipeta graduada de 0.2 cc y cronometrar el
tiempo de flujo de salida (dejar caer libremente el líquido por gravedad) de la solución hasta
extraer 0.15 cc.
12. El otro tubo debe ser calentado en baño de María por 10 minutos. Después del período de
calentamiento proceder como en el inciso 11, anotando el tiempo de flujo.
13. Enfriar esta solución en hielo por 15 minutos y repetir el procedimiento 11.
14. Interpretar los resultados.
V. POSTPRÁCTICA
1. Responda las siguientes preguntas:
a. Cuál es la función de los dos componentes de la solución de lisis? Explique
b. A qué se debe la diferencia de viscosidades del ADN observada en los experimentos?
2. Completar y entregar el Reporte Final.
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BIBLIOGRAFÍA
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México.
2. Bohinsky, R. 1991. Bioquímica. 5a ed. Addison Wesley Iberoamericana, N.Y.
Córdova Frunz, J.L. 1990. La química y la cocina. F.C.E. México.
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9. Voet, D. y Voet, J . 1990. Biochemistry. John Wiley & Sons, N.Y.
10. "Bioquímica. Libro de texto con aplicaciones clínicas". 4ª ed. Devlin, T.M. Ed. Reverté. 2004. El
principal interés está en las aplicaciones clínicas que aparecen en cada tema.
11. "Bioquímica" 3ª ed. Mathews, C.K., Van Holde, K.E. y Ahern, K.G. Ed. Addison Wesley. 2002. Un
buen texto de Bioquímica general. Muy completo y actualizado. Buenos esquemas e
ilustraciones.
12. "Bioquímica: la base molecular de la vida" 3ª ed. McKee T, McKee, J.R. Ed. Mc Graw Hill
Interamericana, 2003. Un buen texto, con ejercicios y aplicaciones clínicas al final de cada
capítulo.
13. “Basic Medical Biochemistry. A Clinical Approach”. Marks, D.B, Marks, A.D and Smith, C.M.
Williams and Wilkins.1996. Perfectamente adaptado a los contenidos de un curso básico de
Bioquímica en Medicina. Esquemas clarísimos y muchos casos clínicos en clave de humor.
14. “Bioquímica”. 5ª ed. Berg, J., Tymoczko, J. Stryer, L. Ed. W.H. Reverté. 2003. Otro clásico de la
Bioquímica. Recomendable para los temas de ácidos nucleicos e información genética.
Páginas web utilizadas y consultadas para la elaboración y adaptación de este manual
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5. http://ellaboratorio.servit.org
6. http://www.joseacortes.com/practicas/lipidos.htm
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8. http://www.arrakis.es/~rfluengo/proteinas.html
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11. http://sebbm.bq.ub.es/BioROM/contenido/av_biomo/Mat1b.html
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