Penicillium Digitatum
Las patologías fúngicas son una de las principales causas de las pérdidas ocasionadas durante
la manipulación y conservación postcosecha de los frutos. Los porcentajes que se pierden en la
producción varían según las condiciones ambientales dependiendo de la campaña, la época del
año, la madurez del fruto, y los procesos de recolección, almacenamiento, confección y
comercialización. Se estima que entre el 3 y el 5 % de las pérdidas postcosecha son debidas a
podredumbres, pudiendo alcanzar el 8-12 % en años de climatología favorable para el
desarrollo de las infecciones fúngicas (Tuset, 1987).
Los hongos Penicillium digitatum y Penicillium italicum, causantes de la podredumbre verde y
azul, respectivamente, contribuyen al 60-80 % del total de los podridos producidos (Tuset,
1987). Ambos hongos están estrechamente relacionados filogenética y biológicamente (Tuset,
1987; López-García et al., 2002). A diferencia de P. digitatum, P. italicum se desarrolla
principalmente durante la frigoconservación a temperaturas próximas a 5 ºC y si bien es un
patógeno importante de frutos cítricos también puede atacar otros frutos y vegetales.
Un aspecto relevante es que P. digitatum afecta específicamente a los frutos cítricos, ya que no
ha sido descrito de forma natural en otros órganos vegetales. Es un hongo necrótrofo que
penetra en el tejido vegetal a través de las heridas producidas por agentes externos bióticos o
abióticos en la parte coloreada de la piel del cítrico
El signo visible del desarrollo del hongo es la presencia del micelio blanquecino sobre la
superficie de la lesión que luego cambia al color verde oliváceo debido a la esporulación del
patógeno. Los cultivos axénicos de este hongo en placas de agar patata dextrosa (PDA) son
colonias típicas de color verde.
Características principales:
Presenta micelios de crecimiento rápido
• Aspecto: Aterciopelado o pulvurulento y rugosidades radiales. La colonia es inicialmente
blanca y vellosa; a medida que se producen esporas pigmentadas, toman matiz verde o verde
azulado. A veces se observan variantes amarillas o tostadas. A menudo se forman rugosidades
radiales.
• CRECIMIENTO: 22-30º, 7-10 dias.
Aislamiento:
La cepa silvestre PHI26 de P. digitatum utilizada en esta tesis se creció en placas de medio
sólido PDA (agar patata dextrosa, Difco), a la temperatura óptima de 24 ºC durante 7-10 días.
Generalmente, luego de 7 días de incubación (hasta 12 días en el caso de los transformantes
con dificultades de crecimiento) se recogieron los conidios rascando las placas esporuladas con
asas estériles y resuspendiéndolos en agua estéril. Luego se filtraron con velo de novia y se
diluyeron para su recuento en cámara cuenta glóbulos (Neubahuer improved) para ajustar a la
concentración deseada en cada experimento.
Cajeta este ve’
Pa’ velo en lo microcopio:
El blanco de calcofluor es un compuesto que se une a la quitina presente en las paredes
celulares de los hongos permitiendo su detección y visualización por microscopía de
fluorescencia (Pringle, 1991). La observación de la fluorescencia se hizo mediante un
microscopio de epifluorescencia (E90i, Nikon) con contraste interferencial diferencial (DIC)
para campo claro y la fluorescencia del CFW se detectó con los filtros de longitudes de onda de
excitación/emisión de 395/440 nm, respectivamente. Las fotografías se tomaron generalmente
con el objetivo 40x usando el programa NIS-Elements BR (v2.3, Nikon). Para analizar la
morfología de las cepas fúngicas por microscopía de fluorescencia se utilizó el procedimiento
descrito por (Harris et al., 1994). Se depositaron 100 L de una suspensión de 5 x 104
conidios/mL preparada en medio PDB en el centro de portaobjetos de vidrio. Luego de 24, 48,
72 h de incubación a 24 ºC en ambiente saturado de humedad, se trataron con 100 L de una
solución de fijación (formaldheído 3,7 %; tampón fosfato salino PBS 50 mM, pH 7; Triton X-100
0,2 %) durante 30-60 min, se escurrieron y agregaron 100 L de tampón PBS pH 7. Se trataron
con una solución de CFW 0,1 % p/v a una concentración final de 50 g/mL, durante 10 min en
oscuridad y lavaron con tampón PBS pH 7, se escurrieron los portaobjetos y luego se les agregó
una solución de montaje (PBS diluido 1/10, glicerol 50 % v/v).
Microscopia:
Las especies de Penicillium (excepto P. marneffei), hifas septadas hialinas (1.5-5 µ de
diámetero), con conidióforos simples o ramificadas, métulas, fialides y conidias. Las métulas
son ramificaciones secundarias que se forman sobre los conidióforos. Las métulas acarrean
fialides en forma de frasco. La organización de las fialides en la punta de los conidioforos es
típica (llamadas "penicilli" o pincel). Las conidias (2.5-5µ de diámetro) son redondas,
unicelulares y observadas como cadenas no ramificadas en el extremo de las fialides.
