MICROSCOPIA - MANEJO Y MEDICIONES.
ÁLVAREZ G, Diego, CABRERA V, Daniel, MIRA R, Cristian, PELÁEZ A, Julián,
Universidad Libre- Seccional Cali. Facultad de Ciencias de la Salud. Programa de
Medicina. Primer Semestre.
RESULTADOS: A continuación, se observarán los resultados obtenidos posterior a la
realización de los protocolos:
PROTOCOLO 1:
Se observó en la muestra con aumento de 4X que la imagen se encontraba en posición inversa o
invertida; al mover la lámina hacia la derecha, la imagen lo hacía hacia la izquierda y siguiendo
este mismo comportamiento, al mover la lámina hacia adelante, esta se movía hacia atrás.
Cambiando el objetivo a 10X se observa que la imagen no cambia de posición pero sí de tamaño.
Respecto a la iluminación, se observó que disminuyó junto con el campo de observación
respecto con la imagen obtenida con el aumento de 4X.
4X 10X 40X
Tabla No. 1 se observa la letra “e” aumentando de tamaño al cambiar de objetivo
PROTOCOLO 2:
Se observaron aproximadamente 5.0 líneas verticales, las cuales indicaron un diámetro del
campo visual de 5.0 mm, como se puede observar en la figura No. 1. Al pasar las medidas a los
otros objetivos se obtuvo que la medida del objetivo 10X era 2.0, la del objetivo 40X era 0.5 y la
del objetivo 100X era 0.2. Esto lo podemos evidenciar en la tabla No.2 en la cual se muestran las
anteriores medidas en mm y en µm. Al contestar las preguntas de aplicación se obtuvieron los
siguientes resultados: a medida que aumenta el objetivo, el diámetro del campo visual
disminuye. con el objetivo de 10X, la altura de la letra “e” fue de 4.5 mm (4500µm); El diámetro
del óvulo humano midió 1.5 mm. finalmente el la cabeza de un espermatozoide midió 5000 nm.
Figura No. 1: pedazo de papel milimetrado con el objetivo 4X
Unidades 4X 10X 40X 100X
mm 5 2 0.5 0.2
µm 5000 2000 500 200
Tabla No. 2 medidas microscópicas: diámetro de campo.
PROTOCOLO 3.
En la figura No.2, se distinguen 9 puntos(violetas) Estos se hallan a una distancia aproximada
de 222,22 µm. El poder de resolución para cada objetivo se observa en nanómetros y micras en
la tabla No. 3
Figura No.2 Fotografía de un fragmento de revista con montaje en fresco a 10X
PR 4X 10X 40X 100X
nm 2800 1120 430,77 224
µm 2,8 1,12 0,43 0,224
Tabla No.3 poder de resolución de los objetivos con una longitud de onda de 560 nm
PROTOCOLO 4:
A continuación se muestran los resultados del poder de penetración con un aumento de 10x en
microscopia óptica con un montaje en fresco.
- Plano superior.
Figura No 3. Fotografía de fibras de hilo en un aumento de 10x montaje en fresco con un plano superior
destaca la fibra azul
Plano Medio
Figura No 4. Fotografía de fibras de hilo en un aumento de 10x montaje en fresco con un plano medio
destaca la fibra blanca
- Plano inferior
Figura No 5. Fotografía de fibras de hilo en un aumento de 10x montaje en fresco con un plano inferior
destaca la fibra naranja
DISCUSIÓN:
PROTOCOLO 1.
Desde la óptica se explica que los objetos ubicados cerca del foco del objetivo en relación al foco
del ocular, dan como resultado una imagen virtual y de gran amplitud. Las imágenes observadas
con el microscopio son invertidas con respecto a cómo se ubican en el portaobjeto gracias al
fenómeno de la refracción de la luz y al lente convexo del objetivo. El cambio de posición de la
imagen se debe únicamente al lente objetivo, mientras que el ocular no tiene ninguna relación
con este fenómeno.(Bautista L. s.f., Cooper GM, ).
Figura N° 6. imagen tomada de Óptica: la lupa, microscopio compuesto, telescopio. camara fotografica.
(Bautista L. s.f.). fenómeno óptico con respecto al movimiento y visualización a través del microscopio.
La iluminación es mayor en el caso del objetivo con aumento 10X con respecto al de 4X pues
esta es dependiente de la apertura numérica la cual es una medida de la capacidad para recoger la
luz y resolver detalles pequeños a una distancia objeto fija y el objetivo de 10X posee una
apertura numérica mayor a la de el de 4X. (Martínez M, 1998.)
PROTOCOLO 2.
Con respecto al aumento del objetivo y el campo visual , se debe decir que estos presentan
una relación inversa, puesto que a medida que se aumenta el objetivo pasando de 4X a 10X y de
este último a 40X, se observa que disminuye el campo visual de la imagen, y esta, se agranda
cada vez más hasta el punto de perder su su totalidad, como pudo apreciarse en la letra “e”. Esto
se debe a que a medida que aumenta el objetivo, la altura de la imagen o la distancia de enfoque
disminuye y la luz se refleja más en el objetivo, el primer cambio, que fue la altura de la imagen,
hace que el campo visual pierda la totalidad de la imagen y por consiguiente, disminuya. el
segundo cambio, que fue el enfoque de luz, permite que haya una mejor resolución de la imagen,
esto quiere decir que a medida que aumenta el objetivo, la resolucion tambien lo hace. ( Harley,
2004)
PROTOCOLO 3.
Tal como se observa en la tabla No. 3, cada uno de los objetivos (4X, 10X, 40X y 100X) del
microscopio óptico con una longitud de onda de 560 nm, podemos afirmar que a medida de que
aumenta el objetivo aumenta la capacidad de diferenciar dos puntos muy cercanos también
aumenta. . El microscopio óptico puede llegar a presentar una poder resolución máximo (100X)
de 0.22 a 0.25 µm lo cual comparado con los datos obtenidos en la prácticas coinciden estando
nuestros datos dentro de este margen. siendo 454.54 veces mayor que el poder de resolución del
ojo humano que tiene un poder de resolución de alrededor 100 µm (Barnes, 2006). por ende, la
resolución para el objetivo de 40X es mayor 232.55 veces; la del objetivo de 10X es mayor 89.28
veces y, finalmente, la del objetivo de 4X es mayor 35.71 veces. por esta razón el ojo humano es
incapaz de ver características físicas de la manera en la que permite ver el microscopio.
Con respecto a la comparación del poder de resolución del microscopio óptico y el microscopio
de fluorescencia, radica en la longitud de onda de la luz utilizada, la cual varía mucho
dependiendo de el fluorocromo que se utilice en el microscopio de fluorescencia y cada uno de
ellos tiene su espectro de absorción y de emisión específico que depende de la composición y
estructura de la molécula fluorescente, por lo general el espectro de emisión resulta siendo mayor
al de absorción por lo que garantiza un mejor resolución a diferencia del microscopio óptico
(Cabrestrero, 2007).
PROTOCOLO 4.
cuando hablamos de poder de penetración, estamos hablando de Profundidad de Foco y
profundidad de campo: es la resolución espacial discernible por un detector( ojos lentes camara
etc) se da por un diámetro mínimo en ´B´ donde las “manchas imagen de dos puntos no son
distinguibles, es decir que nuestros planos inferior medio y superior se encuentran entre -b y +b
que está dado por el diámetro del objetivo representado en la figura 7 por B´ la imagen podrá ser
enfocada mientras su diámetro sea menor y permanezca en la distancia correcta, lo que nosotros
vemos como planos son en realidad enfoques que se dan en -b y b+ dependientes de la luz y su
espectro de onda visible. entonces tenemos que todo lo que se encuentre más allá de b+ no se
podrá observar porque supera el diámetro del objetivo y todo lo que se encuentre más cerca de -b
tampoco, mientras que lo que encontremos en -b y b+ será perfectamente enfocable teniendo su
mejor enfoque con la mínima cantidad de manchas imagen este foco esta representado en la
figura 7 como Foco nominal.(Gomez 2006,Garcia 1996)
Figura N° 7. Imagen tomada de Conceptos de Óptica Geométrica (Gomez 2006) esquema de lentes y
dirección de luz
CONCLUSIONES
● En conclusión, el microscopio óptico es una herramienta eficaz para la observación de los
objetos a una distancia muy reducida. Sus tres poderes son los que le permiten tener esta
capacidad a diferencia de otros objetos utilizados en el campo de la investigación, sobre
todo el poder de resolución. Esta es una herramienta que le permite al ser humano ver
más allá de lo que está a simple vista, ya que el órgano encargado de esta función (el ojo)
no tiene la capacidad que se puede obtener con un microscopio. Se puede observar esto
en el estudio de virus y bacterias, las cuales son afortunadamente detectadas por el uso
del microscopio en la ciencia.
● Además, se constata que el poder de resolución es fundamental para realizar una
observación a través de un microscopio. En el caso de la revista, sólo se puede observar
la estructura general que forma el conjunto de puntos (las letras), en cambio con el poder
de resolución del microscopio que es mucho mayor al del ojo se alcanzó a detallar
perfectamente los puntos y sus respectivos espacios que separan a los mismos y que
fueron plasmados por la imprenta. Por otro lado, la importancia del poder de resolución
durante la observación del pétalo, radica en la diferenciación de capas que la conforman,
la capa color fucsia seguramente presenta un mayor número de células que la segunda
capa, lo que explicaría su intenso color fucsia, comparado con el pálido tono de la
subyacente.
● También, el campo visual es una característica intrínseca de cada objetivo, la cual
permite ver la totalidad de una imagen, pero que a medida que se aumenta el objetivo,
este va disminuyendo hasta que solo se puede observar un pequeño pedazo de la imagen,
con mayor nitidez pero solo siendo una parte de esta.
● Los resultados obtenidos en comparación con la teoría fueron similares concluyendo que
tuvimos cierta precisión y exactitud al realizar la práctica, basándonos muy bien en lo que
se indicaba en la guia logrando reducir el margen de error durante la práctica gracias a la
buena disposición y concentración que se tuvo al frente de esta situación.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
● Martínez M. Furlan W. Ponds A. Saavedra G. (1998). Instrumentos opticos y optometría.
Teoria y practica. España. Editorial Els Autors. p.90
● Barnes N.S, Curtis H, Flores G, Schnek A. (2006). Introducción a la biología (6ta ed. ).
España. Editorial médica panamericana.
● Cooper GM, Hausman.(2014). Microscopía óptica. LA CÉLULA. Madrid. Editorial
Maraban; p. 22-23.
● Cabrestrero Alonso R, Maestú Unturb F, Ríos Lago M. (2007). Neuroimagen: tecnicas y
procesos cognitivos. España. Editorial Elsevier Masson. p 14.
● Garcia Jose, Fundamentos de Optica Geometrica.(1996) . servicio de publicaciones
Universidad de Oviedo p100
● Gomez Emilio. Conceptos de Optica Geometrica (2006) Universidad de Sevilla. p 25
● Harley, Prescott Klein. Microbiología 2004. Segunda edición. España: Mcgraw - Hill
interamericana. p20.
● Bautista L. Optica: la lupa, microscopio compuesto, telescopio. camara fotografica. (s.f.).
Fisicanet. Recuperado de
[Link]
