ENZIMAS LIPASAS
Tatiana Alejandra Cárdenas Solano
BIOTECNOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
2020
Las lipasas son enzimas que catalizan la hidrólisis de los enlaces éster presentes en los acilgliceroles.
Además, pueden catalizar la hidrólisis o síntesis de ésteres carboxílicos. Estas enzimas están
ampliamente distribuidas en la naturaleza, y se encuentran en microorganismos, plantas y animales,
como enzimas extracelulares (González et al 2009).
Figura 1. Reacción química llevada a cabo por las lipasas
Clasificación
Las lipasas hacen parte de las enzimas hidrolasas y actúan sobre enlaces ésteres, pero especialmente
sobre los ésteres carboxílicos. Por eso, estas enzimas tienen una clasificación EC de [Link].
3 Hidrolasas
3.1 Esterasas, nucleasas, fosfodiesterasas, 3.1.1 Hidrolasas de [Link] Triacilglicerol
lipasas fosfatasas ésteres carboxílicos lipasa
3.2 Glucosidasas
3.3 Enlaces éter.
3.4 Peptidasas
Figura 2. Clasificación de las hidrolasas
Obtención
Estas enzimas se pueden obtener de 3 tipos de fuentes diferentes; origen animal (tejidos del páncreas),
origen vegetal (derivada del germen de trigo y avena) y origen microbiano (sintetizadas por hongo
como Aspergillus, Penicillium, levaduras y bacterias como Bacillus).
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Obtención del Producción de la Extracción
cultivo celular enzima enzimática
Tomar colonias
Deben estar en un
aisladas de un medio nutritivo
cultivo
Pasarlas a un Compuesto por 12 g/L NaH2PO4;
medio modificado 2g/L KH2PO4; 7g/L MgSO4; 0.3 g/L
para producción H2O; 0.25g/L CaCl2; (NH₄)₂SO₄ 1%,
enzimática y aceite de oliva al 2%
30ºC por 6-8 días, con un pH
Incubar
ajustado de 6
Suspensión de
Proporción 1:9
colonias en agua
destilada Hernández et al 2001
Agitación
200 rpm por 1 hora a TºA.
constante
Cujilema et al 2018
Centrifugar 10000 rpm por 15 minuto
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Purificación Caracterización
Obtención de
extracto crudo Proceso de extracción
enzimático
Adición de sulfato Solución del 60% v/v
de amonio con agitación
Centrifugación 10000 rpm por 15 minutos
Diálisis 4ºC por 48 horas
Bella & Barrera 1999
Tubos de ensayo con p-nitrofenil hexanoato (pNP6), pnitrofenil
enzima purificada, buffer y caprilato (pNP8), p-nitrofenil laurato (pNP12) y
diferentes sustratos. TºA p-nitrofenil estearato (pNP18).
Tubos de ensayo con enzima tampón 50 mM Tris/maleico (pH 5-6) ajustado
purificada, sustrato definido y con NaCl; y tampón 50 mM Tris, CaCl2 40 mM
diferente buffer. TºA ajustado con HCl (pH 7-9)
Tubos de ensayo con enzima
Variación de temperatura,
purificada, sustrato definido,
de 30 a 70ºC
buffer y diferente temperatura
García 2017
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Características de las lipasas
Las lipasas están compuestas por ocho cadenas β que forman una hoja β. Estas cadenas están
conectadas por hélices α, que quedan empaquetadas a ambos lados de la hoja β. Este núcleo central
es el responsable directo de la actividad catalítica y define el plegamiento α/β-hidrolasa, común para
muchas hidrolasas. La actividad funcional de las lipasas se sustenta en la tríada de aminoácidos
clásica: nucleófilo-ácido-histidina.
Figura 3. Plegamiento de la lipasa, con sus respectivas cadenas
Una característica peculiar de las lipasas es que son enzimas solubles en agua que actúan sobre
sustratos insolubles y agregados, por lo que operan unidas a interfaces lípido-agua, bajo estas
condiciones, se produce un incremento de la actividad catalítica. Si bien las lipasas han sido definidas
como enzimas específicas para catalizar la separación hidrolítica de los ácidos grasos de cadena larga
presentes en los acilgliceroles, los cuales son sus sustratos naturales, muy pocas lipasas son
específicas en sus reacciones. Por este motivo, el término especificidad se ha ido reemplazando en la
literatura por el de selectividad, el cual describe mucho mejor el comportamiento reactivo de estas
hidrolasas. Las lipasas pueden ser selectivas por la clase de lípido y por la posición y el tipo de ácido
graso. Estas enzimas pueden ser además estereoselectivas, y alcanzan a distinguir entre enantiómeros,
frente a sustratos racémicos.
La temperatura óptima para las lipasas puede encontrarse en el intervalo entre 35 y 50 °C, aunque
existen lipasas termoestables que exhiben valores de temperatura óptima superiores a 50 °C
(González et al, 2009). Por otro lado, el pH óptimo para las lipasas se encuentra generalmente en el
intervalo entre 7,0 y 9,0, cuando la actividad enzimática se ensaya frente a sus sustratos específicos,
como el aceite de oliva, la tributirina, otros triacilglicéridos pequeños y la trioleína. No obstante, para
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algunas lipasas, el pH óptimo se encuentra en la región acídica. Asimismo, se han encontrado lipasas
con la mayor actividad a valores de pH más alcalinos (González et al, 2009).
Las lipasas son inhibidas por los organofosfatos como el dietil-p-nitrofenilfosfato. También son
inhibidores de lipasas los ácidos borónicos y el fenil-metil-sulfonilfluoruro, así como los metales
pesados, el EDTA, algunos terpenos, los iones halógenos, los alcaloides, el cloroformo, el n-hexanol,
el dietil-fenil carbonato, el bromoformo y varias lactonas. Algunas proteínas hidrofóbicas, como la
albúmina de suero bovino, inhiben a las lipasas mediante su unión competitiva a las interfaces. Los
detergentes y las emulsiones de varios solventes orgánicos pueden actuar como inhibidores de las
lipasas. Algunos autores han informado inhibición competitiva causada por concentraciones elevadas
de detergentes.
Aplicación biotecnológica
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Identificación
Placa Petri Espectrofotometría
Compuesto por: 0.01 % Rojo fenol,
Preparación de 1% aceite de oliva, CaCl2 10mN, 2%
medio de cultivo Agar. El pH ajustado con NaOH 0.1
M a 8.0. Autoclavar.
Adición del crudo 100 µL de muestra proteica en
enzimático a la placa concentraciones: 0.4, 0.04 y 0.004
por perforación al mg/mL (diluciones en buffer
medio fosfato pH 7), 0.04 mg/mL
(dilución en agua); y como
controles; agua y buffer fosfato.
30ºC por 2,5 horas, observar viraje
Incubar
del medio por acidificación.
Lazcano 2018
Adición de para-
nitrofenilo de En un tubo de ensayo con solución
propianato a la buffer de pH 7
muestra proteica
30ºC por 2 horas. Observar
Incubar coloración de la solución por
producción de p-nitrofenol
Lectura 400nm cada hora determinando la
espectrofotométrica actividad enzimática.
Hernández et al 2001
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REFERENCIAS
Bella, A.; Barrera, D.; 1999; Estudio comparativo de la obtención de extractos crudos y
semipurificados de lipasa de salvado de arroz; UNICAMP; 50 (3); 177-180
Cujilema, M.; León, G.; Rizo, M.; Taramona, L.; Beltrán, L.; 2017; Producción de lipasas por
fermentación sólida con aspergillus niger: influencia del pH; Recuperado de;
[Link]
García, N.; 2018; Caracterización bioquímica de una lipasa obtenida a partir de una metagenoteca de
aguas termales; Recuperado de;
[Link]
uence=2&isAllowed=y
González, J.; Rodríguez, J.; Martínez, A.; 2009; Las lipasas: enzimas con potencial para el desarrollo
de biocatalizadores inmovilizados por adsorción interfacial; Recuperado de;
[Link]
Hernández, O.; Coca, J.; Berrio, R.; Martínez, S.; Díaz, E.; Dustet, J.; 2001; Producción y
caracterización de las lipasas de Aspergillus niger y A. fumigatus; Recuperado de;
[Link]
Lazcano, L.; 2018; Producción, extracción y caracterización de lipasas provenientes de la levadura
antártica Guehomyces pullulans; Recuperado de; [Link]
Rivera, C.; García, F.; 2007; Enzimas lipolíticas y su aplicación en la industria del aceite;
BioTecnoología; 11 (2); 37-45
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