Ciclo celular eucariota 591

Reguladores de la Progresión
del ciclo celular 599
Sucesos de la fase M 608
Meiosis y fecundación 615
Céluias madre Y mantenimiento
de tejidos adultos 621
ExpeRrveruto cLnvr:
Descubrimiento del MPF 600

ExpeRtn¡Ento cLeve:
Cultivo de células madre A CAPACIDAD DE AUTORREPRODUCIRSE PHOBABLEI\¡ENTE SEA LA CARACTERISTI'
embrionarias 622 CA FUNDAMENTAL de las células igual que podría decirse de los seres
-al
vivos-" Todas las células se reproducen mediante su división en dos,
cada célula parental dando lugar a dos células hijas al final de cada ciclo de
división celular. Estas células hijas, a su vez pueden crecer y dividirse, dando
lugar a una población celular a partir del crecimiento y la división de una Única
célula parental y de su progenie. En el caso más sencillo, estos ciclos de creci-
miento y división permiten a una única bacteria, tras la incubación, durante una
noche, en una placa de agar con medio provisto de nutrientes, formar una
colonia constituida por una progenle de millones de células. En un caso más
complejo, ciclos repetidos de crecimiento y división celular suponen el desa-
rrollo de una célula huevo fecundada, dando lugar a las más de 1013 células
que componen el cuerpo humano.
La división de todas las células ha de ser finamente regulada y coordinada
con el crecimiento celular y con la replicación del ADN, para asegurar la forma-
ción de una progenie de células que contengan sus genomas completos. En las
células eucariotas, la progresión a lo largo del ciclo celular la controia una Serie
de proteína quinasas que se han conservado desde las levaduras hasta los
mamíferos. En los eucariotas superiores, esta maquinaria del ciclo celular a su
vez está regulada por los factores de crecimiento que controlan la proliferación
celular, lo que perm¡te coordinar la división de las células individuales con las
necesidades del organismo como un todo. No debe extrañar que las alteracio-
nes en la regulación del ciclo celular sean una causa frecuente de la prolifera-
ción anormal de las células cancerosas; por tanto, los estudios acerca del ciclo
celular y del cáncer se han solapado, de igual manera que están relacionados
los estudios acerca del cáncer y cle las vías de señalización celular como se vio
en el Capítulo 13.

{-, i;- ir-' *:*3i¡É*; *L§{-;'}-';i-:,i,,':

El ciclo de la división de la mayoría de las células consiste en cuatro procesos

coordinados: crecimiento celular, replicación del ADN, distribución de los cro-
mosomas duplicados a las células hijas y división celular. En las bacterias, el
crecimiento celular y la replicación dei ADN tienen lugar durante la mayor parte
del ciclo celular, y los cromosomas duplicados se distribuyen a las células hijas
asociados a la membrana plasmática, Sin embargo, en los eucariotas el ciclo
celular es más complejo y consiste en cuatro fases diferenc¡adas. Aunque el
crecimiento celular suele ser un proceso continuo, el ADN se sintetiza sólo du-

591
598 o Sección lV'Regulación celular

en ta deten-
G,' La proteína p53 iuega un papel clave
7:{: J:J1ten la detención en estabiliza a
fosf orilációIn por ATM y chk2
ción der cicro celurar en o-rñio á" üntror b,. La
", á" i". .i"áles de p5i en respuesta al ADN daña-
ADN dañado p53. resuttando en un ,..I#á""Üráóiü" la
la expresión d'" genet que desencadenan
do. La proteína p53 a
I "o'itin'utlon'induce
detención del ciclo celular'

;D*
+
se encuentra mutado en
yar que el gen que codifica para p53 frecuentemente
función de p53 como resultado de estas
cánceres humanos. Lá óá[Link]á oL la
respuesta al ADN dañado' de modo
mutaciones, impide la detención en G, en
hiias' en lugar de ser reparado La
-\ I que es replicado y ,,unttiiiJo a las células
herenciadeesteADNdañadoresulta"n'nuelevacióndelafrecuenciade
celular' l1
general del genoma contribuye Oue
mutaciones y de la inestanitiJaO
iá" det gén de p53 son la alteración genéti-
al desarrollo oet cancer'
"tuiion"s Cap' 15)' lo que ilustra la im-
ca más común en tos cáñres humanos ivéase
celular para la vida de los organismos
portancia crítica de ,u águlá"ón del ciclo
multicelulares.
ciclo celular' que mantiene la integridad
+ Otro punto de control imponante del
mitosis (véase Fig' 1a'8)' Este punto de
del genoma, se localizáárt¡nar de la
+ que los cromosomas se alineen de manera correcta en el
control supervisa juego completo de cromoso-
distribuya un
huso mitótico, lo que ,táé'i'que se cro-
la alineáción incorrecta de uno o más
mas a cada célula hija Por e¡emplo' la metafase,
que ra mitosis se detenga en
mosomas en er huso ,¡ioii"á'[Link]
antesdelasegregacióndeloscromosomaSreciénreplicadosalosnÚcleosde segre-
punto de control' los cromosomas no se
las células hijas. Gracias a este para ser
de cromosomas
gm hr.tá qr" ." orsfonga de un ¡uego completo
á¡stribrido a cada célula hija'

itrsfrf;.rg;ir kt rtplittt*'3* d*l Al]fu- ¿¿ l§vttl Ü{z' p*r titlo rci¡tltt

Elpuntodecontro|deG,impidelainiciacÚndelamitosisantesdelacomple. no se
que er ADN repricado incompletamente
ción de ra fase s, u.órránáá asi que el genoma
es importante asegurar
transmita a tas ceturáínlu.. rrrórén de
tuou ciclo celular' Así' una vez-1i:
sólo se replica unu
'l' "Á :i:"9'ento
de control
ADN ha sioo repticaJo Jrrun," la fase
s, deben existir mecanismos
ORC del ADN hasta que se haya comple-
que impidan ta reln¡c¡acán áe la replicación
trÁ. \\ haya pasado por la mitosis' Como se
dijo en el
¿<::J tado el ciclo celular V á su
"¿i'f" miles de orígenes para replicar
capítulo 5, las célulás Je mamífero emplean

le replicación de cada uno de estos orígenes

MCM ADN, de modo que fa inic¡áciOn de la
controlada, para que cada segm:nto del genoma só-
debe ser cuidadosamente
S de cada ciclo celular'
MCM ORC lo se replique una vez durante la fase por
Ia replicación del ADN a una vez
/,_-ffi\
\---4:<--=cal
El mecanismo ,áL"'tur. que restringe
de una tamit¡a de proteínas (denominadas
proteí-
ciclo celular implica l";;¿" del
de replicación]'11? con las proteínas

-.,.+
G"+
r- C-) rr¡cH¡ nas MCM) que se ,n"n u los orígenes
complejo oet orisen ie
'"óu*tion
actúan como .factores licenciadores"
(oRC) (ver Fis

(Fig. 14.11). Su unrólal ADN está reguladadurante

? l9tlli^floteínas
MCM
que permitén que [Link] la replicación
el ciclo celular' de modo

fñ quelasproteínasMCMsóloSonCapacesdeunirsealosorígenesdereplica-
\\>/
óE+$-r

ADN se restringe a una vez por

I
r-><\
|!!{Ír.'Jalrloe ra repricación der ADN. La repricación der
cada cicto cetutar oeoiálá'át [iáiu"9
rt/lcrt'r q-* t"
Yn"l.u lo:-9fls:::t
d" replicación
para la
replicación) y que se requieren
tr?-{) junto con tas proteinastríiiá.I*pi"i" oet origen'áe capa-ces de unirse al ADN
proteinas MCM solo son
iniciación de ta reptrcaáiá. o1i Áoñ. Las rrez que se ha
;;; l;;pil;tb" üel aoru comience en la fase S Una
en G,. lo que permite que la replicación
\ L---4
\ \§--ill nrnrrilcirlo la iniciacion, las proieínas MCM se d".pi;; de tal manera

[" t" p,,áoi i"üái át'u vez hasta después de la mitosis'

592 o Sección lV o Regulación celular

rante una fase del ciclo celular y, entonces, los cromosomas replicados se distri-
que prece-
buyen a los núcleos hijos mediante una compleja serie de procesos
den a la división celular. La progresión a través de estas etapas del ciclo celular
está controlada mediante un sistema regulador conservado, que no sólo coordi-
na los diferentes procesos del ciclo celular sino que también acopla el ciclo
celular con las señales extracelulares que controlan la proliferación celular.

t*ses d*l ':icla c¡:lt¿lar

que se
Un ciclo celular eucariota típico es el de las células humanas en cultivo,
dividen aproximadamente cada 24 horas. Visto al microscopio, el ciclo celular
(divi-
se divide en dos etapas fundamentales: cxlt§§is e ifiter{a§s. La mitosis
la sepa-
sión del núcleo) es la etapa más llamativa del ciclo, que corresponde a
ración de los cromosomas hijos y termina, generalmente, en la división celular
(*i{ocir"rexis). sin embargo, la mitosis y la citocinesis duran cerca de una hora
por to que aproximadaménte el 95% del ciclo celular transcurre en la interfase
intervalo entre dos mitosis-. Durante la interfase los cromosomas se des-
-el
condensan y se distribuyen por el nÚcleo, por lo que el nÚcleo
presenta un as-
pecto uniforme. sin embargo, a nivel molecular, en la intedase es cuando ocu-
ADN de manera sucesiva, lo que
rren el crecimiento celular y la replicación del
deja a la célula preparada para la división.
Figura 14.1
Fáses del ciclo celular. El ciclo de divi- La célula crece a un ritmo continuado durante la interfase, y la mayoría de
las células duplican su tamaño entre una mitosis y la siguiente. En cambio'
el
sión de la mayoría de las células euca-
riotas se divide en cuatro fases diferen- ADN sólo se sintetiza durante una parte de la interJase. Así, la duración de la
ciadas: M, G,, S Y G, A la fase M
síntesis del ADN divide el ciclo de las células eucariotas en cuatro fases diferen-
(mitosls) le suele seguir la citocinesis. La que suele
fase S es el periodo durante el que tiene ciadas (Fig. 14.1). La fase fl§ delciclo corresponde a la mitosis, a la
seguir la citocinesis. A esta fase le sigue la fase G, (gapl),
que corresponde al
lugar la replicación del ADN. La célula
intárvalo (gap) entre la mitosis y el comienzo de la replicación delADN.
crece durante la interfase, que incluye a Durante
las fases G,, S Y Gr. La duración de las G, la cétuia bs metabólicamente activa y está creciendo, pero no se replica su
fases del ciclo celular que se muestran ia que se produce
ADN, Seguidamente tiene lugar la fase § (síntesis), durante
aquí es característica de las células de
pi'oliferación rápida de mamífero. ta replicáción del ADN. Trás finalizar la síntesis del ADN se produce la
fase Gr, durante la que prosigue el crecimiento de la célu-
la y en la que se sintetizan proteínas en preparaclon para
la mitosis.
La duración de estas fases del ciclo celular varía consi-
derablemente según los distintos tipos de células' Para
una célula de proliferación rápida humana típica, con una
duración total del ciclo de 24 horas,la fase G, dura unas
11 ñoras, la fase S unas 8 horas, G, cerca de 4 horas y M
una hora, aproximadamente' [Link], otros tipos ce-
lulares pueden divrdirse más rápidamente' Las levaduras
en gemación, por ejemplo, atraviesan las cuatro fases del
cicló celular sólo en unos 90 minutos. lncluso, en células
embrionarias tempranas tras la fecundación del óvulo tie-
nen lugar ciclos celulares más cortos (30 minutos o me-
nos) (Fig. 14.2). Pero en este caso no se produce creci-
miento celular. Por el contrario, mediante estos ciclos
celulares en el embrión temprano el citoplasma del huevo
se Civide rápidamente en células más pequeñas' En estos
ciclos celulares en el embrión temprano no hay fase G, ni
Gr, y el ADN se replica rápidamente, por lo que consisten
eñ fases S muy cortas alternando con fases M'
A diferencia de la rápida proliferación en las células
embrionarias, algunas células del animal adulto cesan por
completo su divisrón (p ej , las células nerviosas) y mu-
chas otras células sólo se dividen ocasionalmente, cuan-
do es necesario reemplazar la pérdida de las células debi-
 Capítulo 14. Ciclo celular . 599

ción durante G,, permitiendo que se inicie la replicación del ADN cuando la
célula entre en la fase S. Una vez que se ha producido la iniciación, las proteí-
nas MCM son desplazadas del origen, de forma que la replicación no puede
iniciarse otra vez hasta que la célula pase por mitosis y entre en la fase G, del
siguiente ciclo celular. Las proteína quinasas que regulan la progresión del ciclo
celular (estudiadas en la siguiente sección de este capítulo) impiden que las
proteínas MCM se asocien con el ADN durante las fases S, G, Y M del ciclo
celular mediante múltiples mecanismos que siguen sin conocerse por completo.

l{.eguladnres de la 6:relgresión clel ciclo celular

Uno de los descubrimientos más interesantes de la pasada década ha sido el
esclarecimiento de los mecanismos moleculares que controlan la progresión de
las células eucariotas a través del ciclo de división celular. Nuestro conocimien-
to actual de la regulación del ciclo celular se debe a la convergencla de resulta-
dos obtenidos mediante experimentos con organismos tan distintos como las
levaduras, erizos de mar, ranas y mamíferos. Estos estudios han revelado que
el ciclo celular de todos los eucariotas está controlado por un conjunto de proteí-
na quinasas, conservado en los distintos organismoS, qUe Son las responsables
de inducir el paso de un estado del ciclo celular a otro.

.{.CPF; ttw rlímtr* tlc tdr? q citliu*

Tres abordajes experimentales diferentes contribuyeron a identificar las molé-
culas clave responsables de la regulación del ciclo celular. La primera de estas A
líneas de investigación tenía como base los estudios con oocitos de rana (Fig.
14.12). Estos oocitos se detienen en la fase G, del ciclo celular hasta que se "'( r])
estimulan por hormonas, lo que induce su entrada en la fase M de la meiosis (lo
que se lralará posteriormente en este Capítulo). En 1971 , dos grupos de trabajo
independientes (Yoshio Masui y Clement Marker, asícomo Dennis Smith y Ro-
bert Ecke0, descubrieron que se podía inducir a los oocitos detenidos en la fase
\y/
Rrogesterona
G, a entrar en la fase M mediante la microinyección del citoplasma de oocitos
I
que hubieran sido estimulados hormonalmente. Por lo tanto, parecía que un
factor citoplasmático presente en los oocitos tratados con hormonas era sufi-
ciente para inducir la transición de G, a M en aquellos oocitos que no habían
sido expuestos a las hormonas. Debido a que la entrada de los oocitos en meio-
sis se conoce como maduración de los oocitos, a este factor citoplasmático se
le denominó f*et*¡" prerm**t*r e{m ia mmd*ra*i*m {[tl!FF,}. Sin embargo, estudios
posteriores mostraron que la actividad del MPF no se restringe a provocar la
entrada de los oocitos en meiosis. Por el contrario, el MPF también se encuen-
tra en las células somáticas, donde induce la entrada a la fase M del ciclo mitóti-
co. Por lo tanto, parecia que MPF, en vez de ser específico de los oocitos, era
un regulador general del paso de G, a M.
El segundo abordaje para comprender la regulación del ciclo celular fue el
análisis genético de levaduras, del cual fueron pioneros Lee Hartwell y col. a
principios de los años 70. Estudrando la levadura de gemación Saccharomyces
cerevisiae, estos investigadores identif icaron mutantes sensibles a la tempera-
tura que eran defectuosos en la progresión del ciclo celular. La característica

+
Figura 14.12
ldentificación del MPF. Los oocitos de rana se detienen en la fase G, del ciclo celular,
y la hormona progesterona provoca su entrada en la fase M de la meiosis. En el experi-
mento que aquí se ilustra, a los oocitos detenidos en G, Se les microinyectó citoplasma
extraído de oocitos que habían suf rido la transición de G, a M. Esta transferencia citoplas-
mática indujo el paso de G, a M en ausencia del estímulo hormonal, lo que demostraba
que era suficiente un factor citoplasmático (MPF) para inducir la entrada en la fase M de la
meiosis.
 Capítulo 14 . Ciclo celular o 605

TABLA f 4.1. lnhibidores de Cdk

lnhib¡dor Complejo Cdk/ciclina Fase afectada del ciclo celular

Células animales
Familia Cip/Kip (p21 , p27, ps7) Cdk4/ciclina D G1
Cdk6/cicl¡na D G1
Cdk2/ciclina E G1/S
Cdk2/ciclina A S

Familia lnk4 (p15. pl6. p18. p19) Cdk4/c¡clina D G1

Cdk6/ciclina D G1

fosforilación de la tirosina-15, y en el caso de los vertebrados, de la treonina-1 4

adyacente. Estas Cdk's se activan por la desfosforilación de estos residuos por
miembros de la familia Cdc25 de proteína fosfatasas.
Además de la regulación por fosforilación de las Cdk's, su actividad también
puede regularse por la unión de proteínas inhibidoras (denominadas inhibicicres
*le §dk o *Mls) a los complejos Cdt</ciclina. En las células de mamíferos. dos
familias de inhibidores de Cdk son las responsables de regular los diferentes
complejos Cdk/ciclina (Tabla 14.1). Los miembros de la familia Cip/Kip regu an
todas las etapas de la progresión a través de las fase G, y S, inhlbiendo los
complejos que forman Cdk2,4 y 6 con las ciclinas A, D y E. Por el contrario. los
miembros de la familia lnk4 son específicos para los complejos que forman Cdk4
y 6 con la ciclina D, por lo que las CKls lnk4 sólo regulan la progresión a través del
punto de restricción en G,. En las levaduras, las diferentes CKls regulan de igual
manera diferentes etapas de la progresión del ciclo celular, inhibiendo complelos
Cdt</ciclina específicos. Por lo tanto, el control de los inhibidores de Cdk proporcio-
na un mecanismo adicional para regular la actividad de Cdk. Los efectos combina-
dos de todos estos tipos de regulación de Cdk son los responsables del control de
la progresión del ciclo celular en respuesta tanto a los puntos de control como a la
variedad de los estímulos extracelulares que regulan la proliferación celular.

F*¡"cfttrts rl* rretiwte*trs 4 *irf§l.':,its de tí¡:* *

Como ya se trató anteriormente, la proliferación de las células animales se re-
gula principalmente mediante diversos factores de crecimiento extracelu ares
que controlan la progresión de las células a través del punto de restricción en
las postrimerías de G,. En ausencia de los factores de crecimiento las células
son incapaces de rebasar el punto de restricción y se inactivan, con lo que
suelen entrar en el estado de reposo denominado Go; desde éste pueden volver
a entrar en el ciclo celular al ser estimuladas por los factores de crecimiento. Factores de
crecimiento
Este control de la progresión del ciclo celular mediante los factores de creci-
miento extracelulares implica que las vías de la señalización intracelular que se I Ras/

activan posteriormente (downstream) a los receptores de los factores de creci- ünrvrnx

Síntesis de
miento (que se trataron en el Capítulo anterior) intervienen, en última instancia, ciclinas tipo D
regulando los componentes de la maquinaria del ciclo celular.
Un vínculo impoftante entre la señalización por los factores de crecimiento y ¡
\Z
la progresión del ciclo celular son las ciclinas del tipo D (Fig" 14.1 9). La síntesis Cdk4, 6/CycD
de la ciclina D se induce en respuesta a la estimulación por factores de creci- Punto de
miento, como resultado de la señalización a través de la vía Ras/Raf/ERK, de restricción
tal manera que se sintetizan ciclinas mientras los factores de crecimiento están
presentes. Sin embargo, las ciclinas de tipo D también se degradan rápidamen- Figura 14.19
te, por lo que su concentración intracelular desciende bruscamente en ausencia lnducción de las ciclinas tipo D. Los
factores de crecimiento regulan la progre-
de los factores de crecimiento. Así, mientras los factores de crecimiento estén
sión del ciclo celular a través del punto de
presentes durante G,, los complejos de Cdk4/ciclina D hacen que las células restricción de G, induciendo la síntesis
atraviesen el punto de restricción. Por otro lado, si se eliminan los factores de de ciclinas tipo D mediante la vía de se-
creclmiento antes de este punto, los niveles de ciclina D descienden rápidamen- ñalización Rasi Raf/E R K.
606 o Sección lV o Rggulación celular

te, y las células no pasan a través de G, a S; por el contrario, se inactivan y

entran en Go. Por lo tanto, la inducción y el rápido recambio de las ciclinas tipo D
vinculan la señalización por factores de crecimiento con la maquinaria del ciclo
celular, lo que permite a los factores de crecimiento extracelulares controlar la
progresión de las células a través de G,.
Puesto que la ciclina D es una diana importante de la señalización por facto-
res de crecimiento, se podría esperar que las alteraciones en la regulación de la
ciclina D alteraran la regulación del crecimiento celular, característica de las
células Cancerosas. Así, se ha encontrado que la causa de muchos cánceres
humanos es una regulación defectuosa del ciclo celular, al igual que la causa de
muchos otros son alteraciones en las vías de señalización intracelular activadas
por los receptores de los factores de crecimiento (véase el cap. 13). Por ejemplo,
las mutaciones que dan lugar a una expresión continua de la ciclina D1 contribu-
yen al desarrollo de varios tipos de cánceres humanos, entre los que Se incluyen
los linfomas y el cáncer de pulmón. lgualmente, las mutaciones que inactivan a
los inhibidores lnk4 de cdk (p. ej., pl6) que se unen a los complejos cdk4,6/ci-
clina D, se encuentran con frecuencia en las células humanas Cancerosas'
La relación entre la ciclina D, el control del crecimiento celular, y el cáncer se
ve reforzada por el hecho de que una proteÍna sustrato de los complejos
Cdk4,6/ciclina D aparece mutada en varios tumores humanos' Esta proteína,
denominada ffib, se iclentificó como el producto de un gen responsable del reti-
noblastoma, un tipo de tumor de ojo infantil hereditario poco frecuente (véase el
Cap. 15). Estudios posteriores mostraron que las mutaciones que ocasionan la
ausencia de la proteína Rb funcional, no sólo se encuentran en el retinoblasto-
ma sino en diversos cánceres humanos más comunes. Rb es el prototipo de un
§*n ssprsssn de tu¡n:ore§ -un gen cuya inactivación conduce al desarrollo de
un tumor-, Mientras que las proteínas oncogénicas como Ras (véase el cap.
13) y la ciclina D provocan la proliferación celular, las proteínas codificadas por
los genes Supresores de tumores funcionan como frenos que ralentizan la pro-
gresión del ciclo celular. Otros ejemplos de reguladores del ciclo celular codifi-
cados por genes supresores de tumores son los inhibidores lnk4 de Cdk que se
unen a los complejos Cdk4,6/ciclina D, y el importante regulador del crecimiento
celular p53, del que ya se habló en este Capítulo.
Estudios posteriores acerca de Rb, revelaron que desempeña un papel fun-
damental en acoplar la maquinaria del ciclo celular con la expresión de aquellos
genes que se requieren para la progresión del ciclo celular y para la síntesis del
ADN (Fig. 14.20). La actividad de Rb se regula mediante cambios en su fosfori-
lación a medida que las células avanzan por el ciclo. Concretamente, Rb es
fosforilada por los complejos Cdk4,6/ciclina D a medida que las células rebasan
el punto de restricción en G,. En su estado poco fosforilado (en Go o en G1
temprana), Rb se une a los miembros de la familia de los factores de transcrip-
ción §2F, que regulan la expresión de varios genes relacionados con la progre-
sión del ciclo celular, incluyendo al gen que codifica para la ciclina E. E2F se
une a SUS secuencias diana tanto en presencia Como en ausencia de Rb' Pero
Rb actúa como un represor, de tal manera que el complejo RblEzF impide que
se transcriban los genes regulados por E2F. La fosforilación de Rb por los com-
plejos cdk4,6/ciclina D provoca que el Rb fosforilado se disocie de E2F, lo que
activa la transcripción de sus genes diana. Por lo tanto, Rb interviene como un
interruptor molecular que convieñ e a E2F de un represor a un activador de los
genes requeridos para la progresión del ciclo celular. Por su parte, el control de
Rb a través de la fosforilación por Cdk4,6/ciclina D acopla esta regulación de la
expresión génica a Ia disponibilidad de factores de crecimiento en G,
k¡lribi¡tr*rrs tl.e i* pr*g'tsióx iÉef rit:Í* c*fuÍt;-,'
La proliferación celular se regula no sólo por factores de crecimiento sino tam-
bién por diversas señales que inhiben la progresión del ciclo celular. Por ejem-
plo, los agentes que dañan el ADN provocan que el ciclo celular se detenga,
 Capítulo 14 . Ciclo celular . j93

Figura 14.2
Ciclos de las células embrionarias. Los
ciclos de las células embrionarias tempra-
nas dan lugar a la división rápida del cito-
plasma del huevo en células más peque-
ñas. Las células no crecen durante estos
ciclos, los cuales carecen de G, y de Gr, y
consisten simplemente en la alternancia
de cortas fases S con fases M.

do a una lesión o a la muefte celular. Entre este último tipo de células se inclu-
yen a los fibroblastos de la piel, así como a las células de muchos órganos
internos, como el hígado, el riñón y el pulmón. Como se lralará más adelante en
la sección siguiente, estas células salen de G, para entrar en un estado de
I reposo del ciClo denominado &n, en el que permanecen activas metabólicamen-
te pero no proliferan a no ser que sean requeridas para ello mediante las seña-
les extracelulares aProPiadas.
El análisis del ciclo celular requiere que las células se identifiquen en las
pue-
diferentes etapas indicadas anteriormente. Aunque las células mitóticas se
en las otras fases del ciclo (G,, S y Gr)
den distinguir al microscopio, las células
han de ser identificadas mediante criterios bioquímicos' Las células en la fase S
pueden identificarse fácilmente porque incorporan timidina radiactiva, la cual se
po-
usa exclusivamente en la síntesis delADN (Fig. 14.3). Por ejemplo, si una
humanas en cultivo, que proliferan rápidamente, se expone a
blación de céluias
timidina radiactiva durante un periodo corto de tiempo (p. ej., 15 minutos) y a
continuación se analiza por autorradiograf ía, se encontrará que cerca de la ter-
cera parte de las células están marcadas radiactivamente, lo que corresponde-
ría ala fracción de células en fase S.
También se pueden uiilizar variantes de estos experimentos de marcaje ce-
lular para determinar la duración de las diferentes etapas del ciclo celular' Por
ejemplo, consideremos un experimento en el que las células se exponen a timi-
y
dina radiactiva durante 15 minutos, tras lo cual se retira la timidina radiactiva
se cultivan las células durante diferentes intervalos de tiempo antes de realizar
la autorradiografía. Las células interfásicas marcadas radiactivamente, que se

Figura 14.3
incor-
ldéntificación de células en fase S mediante la *-:':-
poración de timidina radiactiva. Las cé ulas
expuestas a timidina radiactiva y se ana izaron p:' '-"-'
rradiograf Ía. Las flechas indican las células marcalas
i
pai'tir de D.W. Stacey et al., 1991 Mol Ce' 3 '
4.053.)
600 . Seccién lV r R€gulación celular

Control citoplasmático del compoñamiento nuclear durante la maduración

meiótica de los oocitos de rana
Yoshio Masui y Clement L. Markert
Yale University, New Haven, CT
Journal of Exper¡mental Zoology,1971, Volumen 177, pá7s.129-146

Contexto citoplasma de los oocitos s60

estimulados con hormonas a los .a
Los trasplantes nucleares y los a
oocitos que no habían sido .o
experimentos de fusión nuclear 6)

llevados a cabo en los años 60 estimulados. Estos experimentos >40

indicaban que los núcleos demostraron que un factor
transferidos a las células en citoplasmático, que Masui y
diferentes estados del ciclo celular Markert denominaron factor
mitótico adoptaban el promotor de la maduración (MPF),
comportamiento de la célula es el responsable de la inducción
huésped. Por lo tanto, parecía ser de la meiosis tras el tratamiento
que la actividad mitótica del núcleo hormonal. 10 20 30 40 50
era regulada por el citoplasma. Sin inyección del citoplasma (nl)
embargo, el postulado de la Experimentos Los oocitos receptores se inyectaron con las
existencia de factores Debido a su gran tamaño y a su cantidades que se indican de citoplasma de
citoplasmáticos que controlaban la capacidad de sobrevivir a la oocitos que habían sido tratados con
progesterona. EI citoplasma donante se obtuvo
actividad mitótica del núcleo inyección mediante mlcropipetas
de la región central del oocito con una
requería demostrarse mediante un de ci'istal, los oocitos de rana micropipeta (línea cont¡nua) o a partir de un
abordaje experimental directo. Esta constituían un sistema homogeneizado de ooc¡tos enteros (línea
demostración la proporcionaron los experimental adecuado para discontinua). Los resultados se presentan como
estudios de Masui y Markert, que comprobar la actividad de los el porcentaje de oocitos ¡nyectados en los que se
investigaron el papel de los factores factores citoplasmáticos. El diseño indujo la reanudación de la meiosis,
citoplasmáticos en la regulación del básico de los experimentos de
comporlamiento nuclear durante la Masui y Markert consistía en quitar Los experimentos de control
meiosis de los oocitos de rana. el citoplasma de los oocitos permitieron desechar la posibilidad de
Varias características de la donantes que habían sido tratados que fuera la propia progesterona el
meiosis de los oocitos de rana con progesterona para inducir la factor inductor de la meiosis en el
sugerían que esta era controlada reanudación de la meiosis. citoplasma donante. En concreto, se
por factores citoplasmáticos. Cantidades variables de este demostró que la inyección de
Concretamente, la meiosis de los citoplasma se inyectaron en oocitos progesterona en oocitos receptores no
oocltos de rana se detiene al final receptores que no habían sido inducía la meiosis. Sólo la aplicación
de la profase de la meiosis L EI tratados. El resultado clave fue que externa de la hormona es eficaz, lo que
tratamiento con la hormona el citoplasma de los oocitos indica que la progesterona actúa sobre
progesterona provoca la donantes que había sido retirado un receptor celular de la supedicie
reanudación de la meiosis, lo que seis o más horas después del activando a un factor citoplasmático
equivale al paso de G, a M en las tratamiento hormonal indujo la diferente. Experimentos similares
células somáticas. Entonces los reanudación de la meiosis en los realizados independientemente por
oocitos sufren una segunda parada receptores inyectados (véase Dennis Smith y Robert Ecker (La
en la metafase de la meiosis ll, Figura). Por el contrario, la interacción de los esteroides con los
donde permanecen hasta la inyección del citoplasma de oocitos oocitos de Bana pipiens en la inducción
fecundación. Masui y Markert control que no habían sido de la maduración. Dev. Biol.25:
propusieron Ia hipótesis de que expuestos a Ia progesterona no 232-247, 1971) condujeron a la misma
tanto los efectos en la meiosis del tuvo efecto sobre los receptores. conclusión. Es de destacar que la acción
tratamiento hormonal como los de Por lo tanto, parecía que los oocitos de la progesterona en este sistema
la fecundación se debían a tratados con hormonas contenían difiere de su acción en la mayoría de las
variaciones en el citoplasma que un factor citoplasmático que podía células, donde difunde a través de la
controlaban de manera indirecta el inducir la reanudación de la meiosis membrana plasmática y se une a un
comportamiento del núcleo. en aquellos receptores que nunca receptor intracelular (véase Cap. 13).
Comprobaron directamente esta habían sido expuestos a la Sin embargo, en los oocitos la
hipótesis transfiriendo e progesterona. progesterona actúa claramente sobre la j
 Capítulo 14 . Ciclo celular . 607

Figura 14.20
Regulación del ciclo celular por Rb y
--c=.---tRb E2F. En su estado poco fosforilado, Rb

ffi)
Cdk4. G/ciclina D
se une a miembros de la familia E2F repri-
miendo la transcripción de los genes regu-
lados por E2F. La fosforilación de Rb por
los complejos Cdk4,6/ciclina D provoca su
disociación de E2F en la fase G, avanza-
da. Entonces E2F activa la expresión de
sus genes diana, que codifican proteínas
necesarias para la continuación del ciclo
celular.

Transcripción Transcripción de
reprimida genes de la fase S

dando tiempo de esta manera a la célula a reparar el daño. Además, los contac-
tos celulares y varios factores extracelulares intervienen inhibiendo la prolifera-
ción de sus células diana en vez de estimulándola. Los efectos de estas señales
inhibidoras también son mediados por los reguladores de Ia maquinaria del ciclo
celular, con frecuencia a través de Ia activación de los inhibidores de cdk.
Un claro ejemplo de Ia acción de los inhibidores de cdk Io proporciona la
detención del ciclo celular en respuesta a las lesiones en el ADN, que tiene
lugar mediante la intervención de la proteína p53 (tratada anteriormente en este
capítulo). La proteína p53 es un regulador de la transcripción que interviene, al Lesión en el ADN
menos en pate, activando la expresión det inhibidor de cdk, p2i (Fig. i4.21). orrn"nro en et nivet de p53
La proteína p21 inhibe varios complejos cdk/ciclina, y su inducción por p53 r\ |
parece que representa al menos uno de los mecanismos dependientes de p53
de que el ciclo celular se detenga tras la lesión del ADN. Aclemás de inhibir la
progresíón del ciclo celular mediante su interacción con cdk's, p21 puede inhibir
directamente la replicación del ADN. concretamente, p21 se une al antígeno
X
1+m*§(§)
nuclear de proliferación celular (PCNA), que como ya se trató en el capítulo 5,
es una subunidad de la ADN polimerasa ¿. De esta manera, p21 desempeña un
doble papel en la detención del ciclo celular inducida por daños en el ADN: no
solamente bloquea la progresión del ciclo celular mediante la inhibición de
cdk's, sino que también inhibe directamente la replicación del ADN en fase s. I
I
El inhibidor extracelular de la proliferación de las células animales mejor V
caracterizado es el rGF-/, polipeptídico que inhibe la proliferación
-un factordeteniendo
de varios tipos de células epiteliales la progresión del ciclo celular
Qnzr
I
en G,. Esta acción de TGF-/ parece que se produce por la activación del inhibi-
dor p15 de cdk, que se une a los complejos cdk4,6/ciclina D. como resultado,
si cdk4 no está activo, se bloquea la fosforilación de Rb y el ciclo celular se
detiene en G,.
"4"
redd
lnhibición del
F€NA]
lnhibición de
Para regular la progresión del ciclo celular a través de los puntos de control ciclo celular la replicación
de s y Gr, se utiliza un mecanismo molecular diferente, que impide la progre- dei ADN
sión del ciclo celular en respuesta a ADN sin replicar o dañado. como se estu-
dió anteriormente en este capítulo, Ia detención del ciclo celular en estos puntos Figura 14.21
de control está mediada por tas proteína quinasas chkl y chk2 (ver Fig. t a.9). lnducción de p21 debido a lesiones en
el ADN. Las lesiones en el ADN provocan
chkl y chk2 fosforilan e inhiben a la proteína fosfatasa cdc2Sc, que es respon- el aumento del nivel intracelular de p53. lo
sable de defosforilar y activar a los complejos cdc2lciclina B (Fig. 14.22). En que activa la transcripción del gen que co-
ausencia de la activación de cdc2, la progresión de la mitosis está bloqueada y difica el inhibidor de Cdk, p21 . Además de
la célula permanece detenida en Gr. Del mismo modo, chkl y chk2 fosforilan inhibir Ia progresión del ciclo celular me-
un miembro relacionado de la familia cdc25, Cdc2SA. cdc25A defosforila y acti- diante su unión a los complejos Cdk cic -
na, p21 puede inhibir directamente la sin-
va a los complejos de cdk2 y ciclinas A o E, que son responsables de la inicia- tesis del ADN al interaccionar con PCNA
ción y la progresión de la fase s. La fosforilación desencadena la rápida degra- (una subunidad de la ADN polimerasa ,i).
594 o Sección lV o Regulación celular

hubieran encontrado en fase S durante el tiempo que duró la exposición a timidi-

U1
na radiactiva, se observarán durante varias horas, mientras avanzan a través
del resto de la fase S y de la fase Gr. Sin embargo, no se observarán células
mitóticas marcadas radiactivamente hasta 4 horas después del marcaje. Este
lapso de 4 horas corresponde a la duración de G, tiempo mínimo que se
-el radiactiva
requiere para que una célula que incorporó la timidina al final de la
G2+M fase S entre en mitosis.
También se pueden distinguir las células en las diferentes etapas del ciclo
celular en función de su cantidad de ADN (Fig. 1a.a). Por ejemplo, las células
animales en G, son diploides (contienen dos copias de cada cromosoma), por lo
que se dice que su cantidad de ADN es 2n (se designa por n al contenido de
ADN haploide en el genoma). Durante la fase S, mediante la replicación se
aumenta la cantidad de ADN de la célula de 2n a 4n, por lo que las células en
fase S tendrán una cantidad de ADN enlre 2n y 4n. El contenido de ADN se
2n 4n
mantiene en 4n en las células en G, y en M, y se reduce a2nlras la citocinesis.
Cantidad de ADN por céiula
La cantidad de ADN celular se puede determinar experimentalmente incubando
Figura 14.4 las células con una tinción fluorescente que se una al ADN, y posteriormente
Determinación de la cantidad de ADN analizando Ia intensidad de la fluorescencia en las células individuales por *itm-
celular. Una población de células se §xctría de fluj* o mediante un separmdor t:c§u§ar de flme:resaeneia; de esta
marca con una tinción fluorescente que
se une al ADN. Entonces se hace pasar a
manera se distinguen las células en las fases G,, S y G, /M del ciclo celular.
las células por un citofluorÍmetro de flujo,
que mide la intensidad de la fluorescen- Regxi*ti** ¿fu| cirl* *slul*v gr*r rl cr*¡i¡rcie¡¡tr¡ rci¡tl¿zv
cia en las céiulas individuales. Los datos
¡s t: tx' se fi *l t s * xfr r¡ t t Í¡¡ I¿¡:"¡s
se representan como el número de célu-
las frente a la intensidad de la fluorescen-
cia, que es proporcional a la cantidad de La progresión de ias células a través del ciclo de división celular se regula por
ADN. La distribución muestra dos picos, señales extracelulares del medio, asícomo por señales internas que supervisan y
que corresponden a las células con un coordinan los diversos procesos que tienen lugar durante las diferentes fases del
contenido de ADN de 2n y de 4n; estas ciclo celular. Un ejemplo de la regulación del ciclo celular por señales extracelula-
células están en las fases G, y GrlM del
ciclo, respectivamente. Las células en la
res lo proporciona el efecto de los factores de crecimiento sobre la proliferación
fase S tienen una cantidad de ADN entre de las células animales. Además, diversos procesos celulares como el crecimien-
2n y 4n, y se distribuyen entre los dos to celular, la replicación del ADN y la mitosis, han de coordinarse durante el trans-
picos. curso del ciclo celular. Esto se consigue mediante una serie de puntos de con-
trol que regulan la progresión a través de las diferentes fases del ciclo celular.
Uno de los puntos de regulación principales del ciclo celular, en muchos
tipos celulares, se encuentra avanzada la fase G, y controla el paso de G, a S.
Este punto de regulación se definió por primera vez en estudios de la levadura
de gemación (Saccharomyces cerevisrae), donde se le conoce como ST&$§T
(Fig. 1a.5). Una vez que las células han rebasado el START, quedan determina-
das a entrar en la fase S y a sufrir un ciclo de división celular. Sin embargo,
rebasar el punto START es un proceso que está finamente regulado en el ciclo
celular de la levadura, siendo controlado a través de señales externas, como la
disponibilidad de nutrientes, y por el tamaño celular. Por ejemplo, si las levadu-
ras se enfrentan a una carencia de nutrientes, paran su ciclo celular en START
y entran en un estado de reposo envez de proseguira lafase S. Así, START
supone un punto de decisión en el que la célula determina si hay suficientes
nutrientes disponibles para avanzar a través del resto del ciclo celular. Los fac-
tores polipeptídicos que intervienen como señales para el apareamiento de las
levaduras también detienen el ciclo celular en START, lo que permite fusionarse
a las células de levadura haploides envez de proseguir a la fase S.
Además de servir como un punto de decisión para supervisar señales extra-
celulares, START es el punto en el que se coordina el ci'ecimiento de la célula
con la replicación del ADN y con la división celular. La importancia de esta regu-
lación se muestra de manera evidente en las levaduras de gemación, en las que
la división celular da lugar a una progenie de células de distintos tamaños: una
célula madre grande y una célula hija pequeña. Para que las células de la leva-
dura mantengan un tamaño constante, la célula hija pequeña debe crecer hasta
alcanzar un tamaño mayor al de la célula madre, antes de volver a dividirse. Por
 Capítulo 14 . Ciclo celular . 601

genética de levaduras y los

estudios en embriones de erizo de
mar, convergieron para revelar la
me¡os¡s del oocito se conoce identidad de este regulador
comúnmente como la maduración fundamental del ciclo celular. A
del oocito, Masui y Markert saber, el MPF resultó ser un dímero
acuñaron el término "factor constituido por la ciclina B y la
promotor de la maduración" para el proteína quinasa Cdc2. Estudios
regulador de la meiosis recién posteriores han establecido que
descubierto. tanto la ciclina B como Cdc2 son
miembros de familias grandes de
lmpacto proteínas; diferentes ciclinas y
Tras su descubrimiento en los proteína quinasas relacionadas con Yoshio Masui
oocitos de rana, también se Cdc2 funcionan de manera análoga
encontró el MPF en las células a MPF en la regulación de otros
somáticas, donde induce el paso pasos del ciclo celular. Por lo tanto,
de G, a M en la mitosis. Por lo el descubrimiento de MPF en los
tanto, el MPF parecía ser un oocitos de rana abrió el camino a la '.:.,:;a:l::.,|;,,

regulador general de la entrada a la comprensión del aparato regulador

fase M tanto en el ciclo celular del ciclo celular que se conserya en Clement Markerl
meiótico como mitótico. La todos los eucariotas.
purificación definitiva del MPF de
oocitos de rana en 1988. la
*,'-."'"-i

principal de estos mutantes (denominados cdc por mutantes del ciclo de dvi-
sión celular) era que se detenia su crecimiento en determinados puntos del ciclo
celular. Por ejemplo, un mutante particularmente importante designado como
cdc28 delenía el ciclo celular en START, lo que indicaba que se necesitaba la
proteína Cdc28 para rebasar este punto crítico de regulación en G, (Fig. 14.13).
Paul Nurse y col. aislaron una colección similar de mutantes del ciclo celular en
la levadura de fisión schizosaccharomyces pombe. Entre estos mutantes se
encontraba cdc2, que detenía el cicio celular de S. pombe tanto en G, como en

Mutante cdc28 sensible a Ia temperatura

Temperatura Temperatura
permisiva no permisiva

céiula madre
O

- j-FrARr
\\/,--&-trry]
\\
\;-/r/
,y--ñ -fnnr
,r--/ - '\---Y-l T*
,r=:\\v-_-,^\
)) r/
(( \
{_>
() f-I Fisura 14.13

\-/ \\
Y
\ Propiedades de los mutantes cdc2Sde S. cerevisiae. El mutante sensible a la tempe-

EIX|:;Í"ín:J,i:"if,T'J=1[;Ti,:li:T?:ffJ'¿[:#i'" *,'l"]f;ffiu
r't"'0".
608 o Seceión lV ' R09ulal!n celular

ADN dañado o no rePlicado

Replicación comPleta

ProteÍnas
sensoras
(:3
,,.,.,r".2O Ó
sensoras
@ @
Cht\l l I
['y, @ +

lnactiva

=t--\
(",.,,./u /
X_,\
) ,ó0., (
\c,/
ó
MPF inactivo
MPF activo

s s
[c-".q*".-.,1
I a mttosrs I r*@
Figura 14.22
Ráoulación del Punto de control de
C..-Un compleio de proteinas del punto
dá control reconoce el ADN dañado o que dacióndeCdc25A,resultandoenladetencióndelciclocelularenrespuestaal
ná se na replicado y activa a la proteína
ADN dañado.
áu¡nasa Chkl , la cual fosforila e inhibe a la
oroteína fosfatasa Cric25 La inhibición de
'CdcZS
impiOe que Cdc2 se desfosforile y
se active. 5;{ j =,:g lE¿: !; ;-Pt' .q i
LafaseMeselperÍodomásllamativodelciclocelular,enelqueseproducela
reorganizacióndecasitodoslosComponentesdelacé[Link]
nuclear de la ma-
la envuelta
(división nuclear) Ios cromosomas se condensan'
yoríadelascélulassedesintegra,elcitoesqueletosereorganizaparaformarel
Tras la segregación
huso mitótico, y los cromouo*á' migran a polos opuestos
de la célula (citocinesis)' Aun-
de los cromosomas.".r"l" produclr ra división
en Capítulos^'11?t^itji3',nl:
que muchos de estos sucesos ya se han tratado
blardelaestructurayfuncióndelnÚcleoydelcitoesqueleto,Serevisa-naqUlen
el contexto cie la fase M y de la acción del
I MPF'
il¿:.1t,;= i¡1,¡ Jl¡ ;+ií+g;-{
varían entre los diferentes organis-
Aunque muchos de los detalles de la mitosis
segregación fidedigna de las cromá-
mos, los procesos nasl"ot q'u aseguran la procesos
iEntre estos
tidas hermanas se conseryan en todos los eucariotas
básicosdelamitosisseincluyenlacondensacióndeloscromosomas,laforma-
a los microtúbulos del
cién del huso mitÓtico, y Ia unión de los cromosomas
 Capítulo 14 o Ciclo celular o 595

célula hiia
O

cérura madre
O
lñ*"1"J

',/-_ I Factores de
\ apareamrenro
I

( r- o. q x\---
-ll
Erygrlti
F¡gura 14.5
H
Regulación del ciclo celular de la leva-
dura de gemación. LA El c clo celular cie
- Saccharomyces [Link]'s¡ae se regula prin-
cipalmente en un [Link] de a fase G,
lo tanto, se ha de controlar el tamaño de la célula para poder coordinar el creci-
avanzada. denor" nado START. E paso
miento celular con los otros procesos del ciclo celular. Esta regulación se realiza por START está ccrtrc aco por la d sooni-
mediante un mecanismo de control que requiere que la célula alcance un tama- bilidad de nutrientes, ¡e factores de apa-
ño mínimo para poder rebasar el START. Por lo tanto, la célula hija pequeña reamiento y por e tamaio ceLu ar. Cbe
pasa más tiempo en G, y crece más que la célula madre. destacar que estas e,.'aC¡ras se dividen
por gemación, Las [Link] se generan tusto
La proliferación de la mayoría de las células animales también se regula en
después de START y coni nuan crec endo
la fase G, del ciclo celular. Concretamente, un punto de decisión de la G, avan- hasta que se separan ce a cé ula madre
zada, denominado pun"lt* de rs*tyleci*r"¡ en las células animales, funciona de tras la mitosis. La célula n a l-re se fo'ma a
manera análoga a como lo hace START en las levaduras (Fig. 14.6). Sin embar- pañir de la yema es más cecreia que la
go, a diferencia de las levaduras, el paso de las células animales a través del célula madre y. oo" ta^:-. -É:- e': -as
tiempo para crecer d-.a':e , 'a:e G del
ciclo celular se regula, principalmente, por factores de crecimiento extracelula- siguiente ciclo celular. AunqL,e as 'ases G.
res que son señales de proliferación celular, en vez de por la disponibilidad de y S tienen lugar de ma'era -:'- a : - -so
nutrientes. En presencia de los factores de crecimiento apropiados, las células mitótico comienza a foi-marse r!'[Link] a
atraviesan el punto de restricción y entran en la fase S. Una vez que la célula ha fase S, por lo que el cic o ceru ar :le a e-
vadura de gemación carece oe ;ra fase
rebasado el punto de restricción, queda determinada a proseguir a través de la
G, diferenciada. (B) Micrograf ra a m cros-
fase S y del resto del ciclo celular, incluso en ausencia de la estimulación por los copio electrónico de barrido oe S. cerevt-
factores de crecimiento. Por otro lado, si los factores de crecimiento adecuados siae. El tamaño de la yema ref eta ra siiLra-
no están disponibles en G,, la progresión a través del ciclo celular se para en el ción de la célula en el c clo. iB Dav d M.
punto de restricción. La célula entra en un estado en reposo del ciclo celular Philips/Visuals Unlimited. )
denominado Go en el que puede permanecer indefinidamente sin proliferar. Las
células en Go son metabólicamente activas aunque cesa su crecimiento y su
ritmo de síntesis de las proteínas es menor. Como ya se ha comentado, muchas
células en los animales permanecen en Go hasta que son inducidas a proliferar
por los factores de crecimiento apropiados o por otras señales extracelulares.
Por ejemplo, los fibroblastos de la piel se mantienen detenidos en Go hasta que
se les estimula a dividirse para reparar el daño causado por una herida. La
proliferación de estas células se activa por el factor de crecimiento derivado de
las plaquetas, que es liberado por las plaquetas de la sangre durante la coagu-
lación sanguínea y actúa como una señal para la proliferación de los fibroblas-
tos en la proximidad del tejido dañado.
Aunque la proliferación de la mayoría de las células se regula en G,, algunos
ciclos celulares se controlan, en cambio, en Gr. Un ejemplo de esto es el ciclo

Figura 14.6
Regulación del ciclo de las células animales por factores de crecimiento. La
disponibilidad de factores de crecimiento controla el ciclo de la célula animal en un punto
de la fase G, avanzada, denominado punto de restricción. Si los factores de crecimiento
no están disponibles durante G,, las células entran eri un estado en reposo del ciclo
denominado G,,.
602 . Sección IV o Regulación celular

{\{\fi
Figura 14.14
Acumulación y degradación de cicli-

/VVV
nas en los embriones del erizo de
mar. Las ciclinas fueron identificadas a
(d
como proteinas que se acumulaban du- .E
rante la interJase y se degradaban rápida- E
mente hac a e final de la mitosis. o
0)
1'
o
z

lnterfase Mitosis lnterfase Mitosis lnterfase Mitosis

TiemPo
--->
el paso de G, a M (que es el principal punto de regulación en la levadura de
fisión). Estudios posteriores mostraron que cdc28 de S. cerevisiaey cdc2 de S.
pombe son genes funcionalmente homólogos, que se requieren para atravesar
START asícomo para entrar en mitosis en ambas especies de levaduras. Para
evitar la confusión de la diferente nomenclatura entre [Link] S. pombe,
en este texto nos referiremos a la proteína codificada por ambos genes como
*d*§. Estudios posteriores de cdc2 proporcionaron información sobre dos as-
pectos impoftantes. Primero, la clonación y la secuenciación de nucleótidos re-
veló que cdc2 coditica una proteína quinasa primera indlcación acerca del
-la
papel predominante de la fosforilación de proteínas en la regulación del ciclo
celular-. Segundo, se identificó un gen humano relacionado con cdc2 y se
mostró que también era funcional en levaduras, lo que demostraba de manera
evidente la actividad conservada de este regulador del ciclo celular.
Por último, la tercera línea de investigación que convergÍa con la identifica-
ción del MPF y con la genética de levaduras, vino de estudios sobre la síntesis
de proteínas en embriones tempranos de erizo de mar, Tras la fecundación,
estos embriones sufren una serie de divisiones celulares rápidas. Sorprenden-
temente, los estudios con inhibidores de la síntesis de proteínas mostraban que
la entrada en la fase M en estos ciclos celulares embrionarios requería una
nueva síntesis de proteínas. En 1983, Tim Hunt y col. identificaron dos proteí-
nas que mostraban un patrón periódico de acumulación y degradación en em-
briones de erizo de mar y de almeja. Estas proteínas se acumulaban durante la
interfase y eran degradadas rápidamente alfinalde cada mitosis (Fig. 14.14)"
Hunt ilamó a estas proteínas *i*§i¡ras¡ (las dos proteínas fueron designadas
como ciclina A y ciclina B) y sugirió que podían ser inductores de la mitosis, y
que su acumulación y degradación periódica controlaría la entrada y la salida de
la fase M. El papel propuesto para las ciclinas se confirmó en 1986 cuando Joan
Ruderman y col. mostraron que bastaba con la microinyección de la ciclina A en
oocitos de rana para inducir el paso de G, a M.
Estos abordajes independientes convergieron de manera espectacular en
1988, cuando se purificó el MPF a partir de oocitos de rana en el laboratorio de
James Maller. La caracterización molecular del MPF en varios laboratorios
mostró que este regulador conservado del ciclo celular está compuesto por dos
subunidades fundamentales: Cdc2 y ciclina B (Fig. 14.15). La ciclina B es una
subunidad reguladora que se requiere para la actividad catalítica de la proteína
quinasa Cdc2, lo que concuerda con el hecho de que la actividad de MPF está
controlada por la acumulación y degradación periódica de la ciclina B durante el
transcurso del ciclo celular.
Diversos estudios posteriores han confirmado este papel de la ciclina B, así
como la regulación del MPF mediante la fosforilación y la desfosforilación de
Figura 14.15
Estructura del MPF. El MPF es un di- Cdc2 (Fig. 14.16). En las células de mamíferos, la síntesis de la ciclina B co-
mero constituido por la ciclina Byporla mienza en la fase S. La ciclina B entonces se acumula y forma complejos con
proteína quinasa Cdc2. Cdc2 durante S y Gr. Al formarse estos cornplejos, Cdc2 se fosforila en dos
596 o Sección ]V ¡ Regulación celular

1 2 4
(B) .¡,,,,,,,,,,,,,§;illrl"rr.':r:ii¡
liit li.t"'¡lr

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W
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ffi;,,.] i::il,],r i ,r,i.. . .. ,r,'t1]:,':,]

5 lrm

Floura 14./ celulardelalevaduradefisiónSchizosaccharomycespombe(Fi1.14,7).Adife.

de s. pombe se regula
CÉlo celular de la levadura de fisión' rencia de saccnaromfces cerevisiae, el ciclo celular
tA) Las levaduras de fisión crecen
por sus
básicamente a través OLI controt del paso de
G, a M' que es el punto principal
formando una pa-
extremos, y se dividen y la áisponibilidad de nutrientes' En
ied oue atáviesa la zona media de la cé- en el que es supervisaáo el tamaño celular
control del ciclo celular en G, lo
lula. Á diferencia del ciclo de las levaduras los animales, el ejemplá más característico de permanecer
de oemaciÓn, el ciclo celular de las leva- jÁ[Link] los oocitos. Los oocitos de los veftebrados pueden
áurás Oe fisión tiene fases G-. S, G, y M (varias dé[Link] en el ser
detenidos en G, durantá tu'got períodos de tiempo
normales. Cabe destacar que la citocine- M' por la estimulación hormonal'
humano) hasta que se activa su paso a la fase
ii. ti"n" lugar en G,.La longitud O"-|.1 9i- pueden controlar la proliferación celu-
trt" ind¡.u éu situaciÓn en el ciclo (B) Mi- De esta manera, las señales extracelulares
de G' a S del ciclo celular'
crograf ías al microscopio óptico que lar regulando el paso O" iá. tut"t G, a M así como
muéstran sucesivos estadios de la mitosis
v de la citocinesis. (B. cortesía de C F' Ro- Fs.t¡+t*s ¡le *tetr*l del cicl* selu!*r
binow. University of Western Ontario') anterior regulan la progresión
Los mecanismos de control tratados eh la sección
delciclocelularenrespuestaaltamañocelularyaseñalesextracelulares,como
pero que tie- además, los sucesos
los nutrientes o los tu.1ár", de crecimiento.
nenlugardurantelasdiferentesetapasdelciclocelularhandecoordinarseen-
por ejemplo, es de la
tre sí de tar manera que ocurran en el orden adecuado.
Fioura 14.8
Príntos de control del ciclo celular' Va-
mayorimporlanciaquelacélulanoentreenmitosishastaquehayafinalizadola
rios puntos de control funcionan para ase- replicació[Link]íaunadivisióncelulardesas.
del material
ourar que los genomas completos se trosa, en la que las ."rrrá. rri¡as no heredarían una copia completa
iransmiien a tas células hijas Un punto gené[Link]íadelascélulas,estacoordinaciónentrelasdiferentes
de control fundamental detiene las célu- fasesdelciclocelulardependedeunsistemapl,nt0§deeomtr*lqueprevienen
las en G, en respuesta al ADN dañado o de la fase
hasta que los eventos
oue no h'ava sido replicado. La presencia la entrada en la siguientá tase del ciclo celular
de ADN dánado también provoca que el precedente hayan sido completados'
para asegurar que los
ciclo celular se deienga en un punto de Varios puntos oe controi del ciclo celular funcionan
control en G,. Otro punto de control en la cromosomasincompletosodañadosnoseanreplicadosytransmitidosalas
fase M detiene la mitosis si los cromoso-
mas no están correctamente alineados
célulashijas(Fig.14.8).EstospuntosdecontroldetectanelADNnoreplicadoo
de la repli-
con la compleción
en el huso mitótico. dañado y coordinan tá'progre"ion del ciclo celular
por punto de [Link] G, previene la
cación o reparación oei ndu. ejempro, er
Alineación
incorrecta iniciacióndelamitosishastaquesehayacompletadolareplicacióndelADN.
genera una señal
ADN dañado replrcar' lo que
de los cromo- Este punto de control án G, d"t"tt' al ADN sin
o no replicado
del ciclo celular. Por lo tanto, la operación del punto
SOMAS qr" d, lugar a la detencióÁ
decontroleno,pre,ienela¡nic¡aciondelafaseMantesdelacomplecióndela
G, hasta que el genoma Se
fase S, de modo que las células permanecen en progre-
alivia la inhibición de la
haya replicado por completo. SÓlo entonces se
mitosis y distribuir los cromosomas
sión en'G,, permitiendo.a la célula iniciar la
completamentereplicadosentrelascélulashi¡[Link]ásdedetectarelADN
el resul-
el ADN dañado' como
no replicado, el punto de control en G, detecta
tantedelaradiaciÓ[Link]ñodelADN,ladetenciónenelpuntode
controlproporcionaeltiemponecesarioparalareparacióndeldaño,enlugarde
transmitirse a las células hijas'
en Gr, sino también en puntos
El ADN dañado no sólo óetiene el ciclo celular
y detención en el punto de control de G, permite
de control en tas tasesé, S. La
 Capítulo 14 . Ciclo celular . 603

Síntesis de
la ciclina B
Deg radación a .-u
de la cicl na B a
^c,
É-- OG
<lu
Desfosforilación
Figura 14.16
Regulación del MPF. Cdc2 forma com-
p elos con la ciclina B durante S y Gr. En-
lugares críticos para su regulación. Una de estas fosforilaciones se produce en tonces Cdc2 es fosforilada en la treonina-
161 , que se requiere para su actividad, y
la treonina-l61 y se requiere parala actividad quinasa de Cdc2. La otra es una
en la tirosina-15 (y en la treonina-14 en
fosforilación de la tirosina-15 y de la treonina-14 adyacente en vertebrados. La células de verlebrados), lo que inhibe la
fosforilación de la tirosina-15, calalizada por una proteína quinasa denominada actividad de Cdc2. La desfosforilación de
Wee1, inhibe la actividad de Cdc2, y lleva a que se acumulen complejos inacti- aTár-14 y de la Tyr-15 activa a MPF para
vos Cdc2lciclina B durante S y Gr. Entonces el paso de G, a M se lleva a cabo el paso de G, a M. La actividad de I\i1PF
por la activación del complejo Cdc2lciclina B debido a la desfosforilación de la termina hacia el final de la mitosis por la
degradación proteolítica de la ciclina B.
treonina-1 4y de la tirosina-15 por una proteína fosfatasa denominada Cdc25.
Una vez activada, la proteína quinasa Cdc2 fosforila varias proteinas diana
que inician la fase M, lo que se tratará posteriormente en este Capítulo. Ade-
más, la actividad de Cdc2 provoca la degradación de la ciclina B, que se produ-
ce por una proteolisis mediada por ubiquitina. Esta destrucción proteolítica de la
ciclina B inactiva a Cdc2, lo que lleva a la célula a salir de la mitosis, a sufrir la
citocinesis, y a volver a la interfase.

§:*[Link] rl* rirlitl;ts tf t¡tzitxtstzs deyr*dirntts dt: rit:litz*s

La estructura y función de MPF (Cdc2lciclina B) no sólo proporciona una base
molecular para comprender la entrada y salida de la fase M, sino también las
bases para dilucidar la regulación de otros pasos del ciclo celular. La informa-
ción que proporcionó la caraclerización del complejo Cdc2lciclina B ha tenido
un profundo impacto en la comprensión de la regulación del ciclo celular. En
concreto, investigaciones posteriores han establecido que tanto Cdc2 como la
ciclina B son miembros de grandes familias de proteínas relacionadas, en las
que los diferentes miembros de estas familias controlan la progresión a través
de las distintas fases del ciclo celular.
Como ya se trató anteriormente, Cdc2 controla el paso a través de START
así como la entrada en mitosis en las levaduras. Sin embargo, esto lo hace en
asociación con diferentes ciclinas (Fig. 14.17). Concretamente, la transición de
G, a M la lleva a cabo Cdc2 junto con las ciclinas mitóticas de tipo B (Clb1 , Clb2,
Clb3, Clb4). Sin embargo, el paso a través de START lo controla Cdc2 en aso-
 Capítuto 14 o Ciclo celular . 597

Figura 14.9
Detencion del ciclo celular en los pun-
tos de control de G,, S y Gr. Un comple-
: r",
jo de proteínas sensoras se une al ADN
dañado o no replicado y activan a las pro-
teína quinasas ATM y ATR. ATM y ATR a
su vez fosforilan y activan a las proteína
quinasas Chk2 y Chkl , respectivamente,
dando lugar a la detención del ciclo celu-
lar.

Detención del ciclo celular

la reparación antes de que la célula entre en la fase S, en la que se replicaría el

ADN dañado. El punto de control de la fase S proporciona una monitorización
continua de la integridad del ADN, para asegurar que el ADN dañado es repara-
do antes de su replicación. Además, el punto de control de la fase S proporciona
un monitor del control de calidad, que estimula la reparación de cualquier error
que pueda ocurrir durante la replicación del ADN, como la incorporación de
bases incorrectas o la replicación incompleta de segmentos de ADN.
La detención del ciclo celular en los puntos de control de G,, S, y G, está
iniciada por un complejo de proteínas que se unen al ADN dañado o sin replicar
(Fig. 14.9). Estas proteínas (que todavía no están completamente caracteriza-
das) son los sensores del ADN dañado, y sirven para activar una vía de señali-
zación que desencadena no sólo la detención del ciclo celular, sino también la
activación de la reparación del ADN y, en algunos casos, la muerte celular pro-
gramada. Las dianas inmediatas de las proteínas sensoras son dos proteínas
quinasas relacionadas, denominadas ATM y ATR, que se activan en respuesta
al ADN dañado. Estas proteínas fueron identificadas inicialmente porque las
mutaciones en el gen que codifica a ATM son responsables de la enfermedad
ataxia telangiectasia, que resulta en defectos en los sistemas nervioso e inmu-
nológico, además de una elevada f recuencia de cáncer en los individuos afecta-
dos. Después, ATR fue identificada como una proteína estrechamente relacio-
nada con ATM. Una vez activadas, ATM y ATR fosforilan y activan a las
quinasas Chk2 y Chk1, respectivamente. Chkl y Chk2, a su vez fosforilan a
componentes del aparato regulador del ciclo celular, estudiado en la siguiente
sección de este capítulo, para detener la progresión del ciclo celular.
En las células de mamífero, la detención en el punto de control de G, está
mediada por la acción de una proteína adicional conocida como p§S, que es
fosforilada por ATM además de por Chk2 (Fig. 14.1 0). La fosforilación estabiliza
a p53, que de otro modo es degradada rápidamente, resultando en un aumento
rápido en los niveles de p53 en respuesta al ADN dañado. La proteína p53 es un
factor de transcripción, y la elevación de su expresión desencadena la induc-
ción de genes diana que inducen la detención del ciclo celular. Hay que subra-
604 . Sección lV o R0gulación celular

Cdc2/CIb1, ciación con una clase diferente de ciclinas denominadas *i*$ines *, o ülr*'s.
crb2, crb3, crb4 Entonces Cdc2 se asocia con un tipo diferente de ciclinas B (Clbs y Clb6), que
se requieren para la progresión a través de la fase S. Estas asociaciones de
Cdc2 con diferentes ciclinas del tipo B y G, provocan la fosforilación por Cdc2
de diferentes proteínas sustrato, lo que se requiere para la progresión a través
de las fases específicas del ciclo celular.
Los ciclos celulares de los eucariotas superiores se controlan, no solamente
por múltiples ciclinas, sino también por múlt¡ples proteína quinasas relaciona-
das con Cdc2. Estas quinasas se conocen como üc,*{'s (de quinasas depen-
dientes de ciclina). Puesto que Cdc2 es el m¡embro original de esta familia,
Cdc21Clb5. Clb6 también se le conoce como Cdkl .
Todos estos miembros de la familia Cdk se asoc¡an con c¡cl¡nas específ¡cas
para llevar a cabo la progresión a través de los diferentes estados del ciclo
celular (véase Fig. 14.17). Por ejemplo, el paso de G, a S se regula principal-
mente por Cdk2 y Cdk4 (y en algunas células Cdk6) en asociación con las cicli-
nas D y E. Los complejos de Cdk4 y Cdk6 con las ciclinas de tipo D (ciclina D1,
D2 y D3) desempeñan un papel crítico en la progresión a través del punto de
restricción en G,. La ciclina E se expresa posteriormente en G,, y los complejos
Cdk2lciclina E se requieren para el paso de G, a S y el inicio de la síntesis del
ADN. Los complejos de Cdk2 con la ciclina A intervienen en la progresión de las
células a través de la fase S, Como ya se ha tratado, los complejos de Cdc2 con
Cdk2lCycA la ciclina B dirigen el paso de G, a M.
La actividad de las Cdk's durante la progresión del ciclo celular se regula por,
Figura 14.17
Complejos de ciclinas y de quinasas al menos, cuatro mecanismos moleculares (Fig. 1a.18). Como ya se ha tratado
dependientes de ciclinas. En las leva- en el caso de Cdc2, el primer nivel de regulación implica la asociación de las
duras, el paso a través de START lo con- Cdk's con las ciclinas correspondientes. Así, la formación de los complejos es-
trola Cdc2 asociado a las ciclinas G, pecíficos Cdk/ciclina está controlada por la síntesis y degradación de las cicli-
(Cln1, Cln2, Cln3). Los complejos de
Cdc2 con diferentes ciclinas tipo B (Clb's) nas. En segundo lugar, la activación de los complejos Cdk/ciclina requiere la
regulan la progresión a través de la fase fosforilación de un residuo de treonina de la Cdk conservado alrededor de la
S y la entrada en la mrtosis. En las célu- posición 160. Esta fosforilación que activa la Cdk está catalizada por una enzi-
las animales, el paso a través del punto ma denominada CAK (de quinasa activadora de Cdk), que a su vez está consti-
de restricción de G, es controlado por tuida por una Cdk (Cdk7) unida con la ciclina H. Los complejos de CdkT y ciclina
complejos de Cdk4 y Cdk6 con ciclinas
del tipo D. Los complejos Cdk2lciclina E H se asocian con el factor de transcripción TFllH, que se requiere para la inicia-
intervienen más adelante en G, y se re- ción de la transcripción mediante la ARN polimerasa ll (véase Cap. 5). Por lo
quieren para el paso de G, a S. Los com- tanto, parece ser que este miembro de la familia de las Cdk's participa en la
plejos Cdk2lciclina A se requieren parala
transcripción así como en la regulación del ciclo celular.
progresión a través de la fase S, y los
complejos Cdc2iciclina B son responsa- A diferencia de la fosforilación activadora producida por CAK, el tercer me-
bles del paso de G, a M. canismo de la regulación de Cdk implica la fosforilación inhibidora de residuos
de tirosina cerca del extremo amino terminal de Cdk, que está catalizada por la
proteína quinasa Wee1. En concreto, tanto Cdc2 como Cdk2 se inhiben por la

Fosforilación
activadora de la
treonina próxima
a la posición 160

Fosforilación inhibidora
Figura 14.18
de la treonina 14
Mecanismos de regulación de Cdk. Las y de Ia tirosina 15
actividades de las Cdk's se regulan por
cuatro mecanismos moleculares.