LACTATO DESHIDROGENASA LS (IFCC)

Reactivo líquido para la determinación de la enzima

Lactato Deshidrogenasa en suero o plasma.

Para uso en el diagnóstico in Vitro. Apto para usar en autoanalizador.

SIGNIFICANCIA CLINICA MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO

La enzima Lactato deshidrogenasa se encuentra concentrada en el Espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros con cubeta
corazón, riñón, hígado, músculo y otros tejidos corporales. El daño a termoestabilizada, capaz de medir absorbancia a 340 nm, baño
alguno de estos tejidos resulta en un aumento de los niveles séricos de termoregulado, cronómetro, pipetas, calibrador y sueros controles.
LDH. Niveles elevados de LDH están asociados con infarto del
miocardio, daño renal, hepatitis, enfermedades musculares y otras TECNICA
patologías. Existen a lo menos cinco isoenzimas de LDH dependiendo de
su origen tisular. Llevar el reactivo a la temperatura de reacción (30° ó 37° C.) y poner el
espectrofotómetro en cero contra blanco de agua destilada.
FUNDAMENTOS DEL METODO
Calibrador Muestra
La enzima LDH cataliza la reacción reversible de lactato a piruvato,
Muestra (ml) -- 0.05
pudiendo utilizarse ambos como sustrato. Este reactivo se basa en el
método de Wacker & Amador, y las modificaciones posteriores de Gay, Calibrador (ml) 0.05 --
[Link] y Bowers, tendientes a mejorar la linealidad del método y la Reactivo de Trabajo (ml) 1.00 1.00
duración del reactivo. Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotómetro. Incubar 30
LDH segundos a la temperatura de reacción. Leer la absorbancia inicial (A1)
L-Lactato+NAD+ Piruvato +NADH + H+
a 340 nm. Repetir las lecturas a intervalos de 60 segundos, hasta por
En este caso, la enzima cataliza la oxidación de lactato a piruvato tres minutos.
reduciendo el NAD a NADH. La concentración de LDH se determina Adaptaciones para la aplicación de este reactivo en autoanalizadores
midiendo el aumento de absorbancia a 340 nm. a medida que se están disponibles a solicitud. Es responsabilidad del laboratorio validar
produce NADH. esta aplicación.

REACTIVOS CALIBRACION

Conservados entre 2° y 8°C. y protegidos de la luz, estables hasta la  En la calibración se recomienda utilizar calibrador sérico VALTROL-
fecha de caducidad indicada en la etiqueta. C (código 210-130), proceder de igual forma que con las muestras.
 Se recomienda recalibrar en cualquier momento que se evidencie
Composición de los Reactivos: alguno de estos acontecimientos:
Reactivo 1:  El lote de reactivo cambia
Tris Buffer ph 8.9 100 mM  Se realiza un mantenimiento preventivo del equipo
L-Lactato 60 mM  Los valores de control han cambiado o se encuentran fuera
KCl 180 mM de escala.
Estabilizantes no reactivos c.s.
CALCULOS
Reactivo 2:
Tris Buffer ph 8.9 50 mM Determine el cambio de Absorbancia por minuto A/min)
NAD 39 mM
Factor = Concentración Calibrador
Preparación del Reactivo de Trabajo: Mezclar 1 ml. de Reactivo 1 con A/min. Calibrador
200 ul. de Reactivo 2 o preparar el volumen requerido manteniendo la Actividad LDH (UI/L) = Factor x A/min. Muestra
proporción. Estabilidad del reactivo de trabajo: 4 días entre 2° y 8°C.
Descartar el reactivo si su absorbancia es mayor de 0.6 a 340 nm. contra O bien se puede utilizar el siguiente factor:
blanco de agua y paso de luz de 1 cm o presenta turbidez.
Actividad LDH (UI/L) = A/min x 3376
MUESTRA

Utilizar de preferencia suero libre de hemólisis obtenido por Factor = Vt x 1000 = 3376
centrifugación. La hemólisis eleva falsamente la concentración de LDH. NADH 340 x P x Vm
En lo posible desechar el uso de plasma debido a la interferencia de los
anticoagulantes, de otra forma, utilizar solamente plasma heparinizado. Vt= Volumen total de reacción
No se requiere una preparación especial del paciente. La LDH es estable NADH 340= Coeficiente de extinción del NADH a 340 nm.
por 7 días entre 2° y 8°C. No congelar las muestras ya que se destruye P= Espesor del paso de luz en la cuveta
la isoenzima de origen hepático. Vm= Volumen de muestra utilizado

Valtek S.A. Av. Marathon 1943, Ñuñoa, Santiago de Chile / Tel. + (562) 654 1100
Fax + (562) 654 1199 / [Link] / info@[Link]
CONTROL DE CALIDAD

 Es conveniente analizar junto con las muestras sueros controles -Repetibilidad intraserie: n=20
valorados para Lactato Deshidrogenasa por este método. Se
recomienda la utilización de los sueros controles VALTROL-N Nivel Media (U/L) C.V.
(código 210-100) y VALTROL-P (código 210-110). Normal 141 0,82%
 Si los valores obtenidos para los controles se encuentran fuera del Patológico 222 0,85%
rango de tolerancia, revisar el instrumento, el reactivo y el
calibrador. -Reproducibilidad interserie: n=20
 Cada laboratorio debe disponer de su propio Control de Calidad y
establecer las correcciones necesarias en caso de que no se Nivel Media (U/L) C.V.
cumpla con las tolerancias permitidas para los controles. Normal 141 1,05 %
Patológico 222 0,89 %
ADVERTENCIAS Y MEDIDAS DE PRECAUCION:
Estos datos han sido obtenidos utilizando un autoanalizador MINDRAY
 Los volúmenes indicados pueden ser alterados proporcionalmente de la serie BS. Los resultados pueden variar al cambiar de instrumento o
sin alterar los resultados. al realizar el procedimiento manualmente.
 El factor podría variar en autoanalizadores por diferencia en el
espesor de paso de luz. En este caso utilizar un calibrador sérico -Certificado de Conformidad y Trazabilidad disponible a solicitud
VALTROL-C (código 210-130) para obtener el factor.
 Los rangos normales deben informarse de acuerdo a la RANGOS DE REFERENCIA
temperatura a la cual se realiza el ensayo.
 Consultar en nuestra página WEB la ficha de seguridad de este Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en
reactivo y observar todas las medidas de precaución necesarias función de la población de pacientes. Los rangos de referencia que se
para la manipulación y eliminación de residuos. enumeran a continuación están tomados de la bibliografía existente.
 En autoanalizadores debe utilizarse contenedores de reactivos
nuevos. 60 a 140 UI/L a 30°C 115 a 240 UI/L a 37°C

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO: PRESENTACIONES DISPONIBLES

-Linealidad: 1000 U/L. CODIGO CONTENIDO

Para valores superiores 1000 U/L, diluir la muestra con suero fisiológico 130-150 Reactivo 1 3 x 50 ml
y el resultado obtenido se multiplica por el factor de dilución. Reactivo 2 1 x 31 ml
300160 Reactivo 1 4 x 40 ml
-Límite de detección: 4 U/L. Reactivo 2 2 x 16 ml
200160 Reactivo 1 4 x 40 ml
-Interferencias: Hemólisis, bilirrubina sobre 20 mg/dL, y la lipemia Reactivo 2 2 x 16 ml
(triglicéridos sobre 1000 mg/dL) pueden interferir en la técnica. Otros
medicamentos y sustancias podrían interferir (3). BIBLIOGRAFIA

-Exactitud: Los reactivos VALTEK no muestran diferencias sistemáticas 1. Tietz, N.W. (ed) Fundamentals of Clinical Chemistry W.B. Saunders
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los Co., Philadelphia, 1976.
detalles del estudio comparativo están disponibles bajo solicitud. 2. Gay, R.J., Mc Comb, R.B., and Bowers, G.H. Jr. Clin Chem 14, (740)
1978.
3. Young D.S., effects of drugs on clinical laboratory tests,
4th ed. AACC Press, 1995.

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