USO DEL MICROSCOPIO
ÓPTICO
PARTES DEL MICROSCOPIO
OCULAR
REVÓLVER Y
OBJETIVOS
PLATINA
MACRO Y
CONDENSADOR Y MICROMÉTRICO
DIAFRAGMA DE IRIS
FUENTE DE LUZ Y
DIAFRAGMA DE CAMPO
EL SISTEMA ÓPTICO I: LOS OBJETIVOS
MANEJO DEL MICROSCOPIO
ÓPTICO
Colocar la preparación en la platina, centrándola en la zona a observar.
Conectar la fuente de iluminación.
Ajustar los oculares a la distancia interpupilar.
EMPEZAR CON EL OBJETIVO DE MENOR AUMENTO. (4X rojo). El condensador
debe estar en la parte más alejada de la preparación (en posición baja) y el
diafragma parcialmente cerrado. El condensador irá subiendo de posición y el
diafragma se ira abriendo conforme aumentamos el objetivo.
Cuando se emplean objetivos de inmersión (100X) el condensador se sitúa
en la parte más cercana a la preparación (condensador alto) y el diafragma
abierto. En algunos microscopios, el condensador tiene una posición fija;
en este caso sólo se ajustará el diafragma.
PREPARAR ENFOQUE: Con el tornillo macrométrico, se aproxima la
preparación lo máximo posible al objetivo, sin llegar a contactar en caso de
objetivos secos (4X, 10X, 20X, 40X), y conectando ligeramente cuando se
utilizan objetivos de inmersión (100X).
ENFOQUE: Mirando a través del ocular, se gira el tornillo macrométrico hasta
que aparezca la imagen de la preparación. Cuando ya se tiene localizada la
imagen, se afina el enfoque con el tornillo micrométrico.
MANEJO DEL MICROSCOPIO
ÓPTICO
• Se pueden observar las distintas partes de la preparación moviendo ésta sobre la
platina, con ayuda del carro. Para no repetir los campos observados, la
preparación se mueve siguiendo un orden:
PROBLEMAS DE FUNCIONAMEINTO
• La muestra está iluminada defectuosamente: iris del diafragma
muy cerrado o condensador sucio o muy alejado de la muestra.
• La imagen se desenfoca continuamente porque la platina se
baja sola o se bloquea: fallo mecánico de la cremallera.
• La muestra no está iluminada uniformemente: el objetivo no
está bien centrado (girar lentamente el revólver hasta que haga
tope), o la fuente de luz no está centrada (rectificar el
alineamiento del condensador).
CÓMO ALINEAR LA ÓPTICA DEL MICROSCOPIO
• Si la óptica del microscopio se encuentra desalineada, al observar al microscopio óptico, se ve el campo
parcialmente iluminado, dando una imagen de luna creciente o menguante
• Colocar la muestra en la platina.
• Abrir el diafragma de campo (base microscopio) y el diafragma del iris.
• Enfocar la preparación con el objetivo 4X con el condensador arriba.
• Cerrar el diafragma de campo hasta que se vea el campo y baje el condensador hasta tener una visión nítida.
• Mala alineación: Imagen A y B
• Centre la imagen con los tornillos del condensador.
• Hasta que observe como en la imagen C
• Cambie al objetivo de 10X y abrir el diafragma de campo hasta que el borde desaparezca del campo visual.
Imagen D
• Regule el contraste con el diafragma de iris y si es necesario haga alguna corrección con los tornillos del
condensador
HISTOLOGÍA DEL SISTEMA NERVIOSO:
TÉCNICA HISTOLÓGICA
CONVENCIONAL PARA M.O.
• OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
• FIJACIÓN
• DESHIDRATACIÓN
• INCLUSIÓN EN PARAFINA
• CORTE CON MICROTOMO
• HIDRATACIÓN
• COLORACIÓN
• DESHIDRATACIÓN Y MONTAJE
EL PROCESO HISTOLÓGICO
Fuente:
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-
tecnicas/1-proceso.php
EL PROCESO HISTOLÓGICO: INCLUSIÓN EN PARAFINA
Fuente:
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-
proceso.php
EL PROCESO HISTOLÓGICO:
DESPARAFINADO, HIDRATACIÓN, TINCIÓN, DESHIDRATACIÓN Y MONTAJE
Fuente:
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-
proceso.php
(Tinción general con hematoxilina-eosina)
TIPOS DE COLORANTES
COLORANTES BÁSICOS: COLORANTES ÁCIDOS:
Tiñen estructuras que tienen carácter ácido Tiñen estructuras con carácter básico
(basófilas), normalmente con carga negativa (acidófilas), normalmente con carga positiva
• Azul de tionina (Tinción Nissl ARN ribosómico) • Eosina (citoplasma)
• Violeta de cresilo (Tinción Nissl ARN ribosómico)
• Rojo neutro (neuronas y células gliales) y la
sustancia de Nissl (ribosomas libres y asociados a
membranas del retículo endoplasmático rugoso
• Azul de metileno (núcleos celulares)
• Azul de toluidina (núcleos celulares)
Tinción hematoxilina-eosina
• Hematoxilina (núcleos celulares)
COLORACIÓN POR PRECIPITACIÓN: COLORANTES LIPOSOLUBLES:
• Tinción de Golgi impregnación argéntica • Luxol Fast Blue
(axón y dentritas) • Negro Sudán
• Tinción de Cajal Sublimado de oro
(astrocitos, neuronas)
TINCIONES MÁS UTILIZADAS EN EL TEJIDO
NERVIOSO
TÉCNICA DE NISSL.
Esta técnica utiliza diversos colorantes básicos (violeta de cresilo, azul de toluidina)
para teñir el ARN de color azulado. Con esta técnica se resaltan las características
estructurales importantes de las neuronas.
La sustancia de Nissl (retículo endoplasmático rugoso y ribosomas libres) aparece
azul oscuro debido a la tinción de ARN ribosómico, dando al citoplasma un aspecto
moteado. El DNA, presente en el núcleo, se tiñe de un color similar.
No se tiñen los axones ni ramificaciones de las neuronas, por carecer de ARN en su
interior.
HEMATOXILINA-EOSINA
Es una coloración que permite distinguir detalles morfológicos de células y tejidos.
La hematoxilina (un colorante básico) tiñe de color azul-violeta las estructuras ácidas
(núcleo, ribosomas, RER) y la eosina (un colorante ácido) tiñe de color rosa-rojo las
estructuras básicas (la mayoría de las proteínas citoplasmáticas, mitocondrias).
En general, con esta tinción se ven los núcleos de las células en azul y el citoplasma
en rosa. Las fibras de colágeno de la matriz extracelular se tiñen de rosa.
TINCIONES MÁS UTILIZADAS EN EL TEJIDO NERVIOSO
TÉCNICA DE KLÜVER BARRERA
Utiliza dos colorantes un colorante básico (por ej. violeta de cresilo) y luxol fast-
blue (con afinidad por los lípidos de la vaina de mielina).
Resultado: se tiñe la mielina de azul, los núcleos y la sustancia de Nissl (ARN
ribosómico) del color del colorante básico (violeta en nuestro ejemplo).
TÉCNICA DE GOLGI:
Esta técnica fue la precursora de todas las técnicas de impregnación argéntica.
Las tinciones argénticas permiten visualizar fibras de colágeno o células con
prolongaciones celulares (dendritas y axones neuronales...). Suelen dar un color
negro o marrón oscuro y el fondo de la preparación puede verse dorado.
Resultado: Se observan neuronas, glía y vasos de color negro-marrón sobre un
fondo amarillo-dorado. Se utiliza para el estudio de campos dendríticos y
axonales. No se observan detalles citológicos.
OTRAS TÉCNICAS DE TINCIÓN
TÉCNICA DE CAJAL
Técnica de impregnación argéntica.
Resultado: Neurofilamentos y neurotúbulos del soma, axones y dendritas, se observan formando un
artificio llamado neurofibrillas, de color marrón. El núcleo es negativo, de un color amarillo pálido.
Las prolongaciones neuronales y gliales y algunos vasos aparecen impregnados de color marrón.
Permite el estudio de prolongaciones neuronales, dando una imagen más completa del tejido
nervioso. No es posible observar detalles citológicos ni el núcleo celular.¡¡Posibilita observar el
neuropilo!!
MÉTODO DE CAJAL CON ORO SUBLIMADO
El sublimado de oro es una solución mezcla de cloruro de mercurio y cloruro de oro que precipita
sobre los gliofilamentos.
Resultado: los astrocitos y sus prolongaciones aparecen impregnados de color negro. El fondo es
habitualmente incoloro o marrón.
MÉTODO DE DEL RÍO HORTEGA
Empleado para astrocitos. Utiliza nitrato de plata y carbonato de litio.
Resultado: los astrocitos se observan de color negro y bien delimitados, con sus prolongaciones de
color negro y fondo amarillo.
MÉTODO DE WEIGERT
Utiliza la hematoxilina con un mordiente y cloruro férrico.
Resultado: se tiñen las lipoproteínas de la banda de mielina de color violáceo o negro, sobre un
fondo incoloro o amarillo pálido.
Corteza cerebelo. Hematoxilina-Eosina
Sustancia Gris:
Substància Grisa: cossos
cuerpos celulares
cel·lulars
Sustancia
blanca: fibras
Substància Blanca:
nerviosas
fibres nervioses
PRÁCTICA DE MICROSCOPÍA: CEREBELO
LCH/518 Cerebelo mamífero LCH/518 Cerebelo mamífero
Objetivo 4X
Objetivo 4X
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBELO
LCH/518 Cerebelo mamífero
Objetivo 10X LCH/518 Cerebelo mamífero
Objetivo 10X
http://www.uv.es/histome
d/privadoMEsp/
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBELO
LCH/518 Cerebelo mamífero
Objetivo 10X
Corteza cerebelo. Hematoxilina-Eosina
Corteza cerebelo. Hematoxilina-Eosina
Capa Granular
Sustancia gris
Capa Molecular
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBELO CÉLULAS PURKINJE 40X
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBELO
Céls. de
Purkinje
Céls. de
Purkinje
Céls. de
Purkinje
Corteza cerebelo. Hematoxilina-Eosina
Corteza cerebelo 40X Células Purkinje . Hematoxilina-Eosina
Corteza cerebelo
Células Purkinje .
Hematoxilina-Eosina
Corteza cerebelo. Tinción de Golgi
Corteza cerebelo. Tinción de Golgi
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBRO
TÉCNICA DE GOLGI: LCH/512 Cerebro de Gato Color negro o marrón
Objetivo: 4X (Visión general)
oscuro y el fondo de
la preparación puede
verse dorado.
Resultado: Se
observan neuronas,
glía y vasos de color
negro-marrón sobre
un fondo amarillo-
dorado. Se utiliza
para el estudio de
campos dendríticos y
axonales. No se
observan detalles
citológicos.
Corteza cerebro. Tinción de Golgi
Corteza cerebro. Tinción de Golgi 40x
Corteza cerebro. Tinción de Golgi
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBRO
TÉCNICA DE GOLGI: LCH/512 Cerebro de Gato
Objetivo: 100X (Detalle de neurona)
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBRO
• LCH/513 Cerebro de mamífero LCH/513 Cerebro de mamífero
Objetivo 10X Objetivo 40X
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: CEREBRO
• LCH/513 Cerebro de mamífero. Objetivo 100X
Corteza cerebro. Hematoxilina-Eosina
Corteza cerebro. Hematoxilina-Eosina
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: MÉDULA
Fuente:
sosbiologiacelularytisular.blogspot.com
Tinción de Klüver-Barrera
Este campo muestra una sección de médula espinal teñida con la
técnica de Klüver-Barrera. Se observan núcleos y grumos de Nissl color
rojo-violeta y vainas de mielina azul más oscuro.
La zona delimitada por letra A corresponde a la sustancia gris (se observa
presencia de somas neuronales) y la zona delimitada por la letra B
corresponde a la sustancia blanca (contiene axones mielinizados y
celulas glia)
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: MÉDULA
Fuente:
www.wesapiens.org
Tinción de Klüver-Barrera
Este campo muestra un primer plano del canal central de una
médula espinal teñida con la técnica de Klüver-Barrera.
El canal central está revestido por un epitelio formado por
ependimocitos. Por el canal fluye líquido cerebroespinal.
El canal central se encuentran en la substancia gris.
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: MÉDULA
LCH/527 Médula espinal de vaca LCH/527 Médula espinal de vaca
Objetivo 4X Objetivo 4X
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: MÉDULA
LCH/527 Médula espinal de vaca LCH/527 Médula espinal de vaca
Objetivo 10X ( T. Nissl) Objetivo 10X ( T. Nissl)
Sustancia gris médula. Tinción de Nissl
Cuerpos celulares
Médula espinal 4x
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: MÉDULA
• LCH/524: Médula Humana. Objetivo
10X (H/E)
LCH/527 Médula espinal de vaca
Objetivo 4X ( T. Nissl)
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: MÉDULA
LCH/528 Médula Espinal de Gato LCH/528 Médula Espinal de Gato
Objetivo 4X TINCIÓN DE KLÜVER Objetivo 4X
BARRERA
LCH/527 Médula espinal
Objetivo 10X ( T.
LCH/527 Médula espinal
Objetivo 40X ( T.
LCH/527 Médula espinal
Objetivo 40X ( T. Kluver Barrera)
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: MÉDULA
LCH/528 Médula Espinal de Gato Objetivo 40X
TINCIÓN DE KLÜVER BARRERA
Médula espinal. Hematoxilina-Eosina
NEURONA MOTORA
Médula espinal. Hematoxilina-Eosina
Nervio periférico
Nervio periférico:
Objetivo 4X y 10X
Nervio. Hematoxilina-Eosina
Nervio periférico Tinción con Tuloidina
Nervio periférico Tinción con Tuloidina
Plexo coroideo. Hematoxilina-Eosina
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: NEURONAS MOTORAS
LCH/534 Neuronas motoras de LCH/534 Neuronas motoras de nervios de
nervios de mamífero. Objetivo 4X T. mamífero. Objetivo 4X. T Nissl
Nissl
En el interior del citoplasma
neuronal se pueden advertir
claramente los cuerpos de Nissl,
acumulaciones de retículo
endoplasmático. En el neuropilo
circundante, se pueden observar
células gliales de menor tamaño.
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: NEURONAS MOTORAS
LCH/534 Neuronas motoras de nervios de
• LCH/534 Neuronas motoras de nervios
mamífero. Objetivo 40X (T. Nissl)
de mamífero. Objetivo 10X ( T. Nissl)
Neuronas motora teñidas con tinción de Nissl. En el interior del
citoplasma se observan los granos de Nissl. En el neuropilo que rodea al
soma neuronal se observa la presencia de células gliales.
PRÁCTICA DE MICROSCOPIA: NEURONAS MOTORAS
• LCH/534 Neuronas motoras de nervios
de mamífero. Objetivo 100X ( T. Nissl)
