INTRODUCCION
La cromatografía de gases es el procedimiento comúnmente utilizado en el análisis
químico, en concreto cromatografía de gases consiste en una muestra que se vaporiza y
se inyecta en la cabeza de la columna cromatografía. La muestra se transporta a través
de la columna por el flujo de fase inerte, móvil gaseosa. La propia columna contiene una
fase líquida estacionaria que se adsorbe sobre la superficie de un sólido inerte.
DESCRIPCION DEL EQUIPO
En la imagen superior se muestra un esquema simplificado de las partes de un
cromatógrafo de gases. En elpuede regularse la presión y el flujo de la corriente de gas
acarreador, y también la temperatura del horno que calienta la columna.
A partir de esta imagen puede resumir la CG. Del cilindro fluye una corriente de He, la
cual dependiendo del detector, una parte se desvía hacia él y la otra se dirige al inyector.
En el inyector se coloca una jeringa con la cual se libera de manera inmediata un volumen
de muestra.
El calor del horno y del inyector debe ser lo suficientemente elevado como para
evaporizar instantáneamente la muestra; a menos, que se inyecte una muestra gaseosa
directamente.
Sin embargo, la temperatura tampoco puede ser demasiado elevada, ya que podría
evaporar el líquido de la columna, el que funciona como fase estacionaria.
La columna está empacada como una espiral, aunque también puede tener forma de U.
Recorrida la muestra toda la longitud de la columna, llega al detector, cuyas señales se
amplifican obteniendo así los cromatogramas.
FUENTE DE GAS
-el gas debe ser químicamente inerte y no debe interaccionar con las moléculas del
analito ni con las columnas. Debe obtenerse en un grado de pureza alto (libre de
contaminantes) y a un precio razonable también debe ser compatible con el sistema de
detección empleado y los gases portadores comúnmente en cromatografía de gases son
el helio, nitrógeno, argón e hidrogeno que estos se suministran desde un recipiente o
bomba a presión por lo que se incorpora al sistema de medidores de regulador de presión
así como también un sistema de regulación de flujo y un filtro que elimine el agua y otras
impurezas
El gas portador (por ejemplo, helio, nitrógeno, hidrógeno o una mezcla de argón y
metano) debe ser puro (> 99,9995 %). Los contaminantes pueden reaccionar con la
muestra y la columna, crear picos falsos, sobrecargar el detector y aumentar la línea
base, entre muchos otros problemas.
La función del gas portador es transportar la muestra a través del sistema.
SISTEMA DE INYECCION
El inyector introduce la muestra vaporizada en la corriente de gas portador. Los inyectores
más comunes son los puertos de inyección y las válvulas de muestreo.
La muestra se introduce en la corriente de gas portador a través de un séptum por medio
de jeringas de líquido o de gas. Y se evaporiza en el tubo de vidrio. Por lo general las
columnas analíticas requieren de 0.1 a 10 ul de muestra liquida. Los gases pueden
introducirse por medio de jeringas de cierre hermético o válvulas de muestreo de gases,
en el trabajo analítico puede necesitarse de 0-5 a 10 ml de gas.
La inyección dividida es una forma de reducir el volumen de muestra para las columnas
tubulares abiertas. La inyección dividida no es útil para el análisis de trazas ya que la
mayor parte de la muestra se descarta para un buen análisis de trazas es adecuado la
inyección sin división ya que en este caso se inyecta una solución de muestra diluida en
un solvente con el punto de ebullición más bajo en este caso deben estar cerradas las
válvulas de aguja y la temperatura inicial de la columna es de 20 a 25 ºC menor que el
punto de ebullición de este modo se condensa al principio del equipo.
COLUMNAS CROMATOGRAFICAS
Las columnas pueden ser del tipo empaquetadas o capilares. En la columna es donde se
produce el proceso de separación.
La temperatura influye enormemente sobre la mayoría de las separaciones; precisamente
por eso, la columna se ubica en un horno bien controlado.
La muestra vaporizada se introduce en la columna por medio de un gas portador. Los
compuestos se reparten de forma selectiva entre la fase estacionaria (revestimiento) y la
fase móvil (gas portador).
-columnas empaquetadas: están fabricadas con vidrio o con tubería metálica
normalmente tienen un largo de 2 a 3 metros y tienen diámetros internos de 2 a 4 mm
.estos tubos están densamente empacados con un material de empaque uniforme
finamente dividido, o con un soporte solido que está recubierto con una capa delgada
(0.05 a 1um) de la fase liquida estacionaria. Por lo general los tubos se forman como
bobinas con diámetros cerca de 15 cm para que se puedan colocar en un horno de
temperatura controlada
-columnas capilares: también son llamadas columnas tubulares abiertas debido a que
tienen una trayectoria de flujo abierta. Hay dos tipos básicos: tubulares abiertas con la
pared cubierta y tubulares abiertas con el soporte cubierto. Las columnas con la pared
cubierta son tubos capilares recubiertos con una delgada capa de líquido de la fase
estacionaria. En las columnas tubulares con el soporte abierto la superficie interna del
capilar está recubierta con una delgada película (30 um) de un material de soporte sólido
como tierra de diatomeas, en el cual el líquido es adsorbido de la fase estacionaria. Este
tipo de columnas retienen varias veces tanta fase4 estacionaria como lo hace una
columna con la pared recubierta y por lo tanto tienen una capacidad de muestra más
grande. La eficiencia de una columna de tubulares abiertas con el soporte cubierto es
menor a la de una columna de tubulares abiertas con la pared cubierta pero
significativamente mayor que la de una columna empacada.
FASE ESTACIONARIA
La fase estacionaria más común es el gel de sílice o más conocido como acido silícico.
FASE ESTACIONARIA LIQUIDA
Las propiedades deseables para la fase liquida inmovilizada en una columna
cromatografica de gas líquido incluyen:
- baja volatilidad (idealmente, el punto de ebullición del líquido debe ser por lo menos
100ºC superior a la temperatura máxima del funcionamiento de la columna)
- estabilidad térmica
-que sea químicamente inerte
Las fases estacionarias más utilizadas tanto para columnas empacadas como para
tubulares abiertas de cromatografía de gases en orden creciente de polaridad. Estos seis
líquidoquizá puedan proporcionar separaciones satisfactorias para el 90% o más de las
muestras.
FASE ESTACIONARIA ENLAZADAS Y ENTRECRUZADAS
Las columnas comerciales se anuncian como fases estacionarias enlazadas o
entrecruzadas el objetivo de enlazarlas y entrecruzarlas es brindar una fase estacionaria
más duradera que pueda ser enjuagada con un disolvente cuando la película se
contamine
FASE MOVIL
Es un fluido que penetra a través o a lo largo del lecho estacionario, en una dirección
determinada. Puede ser un líquido (cromatografía de líquidos) o un gas (cromatografía de
gases) o un fluido supercrítico (cromatografía de fluidos supercríticos). En cromatografía
de gases se puede utilizar la expresión gas portador para designar la fase móvil, y en
cromatografía de elución se puede utilizar la palabra eluyente para designar esta misma
fase.
- Recipiente con la fase móvil o gas portador: Es una bala de gas inerte (N2, He, Ar ,H), a
elevada presión y de gran pureza, provista de un manorreductor y un sistema para regular
un flujo pequeño de gas.
La fase móvil que arrastra los componentes de la mezcla. Este gas acarreador, que en la
mayoría de los casos es el helio, recorre el interior de una columna cromatográfica,
mientras que al mismo tiempo terminan separándose todos los componentes.
Otros gases acarreadores utilizados para este fin son nitrógeno, hidrógeno, argón y
metano. La selección de estos dependerá del análisis y del detector acoplado al sistema
DETECTORES
La corriente de gas de la columna, que contiene los compuestos separados, pasa a través
de un detector. La salida del detector se transforma en el cromatograma. Aunque existen
varios tipos de detectores, todos ellos realizan las mismas tareas:
Generar una señal electrónica estable (línea base) cuando llega gas portador puro (sin
ningún otro componente) al detector. Generar una señal diferente cuando un componente
atraviesa el detector
TIPOS DE DETECTORES:
-Detector de conductividad térmica: detecta los compuestos que tienen una conductividad
térmica diferente a la del gas portador.
-Detector de ionización de llama: detecta los compuestos que sufren combustión o se
ionizan al entrar en contacto con una llama.
-Detector de captura de electrones: detecta los compuestos capaces de capturar
electrones (ejem. Los compuestos halogenados)
-Detector de nitrógeno- fosforo: detecta los compuestos que contienen fosforo y nitrógeno
-Detector fotométrico de llama: detecta los compuestos que contienen azufre y fosforo
-Detector de emisión atómica: puede ajustarse para detectar numerosos elementos.
-Detector selectivo de masas. Identifica componentes del espectro de masas
REGISTRO
El registro es donde podemos obtener el resultado y el respectivo cromatograma, el área
del pico y el tiempo
Preparación de soluciones estándar
1. Preparar una solución patrón de cocaína y sustancias relacionadas separadamente a
concentraciones de 1 mg/mL usando el solvente de extracción
2. Transferir 1mL de la solución a un vial de vidrio de 2 mL
3. Inyectar 1-2 µL de la solución patrón en el GC-MS
Preparación de las muestras de hoja de coca
1. Secar las muestras de hoja de coca en el horno a 40°C durante la noche o hasta que no haya
cambio en el peso 2 Usando un mortero y pistilo, moler y homogenizar una muestra
representativa de un lote de hoja de coca secada en horno. 3 Pesar 500 mg de hoja de la muestra
de hoja de coca en un tubo de cultivo de 15 mL 4 Adicionar 2 mL de solvente de extracción en el
tubo de cultivo 5 Calentar la mezcla a 75 °C en un horno por una hora con agitación ocasional a
intervalos de 15 minutos. 6 Permitir que la mezcla se asiente y enfriar a temperatura ambiente. 7
Filtrar 1 mL del sobrenadante directamente dentro de un vial de vidrio de 2 mL usando una jeringa
de 3 mL BD Luer Lok con un filtro de jeringa de 0,45 micras (sin aguja) 8 Inyectar 1-2 µL del
extracto de la muestra dentro del GC-MS Preparación de la muestra de cocaína en los productos
intermedio y final. 1. Pulverizar y homogenizar la muestra de cocaína sólida usando un mortero y
pistilo.
2. Pesar aproximadamente 5 mg de la muestra de cocaína en un tubo de ensayo y adicione 2 mL
del solvente de extracción. 3. Mezclar la solución agitandola o con agitador vortex. Si la solución
resultante esta nublada, filtrar usando una jeringa BD Luer- Lok con un filtro de jeringa de 0,45
micras (sin aguja) dentro de un vial de vidrio de 2 mL, de otra manera transferir 1 mL de la
solución a un vial de vidrio de 2 mL.
4. Inyectar 1-2 µL del extracto de la muestra dentro del GC-MS Página 51
INFORME CONSULTORÍA TALLER “ANÁLISIS DE MUESTRAS DE INTERÉS FORENSE POR
CROMATOGRAFÍA DE GASES ACOPLADA A ESPECTROMETRÍA DE MASAS (GC-MS)”. La Paz, Bolivia,
13 al 17 de agosto, 2012 Nota: Las condiciones anteriores pueden ser alteradas, siempre y cuando
se lleve a cabo la validacion adecuada
Condiciones de operación del GC-MS para análisis cualitativo de muestras de cocaína Columna :
Ultra 2 o equivalente ( 25m x 0,2mm x 0,33m; ligada entrecruzada, 5% fenilmetilsiloxano) Presión
de cabeza de la columna Gas de arrastre: 8 psi 1 mL/min helio Modo de entrada Split Temperatura
del inyector: 280 °C Temperatura del Detector 280 °C Programa de temperatura del horno: 80 °C
( mantener por 3 min) rampa a 40°C/min a 280°C (mantener por 15 min) Tiempo de corrida 23 min
Modo de adquisición Scan Rango de Scan 33-500 uma
Resultados: La identificación se realiza comparando el tiempo de retención y el espectro de masas
del analito con la de un patrón de de referencia. Todos los compuestos identificados por GCMS y
reportados por el analista deben ser comparados con un espectro de masas actual del estándar de
referencia apropiado, preferiblemente obtenido en el mismo instrumento, operado bajo las
mismas condiciones. Librerías comerciales de espectros de masa o espectros generados por el
usuario podrían ser usados con propósitos de referencia solamente
