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Tecnica de Elucion Por Calor

Este documento describe un procedimiento para detectar subgrupos débiles de los grupos sanguíneos A y B. Se explican los materiales necesarios como antisueros anti-A y anti-B, glóbulos rojos de diferentes grupos sanguíneos, y soluciones salinas. El procedimiento involucra la adsorción de anticuerpos a los glóbulos rojos mediante incubación, lavados repetidos, y elución de los anticuerpos usando albúmina bovina. La detección de reacciones entre el eluato y glóbulos

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Jobita Yaritza López Pineda
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Tecnica de Elucion Por Calor

Este documento describe un procedimiento para detectar subgrupos débiles de los grupos sanguíneos A y B. Se explican los materiales necesarios como antisueros anti-A y anti-B, glóbulos rojos de diferentes grupos sanguíneos, y soluciones salinas. El procedimiento involucra la adsorción de anticuerpos a los glóbulos rojos mediante incubación, lavados repetidos, y elución de los anticuerpos usando albúmina bovina. La detección de reacciones entre el eluato y glóbulos

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Principio y aplicación

Aunque algunos eritrocitos con subgrupos débiles de A o B no aglutinan en las pruebas

Convencionales para grupo ABO, pueden adsorber y eluir el correspondiente anticuerpo.

Reactivos, materiales y equipamiento

1. Antisuero comercial (anti-A o anti-B)

2. 1-2 ml de GR a estudiar

3. GR reactivos de grupos A1, A2, B y O

4. Albúmina sérica bovina (ASB) al 6%

5. Suero Antiglobulina humana (AGH)

6. Solución salina

7. Pipetas

8. Tubos de ensayo

9. Centrífuga apropiadamente calibrada

10. Incubadora/baño térmico

11. Heladera/baño de hielo

Procedimiento
1. Lavar los GR a estudiar 3 veces con salina.

2. Concentrar los GR a estudiar por centrifugación a 1000 RPM durante 10 minutos y remover todo el sobrenadante.

3. Diluir el antisuero comercial (anti-A o anti-B) al 1:2 con salina.

4. En un tubo, mezclar volúmenes iguales de GR a estudiar con el anti-suero diluido.

5. Incubar a temperatura ambiente o a 4 °C por 30 minutos.

6. Concentrar los GR en estudio y descartar el antisuero. Lavar los GR 4-6 veces con salina.

7. Trasladar a un nuevo tubo y lavar 3 veces más con salina. Guardar el último lavado.

8. Concentrar los GR en estudio.

9. Agregarles un volumen igual de ASB al 6% a los GR lavados y compactados.

10. Mezclar bien e incubar a 56 °C durante 10 minutos –agitando frecuentemente.

11. Centrifugar durante 5 minutos. Recoger el sobrenadante teñido de hemoglobina (eluato).


12. Estudiar el eluato y el sobrenadante del último lavado con 3 testigos conocidos, como mínimo, de GR del
correspondiente grupo ABO (A1, A2, y/o B) y con GR de grupo O para control. Estudiar a temperatura ambiente, a 37 °C y
finalizar en prueba antiglobulínica (PAG).

Interpretación
Negativo: Si las células no tienen suficientes antígenos A, B o ambos, el eluato no reaccionará con las células A y/o B.

Positivo: Si las células estudiadas tienen suficiente expresión antigénica de A, de B o de ambos, el eluato puede reaccionar
con las células testigo A y/o B.

Inválido: cuando las células de grupo O reaccionan con el eluato.

Notas
1. Si el sobrenadante del último lavado reacciona con los GR en estudio en el paso 12, se invalidan los resultados de la
prueba. El procedimiento de adsorción y elución se debe repetir con lavados adicionales.

2. Algunos subgrupos muy débiles sólo pueden ser detectados a través de la adsorción con anti-A, B.

Referencias
1. Landsteiner K, Miller CP. Serological studies on the blood of primates. II. The blood groups inanthropoid apes. J Exp
Med 1925;42:853.

2. Schwedfeger D, Heal J. A novel weak subgroup of A (abstract) Transfusion 1989;29:14S.

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