PERSONAL INVESTIGADOR
GUEVARA ROSALES Estefani161.0605.514)
LOLI GÓMEZ Stuwart (171.0606.061)
VELÁSQUEZ OCROSPOMA Jean (171.0606.025)
MARCO TEORICO
1. AGAR SABOURAUD
El agar Sabouraud es un medio de cultivo que por sus características funciona como
medio de enriquecimiento para hongos y que, en caso de contener cloranfenicol u otro
antibiótico, se convierte en un medio selectivo para los mismos. El medio contiene
peptonas y una elevada concentración de glucosa que favorece el crecimiento de los
hongos sobre las bacterias. Es utilizado para el cultivo de hongos, especialmente
dermatofitos, aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias
filamentosas tales como Nocardia.[ CITATION Gil18 \l 3082 ]
Fue utilizado por primera vez por Raymond Sabouraud en 1870. Más tarde Chester W.
Emmons mejoró el medio acercando el pH al neutro (pH entre 5,5 y 6,0) y
disminuyendo el nivel de glucosa para permitir el crecimiento de otros sub-cultivos de
hongos.
FUNDAMENTO
El agar dextrosa Sabouraud es un medio que en su formulación original es débilmente
selectivo, debido a su pH ácido de 5.6 ± 0.2, sin embargo, aun así las bacterias pueden
desarrollarse, principalmente en incubaciones prolongadas. El medio contiene peptona
de caseína y digerido pancreático de tejido animal, que proporcionan la fuente de
carbono y nitrógeno para el desarrollo de los microorganismos. También contiene alta
concentración de glucosa, que actúa como fuente de energía favoreciendo el crecimiento
de los hongos por encima de las bacterias. Todo ello mezclado con agar-agar,
componente que le brinda la consistencia adecuada. Por otra parte, el agar dextrosa
Sabouraud puede ser selectivo si se le agrega antibióticos. Con antibióticos es
especialmente útil en muestras de heridas, úlceras abiertas o cualquier muestra en la que
se sospeche gran contaminación bacteriana.
COMBINACIONES MÁS UTILIZADAS DE AGAR DEXTROSA SABOURAUD
CON ANTIBIÓTICOS
-Agar Sabouraud con cloranfenicol: ideal para recuperar levaduras y hongos
filamentosos.
-Agar Sabouraud con gentamicina y cloranfenicol: en este medio crecen casi todos los
hongos filamentosos y levaduras, e inhibe una gran cantidad de bacterias, entre ellas
Enterobacterias, Pseudomonas y Staphylococcus.
-Agar Sabouraud con cycloheximide: es especialmente útil para muestras procedentes
de piel o del tracto respiratorio, siempre y cuando la sospecha sea de hongos dimórficos.
El cycloheximide debe usarse con precaución; si bien se usa para inhibir el crecimiento
de hongos y levaduras no patógenas o ambientales que puedan estar presentes como
contaminantes en una muestra, también inhibe el crecimiento de algunos hongos
como Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium
sp y otros hongos oportunistas.
-Agar Sabouraud con cloranfenicol más cycloheximide: se usa principalmente para
aislar dermatofitos y hongos dimórficos. Tiene el inconveniente que inhibe algunas
especies de hongos oportunistas como Candida no albicans, Aspergillus, Zigomicetos o
C. neoformans.
-Agar Sabouraud con cloranfenicol, estreptomicina, penicilina G y cycloheximide: es
ideal para muestras extremadamente contaminadas con bacterias y hongos saprófitos,
pero tiene el inconveniente de que inhibe el crecimiento de Actinomyces y
Nocardias, además de los hongos oportunistas mencionados anteriormente. [ CITATION
Cas94 \l 3082 ]
METODOLOGÍA DE USO DEL AGAR SABOURAUD
Composición típica
40 g/L glucosa
10 g/L pluripeptona
15 g/L agar-agar
0,05 g/L [cloranfenicol]
pH 5.6 ± 0.2
PREPARACIÓN
Se mezclan todos los ingredientes, se ajusta el pH a 5,6. Se procede a disolver los
solutos mediante ebullición, se distribuye 20 ml del medio en tubos de 25 x 150 mm, sin
reborde y con tapa de algodón preferiblemente. También se pueden usar otras medidas
de tubos, según la disponibilidad. Se llevan a la autoclave durante 10 minutos a una
atmósfera de presión (121°C). No se debe exceder en el tiempo de auto-clavado. Al salir
de la autoclave se inclinan los tubos con ayuda de un soporte hasta que solidifiquen en
pico de flauta. Otra forma es disolver los ingredientes por calentamiento hasta que
hierva. En la misma fiola autoclavar durante 10 minutos y posteriormente distribuir 20
ml en placas de Petri. [ CITATION BRI \l 3082 ]
Si se dispone de un medio agar dextrosa Sabouraud que ya contiene todos los
ingredientes, se procede a pesar la cantidad que especifique la casa comercial para un
litro de agua. El resto de los pasos es igual a los descritos anteriormente.
INCUBACIÓN
En condiciones de aerobiosis a 20-25 °C, el tiempo dependerá del hongo y levadura que
se quiera recuperar, como regla general, incubar durante 2 a 7 días, en caso de
investigador dermatofitos será durante 5 a 20 días y examinar el cultivo de 4 a 6 días.
[ CITATION Nav13 \l 3082 ]
2. AGAR ENDO
También llamado medio endo. Es un medio de cultivo diferencial y moderadamente
selectivo para la detección y confirmación de coliformes y otros microorganismos
entéricos de aguas, leche, productos lácteos y otros productos alimenticios. Fue
originalmente desarrollado para el aislamiento de Salmonella typhi, pero ahora es usado
mayormente como un medio para coliformes.
Este medio utiliza fucsina para diferenciar entre bacterias fermentadoras y no
fermentadoras de lactosa.
COMPOSICION
El agar endo contiene (en porcentaje peso/volumen):
Agar bacteriológico 10 g/L
Fosfato dipotasico 3,5 g/L
Sulfato de sodio 2,5 g/L
Peptona bacteriológica 10 g/L
Lactosa 10 g/L
PREPARACION
Suspender 36 gramos de medio en un litro de agua destilada. Agregar 5 ml de una
solución alcohólica al 10% (p/v) de base fucsina en alcohol etílico al 95%. Mezclar bien
y disolver calentando con agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver
por completo. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC,
mezclar bien y dispensar en placas.
INSTRUCCIONES DE USO
Para diagnóstico clínico, el tipo de muestra es bacterias aisladas de cualquier muestra
clínica.
Inocular en superficie. Estrías paralelas con el asa o hisopo.
Incubar las placas protegidas de la luz, a 35±2 ºC durante 18-24 horas. Si tras 24
horas da negativo, volver a incubar durante 24 horas adicionales.
Para confirmar la presencia de posibles coliformes, inocular los tubos con la Base de
Agar Endo e incubar a 35±2 ºC durante 18-24 horas. Examinar para determinar la
producción de ácido y gas.
Lectura e interpretación de los resultados.
Los fermentadores rápidos de lactosa producen colonias rojas con un brillo metálico.
Los fermentadores lentos de lactosa producen colonias rojas. Los no fermentadores de
lactosa producen colonias incoloras.
CONTROL DE CALIDAD
COLOR DEL COLOR DEL FINAL
SOLUBILIDAD APARIENCIA MEDIO MEDIO pH
DESHIDRATADO PREPARADO (25º C)
Ámbar con tono
Sin restos Polvo fino Beige 7,5±0,2
rosa
ALMACENAMIENTO
Temperatura Mínima: 2 ºC
Temperatura Máxima: 25 ºC
3. AGAR PARA RECUENTO ESTÁNDAR
Para el recuento total de placas microbianas en leche, productos lácteos, aguas de
consumo y aguas residuales.
INFORMACIÓN PRÁCTICA
Aplicaciones: Recuento selectivo
Categorías: Aerobios mesófilos
Industria: Aguas de consumo / Monitorización ambiental / Productos lácteos
PRINCIPIOS Y USOS
Agar para Recuento Estándar se recomienda para enumerar las bacterias aeróbicas en
leche, productos lácteos, agua potable y aguas residuales. Es especialmente adecuado
para preparar medios de cultivo especiales que necesitan ser ricos en nutrientes.
La caseína y peptona de carne proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y
aminoácidos esenciales para el crecimiento. El cloruro de sodio suministra electrolitos
esenciales para el transporte y el equilibrio osmótico. El agar bacteriológico es el agente
solidificante.
FÓRMULA EN g/L
Sustancia Cantidad en g/L
Agar bacteriológico 12
Peptona de carne 3
Peptona de caseína 5
Cloruro sódico 5
PREPARACIÓN
Suspender 25 gramos de medio en 1 litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
calentando con agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta la disolver por
completo. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121 ºC
durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC, mezclar bien y distribuir en placas.
INSTRUCCIONES DE USO
Inocular las placas mediante las técnicas de siembra en superficie o siembra en
profundidad.
Incubar a una temperatura de 35±2 °C durante 18–24 horas.
Contar las colonias desarrolladas.
TEST MICROBIOLÓGICO
Condiciones de incubación: (35±2 ºC / 18-24 h)
Microorganismos Especificación
Bacillus cereus ATCC 11778 Buen crecimiento
Escherichia coli ATCC 25922 Buen crecimiento
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Buen crecimiento
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Buen crecimiento
ALMACENAMIENTO
Temp. Min.:2 ºC
Temp. Max.:25 ºC
BIBLIOGRAFÍA
Downes F. P. and Ito K., (Eds.), 2001, Compendium of Methods for the
Microbiological Examination of Foods, 4th Ed., APHA, Washington, D.C. Standard
Methods for the Examination of Dairy Products, 13th Ed. APHA, 1972. American
Public Health Association.
BRITANIA. (s.f.). Sabouraud Glucosado Agar.
Casas Rincón, G. (1994). Micología General. Caracas - venezuela: Editorial
Universidad Central de Venezuela.
Gil, M. (23 de Febrero de 2018). Lifeder.com. Obtenido de Lifeder.com:
https://www.lifeder.com/agar-sabouraud/
Navarro, O. (2013). Micología veterinaria. Nicaragua: Editorial Universidad Nacional
Agraria de Nicaragua.
