MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

FACULTAD MEXICANA DE MEDICINA

UNIVERSIDAD LA SALLE

Profesora: Dra. Martha Patricia Sierra Vargas

Aux. Bioq.: QFB. Ana Laura García

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Grupo: 203 Sección: Mesa:

Integrantes:

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Semestre 2020-1

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ÍNDICE

TEMA PÁGINA

Portada 1

Índice 3

Introducción 4

Objetivo 5

Reglamento del Laboratorio de Bioquímica 6

Medidas de seguridad químico-biológicas 8

Calendario de prácticas 9

Evaluación del laboratorio 10

Bibliografía 11

Principios de Seguridad Químico-Biológica en el Laboratorio 12

Toma de muestra de sangre y centrifugación 14

Equilibrio ácido-base y cinética enzimática 19

Metabolismo de carbohidratos y espectrofotometría 23

Metabolismo de lípidos 27

Metabolismo de proteínas 32

Pruebas de función renal 37

Pruebas de función hepática 41

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INTRODUCCIÓN

La bioquímica estudia la base molecular de la vida y por lo tanto los procesos metabólicos
de los seres vivos.
La bioquímica clínica desempeña un papel fundamental en el seguimiento del estado clínico
del paciente, y es través de los estudios de laboratorio que el médico puede inferir si un
órgano presenta alteraciones en su funcionamiento y de esta manera hacer un diagnóstico
preciso. Para poder interpretar los estudios de laboratorio es necesario el estudio y la
integración de las diferentes vías metabólicas y relacionarlas con los cambios
fisiopatológicos, o los inducidos por la implementación de maniobras terapéuticas necesarias
para el tratamiento de enfermedades. Para esto, la Bioquímica Clínica aplica los métodos,
las técnicas y los procedimientos de la química analítica y la estadística, basados en el
método científico con el propósito de obtener e interpretar la información obtenida para
prevenir, establecer un diagnóstico precoz, hacer un pronóstico, seguir la evolución de la
enfermedad y evaluar la respuesta al tratamiento.

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OBJETIVO

Proporcionar al alumno los conocimientos básicos de las pruebas más utilizadas en un

laboratorio de análisis clínico. Brindarle las herramientas prácticas con las cuales será capaz
de integrar los diferentes procesos metabólicos aprendidos en la clase teórica y relacionar
los hallazgos de los análisis de laboratorio con las patologías más frecuentes en nuestro
medio. Por otra parte, también intenta introducir al alumno en la relación médico-paciente
mediante la explicación de los resultados de los análisis clínicos y la emisión de
recomendaciones higiénico dietéticas.

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 REGLAMENTO

1. El alumno no puede entrar y salir a voluntad del laboratorio.

2. Debe esperar fuera del laboratorio hasta que el profesor(a) llegue. Deben presentarse
con un máximo de 15 minutos de retardo, después de esa hora no podrá entrar y la
puerta permanecerá cerrada.
3. Al inicio del semestre el profesor integrará los equipos y les asignará una mesa de
trabajo.
4. NO HABRÁ TOLERANCIA PARA LA ENTREGA DEL REPORTE DE LA PRÁCTICA
5. Presentarse con el material y uniforme completo:
- Portar bata de algodón con manga larga, debe estar CERRADA
- El uso de guantes de látex o de nitrilo en caso de alergia
- Lentes de protección
- El cabello debe estar recogido.
7. Seguir las instrucciones del profesor titular y/o del asistente de laboratorio para el
desarrollo de la práctica
8. No efectuar experimentos que no se hayan indicado.
9. Manipular el material y los reactivos de acuerdo a los lineamientos de seguridad
químico-biológica.
10. Si accidentalmente cae sobre la piel o la ropa algún tipo de reactivo, lavarse
inmediatamente con agua en abundancia e informar al profesor titular o al asistente
de laboratorio.
11. Si se derrama algún tipo de reactivo sobre la mesa, se debe informar al profesor
titular o asistente de laboratorio.
12. No jugar ni hacer bromas.
13. Al inicio de la práctica se debe llenar y firmar el vale de solicitud de material y
proceder a su revisión por el representante de cada mesa.
14. En el área de trabajo solo debe haber el manual de laboratorio. NO debe haber,
libros, cuadernos, estuches, computadoras ni mochilas u otro material que pueda
obstruir el movimiento y/o la manipulación del material de laboratorio.
15. El material se debe entregar limpio antes de terminar la sesión de laboratorio.

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16. Ningún alumno podrá retirarse del laboratorio hasta que se haya cancelado el vale del
material solicitado para la práctica y haber revisado que las mesas y su lugar de
trabajo estén limpios.
17. La salida será en orden y será hasta que el profesor titular del laboratorio lo indique.
18. En caso de daño o rotura de material, se debe de llenar y firmar el vale respectivo por
la persona que haya causado el daño, comprometiéndose a reponerlo en especie a la
brevedad posible.
19. Los alumnos supervisados por el profesor y/o asistente de laboratorio, son
responsables de la separación, envase y depósito en el área temporal del Laboratorio
de los RPBI y CRETI.
20. En caso de que alguna práctica sea suspendida porque el alumno no cuente con el
material necesario para desarrollar la práctica, ésta se dará por vista y NO habrá
reposición.
21. NO está permitido cambiar de sección sin previa autorización del profesor titular.
22. Si por causas de fuerza mayor el alumno no puede asistir a la práctica, éste deberá
justificar su inasistencia ante el profesor titular para obtener el derecho de reposición.
23. El alumno que no cumpla total o parcialmente el reglamento o ponga en riesgo la
seguridad de sus compañeros, será expulsado de la clase. En caso de reincidir será
expulsado de manera definitiva del laboratorio, por lo que automáticamente reprobará
la materia.
24. NO SE PERMITIRÁN FALTAS DE RESPETO

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MEDIDAS DE SEGURIDAD QUIMICO-BIOLÓGICAS

1. Al entrar al laboratorio, los estudiantes deberán portar la bata de laboratorio.

2. Colocar sus mochilas o útiles en el área ubicada debajo de la mesa de trabajo.
3. Deben tener en su mesa de trabajo exclusivamente el material requerido para la
realización de la práctica.
4. Los alumnos que tengan pelo largo deben mantenerlo recogido para evitar accidentes
durante el desarrollo de la práctica.
5. No hacer uso de cosméticos en el laboratorio.
6. Deberán lavarse las manos antes de iniciar y al finalizar cada práctica.
7. Es obligatorio usar guantes de protección (látex, nitrilo) y lentes de seguridad para el
desarrollo de las prácticas de laboratorio.
8. Los fluidos biológicos (coágulos de sangre, el suero, el plasma), deben ser
inactivados con una solución de cloro al 10% durante 20 minutos antes de ser
vertidos en la tarja. Las muestras de orina deberán depositarse en el excusado.
9. Las agujas deben ser colocadas SIN CAPUCHÓN en el recipiente rígido rojo de RPBI
que se encuentra en el área de almacén temporal de residuos.
10. Los algodones, jeringas SIN aguja, guantes, papel absorbente y los aplicadores de
madera contaminados con fluidos biológicos deben ser depositados en la bolsa roja
de RPBI ubicada en el área de almacén temporal de residuos.
11. Para dispensar los reactivos, se deben utilizar las propipetas proporcionados por el
(la) asistente de laboratorio.
12. Los residuos químicos deberán depositarse en los contenedores ubicados en el área
de almacén temporal de acuerdo a las indicaciones del profesor y/o asistente de
laboratorio.
13. Las mesas deben limpiarse al final de la práctica con solución de cloro al 10%.
14. En caso de cualquier accidente personal o de material de trabajo debe notificarse
inmediatamente al profesor y/o asistente de laboratorio verbalmente.
15. En caso de accidente, se proporcionarán los primeros auxilios y de ser necesario, se
referirá al afectado al centro hospitalario más cercano.
16. Las autoridades escolares deberán notificar a los familiares del afectado.
17. QUEDA ESTRICTAMENTE PROHIBIDO INGERIR ALIMENTOS Y BEBIDAS
DENTRO DEL LABORATORIO.
18. Cuando sea necesario el ayuno, el estudiante dispondrá de 30 minutos para ingerir
sus alimentos y regresar al laboratorio. Pasado este tiempo el alumno no podrá
reingresar al laboratorio y concluir la práctica.

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CALENDARIO DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE BIOQUIMICA

GRUPO 203
Profesor: Dra. Martha Patricia Sierra Vargas

PRÁCTICA FECHA

1. SEGURIDAD QUÍMICO-BIOLÓGICA Y TODO EL GRUPO

NORMATIVIDAD EN EL LABORATORIO 29 ENERO 2020

2. TOMA DE MUESTRAS Y SECCIÓN A: 05 FEBRERO 2020

CENTRIFUGACIÓN SECCIÓN B: 12 FEBRERO 2020

3. EQUILIBRIO ÁCIDO – BASE Y SECCIÓN A: 19 FEBRERO 2020

CINÉTICA DE REACCIÓN SECCIÓN B: 26 FEBRERO 2020

4. METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS SECCIÓN A: 11 MARZO 2020

Y ESPECTROFOTOMETRÍA SECCIÓN B: 18 MARZO 2020

SECCIÓN A: 25 MARZO 2020

5. METABOLISMO DE LÍPIDOS
SECCIÓN B: 01 ABRIL 2020

SECCIÓN A: 22 ABRIL 2020

6. METABOLISMO DE PROTEÍNAS
SECCIÓN B: 29 ABRIL 2020

SECCIÓN A: 06 MAYO 2020

7. PRUEBAS DE LA FUNCIÓN RENAL
SECCIÓN B: 13 MAYO 2020

SECCIÓN A: 20 MAYO 2020

8. PRUEBAS DE LA FUNCIÓN HEPÁTICA
SECCIÓN B: 27 MAYO 2020

LA ENTREGA DE CALIFICACIONES SE REALIZARÁ CONJUNTAMENTE CON LAS

DE TEORIA

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Evaluación del laboratorio

1. Para la calificación final del laboratorio se tomará en cuenta: material requerido para
desarrollar la práctica (10%), marco teórico (20%), examen (60%), trabajo de
laboratorio (10%).
2. La calificación mínima para acreditar es de 6.00, tomando en consideración dos
decimales SIN redondeo. Las calificaciones con decimales iguales o mayores a 0.60
suben al número entero inmediato superior. TODA CALIFICACIÓN MENOR O IGUAL
A 5.99 ES REPROBATORIA.
3. LAS FALTAS INJUSTIFICADAS NO TIENEN DERECHO A REPOSICIÓN DE LAS
PRÁCTICAS DE LABORATORIO, EN ESTE CASO EL ALUMNO SÓLO CONTARÁ
CON LA PARTE PROPORCIONAL CORRESPONDIENTE SEÑALADA EN LA HOJA
DE RÚBRICAS, DEPENDIENDO DEL DESEMPEÑO DEL MARCO TEÓRICO. LOS
CAMBIOS DE SECCIÓN QUEDARÁN A CONSIDERACIÓN DEL PROFESOR.
4. Cada equipo deberá contar con un manual de prácticas impreso. En caso contrario no
podrá ingresar al laboratorio.
5. Deberá leer previamente la práctica correspondiente y realizar una investigación
preliminar por equipo antes de cada práctica para reforzar los conocimientos o
conceptos que requiera para el desarrollo de la misma.
6. Antes de la práctica se evaluará a los alumnos mediante un examen escrito,
sobre el tema de la práctica que corresponda. Al azar, los alumnos explicarán el
procedimiento de la práctica y una breve introducción de la misma.
7. Al inicio de la práctica se darán indicaciones sobre las posibles modificaciones del
método que se utilizará, dependiendo de la clase de reactivos con que se disponga al
momento del desarrollo de la misma (depende del laboratorio de fabricación).
8. Para la evaluación de la práctica los equipos deberán entregar el viernes posterior a
la realización de la misma, a más tardar a las 18:00 hrs. vía correo electrónico a la
siguiente dirección: patsy8860@[Link] el reporte. En el espacio de “asunto”
colocar el mismo nombre del archivo.

9. EL ARCHIVO DEBERÁ CONTENER NÚMERO DE LA PRÁCTICA, SECCIÓN DE

LABORATORIO Y MESA DEL EQUIPO. DE NO CUMPLIR CON ESTE REQUISITO,
LA PRÁCTICA NO SERÁ EVALUADA. Ej. p1A3 (práctica 1, sección A, mesa 3)

10. El formato de las prácticas será siguiendo la “V” de Gowin. Consultar el archivo
proporcionado por el profesor del curso.

11. NOTA: LA APROBACIÓN DEL LABORATORIO ES OBLIGATORIA PARA PASAR

LA MATERIA.

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BIBLIOGRAFÍA:

Principios de Bioquímica Clínica y Patología Molecular. Álvaro González Hernández, Edit.

Elsevier, 2010

Química Clínica. Principios procedimientos y correlaciones. Michael L. Bishop. 5° edición.

Edit. McGraw Hill, 2007.

Fundamentos de Interpretación Clínica de los Exámenes de Laboratorio. G. Ruiz Reyes, A.

Ruiz Argüelles. 2° edición. Edit. Panamericana. 2010.

Interpretación Clínica de Pruebas Diagnósticas. Jacques Wallach. 8° edición. Edit. Lippincott

Williams & Wilkins. 2008.

Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. Carl A. Burtis, Edward R.
Ashwood, David E. Bruns. Edit. Elsevier, 2012

11
PRÁCTICA No. 1
PRINCIPIOS DE SEGURIDAD QUIMICO-BIOLÓGICA EN EL LABORATORIO

Introducción
Se consideran materiales peligrosos a los elementos, sustancias, compuestos, residuos o
mezcla de ellos que, independientemente de su estado físico, representen un riesgo para el
ambiente, la salud o los recursos naturales, por sus características corrosivas, reactivas,
explosivas, tóxicas, inflamables o biológico infecciosas. La norma para el manejo de
Residuos Peligrosos Biológico-Infecciosos (RPBI), fue publicada en 1995 en el diario oficial
de la federación. El principal objetivo de esta norma, fue el de proteger al personal de salud
de los riesgos relacionados con el manejo de estos residuos, así como proteger el medio
ambiente y a la población que pudiera estar en contacto con estos residuos dentro y fuera de
las instituciones de atención médica. Esta norma sufre modificaciones en 2002, relativas a la
clasificación y se publica la NOM-087-ECOL-SSA1-2002, actualmente vigente, de
observancia obligatoria en todas las instituciones generadoras de RPBI. Esta Norma
sustituye a la NOM-087-ECOL-1995.
Con respecto a los residuos químicos, la Norma Oficial NOM-053-SEMARNAT-1993,
establece el procedimiento para llevar a cabo la prueba de extracción para determinar los
constituyentes que hacen a un residuo peligroso por su toxicidad al ambiente. Mientras que
la NOM-052-SEMARNAT-2005, establece las características, el procedimiento de
identificación, clasificación y los listados de los residuos peligrosos.

Objetivo: Introducir al alumno en el marco legal de la seguridad, manejo y disposición

temporal de los Residuos Peligrosos Biológico Infecciosos, así como de los Corrosivos,
Reactivos, Explosivos, Tóxicos e Inflamables

Para esta práctica, el alumno deberá leer la normatividad vigente en materia de

manejo de RPBI y CRETI. Investigar:
¿Qué es un residuo?
¿Cuáles son los criterios que hacen a un residuo peligroso?
¿Quién es responsable del manejo y disposición final de los Residuos Peligrosos?
¿Qué características deben cumplir los envases para residuos peligrosos?
¿Cuál es la diferencia entre sustancia tóxica y un residuo?
¿Qué significan los siguientes pictogramas?. De una breve descripción de sus
principales características y tres ejemplos de cada uno de ellos. Los ejemplos deben
ser de acuerdo a las sustancias que se utilicen en el laboratorio. Deberán buscar la
ficha de identificación de los productos químicos.
¿Qué es el sistema globalmente armonizado?

12
¿Cuál es el sistema para identificación de riesgos?. Explique el logotipo y tres
ejemplos
¿Qué precauciones se deben tomar para el almacenaje de las sustancias peligrosas?
¿Qué es el número CAS?

13
PRÁCTICA No. 2
TOMA DE MUESTRA DE SANGRE Y CENTRIFUGACIÓN

Para construir el marco teórico será necesario investigar los siguientes temas:
1. Sangre: funciones, principales características, componentes celulares,
hemoglobina.
2. ¿Qué es el “buffy coat”?
3. ¿Qué es pellet?
4. Diferencia entre suero y plasma
5. ¿Cómo se obtiene una muestra de suero y una de plasma?
6. Técnicas para la toma de muestra sanguínea en pacientes
7. Sitios de punción más frecuentemente utilizados y que tipo de muestra se
obtienen de ellos.
8. Complicaciones de la toma de muestra y tratamiento
9. ¿Qué es una solución isotónica?
10. Buscar ejemplos de soluciones utilizadas en la práctica clínica (solución
isotónica de NaCl, suero glucosado al 5%, Ringer, Darrow y Hartman) su
composición y aplicación.
11. ¿Qué es un colorante vital? Mencione al menos 5 ejemplos.
12. Tipos y propiedades QUÍMICAS de anticoagulantes (EDTA, citrato de sodio,
heparina, ACD, etc.) comúnmente utilizados para análisis clínicos
13. Buscar el código de colores de tubos para toma de muestra, mencionar el tipo
de anticoagulante que contiene y para qué tipo de análisis se utiliza.
14. Tipo anticoagulante requerido para los análisis clínicos más comúnmente
realizados (BH, QS, Perfil de lípidos, Pruebas de coagulación.
15. Cómo se obtiene plasma y suero sanguíneo
16. Principios de la centrífuga (fuerza centrífuga y centrípeta) y precauciones para
el centrifugado

LOS ALUMNOS DEBERÁN TRAER SU MATERIAL COMPLETO:

BATA, GUANTES, LENTES, ETC.

INSERTOS Y FICHAS DE SEGURIDAD

Heparina
Citrato de sodio
Azul de metileno
NaCl
Solución Salina Isotónica

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I TOMA DE MUESTRAS DE SANGRE

OBJETIVOS.
1. Aprender a tomar muestras de sangre periférica con jeringa.
2. Determinar la importancia de trabajar en condiciones isotónicas.

Material Sustancias

3 Vaso de precipitado de 25 ml Solución Salina Isotónica

4 o 5 Jeringas de 3 o 5 mL NaCl
2 Ligaduras Azul de Metileno
1 frasco con torundas Agua bidestilada
4 Tubos cónicos para centrífuga Solución de HCl al 10 %
1 Micropipeta de 10-100 µl Anticoagulante (Heparina)
1 Micropipeta de 1000 µl
2 matraces aforados de 25 ml
1 matraz aforado de 50 ml
1 pipeta 10 ml
3 tubos eppendorf de 1 ml
Portaobjetos y cubreobjetos
1 gradilla

Para esta práctica es necesario que los alumnos trabajen en pares. Obteniéndose por
equipo 4 muestras.

Procedimiento:
1. Los alumnos explicarán el procedimiento para la toma de muestra de sangre
periférica y el profesor hará las modificaciones pertinentes
2. Uno de los alumnos deberá colocarse detrás del compañero que servirá como
donador de muestra de sangre. Dicho compañero no podrá retirarse hasta verificar
que el paciente no tuvo alguna reacción negativa debido a la toma de muestra.
3. Al terminar la toma de muestra, el alumno deberá retirar la aguja de la jeringa
siguiendo los lineamientos de protección contra riesgos químico-biológicos.
4. Tres de las muestras serán depositadas en tubos con anticoagulante y deberán
agitarse una vez que se obtenga la sangre para evitar que ésta se coagule.
5. La otra muestra será vertida lentamente en un tubo cónico, procurando que la sangre
se deslice por las paredes del tubo para evitar la lisis de los componentes celulares
sanguíneos.

15
 6. Las cuatro muestras sanguíneas serán centrifugadas durante 15 min a una velocidad
de 80 (Speed 80). Deberán tener la precaución de equilibrar adecuadamente los
tubos antes de utilizar la centrífuga.
Nota: Para balancear la centrífuga deben colocar los tubos en paralelo (uno frente a
otro, con el mismo número de camisas vacías de un lado y del otro) y ambos tubos
deben pesar aproximadamente lo mismo o en caso de no poder pesar deben tener el
mismo volumen de muestra o agua.
7. Una vez centrifugadas las muestras de acuerdo a las características de las mismas y
el material empleado para la toma el alumno deberá determinar en qué casos separó
suero o plasma.
8. De aquellas muestras de las que obtuvo plasma, deberán tomar 500 μl de la mezcla
de eritrocitos y pasarlo a otro tubo cónico con 3 ml de solución salina isotónica.
Mezclar suavemente con la micropipeta.
9. En otro tubo cónico adicionar otros 500 μl de la mezcla de eritrocitos y pasarlo a otro
tubo cónico con 3 ml de solución salina hipotónica. Mezclar suavemente con la
micropipeta.
10. En un tercer tubo cónico adicionar 500 μl más de la mezcla de eritrocitos y adicionar 3
ml de solución salina hipertónica. Mezclar suavemente con la micropipeta.
11. Para valorar el efecto que sufren las células cuando se ponen en contacto con las
diferentes soluciones se deberá colocar en un porta-objetos 15 µl de cada una de las
mezclas por separado, colocar un cubre-objetos y observarlas al microscopio, para
evaluar el efecto celular presente.

II. SOLUCIONES ISOTÓNICAS.

1. En un matraz aforado, preparar 25 ml de una solución de NaCl al 4.5% (etiquetar).
2. A partir de la solución anterior, en otro matraz aforado preparar 25 ml de una solución de
NaCl al 0.9% (etiquetar) y en otro matraz aforado más, preparar 50 ml de NaCl al 0.045%
(etiquetar).
Leer las instrucciones para el uso del microscopio (ANEXO 1)

16
 ANEXO 1
PRÁCTICA No. 2

1. Nunca use un adaptador entre el cable y la fuente de alimentación.

2. Use siempre el microscopio sobre una superficie dura y estable.
3. Conecte el cable de alimentación del microscopio a una toma de corriente con conexión a
tierra.
4. Encienda el microscopio girando el interruptor de control de la iluminación situado en la
parte inferior izquierda del instrumento.
5. Coloque el interruptor de control de la iluminación en el nivel más bajo. El control de
iluminación le permite ajustar la intensidad de luz.
6. Abra completamente el diafragma de apertura del condensador girando el anillo hacia el
extremo derecho.
7. Usando el botón de enfoque del condensador, suba el condensador hasta el extremo
superior de su desplazamiento. Iluminación critica únicamente: si el desplazamiento del
condensador es excesivo, limítelo con el tornillo situado debajo de la platina hasta que la
lente superior del condensador se encuentre debajo de la superficie de la platina.
8. Coloque la preparación de la muestra con la muestra en la platina.
9. Gire el revólver hasta situar el objetivo 40X en la posición de trabajo
10. Suba la platina girando el mando de enfoque macrométrico hasta que observe la
preparación y, finalmente, enfoque la muestra con precisión utilizando el mando de enfoque
micrométrico.
11. Ajuste los tubos oculares a la distancia de los ojos.
12. Al término del uso del microscopio retirar la muestra de la platina.
13. Bajar la platina hasta el tope y regresarla a su posición original si es necesario.
15. Desconectar el equipo y enrollar el cable.
16. Limpiar la platina y oculares con un paño humedecido con metanol o con un limpia cristal
comercial.
17. Colocar al microscopio la funda contra el polvo para mantenerlo en buenas condiciones
físicas y mecánicas.

17
Partes del microscopio:
1) Oculares.
2) Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.
3) Platina.
4) Diafragma.
5) Lámpara.
6) Tornillo de la platina para desplazar la muestra.
7) Interruptor de control de la iluminación.
8) Tornillo macrométrico.
9) Tornillo micrométrico.

18
PRÁCTICA No. 3
EQUILIBRIO ÁCIDO – BASE Y CINETICA ENZIMÁTICA

Para construir el marco teórico será necesario investigar los siguientes temas:
1. Definición ácido/base (Arrhenius, Bronsted-Lowry, Lewis)
2. Clasificación de ácidos y bases
3. Definición y cómo se calculan pH, pOH, pKa, pKb, Keq.
4. Indicadores de pH
5. Qué es un potenciómetro y cómo funciona
6. Definición y cálculos para realizar una solución buffer (ecuación Henderson-
Hasselbach)
7. ¿Qué es la titulación?
8. ¿Por qué es importante que se mantenga constante el pH en el organismo?
9. ¿Cuáles son las fuentes de iones H+ en el organismo?
10. ¿Cuáles son los sistemas reguladores que facilitan la eliminación del H +
producido en el organismo con el fin de mantener constante el pH sanguíneo?
11. ¿Cuáles son las reacciones de formación del ácido carbónico (H 2CO3) a partir
de CO2 y H2O, y de su disociación para formar el ion bicarbonato? Escríbalas.
12. ¿Qué sistemas amortiguadores participan directamente en la regulación del pH
sanguíneo?
13. ¿Cuáles son los sistemas extrasanguíneos que tienden a mantener el pH
extracelular?
14. Escriba la ecuación de Henderson y Hasselbalch aplicada al sistema HCO3 -
/H2CO3 y, con base en ella, conteste la siguiente pregunta: ¿Cómo participan el
aparato respiratorio y el riñón en el control del pH sanguíneo?

LOS ALUMNOS DEBERÁN TRAER ADEMÁS DE SU MATERIAL OBLIGATORIO 2

BOTELLAS CON AGUA (1.5 L cada una)

INSERTOS Y FICHAS DE SEGURIDAD

Bicarbonato de sodio, NaHCO3
Metabisulfito de sodio
Yodato de potasio
Almidón soluble
Ácido sulfúrico

OBJETIVOS
I. Determinar las actividades reguladoras del pulmón y el riñón para mantener el
equilibrio ácido-base en condiciones que tienden a romperlo.
II. Evaluar la modificación del pH en orina producto de la realización de ejercicio
muscular intenso y la ingesta de NaHCO3.

19
III. Relacionar las modificaciones de pH con cambios metabólicos originados por el
ejercicio muscular intenso.
IV. Determinar el papel del riñón en el mantenimiento del equilibrio ácido-base en una
situación de alcalosis metabólica provocada por la ingestión de NaHCO3.

Material Sustancias
2 vasos de precipitados de 250 ml
1 vaso de precipitados de 100 ml Bicarbonato de sodio (NaHCO3)
1 piseta con agua Agua bidestilada
1 potenciómetro Orina

I REGULACIÓN DEL EQUILIBRIO ÁCIDO-BASE DESPUÉS DEL EJERCICIO

MUSCULAR INTENSO

Procedimiento

1. Un alumno por equipo desayunará o comerá normalmente (evitar ingestión de jugos

ácidos); después hará lo que se indica a continuación.
2. Tomar 600 mL de agua una hora antes de la clase práctica.
3. Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
4. Tomar 600 mL de agua inmediatamente antes de la clase práctica.
5. Orinar en un vaso de precipitado de 100 ml.
6. Medir el pH de la orina basal y desechar la orina en el baño.
7. Ingerir 250 mL de agua.
8. Realizar ejercicio muscular intenso, como subir y bajar varias veces las escaleras de tres
o cuatro pisos u otro ejercicio sugerido por el profesor.
9. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, como en el inciso 5, hasta completar por lo
menos cinco muestras.
10. A cada muestra se le determinará el pH inmediatamente después de haber sido
obtenida.
11. Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las 5 muestras de orina, trazar una
gráfica de pH contra tiempo; interpretar los resultados y discutirlos en grupo qué
mecanismos están promoviendo los cambios de pH observados.

20
II REGULACIÓN DEL EQUILIBRIO ÁCIDO-BASE DESPUÉS DE LA INGESTIÓN DE
NaHCO3

Procedimiento

1. Un alumno por equipo desayunará o comerá normalmente (evitar ingestión de jugos

ácidos); después hará lo que se indica a continuación.
2. Tomar 600 mL de agua una hora antes de la clase práctica.
3. Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
4. Tomar 600 mL de agua inmediatamente antes de la clase práctica.
5. Orinar en un vaso de precipitado de 100 ml.
6. Medir el pH de la orina basal y desechar la orina en el baño.
7. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de NaHCO3.
8. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta completar por lo menos 5 muestras.
9. A cada muestra se le determinará el pH inmediatamente después de haber sido
obtenida.
10. Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las cinco muestras de orina, trazar
una gráfica de pH contra tiempo; interpretar los resultados y discutirlos en grupo

III CINÉTICA ENZIMÁTICA

Objetivo
Identificar experimentalmente el efecto que produce la concentración de un reactivo en la
velocidad de reacción.

Material Sustancias

1 vaso de precipitado de 250 mL Solución saturada de Yodato de potasio

1 vaso de precipitado de 50 mL (KIO3).
1 probeta de 250 mL Solución semisaturada de Almidón
1probeta de 25 mL Ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado
1 pipeta de 10 mL Metabisulfito de sodio (Na2S2O5)
1 aspirador de vaciado rápido Solución al 10%.
1 varilla agitadora Agua bidestilada
1 cronómetro

Preparación de la solución A
Mezclar en un vaso de precipitado de 250 mL
- 194mL de agua bidestilada
- 4.5 mL de la solución de almidón
- 1.5 ml de solución de Na2 S 2 O5 y
- 8 gotas de H 2 SO4 concentrado

21
Preparación de la solución B
Mezclar en un vaso de precipitado de 50 mL
- 10 mL de agua bidestilada y
- 3 gotas de solución de KIO3

Procedimiento

1. Con una probeta medir 25 mL de la solución A y adicionarla al vaso de precipitado que

contiene la solución B. Disparar el cronómetro al momento de realizar la mezcla y medir el
tiempo que tarda en producirse el cambio. El profesor indicará cuáles mesas tendrán que
agitar la mezcla y cuáles sólo tendrán que esperar a que se lleve a cabo la reacción.

2. Repetir el procedimiento anterior preparando la solución B con 6, 9, 12, 15, 21, 24 Y 30

gotas de la solución de KIO3 .

NOTA: Los residuos resultantes de la cinetica de reacción, se vierten en el frasco de

desechos tóxicos ácidos.

CALCULOS

22
PRÁCTICA No. 4
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS Y ESPECTROFOTOMETRÍA

Para construir el marco teórico será necesario investiguen los siguientes puntos:
1. Describa brevemente el metabolismo de los carbohidratos
2. ¿Cuáles son los rangos de glucemia considerados como normales?
3. ¿Cuáles son los factores hormonales de regulación de la glucemia?
4. Patologías asociadas a una glucemia anormal
5. ¿Cómo se realiza el diagnóstico de la diabetes mellitus?
6. ¿Cuántos tipos de diabetes se conocen?
7. Describir qué es y cómo debe realizarse la prueba de curva de tolerancia oral a la
glucosa y cómo se interpreta.
8. ¿En qué pacientes está indicada esta prueba?
9. ¿Qué es la hemoglobina glicada, investigar el mecanismo de formación y para qué
nos sirve en la clínica?
10. Describa brevemente el metabolismo de la fructosa
11. ¿Qué impacto tiene el consumo de fructosa sobre el metabolismo?
12. Comente si es aconsejable su ingesta cotidiana tanto en sujetos normales como en
pacientes con diagnóstico de diabetes mellitus.
13. Indicaciones para realizar la CTOG
14. ¿Qué es el síndrome metabólico y cómo se diagnostica?
15. Indicaciones para realizar la CTOG durante el embarazo
16. Valores normales de la CTOG y de la glucemia
17. Principios de espectrofotometría (colorimetría) y partes del espectrofotómetro
18. Espectro de absorción (rayos X, UV, visible, infrarrojo)
19. Buscar el espectro de absorción del azul de metileno
20. Ley de Lambert-Beer (absorbancia, coeficiente de extinción, etc.)
21. Curva patrón (interpolar, extrapolar, regresión lineal)
22. Blanco
23. Patrón
24. Estándar

I CURVA DE TOLERANCIA ORAL A LA GLUCOSA

Para este procedimiento se requieren tres sujetos de experimentación:

 Sujeto 1: debe ingerir una dieta normal que debe contener por lo menos de 150 a 200
g de carbohidratos por día. La noche anterior a la prueba, el paciente debe ingerir una
comida con un contenido razonable de carbohidratos (30-50 g). El día de la prueba
después de medir la muestra basal, ingerirá una carga oral de glucosa, 75 g/300 ml
de agua en un periodo no mayor a 5 minutos.

 Sujeto 2: debe ingerir una dieta normal que debe contener por lo menos de 150 a 200
g de carbohidratos por día, durante 3 días previos a la prueba. La noche anterior a la
prueba, el paciente debe ingerir una comida con un contenido razonable de

23
 carbohidratos (30-50 g). El día de la prueba después de medir la muestra basal,
ingerirá alimento rico en proteínas únicamente, como pollo, pescado, carne de res o
puerco (que ya deberá traer listos para su ingesta).

 Sujeto 3: debe ingerir una dieta normal que debe contener por lo menos de 150 a 200
g de carbohidratos por día, durante 3 días previos a la prueba. La noche anterior a la
prueba, el paciente debe ingerir una comida con un contenido razonable de
carbohidratos (30-50 g). El día de la prueba después de medir la muestra basal,
ingerirá alimento coctel de frutas.

Los sujetos deberán tener un ayuno de por lo menos 8 hrs. Durante ese tiempo NO
deben ingerir alimento o fumar. Pueden ingerir agua natural como único líquido.

REACTIVOS
- Carga oral de glucosa (75 gr en 300 ml de solución)
- Tiras reactivas para glucómetro
- Glucómetro.
- Sangre capilar de los tres sujetos de estudio

PROCEDIMIENTO:

El profesor explicará el uso del glucómetro.

Anotar los resultados en la tabla diseñada para ello y elaborar las curvas correspondientes
(realizar una sola gráfica, marcando con un color diferente cada paciente).

RESULTADOS

TABLA DE RESULTADOS

mg glucosa/dL mg glucosa/dL
mg glucosa/dL
COCTEL DE CARGA ORAL
CARNE
FRUTAS DE GLUCOSA
MUESTRA
BASAL

30
minutos

60
minutos

90
minutos

120
minutos

24
 GRAFICA DE RESULTADOS

II ESPECTROFOTOMETRÍA

OBJETIVOS
1. Comprender el adecuado manejo y funcionamiento del espectrofotómetro
2. Determinar la longitud máxima de absorción del azul de metileno con base en
su espectro de absorción.
3. Analizar el comportamiento de la absorbancia con respecto a la concentración
4. Determinar la concentración de una muestra problema a partir de una curva
patrón

CURVA PATRÓN DE AZUL DE METILENO

Marcar una serie de tubos de ensayo como se indica en la tabla y adicionar en cada uno lo
que se indica:

Concentración de Azul de metileno

Blanco 1 2 3 4 5 6
Azul de metileno al 0.5% (μl) 0 500 0 0 0 0 0
Volumen de la disolución
500 500 500 500 500
anterior (μl)
Agua (ml) 3 2 2 2 2 2 2

25
 *AM = Solución de Azul de metileno al 0.5%

 Mezclar vigorosamente.
 Transferir las diluciones a celdillas o cubetas de espectrofotómetro.
 Medir 3 veces la absorbancia del tubo cuatro a una longitud de onda de 350 nm a 950
nm (barrido espectral); calibrando el espectrofotómetro a cero con el blanco.
 Graficar el espectro de absorción de la muestra (longitud de onda vs mediana de la
absorbancia).
 Compare el espectro de absorción con el reportado en la literatura y determine la
longitud máxima de absorción del azul de metileno.
 Con base en la longitud de onda establecida en el paso anterior, determine la
absorbancia de cada dilución
 Grafique la curva patrón del azul de metileno (Absorbancia vs Concentración).
 Nota: Para realizar este gráfico deberá calcular la concentración del azul de metileno
sabiendo que su densidad es 1.757 g/ml y su PM 319.85 g/mol.
 Calcule el coeficiente de correlación de su curva y discuta su datos en función de la
ley de Lambert-Beer

NOTA: Los residuos resultantes de la Curva Patrón del Azul de metileno se vierten en
el frasco de desechos tóxicos colorantes.

26
PRÁCTICA No. 5
METABOLISMO DE LÍPIDOS

El marco teórico debe elaborarse con la investigación de los temas:

1. Definición y clasificación de lípidos
2. Saponificación
3. Ácidos grasos
4. Triacilglicéridos
5. Grasas
6. Fosfoglicéridos
7. Esfingolípidos
8. Terpenos
9. Esteroides
10. Colesterol
11. Prostaglandinas
12. Metabolismo de lípidos totales, triacilglicéridos y colesterol (síntesis,
betaoxidación, lipoproteínas, digestión de lípidos, etc)
13. Niveles normales en suero para cada analito a determinar en la práctica
14. Patologías asociadas a niveles superiores o inferiores a los normales.
15. Reacción tipo Trinder para lípidos
16. Fundamento de la determinación de lípidos totales, triacilglicerol y colesterol
(reacciones que se llevan a cabo, límite de detección, sensibilidad, cálculos,
sustancias que pueden interferir con las determinaciones, patologías
asociadas).

INSERTOS Y FICHAS DE SEGURIDAD

Inserto determinación de lípidos totales

Inserto determinación de triacilgliceroles
Inserto determinación de colesterol
Ácido sulfúrico
fosfovainillina
4-aminoantipirina
3,5-dicloro-2-hidroxibencen-sulfonato
Dihidroxiacetona fosfato
Anhídrido acético
Reactivo de liebermann-Burchard

27
I DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS TOTALES

Método:
Los lípidos reaccionan con el ácido sulfúrico H 2SO4 concentrado caliente formando un ión
carbonio que reacciona con el carbonilo de la fosfovainillina produciendo un complejo rosa,
que es estabilizado por resonancia. La intensidad del color del complejo es proporcional a la
concentración de los lípidos en suero.

Reactivos Muestras
- Ácido sulfúrico concentrado - Suero sanguíneo (ayuno de 13 hrs.)
- Reactivo de color para lípidos totales
- Solución patrón de lípidos totales

Procedimiento:
- Marcar tres tubos de ensayo como se indica en la tabla y proceder a pipetear en cada tubo
lo especificado:

LIP TOT LIP TOT LIP TOT

EQ. ___ EQ. ___ EQ. ___
PIPETEAR EN CADA TUBOS DE ENSAYO
BLANCO PATRÓN PROBLEMA
Sol. patrón de lípidos totales (μl) --- 10 ---
Muestra de suero (μl) --- --- 10
Agua bidestilada (μl) 10 --- ---
Ácido sulfúrico concentrado (mL) 1.0 1.0 1.0

- Tapar los tubos con una mota de algodón seca y agitar los tubos enérgicamente,
con el cuidado requerido en el manejo de ácidos concentrados.
- Incubar los tubos en baño maría en ebullición (100°C) durante 10 min.
- Al término del tiempo, transferir los tubos a un baño de agua fría por 5 min.
-Posteriormente adicionar:
Reactivo de color para lípidos totales (mL) 2.0 2.0 2.0

- Agitar vigorosamente, teniendo cuidado con la reacción exotérmica que se llevara a cabo.
- Mantener en baño de agua fría por 2 min. más.
- Transferir el contenido de cada tubo a celdillas y leer la absorbancia a 520 nm, ajustando a
cero con el blanco de reactivo. Nota: El color producido tan solo es estable por 10 min.
después de ese tiempo, no dará absorbancias confiables.

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación de Lípidos totales, se vierten en

el frasco de desechos tóxicos ácidos.

28
Cálculos
Factor = Concentración de la solución patrón / Absorbancia del patrón
Lípidos Totales (mg/dl) = Factor X Absorbancia del problema
Grupo MexLab

II DETERMINACIÓN DE TRIACILGLICEROLES

Método:
El reactivo está basado en el método de Wako y en las modificaciones de McGowan y col. y
Fossati y col.
Los triacilgliceroles son hidrolizados enzimáticamente por la lipasa a ácidos grasos y glicerol.
El glicerol es fosforilado por el ATP en presencia de glicerol cinasa para producir glicerol-3-
fosfato y ADP. El glicerol-3-fosfato es oxidado a dihidroxiacetona fosfato por la enzima
glicerol fosfato oxidasa, produciendo peróxido de hidrógeno. En una reacción colorimétrica
tipo Trinder catalizada por peroxidasa, el H 2O2 reacciona con 4-aminoantipirina y 3,5-dicloro-
2-hidroxibencen-sulfonato para producir un cromógeno de color rojo, cuya absorbancia, es
proporcional a la concentración de triacilgliceroles presentes en el suero.

Reactivos Muestras
- Reactivo de color para triacilgliceroles - Suero sanguíneo (ayuno de 13hrs.)
- Sol. Patrón para triacilgliceroles

Procedimiento
- Marcar tres tubos de ensayo como se indica en la tabla y proceder a pipetear en cada tubo
lo especificado:

TRI TRI TRI

PIPETEAR EN CADA TUBOS DE EQ. ___ EQ. ___ EQ. ___
ENSAYO BLANCO PATRÓN PROBLEMA
Solución patrón para triacilgliceroles (μl) --- 30 ---
Muestra de suero (μl) --- --- 30
Reactivo de triacilgliceroles (mL) 3.0 3.0 3.0

- Mezclar bien e incubarlos a 37°C durante 5 minutos.

- Transferir a celdillas secas y leer la absorbancia a 520 nm ajustando a cero con el blanco.
El color es estable durante 30 min.

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación de Triacilgliceroles, se vierten en

el frasco de desechos tóxicos básicos.

29
Cálculos
Factor = Concentración de la solución patrón / Absorbancia del patrón
Triacilgliceroles (mg/dl) = Factor X Absorbancia del problema
Grupo MexLab

III DETERMINACIÓN DEL COLESTEROL

Método:
El colesterol se determina por acción de las enzimas Colesterol ester hidrolasa que libera el
colesterol de los ésteres de colesterol y Colesterol oxidasa que oxida el colesterol libre
produciéndose peróxido de hidrógeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa
reacciona con el sistema cromogénico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe
a 505 nm.

Reactivos: Muestra:
- Reactivo de color para colesterol - Suero sanguíneo (ayuno de 13hrs.)
- Solución patrón para colesterol

Procedimiento:
- Marcar tres tubos de ensayo como se indica en la tabla y proceder a pipetear en cada tubo
lo especificado

COL COL COL

PIPETEAR EN CADA TUBOS DE EQ. ___ EQ. ___ EQ. ___
ENSAYO BLANCO PATRÓN PROBLEMA
Solución patrón para colesterol (μl) --- 30 ---
Muestra de suero (μl) --- --- 30
Reactivo de color para colesterol (ml) 3.0 3.0 3.0

- Mezclar bien y colocarlo en baño maría a 37°C durante 5 minutos.

- Transferir el contenido del tubo a una celdilla y medir la absorbancia a 505 nm ajustando
a cero con el blanco. El color es estable solo durante 30 min.

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación del Colesterol, se vierten en el

frasco de desechos tóxicos básicos.

Cálculos
Factor = Concentración de la solución patrón / Absorbancia del patrón
Colesterol Total (mg/dl) = Factor X Abs. del Problema
Grupo MexLab

30
CALCULOS GENERALES:

31
PRACTICA No. 6
METABOLISMO DE PROTEÍNAS

El marco teórico debe elaborarse con la investigación de los temas:

1. Definición y propiedades de aminoácidos
2. Qué es un zwitterion
3. Iminoácido
4. Proteína
5. Enlace peptídico
6. Estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria.
7. Principales funciones de las proteínas
8. Proteínas plasmáticas
9. Albúmina (síntesis, función, degradación y patologías asociadas a
concentraciones por debajo o por encima de los valores considerados
normales)
10. Malnutrición
11. Desnutrición
12. Marcadores de estado nutricional
13. Prealbúmina
14. Transferrina
15. Proteínas de Bence-Jones
16. Degradación de proteínas (ubiquitinación, proteosoma, etc)
17. Degradación de aminoácidos (transaminación, desaminación oxidativa, ciclo de
urea, degradación de esqueletos de carbono)
18. Purinas y pirimidinas (biosíntesis, catabolismo)
19. Ácido úrico (biosíntesis, patologías asociadas al incremento de la
concentración)
20. Fundamento de la determinación de proteínas totales, albúmina y ácido úrico
(reacciones que se llevan a cabo, límite de detección, sensibilidad, cálculos,
sustancias que pueden interferir con las determinaciones, patologías
asociadas).
21. Relación entre los cambios en la concentración plasmática de proteínas con
alteraciones fisiopatológicas

INSERTOS Y FICHAS DE SEGURIDAD

Inserto determinación de proteínas totales
Inserto determinación de albúmina
Inserto determinación de ácido úrico
Reactivo de Biuret
Sulfato de cobre
Hidróxido de sodio

32
Hidróxido de potasio
Verde de bromocresol
Alantoína
Ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibenzosul nico
4 aminofenazona

El paciente de cada equipo, deberá traer la colección de orina de 24 horas en un frasco

estéril (puede ser una botella de agua natural: bonafont, e-pura etc. (NO DE JUGO,
AGUA CON EDULCORANTE) y ayuno de 8 hrs.

OBJETIVOS
1. Conocer los mecanismos de absorción y digestión de las proteínas.
2. Conocer las principales vías metabólicas de las proteínas.
3. Conocer algunas implicaciones clínicas de alteraciones en el metabolismo de las
proteínas.

I DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES

Método:
Los enlaces peptídicos de la proteína reaccionan con iones cúpricas en un medio
amortiguado alcalino, para formar un complejo químico de color azul-violeta. Cada complejo
de cobre formado, contiene de 5 a 6 enlaces peptídicos. El color formado es proporcional a
la concentración de proteínas y se mide a una longitud de onda de 540 nm.

Reactivos Muestras
- Reactivo de Biuret - Suero sanguíneo (ayuno de 8 hrs.)
- Sol. patrón proteínas totales

Procedimiento:
- Marcar tres tubos de ensayo como se indica en la tabla y proceder a pipetear en cada tubo
lo especificado

PROT TOT PROT TOT PROT TOT

PIPETEAR ENCADA TUBOS DE EQ. ___ EQ. ___ EQ. ___
ENSAYO BLANCO PATRÓN PROBLEMA
Solución patrón de proteínas totales (μl) --- 30 ---
Muestra de suero (μl) --- --- 30
Reactivo de Biuret (ml) 3.0 3.0 3.0

- Agitar el contenido de cada tubo e incubar a 37° C durante 10 min.

- Transferir el contenido de cada tubo a celdillas secas para espectrofotómetro.

33
- Leer la absorbancia de cada dilución a una longitud de onda de 540 nm ajustando a cero
con el blanco.

Cálculos
Factor = Concentración del Patrón (g/dl) / Absorbancia del Patrón
Proteínas Totales (g/dl) = Factor x Absorbancia del Problema

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación de proteínas totales, se vierten en

el frasco de desechos tóxicos básicos
Grupo MexLab

II CUANTIFICACION DE ALBÚMINA

Método:
La determinación colorimétrica de albúmina humana en suero, se realiza en un medio
amortiguado, lo cual permite su unión por puentes de hidrógeno a colorantes o indicadores
como el verde de bromocresol, formando complejos coloridos cuya intensidad es
proporcional a la concentración de la misma.

Reactivos Muestras
- Solución patrón de albúmina - Suero sanguíneo (ayuno de 8 hrs)
- Reactivo de color para albúmina

Procedimiento:
- Marcar tres tubos de ensayo como se indica en la tabla y proceder a pipetear en cada tubo
lo especificado

ALB ALB ALB

PIPETEAR EN CADA TUBOS DE EQ. ___ EQ. ___ EQ. ___
ENSAYO BLANCO PATRÓN PROBLEMA
Solución patrón de albúmina (μl) --- 30 ---
Muestra de suero (μl) --- --- 30
Reactivo de color para albúmina (ml) 3.0 3.0 3.0

- Mezclar suavemente sin producir burbujas y dejar en reposo por 3 minutos a temperatura
ambiente.
- Transferir el contenido de cada tubo a celdillas y leer la absorbancia a 620 nm ajustando a
cero con el blanco. El color es estable por 30 min.

34
Cálculos

Factor = Concentración del Patrón (g/dl) / Absorbancia del Patrón

Albúmina (g/dl) = Factor x Absorbancia del Problema
NOTA: Los residuos resultantes de la determinación de albúmina, se vierten en el
frasco de desechos tóxicos ácidos.
Grupo MexLab

III DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO

Método:
El ácido úrico de la muestra es oxidado por la enzima uricasa a alantoína. En esta reacción,
un mol de peróxido de hidrógeno es formado por cada mol de ácido úrico oxidado. El
peróxido de hidrógeno con el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibencensulfónico y 4-aminoantipirina
en una reacción catalizada por la peroxidasa produce un compuesto colorido rojo
(quinoneimina) que es leído a 520 nm. La intensidad de color producido es proporcional a la
concentración de ác. úrico.

Reactivos
- Reactivo de color para ácido úrico
- Solución patrón de ácido úrico

Muestras
- Suero sanguíneo (ayuno de 8 hrs.)
- Toda la orina de 24 horas (ver indicaciones al inicio de la práctica).

Procedimiento:
- En un tubo falcón como orina diluida, diluir una alícuota de orina 1:10, (9ml de agua
destilada + 1 ml de orina).
- Marcar cuatro tubos de ensayo como se indica en la tabla y proceder a pipetear en cada
tubo lo especificado

AC. URI AC. URI AC. URI

AC. URI EQ. ___ EQ. ___ EQ. ___
PIPETEAR EN CADA TUBOS DE EQ. ___ PATRÓN PROB. PROB.
ENSAYO BLANCO SUERO ORINA
Suero --- --- 100 μl ---
Orina diluida 1:10 --- --- --- 100 μl
Patrón de ácido úrico --- 100 μl --- ---
Reactivo para ácido úrico (ml) 4.0 4.0 4.0 4.0

35
- Mezclar suavemente si
n agitar (evitando que se formen burbujas) e incubar a 37°C por 5 minutos
- Transferir el contenido de cada tubo a celdillas para espectrofotómetro y leer la
absorbancia a 520 nm ajustando a cero con el blanco. El color es estable solo 10 minutos
después de desarrollado el color.

Cálculos:
Factor (mg/dl) = Concentración del Patrón (mg/dl) / Absorbancia del patrón

Ácido úrico sérico (mg/dl) = Factor X Absorbancia del Problema Suero

Ác. úrico urinario (mg/dl) = (Factor X Absorbancia del Problema Orina) X 10

Ác. úrico urinario (mg/24 h)= Ác. úrico urinario (mg/dL) X Volumen total de orina en dL

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación del ácido úrico, se vierten en el

frasco de desechos tóxicos básicos
Grupo MexLab

CALCULOS GENERALES:

36
PRACTICA No. 7
PRUEBAS DE LA FUNCIÓN RENAL

El marco teórico debe elaborarse con la investigación de los temas:

1. Anatomía del riñón
2. Anatomía de la nefrona
3. Función de la nefrona
4. Glomérulo (aparato yuxtaglomerular, granulares, células de la macula densa,
células mesangiales extraglomerulares)
5. Principales funciones del riñón
6. Sistema Renina Angiotensina Aldosterona
7. Creatinina (síntesis, depuración de creatinina)
8. Urea (síntesis, degradación, nitrógeno ureico BUN)
9. Fundamento de la determinación de urea, creatinina, depuración de creatinina
(reacciones que se llevan a cabo, límite de detección, sensibilidad, cálculos,
sustancias que pueden interferir con las determinaciones, valores normales,
patologías asociadas).

INSERTOS Y FICHAS DE SEGURIDAD

Inserto determinación de creatinine

Inserto determinación de urea
Creatinina
Ácido pícrico
Amonio
Amoníaco
Hipoclorito de sodio
Salicilato
Nitroprusiato
Indofenol

OBJETIVOS

1. Conocer los principios de la función renal.

2. Conocer el metabolismo de los componentes nitrogenados no proteicos y su relación con
el funcionamiento renal.
3. Determinar mediante exámenes de laboratorio en suero y orina la función renal.
4. Conocer algunas patologías relacionadas con alteraciones en la función renal.

37
I DETERMINACIÓN DE CREATININA

Muestras:
- Se requiere suero de un paciente que tenga un ayuno de 8 hrs.
- Colectar la orina de 24 hrs (el día previo a la toma de muestra: la primer orina de
la mañana se desecha, posteriormente colectar la orina durante 24 hrs en un
ENVASE DE AGUA NATURAL).

Reactivos:
Reactivo de trabajo para creatinina
Sol. Patrón de creatinina (1.5 mg/dl)

Procedimiento:
1. Homogenizar bien la orina de 24 horas y con una probeta de 1000 o 500 ml medir su
volumen total en mililitros.

2. Diluir una pequeña muestra de orina 1:10 de la siguiente forma: En un tubo tipo Falcón,
se mezclan 9 ml de agua bidestilada y 1 ml de orina.

3. El espectrofotómetro con longitud de onda de 505 nm, se calibra a cero utilizando agua
bidestilada, como blanco.

4. Se les proporcionara un frasco ámbar con 3 ml del reactivo de trabajo para creatinina
cinética previamente incubado a 37° C, que es la temperatura de reacción, su contenido
se vierte rápidamente en una celdilla para espectrofotómetro.

5. Con cronometro en mano y cerca del espectrofotómetro, se agregan rápidamente 300 μl

de suero, se tapa con parafilm y se invierte la celdilla para mezclarlos.

6. Medir de inmediato la Absorbancia inicial, sin sacar la celdilla del espectrofotómetro

esperar 60 segundos exactos y leer nuevamente la absorbancia, esperar otros 60
segundos y volver a registrar la absorbancia, por último esperar otros 60 segundos para
leer la Absorbancia final. (Se obtienen 4 lecturas de absorbancia en total).

7. Repetirla operación desde el punto 4, pero ahora agregar 300 μl de la orina diluida 1:10 y
hacer las lecturas de la misma manera que para el suero.

8. Repetir la operación desde el punto 4, pero ahora agregar 300 μl de la solución patrón y
hacer las lecturas de la misma forma que las anteriores.

Cálculos
Determinar ∆A/min = obtener la media de la variación de absorbancia por minuto.

38
Creatinina Sérica (mg/dl) = [∆A/min P. Suero / ∆A/min Patrón ] X 1.5 mg/dl

Creatinina Urinaria (mg/dl) = [(∆A/min P. Orina/∆A/min Patrón) X 1.5 (mg/dl)] X 10

NOTA: Los residuos resultantes de esta determinación, se vierten en el frasco de

desechos tóxicos básicos.
Grupo MexLab

II DEPURACIÓN DE CREATININA

Método:
Es bien conocida la determinación de productos de degradación del metabolismo como la
urea para determinar la función renal, sin embargo cuando estos valores se elevan a niveles
significativos, ya la lesión renal es importante; es por eso que se tiene que recurrir a ciertos
índices para facilitar la detección temprana de alteraciones en la función renal. Clínicamente
esto se logra con la Depuración de Creatinina. La creatinina es el producto de degradación
muscular, tiene la particularidad que solo presenta ultrafiltración glomerular, sin secreción o
excreción en su curso por los túbulos renales, por lo que su determinación es representación
de la tasa de filtrado glomerular. Para hacer la prueba más específica, se tiene que
recolectar un volumen de orina en un tiempo determinado, generalmente 24 horas y se
compara la creatinina excretada con la que se encuentra en el suero. Bajo condiciones
normales, la depuración normal de creatinina es de 125 ml/min. Esta prueba sin embargo,
solo determina la filtración glomerular por lo que para tener una valoración completa de la
función renal, se necesita completar con una serie de exámenes.

Procedimiento:
- Recolectar la orina de 24 horas (toda).
- Medir su volumen total en ml.
- Determinar creatinina sérica y creatinina urinaria.
- Determinar la depuración de creatinina con la siguiente fórmula:

CreatininaUrinaria(mg / dl)  Vol.Orinade24h.(ml)

Depuración de Creatinina =
CreatininaSérica (mg / dl) x1440 (min)

39
III DETERMINACIÓN DE UREA

Muestras:
- Ver indicaciones al inicio de la práctica.

Reactivos:
- Reactivo de trabajo para urea
- Solución patrón de urea

Procedimiento
1. Diluir una pequeña muestra de orina 1:100 de la siguiente forma: En un frasco ámbar de
5 ml, se mezclan 990 μl de agua bidestilada y 10 μl de orina.
2. Marcar 4 tubos de ensayo como lo indica la tabla y pipetear en cada tubo lo especificado:

UREA UREA
UREA UREA
PIPETEAR EN CADA TUBOS DE EQ. ___ EQ. ___
EQ. ___ EQ. ___
ENSAYO PROBLEMA PROBLEMA
BLANCO PATRÓN
SUERO ORINA
Solución patrón de urea (μl) --- 20 --- ---
Muestra de suero (μl) --- --- 20 ---
Orina Diluida 1:100 (μl) --- --- --- 20
Reactivo de trabajo para urea (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0

- Incubar 3 minutos a 37°C (es importante medir exactamente los tiempos de incubación
para un resultado óptimo).
- Sin sacar de la incubación, agregar a cada tubo:
Reactivo de hipoclorito (ml) 2.0 2.0 2.0 2.0
- Incubar 5 minutos más, a 37°C.
- Leer la absorbancia a 600 nm, calibrando a cero con el blanco.
- El color es estable una hora.

Cálculos:
Factor = Concentración del Patrón (mg/dl) / Absorbancia del Patrón
Urea Sérica (mg/dl) = Factor (Absorbancia del Problema Suero )
Urea Urinaria (mg/dl) = ( [ Factor (Absorbancia del Problema Orina) ] x 100 ) x vol ori dL

Para expresar los valores obtenidos como Nitrógeno Ureico (mg/dl), multiplicar el valor
obtenido por 0.455

NOTA: Los residuos resultantes de esta determinación, se vierten en el frasco de

desechos tóxicos básicos.
Grupo MexLab

40
PRACTICA No. 8
PRUEBAS DE LA FUNCIÓN HEPÁTICA

El marco teórico debe elaborarse con la investigación de los temas:

1. Anatomía del hígado
2. Principales funciones del hígado
3. Degradación de aminoácidos (ciclo de urea)
4. Transaminasas
5. Fosfatasa alcalina
6. Bilirrubina
7. Fundamento de la determinación de transaminasa glutamato oxaloacética
(TGO), glutamato pirúvica (TGP), fosfatasa alcalina, billirubina (reacciones que
se llevan a cabo, límite de detección, sensibilidad, cálculos, sustancias que
pueden interferir con las determinaciones, valores normales, patologías
asociadas).

INSERTOS Y FICHAS DE SEGURIDAD

Inserto determinación de transaminasa TGO

Inserto determinación de transaminasa TGP
Inserto determinación de fosfatasa alcalina
Inserto determinación de bilirrubina
Malato
Lactato
Ácido sulfanílico diazotizado
Azobilirrubina
p-Nitrofenilfosfato
p-Nitrofenol
Fosfato
Dimetilsulfóxido
Dietanolamina

I DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO OXALACÉTICA

Fundamento:
L  aspartato  2  oxoglutarato TGO
 oxalacetato  Lglutamato
oxalacetato  NADH  H  MDH
 L  malato  NAD 

Muestra Reactivo
- Suero sanguíneo (Ayuno 8 hrs) - Reactivo de trabajo para TGO

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Procedimiento:
- Calibrar a cero el espectrofotómetro a 340 nm utilizando agua bidestilada como
blanco.
- Se les proporcionara un frasco con 3 ml del reactivo de trabajo para TGO,
previamente incubado a 37°C por 5 min.
- Vaciar inmediatamente el reactivo a una celdilla y agregar 300 μl de suero, tapar con
parafilm e invertir la celdilla para mezclarlos, activando inmediatamente el cronometro.
- Introduzca la cedilla al espectrofotómetro y registre la lectura inicial.
- Sin sacar la celdilla del espectrofotómetro esperar 1 minuto y leer la absorbancia,
después a los 2 y 3 minutos (de esta forma obtendrán 4 lecturas de absorbancia
diferentes, que se utilizaran para los cálculos posteriores).
- Determinar la diferencia promedio de absorbancia/min. restando cada lectura de la
anterior y después promediar los valores resultantes. Utilizar este promedio para los
cálculos.

Cálculos
TGO (U/L) = ∆ A / min. X 1768

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación de TGO y TGP, se vierten en el

frasco de desechos tóxicos básicos.
Grupo MexLab

II DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO PIRÚVICA

Fundamento:
L  alanina  2  oxoglutarato TGP

 pirúvato  L  glutamato
pirúvato  NADH  H  LDT
 L  lactato  NAD 

Muestra Reactivo
- Suero sanguíneo (Ayuno 8 hrs) - Reactivo de trabajo para TGP

Procedimiento:
- Calibrar a cero el espectrofotómetro a 340 nm. utilizando agua bidestilada como
blanco.
- Se les proporcionara un frasco con 3 ml del reactivo de trabajo para TGP,
previamente incubado a 37°C por 5 min.
- Vaciar inmediatamente el reactivo a una celdilla y agregar 300 μl de suero, tapar con
parafilm e invertir la celdilla para mezclarlos, disparando inmediatamente el
cronometro.
- Introduzca la cedilla al espectrofotómetro y registre la lectura inicial.

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 - Sin sacar la celdilla del espectrofotómetro esperar 1 minuto y leer la absorbancia,
después a los 2 y 3 minutos (de esta forma obtendrán 4 lecturas de absorbancia
diferentes, que se utilizaran para los cálculos posteriores).
- Determinar la diferencia promedio de absorbancia/min. restando cada lectura de la
anterior y después promediar los valores. Utilizar este promedio para los cálculos.

Cálculos
TGP (U/L) = ∆ A / min. X 1768

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación de TGO y TGP, se vierten en el

frasco de desechos tóxicos básicos.
Grupo MexLab

III DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA

La bilirrubina es un pigmento biliar formado por la degradación de la hemoglobina liberada

de los eritrocitos viejos o dañados. Normalmente, cerca de 6 g. de hemoglobina es liberada
diariamente, la cual en las células del sistema retículo endotelial es convertida a bilirrubina,
la que es unida a la albúmina y transportada hacia el hígado en donde es removida como un
producto de desecho. Un incremento en la formación o retención de bilirrubina en el cuerpo,
resulta en ictericia y en un aumento del nivel de bilirrubina en suero. La determinación de
Bilirrubina Total y la Bilirrubina Directa es importante para el diagnóstico diferencial de la
hiperbilirrubinemia.

Método:
La mayoría de los métodos utilizados para la determinación de bilirrubina utilizan ácido
sulfanílico diazotizado, formándose azobilirrubina coloreada. En medio acuoso solo
reacciona la bilirrubina conjugada o directa. En presencia de ácido sulfanílico diazotizado,
los glucurónidos de bilirrubina y la bilirrubina-delta reaccionan, formándose azobilirrubina
que en pH ácido presenta un pico de absorción a 560 nm.

Reactivos
Agua destilada
Diazo Reactivo para Bilirrubina Directa
DMSO Reactivo para Bilirrubina Total

Muestra
Suero sanguíneo (Ayuno de 8 hrs)

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Procedimiento para Bilirrubina Directa:
- Marcar 2 tubos de ensayo como lo indica la tabla y pipetear en cada tubo lo
especificado:

BIL DIR BIL DIR

PIPETEAR EN CADA LOS TUBOS DE EQ. ___ EQ. ___
ENSAYO BLANCO PROBLEMA
Agua destilada (μl) 300 ---
Suero (μl) --- 300
Diazo Reactivo para Bilirrubina Directa 3 ml 3 ml

- Mezclar e incubar a temperatura ambiente 3 min.

- Transferir el contenido de cada tubo a celdillas para espectrofotómetro.
- Leer la absorbancia de la Bilirrubina Directa a 560 nm ajustando a cero con el blanco.

Procedimiento para Bilirrubina Total:

- Marcar 2 tubos de ensayo como lo indica la tabla y pipetear en cada tubo lo
especificado:

BIL TOT BIL TOT

PIPETEAR EN CADA LOS TUBOS EQ. ___ EQ. ___
DE ENSAYO BLANCO PROBLEMA
Agua destilada (μl) 300 ---
Suero (μl) --- 300
DMSO Reactivo para Bilirrubina Total 3 ml 3 ml

- Mezclar e incubar a temperatura ambiente 10 min.

- Transferir el contenido de cada tubo a celdillas para espectrofotómetro.
- Leer la absorbancia de la Bilirrubina Total a 560 nm ajustando a cero con el blanco.

Nota: el tiempo para la lectura de la absorbancia es crítico, por tanto deben ser
exactos los 3 y 10 min para obtener resultados confiables.

Cálculos
Bilirrubina Directa mg/dl = (Absorbancia de Bilirrubina Directa) (13 mg/dl)
Bilirrubina Total mg/dl = (Absorbancia de Bilirrubina Total) (17 mg/dl)

NOTA: Los residuos resultantes de la determinación de Bilirrubina total y directa, se

vierten en el frasco de desechos tóxicos ácidos.
Grupo MexLab

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IV DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA

Método:
La fosfatasa alcalina del suero hidroliza al p-nitrofenil fosfato (p-NFF) que es incoloro,
produciendo fosfato y p-nitrofenol a pH alcalino. La velocidad de reacción del anión p-
nitrofenolato (amarillo) a 405 nm es proporcional a la actividad enzimática de las muestras.
La dietanolamina (DEA), regula el pH de la reacción y actúa como aceptor del fosfato
liberado por la fosfatasa (transfosforilación), observándose como resultado una activación
de la reacción. La DEA reúne las mejores condiciones en cuanto a activación y capacidad
buffer cuando se emplea p-NFF como sustrato.

Muestras: Reactivos:
Suero sanguíneo (ayuno de 8 hrs.) Reactivo de trabajo para ALP

Procedimiento:
- Calibrar a cero el espectrofotómetro a 405 nm. utilizando agua bidestilada como
blanco.
- Se les proporcionara un frasco con 3 ml del reactivo de trabajo para ALP, previamente
incubado a 37°C por 5 min.
- Vaciar inmediatamente el reactivo a una celdilla y agregar 60 μl de suero, tapar con
parafilm e invertir la celdilla para mezclarlos, disparando inmediatamente el
cronometro.
- Introducir la cedilla al espectrofotómetro y registre la absorbancia inicial.
- Sin sacar la celdilla del espectrofotómetro esperar 1 minuto y leer la absorbancia,
después a los 2 y 3 minutos (de esta forma obtendrán 4 lecturas de absorbancia
diferentes, que se utilizaran para los cálculos posteriores).
- Determinar el cambio de absorbancia por minuto.

Cálculos:
Fosfatasa Alcalina (UI/L) = ∆ A / min. X 2180

NOTA: Los residuos resultantes de esta determinación, se vierten en el frasco de

desechos tóxicos básicos.
Grupo MexLab

CALCULOS GENERALES:

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