Centrifuga

Maria Fernanda Garibello ([email protected]); Jean Karlo Suta

([email protected])

1. Principio físico:
Es un aparato que aplica una fuerza centrífuga sostenida (esto es, una fuerza producida por
rotación) para impeler la materia hacia afuera del centro de rotación. Este principio se utiliza para
separar partículas en un medio líquido por sedimentación. Es una máquina que se utiliza, sobre
todo, para la separación de mezclas heterogéneas líquido-sólidas y de mezclas líquidas como son
los líquidos insolubles entre sí con distintos pesos específicos.

2. Historia del equipo:

La invención de la máquina centrífuga que purga masa cocidas azucareras ha sido atribuida a
Schotter en 1848 y a Dubrunfaut, pero las autoridades en esta materia están de acuerdo en que
fue David Weston quien obtuvo la patente de la centrífuga suspendida en 1852 y la introdujo al
trabajo práctico azucarero en Hawái, en 1867. Hasta bien entrado el siglo XX, al tipo de máquina
centrífuga que está en uso general en la actualidad se le llamaba centrífuga Weston. Fué para
trabajo azucarero que se desarrollaron equipos de filtración de varios tipos, entre ellos el filtro
Taylor de bolsas, de hace más de 100 años; el filtro prensa, fue sugerido por Howard alrededor
de 1820, pero fue introducido con éxito por Needham en 1853; y los filtros modernos de láminas,
tales como los Kelley, Sweetland y Vallez, fueron introducidos de 1910 a 1920.

3. Funcionamiento:
El principio físico en que se basa el funcionamiento de la Centrifugadora se puede ilustrar
examinando el proceso de sedimentación de un puñado de arena introducido en un recipiente
con agua. Al agitar la mezcla de agua y arena, la fuerza de atracción que ejerce la  tierra actúa
sobre los granos de arena con más intensidad que sobre las partículas de agua, porque la masa de
aquellas es mayor. Los granos de arena son atraídos hacia el fondo de la vasija y cuando, después
de transcurrido cierto tiempo, el sistema llega a alcanzar el estado de reposo, se pueden distinguir
en ellas dos capas bien distintas, a saber, una inferior de arena y otra superior de agua que la
cubre.

Este proceso de separación se puede realizar también en una Centrifugadora, un cuyo caso el
efecto se acelera, al actuar sobre las partículas una fuerza centrífuga que es superior a la fuerza de
atracción gravitatoria. En la Centrifugadora, la mezcla a separar se hace girar a gran velocidad en
un tambor alrededor de un eje vertical. La magnitud de la fuerza centrífuga que va dirigida desde
el eje de giro hacia la periferia del tambor depende principalmente del número de revoluciones de
éste último.

Los tambores son accionados generalmente por un Motor eléctrico a través de una transmisión
que impulsa el árbol de accionamiento fijo al cuerpo del tambor
Partes de una centrifuga

Sus componentes son:

 Rotor: Dispositivo que gira y en el que se colocan los tubos.

Existen varios tipos:

Rotor basculante: Los tubos se colocan en un dispositivo (cestilla) que, al girar el rotor, se coloca
en disposición perpendicular al eje de giro. Así pues, los tubos siempre giran situados
perpendicularmente al eje de giro.

Rotor de ángulo fijo: Los tubos se insertan en orificios en el interior de rotores macizos. El caso
extremo es el de los rotores verticales en los que el tubo se sitúa paralelo al eje de giro. Este tipo
de rotores es típico de ultracentrífugas y se emplea en separaciones de moléculas en gradientes
de densidad autogenerados (por ej. de cloruro de cesio).

 Motor: Es eléctrico y capaz de girar a docenas de miles de veces por minuto. Permite que
la técnica sea ejecutada.

 Cámara de Vacío: Es una pieza cóncava que sirve para contener dentro de ella el rotor y su
respectivo soporte que lo une o conecta con el motor.

 Control de Velocidad, Tiempo y Temperatura: Regula la velocidad del dispositivo al igual

que el dispositivo regulador de la temperatura necesaria para la centrifugación de las
muestras.

Clasificación

 Centrifugas de baja velocidad o clínicas: son útiles para partículas grandes como células,
precipitados de sales insolubles.
 Centrifugas de alta velocidad: son útiles en la separación de fracciones celulares
insuficientes para la separación de ribosomas, virus, macromoléculas.
 Ultracentrífugas: son de 2 tipos.

1. Analíticas: obtención de datos precisos de propiedades de sedimentación

2. Preparativas: aislamiento de partículas de bajo S (coeficiente de sedimentación)

4. Tipos de centrifugas
Existen varios tipos en dependencia de la aplicación que se le dé y el tipo de mezcla que se desea
separar.
Centrífuga de sedimentación: Esta contiene un cilindro o un cono de pared sólida que gira
alrededor de un eje horizontal o vertical. Por fuerza centrífuga, una capa anular de líquido de
espesor fijo se sostiene contra la pared. A causa de que esta fuerza es bastante grande comparada
con la de la gravedad, la superficie del líquido se encuentra esencialmente paralela al eje de
rotación, independientemente de la orientación de la unidad. Las fases densas "se hunden" hacia
fuera y las fases menos densas se levantan hacia dentro. Las partículas pesadas se acumulan sobre
la pared y deben retirarse continua y periódicamente.

Centrífugas de filtro: Estas operan como el tambor de rotación de una lavadora doméstica. La
pared de la canasta está perforada y cubierta con un medio filtrante, como una tela o una rejilla
fina, el líquido pasa a través de la pared impelido por la fuerza centrífuga dejando una torta de
sólidos sobre el medio filtrante. La rapidez de filtración se incrementa con esta fuerza y con la
permeabilidad de la torta sólida. Algunos sólidos compresibles no se filtran bien en una centrífuga
a causa de la deformación que sufren las partículas por la acción de la fuerza centrífuga, por lo que
la permeabilidad de la torta se ve reducida considerablemente. La cantidad de líquido que se
adhiere a los sólidos después que éstos se han centrifugado depende también de la fuerza
centrífuga aplicada; en general, el líquido retenido es considerablemente menor que el que queda
en la torta que producen otros tipos de filtros.

5. Tipos de Centrifugación

 Centrifugación Diferencial: es el método más común de separación. En este método el

tubo de centrifuga se llena con una mezcla uniforme. Tras la centrifugación se obtienen dos
fracciones: un tubo que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material
no sedimentado. El método es bastante inespecifico y no se puede saber si la partícula
buscada quedara en el sobrenadante, en el tubo o repartido entre ambos; sin embargo, es
una técnica muy útil para aislamiento de organeras subcelulares.
 Centrifugación en Gradiente de Concentración: este método es algo más complicado que
la centrifugación diferencial. La técnica no solo permite la separación de varios sino de todos
los componentes de la muestra, también permite realizar medidas analíticas. Este método
implica la utilización de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la
inferior.

Existen 2 variaciones dentro de la centrifugación en gradiente de densidad:

Centrifugación de equilibrio en gradiente o isopicnica: esta técnica se emplea para separar
partículas similares en tamaños, pero distintas en densidad. Puestos que las proteínas poseen casi
la misma densidad, este método no suele utilizar para su separación, sin embargo, en situaciones
donde intervienen diferentes densidades, la centrifugación isopicnica es el método adecuado.
Centrifugación zonal: la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de
densidad preformado. Bajo fuerza centrífuga las partículas comenzaran a sedimentar a través del
gradiente, moviéndose cada partícula a diferentes velocidades dependiendo de su masa.

6. Diferentes equipos
Decantadoras o de Tornillo
Las centrífugas decantadoras se caracterizan por un tazón horizontal con una sección cilíndrica y
una sección cónica, con una relación de longitud a diámetro entre 1.5 - 3.5. el tazón contiene un
tornillo transportador que gira en la misma dirección, pero a una velocidad ligeramente superior o
inferior que el tazón (entre 5 – 100 r.p.m.) de diferencia. Las velocidades de rotación son de 1 600
a 6 000 r.p.m. por lo que los campos centrífugos son menores que los de los otros equipos
En las centrífugas decantadoras la suspensión es introducida a través de perforaciones por un tubo
axial concéntrico a la flecha del tornillo, al final de la sección cónica o de compresión de sólidos.
Los sólidos que se depositan en la pared son transportados y descargados continuamente por el
extremo cónico de la centrífuga, donde escurren antes de salir. El líquido claro se obtiene por
rebosamiento en el extremo opuesto a través de orificios de descarga que fijan el nivel del líquido
en la centrifuga.

Centrífuga de Discos
La centrífuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se montan un conjunto de discos en
forma de conos truncados, uno sobre otro. El rotor de la centrifuga provoca el giro tanto de los
discos como del tazón de la centrifuga. Los discos constan de bordes internos que permiten
mantener pequeñas separaciones entre ellos, del orden de 0.5 a 2.0 mm. El ángulo que forman los
conos con la vertical varía entre 35 y 500 dependiendo de la aplicación particular. Entre la pila de
discos y el tazón existe un espacio que permite la acumulación de sólidos.

Durante la operación de la centrifuga de discos la suspensión es alimentada continuamente en el

fondo del tazón a través de la parte central de la flecha, y fluye hacia arriba entre las placas hacia
la salida en la parte central superior del equipo. Debido a la fuerza centrífuga, los sólidos se
depositan en la cara interna de los discos, resbalando hacia la cámara colectora debido al ángulo
de los discos. La siguiente imagen muestra una centrífuga de discos. En Internet, se encuentra un
archivo del funcionamiento de este tipo de centrífugas en la dirección

Centrífugas de Baja Velocidad

Estas centrífugas son capaces de centrifugar hasta 6 litros de muestra a la vez, mantienen la
muestra fría por un flujo de aire que pasa a través del fondo de la centrifuga. Estas máquinas son
utilizadas rutinariamente para procesos iniciales de muestras biológicas; puede ser utilizadas para
separar células, y con mayores velocidades, separar organelos, así como núcleo y cloroplastos que
también pueden ser separados por gradientes de densidad.

Centrífugas de Alta Velocidad

Estas centrífugas, usualmente con máximas velocidades de 18 000 – 25 000 r.p.m.,son máquinas
que pueden generar cerca de 60 000 g, son muy baratas comparadas con las ultracentrífugas.
Estas centrífugas tienen sistema de refrigeración y algunos tipos tienen también sistema de vacío,
sin embargo, las maquinas que cuentan con sistema de vacío son más caras, pero tienen la ventaja
que controlan con mayor exactitud la temperatura.

Al igual que las centrífugas de baja velocidad las centrífugas de alta velocidad son muy utilizadas
para el fraccionamiento subcelular. La ventaja de los rotores verticales ha facilitado el uso de
centrífugas de alta velocidad para las separaciones por gradiente.

Ultracentrífugas
La fuerza generada por las ultracentrífugas puede ser significativamente mayor de los 600,000 g,
los cuales son suficientes para separar proteínas pequeñas.
Las ultracentrífugas son subdivididas en dos tipos: analíticas y preparativas. La ultracentrífuga
analítica a menudo es confundida con la ultracentrífuga preparativa. Sin embargo, los
experimentos con la analítica son diferentes en varios aspectos. El más importante es que cuenta
con un sistema óptico, por lo que, la muestra es visualizada en tiempo real durante la
sedimentación, permitiendo la determinación exacta de parámetros hidrodinámicos y
termodinámicos. Además, el propósito del experimento es para caracterizar las propiedades
claves de la muestra o para purificar la muestra para un uso posterior

En contraste a muchas técnicas biofísicas, las biomoléculas son caracterizadas durante la

ultracentrifugación analítica en su estado nativo bajo condiciones biológicas importantes. En el
siguiente esquema se pueden observar las diferencias entre un rotor de una centrífuga analítica y
una centrífuga preparativa

Las ultracentrífugas analíticas Beckman se componen esencialmente de un motor, de un rotor de

centrifugación, que está en una cámara blindada protectora y de un sistema fotográfico para
registrar la distribución de las concentraciones de la muestra en la celda de centrifugación, o bien,
de una computadora. El rotor está suspendido en el centro del motor mediante un cable. Uno de
los agujeros del rotor contiene la celda de centrifugación; el otro sirve para equilibrar el peso y
contiene un agujero de referencia para determinar la distancia al centro de rotación. Las paredes
de la celda están diseñadas de modo que, si se orientan con cuidado al colocar la celda en el rotor,
tales paredes serán paralelas a las líneas del campo centrífugo, lo cual impide la acumulación de
materiales en las paredes de la celda. La celda consta de una pieza central que contiene la muestra
líquida, dos ventanas, un cilindro soporte en el que se introduce la pieza central y las ventanas; y
una compuerta de alimentación. Las ventanas suelen estar hechas de cuarzo, aunque a veces se
utiliza zafiro para centrífugas de velocidades muy altas puesto que se deforma menos cuando se
opera a fuerzas elevadas. La pieza central suele estar hecha de metal (aluminio) o de plástico, las
primeras tienen la ventaja de que el equilibrio térmico queda establecido rápidamente,
reduciendo al mínimo la convección producida por los gradientes térmicos. La desventaja del
metal es que a veces reacciona con el disolvente o el soluto por lo que, hay que utilizar el plástico.

Centrífuga Tubular
Las centrifugas tubulares (CT) consisten básicamente de un tubo vertical esbelto que gira a altas
velocidades por la acción de un motor eléctrico, o una turbina de aire o vapor. Este tipo de
centrífuga es una de los más eficientes y sencillos, capaz de separar partículas hasta de 0.1 mm.
Las CT pueden contar con un sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de
caldos con enzimas o proteínas.

Durante la operación de la CT la suspensión es alimentada por la parte inferior y los sólidos

sedimentan en la pared del tubo. El líquido claro se recolecta por rebosamiento en la parte
superior. Conforme se forma el precipitado el área de flujo se reduce y el tiempo de residencia del
líquido disminuye. Esto se traduce en un aumento gradual del contenido de sólidos en el
sobrenadante que puede ser determinado por mediciones de turbidez.

7. Rotores
Rotores de Columpio
En el caso de estos rotores la muestra están en una cubeta individual el cual se mueve de forma
perpendicular al eje de rotación del rotor, por lo tanto, en estos rotores, la fuerza centrífuga es
ejercida a lo largo del eje del tubo, y a pesar de que la fuerza centrífuga es axial, algunas partículas
son sedimentadas sobre la pared del tubo; esto se puede evitar con la sedimentación zonal.

Estos rotores llevan de tres a seis tubos fijados a un soporte de metal que esta libremente
suspendido, la suspensión libre sirve solo para fijar la posición de inicio del tubo con la muestra,
cuando el rotor comienza a girar, el bucket se pone de forma horizontal. Todos los buckets de un
rotor son de igual masa por lo que sólo se necesita balancear los tubos con la muestra. La
superficie de los buckets debe de estar seca y limpia

Los rotores de columpio Beckman tiene un número que designa la máxima velocidad permitida
(r.p.m. x 1000) y por Ti si este hecho de titanio, el digito adicional que sigue a la marca
mencionada indica la variante del rotor con la misma velocidad máxima (50 Ti, 50.2 Ti, etc.)
seguido de las letras SW.

Estos rotores pueden ser divididos en tres grupos.

1.- Rotores de alta velocidad con tubos de 4.4 y 5 ml. Tipo SW 50.1, SW 55 Ti, SW 60 Ti y SW 65 Ti.
Estos rotores son convenientes para centrifugación zonal y al equilibrio donde no es necesaria una
fina resolución.

2.- Rotores de velocidad moderada para tubos de 13.2 a 17 ml de capacidad, son convenientes
para la separación de partículas de masa similar por medio de centrifugación zonal en gradientes
de densidad de sacarosa. Este grupo incluye rotores del tipo SW 20.1, SW 40 Ti y SW 41 Ti.

3.- Rotores para tubos largos y de baja velocidad de rotación. Incluye rotores del tipo SW 25.1 que
contiene tres tubos de 34 ml, el tipo SW 25.2 (3x 60 ml) y SW 28 con seis tubos de 38.5 ml. A
continuación, la imagen corresponde a un rotor de columpio.

Rotores de Ángulo Fijo

Como su nombre lo indica los tubos tienen un ángulo fijo y cuando el rotor gira la solución se
reorienta en el tubo. El ángulo del tubo en el rotor puede variar de 140 a 400. En los modelos
comerciales existe una gran variedad de capacidades, rango de velocidades y ángulos de
inclinación. Los rotores con bajo ángulo son más eficientes para sedimentación porque el trayecto
de las partículas que sedimentan es corto. Los rotores de ángulo fijo están diseñados para soportar
altas fuerzas centrífugas, por arriba de 600 000 g. Las siguientes imágenes muestran dos modelos
de rotores de ángulo fijo.

Rotores Verticales
Estos rotores se utilizan en la mayoría de centrífugas de alta velocidad y ultracentrífugas. En estos
rotores, los tubos están en posición vertical y se podría considerar que es una forma extrema de
un rotor de ángulo fijo, sin embargo, las características del rotor vertical son lo suficientemente
diferentes para considerarse otra categoría. Cuando el rotor gira la solución se reorienta 900, esta
reorientación se lleva a cabo debajo de las 1000 r.p.m. y si la aceleración es suficientemente lenta
la reorientación no rompe el gradiente. La característica importante de los rotores verticales es la
corta trayectoria de sedimentación de las partículas (que equivale al diámetro del tubo). El diseño
de los rotores verticales permite muy altas fuerzas centrífugas.

Rotores Zonal
Los procesos de sedimentación que se llevan a cabo en un rotor zonal son similares a los que
ocurren en los rotores de bucket, sin embargo, en lugar de tubos hay cuatro sectores en el cuerpo
del rotor zonal formados por la inserción de un cilindro de cuatro sectores que está hecha de
Noryl, un químico inerte y suave. El ensamble del aspa asegura la rotación del líquido junto con el
rotor y consecuentemente la formación de una fuerza centrífuga. La dirección de la sedimentación
es hacia la periferia del rotor.

En el interior del centro de las aspas hay canales que conectan la parte central y la región
periférica del rotor con un dispositivo transicional que se encuentra arriba del rotor. Esto permite
que el rotor pueda ser llenado y descargado mientras está girando a baja velocidad (2000 a 3000
r.p.m.), esto es necesario para crear un gradiente de densidad al inicio de la corrida y prevenir la
ruptura del mismo después del fraccionamiento. La densidad del gradiente aumenta del centro a
la periferia del rotor haciendo que la fuerza centrífuga sea mantenida a lo largo de la corrida.

Tipos de configuraciones
El objetivo de la centrifugación es la separación de partículas especificas en una solución. El
término partícula involucra sustancias disueltas y partículas de tamaño microscópico y
macroscópico que se encuentran suspendidas en un fluido que usualmente es agua. En biología las
partículas suelen ser células, organelos subcelulares o moléculas grandes; en química, usualmente
son solutos macromoleculares disueltos. Existen tres tipos principales de centrifugación:
Centrifugación diferencial, centrifugación zonal y centrifugación al equilibrio.

Centrifugación Diferencial o Pelleting

En este método, el tubo de la centrífuga es llenado inicialmente con una mezcla uniforme de la
solución de la muestra, a través de la centrifugación se obtiene una separación de dos fracciones:
Un pellet (sedimento) que contiene la partícula sedimentada y un sobrenadante con la fracción no
sedimentada de la solución. Un particular componente puede terminar en el sobrenadante o en el
pellet, o podría estar distribuido en ambas fracciones, dependiendo de su tamaño y/o de las
condiciones de centrifugación. El pellet es una mezcla de todos los componentes sedimentados y
está contaminado con cualquier partícula no sedimentada que estuviera en el fondo del tubo. Las
dos fracciones son recuperadas por decantación de la solución sobrenadante del pellet. El
sobrenadante puede ser Re centrifugado a altas velocidades para obtener una mayor purificación
con la formación de nuevo pellet y sobrenadante. El pellet puede ser Re suspendido en un
pequeño volumen y Re centrifugado dependiendo de lo que se desee separar.

Centrifugación Zonal
Cuando se coloca una pequeña cantidad de la disolución con las moléculas que se quieren
caracterizar sobre la superficie de un gradiente de densidad previamente formado a lo largo de un
tubo de centrifugación, en la superficie siempre hay una densidad menor que la existente en la
parte superior del gradiente y cuando se centrifuga el tubo las moléculas de la capa superior
sedimentan a través del gradiente. Si todas ellas tienen el mismo coeficiente de sedimentación
sedimentarán en una estrecha franja, sin embargo, si hay moléculas con distintos coeficientes de
sedimentación, se separaran unas de otras a medida que se produzca la centrifugación y
finalmente los diferentes componentes se resolverán en una serie de zonas o bandas, de ahí el
nombre de centrifugación zonal. Una vez completada la centrifugación, se fracciona el contenido
del tubo generalmente por recolección de las gotas cuando se hace un orificio en el fondo del tubo
y el goteo es lo suficientemente lento para no producir turbulencias. Cada gota representa una
lámina del tubo y una fracción está representada por una o varias gotas

8. Equipos del mercado:

MINI CENTRIFUGA VELOCIDAD VARIABLE

Modelo HW-L-2101
MINI CENTRIFUGA "FRONTIER", 8 TUBOS 1.5 A 2.0 ML, 6500 RPM, FC5306 - OHAUS
 MICROCENTRIFUGA RONDO, 6000RPM, 2000G - CAPP
Modelo CAP-CR-68

 Suministrado con rotor de 8 ranura cerrada para operación silenciosa y potente.

 PCR adicionales quitan el rotor (2X8X0.2ml) y adaptadores de reducción para microtubos
0.2/0.4ml suministrados junto con el producto.
 El freno de seguridad electrónico proporciona una parada inmediata en la apertura de la
tapa.
 Operación rápida simplemente cerrando y abriendo la tapa.
 Característica de seguridad de corte de desequilibrio (CR-68X).
 Función de calibración digital (CR-68X).
 Pantalla digital de velocidad y función del temporizador (CR-68X).
CENTRIFUGA SPINPLUS 6 TUBOS DE 15ML, 4000 RPM
Modelo TS-8011602

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