agua ultrapura
Cómo conseguir los mejores resultados
con agua ultrapura
Dr. Paul Whitehead, CChem, Director de laboratorios FRSC, ELGA R&D Facility.
El agua ultrapura (Tipo I) es la sustancia más pura utilizada en un laboratorio.
Este artículo profundiza sobre la calidad e importancia del agua ultrapura y la
forma de mantener esta calidad durante su uso en el laboratorio.
Introducción equilibrio (10–7M a 25 °C), lo que le otorga una resistividad
eléctrica característica de 18,2 [Link].
P
ara un laboratorio es vital disponer de agua pura
para realizar las pruebas de investigación y ensa- Pero el agua tiene la capacidad de disolver casi todo tipo
yo. La presencia de elementos y otros compuestos de compuestos químicos y de albergar toda forma de vida,
en partes por billón (ppb) o incluso de magnitud inferior en lo que implica que su calidad está continuamente bajo la
el agua pura, podría comprometer los resultados de los en- amenaza de cinco tipos de impurezas: partículas en suspen-
sayos por su interacción con las muestras, medios activos o sión, compuestos inorgánicos, moléculas orgánicas, gases
componentes del sistema. disueltos y microorganismos, incluyendo sus biomoléculas
asociadas. Producir agua de alta pureza para su uso en el
El agua 100% pura se compone exclusivamente de molécu- laboratorio, implica someter al agua potable a una serie de
las de agua con iones de hidrógeno e hidroxilo que están en tratamientos de purificación para eliminar estos diferentes ti-
pos de impurezas.
Pureza del agua ultrapura
Los niveles de impurezas detectables en el agua ultrapura de-
penden en gran medida de la sensibilidad de las técnicas utili-
zadas y el entorno en que la prueba se lleva a cabo. Según las
técnicas actuales de ultratrazas, los niveles máximos de impu-
rezas no gaseosas presentes en el agua ultrapura son inferiores a
1,5 µg/l (ppb) para compuestos orgánicos e inferiores a 1,0 µg/l
para otros elementos e iones. Esto significa que el agua ultra-
pura tiene un 99,99999975% de pureza.
técnicas de LABORATORIO 1 Nº 364 SEPTIEMBRE 2011
agua ultrapura
En la Tabla 1 se compara el nivel de im- Metanol (Puranol™ Acetonitrilo Ácido acético Agua Ultrapura
pureza de un agua ultrapura con los tres grado semiconductor) (TraceSELECT Ultra®) (TraceSELECT®) (PURELAB Flex)
disolventes de grado más puro que más Aluminio <1.000 <1.000 <200 <1
se utilizan en el mercado para la investi-
Antimonio <500 <500 <50 <0,2
gación analítica y los ensayos: metanol,
Arsénico <1.000 <1.000 <500 <2
acetonitrilo y ácido acético.
Cadmio <500 <500 <10 <0,5
Calcio <30.000 <20.000 <1.000 <2
Utilizando las últimas técnicas de ICP-
MS, se comprueba que el agua ultra- Cromo <1.000 <1.000 <100 <1
pura carece de todos los elementos no Cobre <1.000 <1.000 <200 <2
gaseosos, la mayoría de ellos con límites Hierro <1.000 <1.000 <500 <2
de detección inferiores a 1 ng/l (ppt). Plomo <500 <500 <10 <0,2
Este nivel de contaminación es varios ór- Magnesio <5.000 <1.000 <100 <1
denes de magnitud menor que todos los Manganeso <500 <500 <20 <0,5
otros disolventes probados. La mayoría Mercurio <200 <1.000 <1.000 <5
de los reactivos empleados en el labo- Níquel <1.000 <1.000 <100 <2
ratorio tienen niveles mucho más altos Potasio <10.000 <10.000 <500 <5
de impurezas que estos disolventes, ya
Sodio <20.000 <20.000 <1.000 <2
que con frecuencia se encuentran en el
Estaño <500 <1 <100 <0,5
rango de mg/l.
Titanio <1.000 <1.000 <50 <0,5
Vanadio <500 <500 <10 <0,2
En las Tablas 2 y 3 se muestran los bajos
de niveles de impurezas orgánicas volá- Zinc <10.000 <1.000 <200 <2
tiles y semivolátiles presentes en el agua Bromuro <1.000 <2 <20
ultrapura utilizando técnicas de purga Cloruro <25.000 <25.000 <20
y trampa GC-MS y desorción térmica Flúor <10.000 <5 <30
GC-MS, respectivamente. Por lo general, Nitrato <25.000 <25.000 <20
los niveles de impurezas son inferiores a los
Tabla 1. Comparación del nivel de impureza de un agua ultrapura con los solventes
límites de detección: <0,05 µg/l en com-
más empleados en el mercado.
puestos orgánicos volátiles y <0,025 µg/l
en el caso de los semivolátiles. Estos
niveles concuerdan con valores de car-
Resultado Resultado
bono orgánico total (COT) inferiores a µg/l (ppb) µg/l (ppb)
1 µg/l (ppb), siendo el COT un indica- Benceno <0,05 1,3-dicloropropano <0,05
dor comúnmente utilizado para medir
Bromobenceno <0,05 2,2-dicloropropano <0,05
la contaminación orgánica en el agua
Bromoclorometano <0,05 1,1-dicloropropeno <0,05
ultrapura.
Bromodiclorometano <0,05 cins-1,3-dicloropropeno <0,05
Bromoformo <0,05 trans-1,3-dicloropropeno <0,05
El agua ultrapura, a 25 °C y 1 bar de
presión atmosférica, contiene alrede- Bromometano <0,05 Etilbenceno <0,05
dor de 9 ppm de oxígeno disuelto y 2-butanone (MEK) <0,05 Hexaclorobutadieno <0,05
14 ppm de nitrógeno. Estos elemen- n-butilbenceno <0,05 Hexano <0,05
tos pueden ser eliminados del agua sec-butilbenceno <0,05 Alcohol isopropílico <0,05
ultrapura mediante la desgasificación tert-butilbenceno <0,05 Isopropilbenceno <0,05
a vacío, pero esta técnica no es ne- Tetracloruro de carbono <0,05 Isopropiltolueno <0,05
cesaria en gran parte de las aplica- Clorobenceno <0,05 Metil-ter-butil-eter <0,05
ciones del laboratorio, ya que en el Clorodibromometano <0,05 Naptaleno <0,05
momento que el agua ultrapura entra Cloroetano <0,05 n-propilbenceno <0,05
en contacto con el aire, el oxígeno y
Cloroformo <0,05 Estireno <0,05
el nitrógeno se disuelven en el agua
Clorometano <0,05 1,1,1,2-tetracloroetano <0,05
en concentraciones en equilibrio con
2-clorotolueno <0,05 1,1,1,2-tetracloroetano <0,05
la atmósfera.
4-clorotolueno <0,05 Tetracloroetano <0,05
Para la eliminación en el agua ultrapu- 1,2-dibromo-3-cloropropano <0,05 Tolueno <0,05
ra de partículas y bacterias se utiliza la 1,2-dibromometano (EDB) <0,05 1,2,3-triclorobenceno <0,05
técnicas de LABORATORIO 2 Nº 364 SEPTIEMBRE 2011
agua ultrapura
Resultado Resultado ósmosis inversa, submicro y/o ultrafiltra-
µg/l (ppb) µg/l (ppb) ción, mientras que para la eliminación
dibromometano <0,05 1,2,4-triclorobenceno <0,05 de endotoxinas se emplea el intercam-
bio iónico y los filtros electrostáticos o la
1,2-diclorobenceno <0,05 1,3,5-triclorobenceno <0,05
ultrafiltración. Las pruebas bacterianas
1,3-diclorobenceno <0,05 1,1,1-tricloroetano <0,05
demuestran que el agua ultrapura con-
1,4-diclorobenceno <0,05 1,1,2-tricloroetano <0,05
tiene valores inferiores a 1 Unidades For-
Diclorodifluorometano <0,05 Tricloroeteno <0,05 madoras de Colonias (UFC)/10 ml, que
1,1-dicloroetano <0,05 Triclorofluorometano <0,05 equivale a <0,1 µg /l COT.
1,2-dicloroetano <0,05 1,2,3-tricloropropano <0,05
1,1-dicloroetano <0,05 1,2,4-trimetilbenceno <0,05
cis-1,2-dicloroetano <0,05 1,2,5-trimetilbenceno <0,05 ¿Por qué utilizar agua
trans-1,2-dichloroetano <0,05 Cloruro de vinilo <0,05 ultrapura?
Diclorometano <0,05 o-xileno <0,05
1,2-dicloropropano <0,05 m-xileno y p-xileno <0,05 Aunque pueda parecer excesivo, el
agua ultrapura tiene que estar libre
Tabla 2. Compuestos orgánicos volátiles mediante técnicas de purga y trampa GC-MS. de todas esas impurezas si se va a
emplear para aplicaciones analíticas
Resultado Resultado
µg/l (ppb) µg/l (ppb) y experimentales. Afortunadamente,
Acenafteno <0,025 hexaclorobutadieno <0,025 el agua ultrapura no es tan costosa,
ya que su precio puede oscilar alrede-
Acenaftileno <0,025 Hexaclorociclopentadieno <0,025
dor de 0,12 EUR por litro, incluyendo
Antraceno <0,025 Hexacloroetano <0,025
todos los costes de inversión y ope-
Bencidina <0,025 Isoforona <0,025
ración.
Benzo (a) antraceno <0,025 2-metilnaftaleno <0,025
Benzo (b) fluoranteno <0,025 Naftaleno <0,025 Como el agua se puede utilizar en mu-
Benzo (k) fluoranteno <0,025 2-nitroanilina <0,025 chos aspectos de un análisis, incluyendo
Alcohol bencílico <0,025 3-nitroanilina <0,025 la preparación de blancos, muestras,
Butil bencil ftalato <0,025 4-nitroanilina <0,025 diluciones, estándares, como eluyentes,
Bis (2-cloroetoxi) metano <0,025 Nitrobenceno <0,025 lavado de instrumentos, etc., la pre-
Bis (2-etilhexil) ftalato <0,025 N-nitrosodimetilanilina <0,025 sencia de algún contaminante puede
Bis (2-cloroisopropil) éter <0,025 N-nitrosodifenilanilina <0,025 comprometer los resultados. La Figura 1
Bisfenol A <0,025 Nonilfenol <0,025 muestra las múltiples formas en las que
4-bromofenil fenil éter <0,025 Fenantreno <0,025 la presencia de impurezas puede afectar
a la fiabilidad y repetibilidad de los re-
Carbazol <0,025 Pireno <0,025
sultados de cromatografía iónica, tanto
4-cloroanilina <0,025 Piridina <0,025
a corto como a largo plazo.
2-cloronaftaleno <0,025 1,2,4-triclorobenceno <0,025
4-clorofenil fenil éter <0,025 Ácido Benzoico <0,025 Los análisis de alta sensibilidad depen-
Criseno <0,025 4-cloro-3-metilfenol <0,025 den en gran medida de la alta pureza
Dibenzofuran <0,025 2-clorofenol <0,025 del agua, especialmente cuando hay
1,2-diclobenceno <0,025 Cresoles <0,025 que medir directamente concentra-
1,3-diclobenceno <0,025 2,4-diclorofenol <0,025 ciones muy bajas o cuando se dispone
1,4-diclobenceno <0,025 2,4-dimetil fenol <0,025 de pequeñas cantidades de muestras,
3,3’- diclorobencidina <0,025 2,4-dinitrofenol <0,025 siendo necesario diluirlas antes del
Dietil ftalato <0,025 4,6-dinitro-2-metilfenol <0,025 análisis.
Dimetil ftalato <0,025 2-metilfenol <0,025
Di-n-butil ftalato <0,025 4-metilfenol <0,025 El uso de agua ultrapura minimiza los
niveles base, permitiendo a los inves-
2,6-dinitrotolueno <0,025 4-nitrofenol <0,025
tigadores obtener resultados de alta
Di-n-octylflalato <0,025 Pentaclorofenol <0,025
sensibilidad en los análisis de trazas.
Fluoranteno <0,025 Fenol <0,025
Por ejemplo, mediante HPLC (véase
Fluoreno <0,025 2,4,5-triclorofenol <0,025 Figura 2) (Referencia A) o mediante
Hexaclorobenceno <0,025 <0,025 cromatografía iónica (IC) (véase Fi-
Tabla 3. Compuestos semivolátiles mediante desorción térmica GC-MS. gura 3).
técnicas de LABORATORIO 3 Nº 364 SEPTIEMBRE 2011
agua ultrapura
Figura 1. Los efectos de las impurezas del agua con técnica de Figura 2. Mejoras en la base de HPLC con detección UV a 210
cromatografía de iones: (a) efectos sobre el sistema y (b) el mm con agua ultrapura con un COT muy bajo.
impacto potencial en resultados experimentales. El tamaño de
la caja indica la importancia del impacto (cualitativa).
Cómo mantener la pureza del agua
Los investigadores que necesiten agua ultrapura debe tener en
cuenta que la pureza del agua puede verse comprometida si
el equipo de producción se utiliza incorrectamente o si el agua
se manipula de forma inadecuada durante su recogida y uso.
Es vital que el sistema de producción de agua ultrapura dispon-
ga de un depósito de almacenamiento de agua, ya que así se
podrá mantener su calidad de forma constante. Esto es posible
si el equipo dispone de un filtro de venteo, se hace recircular el
agua de forma periódica utilizando tecnologías de purificación,
como la fotooxidación UV, la adsorción y el intercambio iónico,
y además se realizan sanitizaciones periódicas del equipo para Figura 3. Análisis de ultratrazas de cationes con preconcentra-
minimizar el crecimiento bacteriano (referencia B). ción de muestras de 20 ml.
Habitualmente, en un laboratorio el agua ultrapura se obtiene de La alta conductancia de los iones de hidrógeno del ácido per-
un equipo de purificación (como el equipo PureLab flex) y se al- mite que esta reacción se alcance con una concentración de
macena en un depósito. En cuestión de segundos el agua empie- CO2 de tan solo 0,5 mg/l. Aunque el dióxido de carbono no
za a absorber el dióxido de carbono del aire, formando ácido car- afecta a la calidad del agua en la mayor parte de las aplicacio-
bónico y reduciendo la resistividad del agua de 18,2 MOhm·cm nes, su efecto sobre la resistividad puede enmascarar la conta-
a un mínimo de alrededor de 1,3 MOhm·cm (véase Gráfico 4). minación del agua por otros iones.
técnicas de LABORATORIO 4 Nº 364 SEPTIEMBRE 2011
agua ultrapura
Figura 4. Efectos de la exposición al aire en la resistividad del agua ultrapura.
El mayor riesgo de contaminación del agua se produce en su A la hora de dispensar el agua, también es importante re-
distribución. Así, por ejemplo, si fijamos un tubo de plástico al ducir al mínimo el contacto del agua con el aire, ya que
punto de uso de dispensación de un equipo de producción de las impurezas del aire también pueden afectar su pureza.
agua para llenar recipientes u otros envases de gran tamaño de La Figura 6 (referencia C) compara la contaminación de la
forma fácil y cómoda, estaremos causando la contaminación de atmósfera entre las muestras de agua recogida con salpi-
esa agua. cadura (menor traza a) y sin salpicadura (mayor traza b).
El análisis por cromatografía iónica demostró que los iones
En la Figura 5 se puede apreciar cómo agentes orgánicos negativos, especialmente los iones nitrito, se detectaron en
o plastificantes procedentes de la tubería pueden pasar al concentraciones más altas cuando la recogida de la muestra
agua: análisis mediante GC-MS muestran que el agua ul- se hizo con salpicaduras.
trapura que pasa a través de la tubería flexible de PVC
puede estar contaminada con plastificante N-butil sulfo- Para garantizar al máximo su pureza, el agua ultrapura debe
namidas. utilizarse lo más rápidamente posible tras su dispensación. Tras
una encuesta sobre el uso frascos lavadores, Kuroki (referencia
Una encuesta llevada a cabo entre usuarios de agua purificada D) concluyó que más del 80% de los usuarios no rellenaban
de una compañía farmacéutica demostró que el promedio de diariamente sus botellas con agua ultrapura. Por otro lado,
recuento total de bacterias viables (TVC) en un agua obteni- los resultados de Horikiri (referencia E) también demostraron
da de 22 equipos purificadores sin tuberías instaladas fue de que para almacenar agua es preferible el uso de botellas de
0,7 UFC/ml, mientras que esta cifra ascendió a 26 UFC/ml para vidrio a las de plástico. Después de dos días de almacenamien-
7 equipos purificadores que sí tenían instalada una tubería adi- to en cada tipo de depósito, el análisis de agua ultrapura por
cional sobre el dispensador. LC-MS mostró, entre otras impurezas, que el di-n-octil ftalato
Figura 5. GC-MS de agua ultrapura: efecto del plastificante en la tubería.
técnicas de LABORATORIO 5 Nº 364 SEPTIEMBRE 2011
agua ultrapura
Figura 6. Ejemplos de contaminación por éster ftalatos en frascos lavadores (3).
Figura 7. Ejemplo de cromatografía iónica (aniones) de la contaminación atmosférica debido a las diferencias en el método de reco-
gida de agua: (a) con salpicaduras y (b) sin salpicaduras.
estuvo presente en ambos recipientes, pero a niveles de ppb Referencias
menores en el caso de la botella de vidrio (véase Figura 7). La
inferior traza proviene del agua ultrapura inyectada con una A. Suzuki, Kawaguchi, Enami and Kuroki: Abstract of Procee-
solución mixta estándar de seis tipos de ésteres de ftalatos. dings of 15th Environmental Chemistry Forum, 2006, 182-
Estos mismos problemas de contaminación se pueden producir 183. (3)
si el agua purificada para la realización el análisis de alta sensi- B. Clinical and Laboratory Standards Institute. Preparation and
bilidad se almacena y reutiliza con posterioridad a la apertura Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory; Appro-
de las mismas. ved Guideline-Fourth Edition. CLSI document C3-A4 (2006)
C. Kuroki: Chromatography, 27(3), 125-9 (2006)
D. Kuroki: Industrial Water, 2003, 541, 24-30. (2)
Conclusiones E. Horikiri S., Fujita N., Kuroki Y. and Enami T. Abstracts of
Proceedings of 54th Mass Spectrometry Analysis General
La utilización de agua ultrapura para la realización de análisis Forum, 2006, 458-459.
de alta sensibilidad garantiza a los investigadores la obtención
de resultados precisos. Esta precisión analítica depende, sin Todos los datos experimentales no documentados proceden de
embargo, del uso de un sistema de purificación de agua bien las instalaciones de I+D de ELGA, Lane End (UK).
diseñado para mantener y monitorizar la pureza del agua den-
tro del sistema, que disponga de un sistema de dispensación [Link]
fácil de usar y de la adecuada recogida y uso del agua. [Link]
técnicas de LABORATORIO 6 Nº 364 SEPTIEMBRE 2011
