Modelos de estudio
❖ Factores necesarios para tener buenos modelos de estudios
- Reproducción rápida
- Ciclo de vida corto
- Descendientes en grandes cantidades
*Generalmente se utilizan ratones
*Modelo más conocido: Escherichia coli
❖ Levadura
Es un hongo, se reproduce rápidamente por mitosis y no necesita tanto oxígeno, puede
trabajar de forma anaeróbica
❖ Arsbidopsisthaliana
Es un modelo celular vegetal, se cultiva de forma hidropónica y su regeneración es muy rápida
Su ciclo vital es corto (8-10 semanas)
Célula vegetal
No necesita mucha luz, es un modelo celular vegetal interesante
❖ Caernorhabditis
Es una célula animal, su ciclo de vida corto de unos pocos días, es capaz de mantenerse en el
ambiente
Se sabe la cantidad de células que tiene un organismo adulto, por lo tanto, también se sabe
cómo se desarrollan sus células
❖ Drosophila melanogaster
Es una mosca de la fruta, se usan para modelos genéticos, ya que sus cromosomas y glándulas
salivales crecen y se van uniendo.
Su ciclo de vida es corto, generalmente de 9 días.
Son fáciles de atrapar y mantener con vida.
Muestran mutaciones rápidamente.
❖ Danio rerio
Conocido como pez cebra, se utiliza para el estudio de vertebrados, es fácil de cultivar, posee
un ciclo de vida corto
❖ Mus musculus
Ratón de laboratorio.
Genoma muy parecido al del ser humano
❖ Métodos de estudio de la célula (cap 8,9)
Microscopio óptico (MO)
Al microscopio entran rayos luminosos, si no entra esta luz no podemos ver bien
Partes:
Fuente de luz; Se emite la luz visible
Lente condensadora; es una lente que condensa los rayos que emite la ampolleta
Muestra; tejido que se utiliza para el estudio
Lente objetivo; Es el que mira la muestra, suele aumentar la imagen 100 veces
Rayos luminosos; Golpean a la muestra y se refleja en el lente objetivo. Aumenta e invierte la
imagen (se muestra al revés).
Si tengo un lente objetivo malo la resolución del espejo va a bajar
Lente ocular; Por donde se mira. Vuelve a aumentar la imagen 10 veces.
Preparación de las muestras para MO
Para que la muestra sirva necesitamos que los rayos pasen por el objeto.
Las muestras biológicas son muy grandes, tienen poca pigmentación y son muy blandas
Para poder observar un tejido necesita tener una preparación.
2 tipos de métodos:
- EXAMEN INMEDIATO O AL ESTADO FRESCO (frotis)
Se pone la muestra y se esparce en un vidrio, debe ser observado rápido ya que se pierde muestra
ya que las células al cambiar su ambiente comienzan a entrar en proceso de necrosis
- EXAMEN MEDIATO (Técnica citológica)
A diferencia del inmediato se permite mantener la muestra, ya que se hace un
preparado para así conservar las células.
El tejido se corta muy pequeño, para poder mantener la célula necesitamos:
FIJACIÓN; para que la célula no se muera ponemos un fijador (normalmente es la
normalina 10%)
INCLUSIÓN; La muestra ya fijada se incluye a la parafina, esta se mantiene ya que a
temperatura ambiente sigue sólida.
CORTE; El micrótomo se encorta de cortar muy fino el tejido, tiene un brazo donde
afirma la muestra mientras es cortada por la cuchilla.
MONTAJE; Donde se pone en el porta objeto para ser estudiado.
TINCIÓN; La muestra se tiñe con colorantes vegetales
TIPOS DE MICROSCOPIOS OPTICOS
Microscopio de fluorescencia
• Se genera para poder mirar en que lugar de la célula encontrábamos proteínas.
• Los fluorocromos son puestos dentro de las células.
• A la muestra se le “inserta” un fluorocromo para que se refleje cuando se emita la luz
• La luz entra con sus colores separados (longitudes de onda), después ésta choca con un
filtro, el cuál absorbe los colores, menos el color del fluorocromo que se le agregó
• El rayo de luz llega a un espejo y devuelve la longitud de onda que queremos observar
hacia la muestra, haciendo que el fluorocromo se exite y emita el color del fluorocromo
que pusimos. Sube así por el lente objetivo, y así observamos cada parte de la célula
.
FLUOROCROMOS
Un fluorocromo es una molécula capaz de absorber fotones y emitir fotones de menor energía
(mayor longitud de onda).
Un fluoruro es la parte del fluorocromo responsable de la emisión de la fluorescencia.
EJEMPLO: Célula ptk2
Se coloca a la muestra en cultivo dos florocromos uno fluoresceína (verde) y el DAPI (azul) en el
núcleo
El fluorocromo se inserta en el anticuerpo y este va a ir a unirse a una proteína especifica
DESVENTAJAS DEL MICROSCOPIO: No se ven los limites de la célula, solo se ve lo fluorecido.
Microscopio de barrido confocal
Se utiliza un láser, que va “cortando” la célula y separándola en
VENTAJA DEL LASER: El láser toma cada parte de la célula y comienza a “dibujarla”, esto permite
formar células tridimensionales
Puedo ver cultivos in vivo, pero al momento de que el láser lo examina muere, por lo que el
experimento puede realizarse una vez con cada célula (desventaja)
Microscopio de contraste de fase
Se pueden ver células in vivo
Se utiliza para ver cultivos celulares
Las células no se tiñen
Se coloca antes del lente condensador un diagrama angular
para que los rayos se concentren mucho más, luego estos
rayos entran en a muestra y permiten ver.
Otra modificación es la placa de fase, la cual se encarga de
que el ojo humano pueda ver los distintos tipos de grises
en la célula (parte más densa y menos densa)
Microscopia electrónica
TIPOS DE MICROSCOPIOS
ELECTRÓNICOS
Microscopio electrónico de transmisión (MET)
Muestra el interior de la célula.
En vez de luz se utilizan electrones. En la parte de arriba
hay un cátodo que emite electrones en donde viajan por
un tubo hasta proyectar la muestra. Los electrones
bombardean rápidamente a la muestra, luego lo
proyectan. Al ser bombardeado la muestra muere y solo
se muestra la foto.
Técnica para MET
Se utiliza cortes muchos más delgados (el ojo humano no los puede ver)
Se trabaja con un recipiente de agua destilada
Quien hace el corte es un diamante
Citrato de plomo y el de uranilo, ambos cancerígenos, con eso se hace un
contraste a la muestra
Veremos la muestra en blanco y negro
Si no lo ponemos, la muestra se ve blanca
Luego se observan en la reja metálica
Microscopio electrónico de barrido
No hay cortes
Hace lo mismo que el confocal, comienzan los electrones a
pasar de un lado a otro para formar la imagen
RESUMEN Y DIFERENCIAS
MO Y MET
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