STAPHYLOCOCCUS

Ya la otra clase mencionamos que había 3 formas base

 Cocos
 En dúo: diplococo
 Dos planos en cadenas: streptococcus
 Tres planos: Staphylococcus
 Bacilos
 Espirilos

INTRODUCCION

 Familia: Micrococcaceae
 Morfología: cocos gram + con múltiples planos de divisiones
 Características
 Inmóviles no tienen flagelos
 Anaerobios facultativos significa que crece tanto como en presencia como en
ausencia de oxigeno
 Fermentadores de glucosa
Catalasa +: es una prueba que nosotros vamos a
utilizar para poder distinguir a los cocos gram +
ya que hay dos tipos de cocos gram + los
stretococcus y los staphylococcus y esta prueba
nos va a permitir distinguirlas dando + para uno
y – para el otro. La vamos a realizar en la práctica
y necesitaremos peróxido de hidrógeno que
viene a ser el sustrato y colocamos el peróxido
de hidrogeno en una lámina 2 o 3 gotitas, luego cogemos una muestra
problema y la sumergimos; lo que va a contener el staphylococcus es la
catalasa y lo que va a hidrolizar es el peróxido de hidrogeno (H2O2) lo va a
partir liberando oxigeno y agua y es lo que se ve como una efervescencia. En
cambio, los estreptococos son catalasa negativos
 Desarrollo: medios con NaCl 10% en medios hipersalinos, esa es una
característica de los estafilococos que crecen en medios
saturados de sal con el agar manitol salado, es un
medio que va a contener buena cantidad de sal en un
10% y este viene a ser el inhibidor para otros
microorganismos porque el resto de los
microorganismos no van a poder tolerar esa
concentración de Sal ya parte tienen un indicador que
le da esa coloración rosada

 Temperatura: 18-40°C porque son microorganismos mesófilos y su

temperatura optima va a ser de 35 a 37°C

IMPORTANCIA CLINICA

Los estafilococos de importancia clínica los vamos a subdividir en dos grupos los coagulasa
positivo y coagulasa negativo. La coagulasa es otra prueba que se realiza en el laboratorio, va
haber unos microrganismo que van a reaccionar con esta prueba que son la gran mayoría
Staphylococcus y solamente uno va a dar positivo es el Staphylococcus Aureus, en el ambiente
hospitalario se escucha bastante de este microrganismo porque esta teniendo una alta
prevalencia en lo que son cuadros infecciosos y sobre todo el que más importancia tiene es el
que es multidrogo resistente que viene a ser el Staphylococcus Aureus Meticilino Resistente
(MRESA).

En los coagulasa negativa hay bastantes especies, pero los más prevalentes son Staphylococcus
epidermidis, Staphylococcus saprophyticcus y Staphylococcus haemolyticus sobre todo el
epidermidis este forma parte de nuestra flora en la piel hasta hace años no tenia mucha
importancia ahora si porque tenemos nuevas patologías como el SIDA, pacientes trasplantados
que su sistema inmune esta suprimido y de esta manera los coagulasa negativo están
adquiriendo importancia porque están adquiriendo importancia de ser amigables con nuestra
flora están pasando a ser oportunistas y a producir infecciones ya sea a nivel de la piel o de la
garganta o a nivel de otros aparatos como a nivel de sangre para producir una septicemia.

Staphylococcus aureus Coagulasa positiva

Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticcus Coagulasa negativa
Staphylococcus haemolyticus

CUADROS CLINICOS

 Síndrome de la piel escaldada principalmente lo provoca el Staphylococcus aureus

como nos dijo la gran mayoría de las patologías era producida por el Staphylococcus
aureus
 Foliculitis-impetigo donde vemos lesiones bien blanquecinas llenas de plasma y suero y
cuando se revientan estas ampollas van a votar todo este exudado cuando se seuqe
van a constituir costras de color miel por ello hablamos de costras mielisericas y eso es
característicos de lesiones por Staphylococcus.
 Neumonía
 Osteomelitis
 Pioartritis infección en las articulaciones
 Meningitis infecciones del sistema nervioso periférico y central
 Sepsis
 Intoxicación alimentaria

CULTIVO

Características a nivel del:

Agar Sangre:

vamos a cultivar estos microrganismos a 37°C por 24 horas y vamos a evidenciar que sus
colonias de regular tamaño pueden ser un poco grandes, son redondas, convexas, pero aparte
tienen una característica en lo que es la pigmentación el Staphylococcus aureus va a tener un
pigmento carotenoide y este pigmento le va a dar una característica de color amarillo oro de
ahí viene su denominación aureus de oro. En cambio, los otros Staphylococcus, los coagulasa
negativo, no van a tener esta pigmentación o son de color blanco o son de color gris.
Otra característica del Staphylococcus aureus es que va a producir B hemolisis, el agar sangre
es un medio enriquecido porque tiene factores de crecimiento y nutrientes va a permitir el
crecimiento de una gran variedad de microrganismos no exigentes, pero también es un medio
diferencial porque permite diferenciar los tipos de hemolisis:

o La completa mas conocida como Beta hemolisis

o La parcial o incompleta conocida como alfa hemolisis
o La ausente conocida como la gamma hemolisis

Este microorganismo va a producir la beta hemolisis es decir una hemolisis completa lo va a

reventar todos los hematíes que están contenidos en nuestro agar sangre y pudiendo
visualizar alrededor de las colonias un pequeño halo blanco a diferencia del color rojo del agar.

En un microorganismo microaerófilo crece en concentraciones de CO2 del 10-12% para

conseguir este ambiente hay unas jarras microbiológicas en donde colocamos el medio que
hemos cultivado de sospecha de Staphylococcus y lo introducimos dentro de la jarra y
colocamos encima de la placa Petri una velita de cera blanca y no de cera roja porque emite
gases tóxicos para el microrganismo, con la velita dentro cerramos la jarra con seguro
herméticamente. La vela se va a apagar porque va a consumir el oxígeno que hay adentro y de
esta manera va a crear CO2 asi se crea un ambiente microaerófilo. Crece mucho mejor tanto
los Staphylococcus como los Streptococcus

DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
 Orina
Piel
Contaminada S. Faringea
Esputo
Muestra
LCR
No Contaminada Sangre
Liquidos Biologicos

Líquidos biológicos como el liquido peritoneal, pericárdico, pleural, etc. Estos tipos de muestra
los vamos a cultivar para el allanamiento del Staphylococcus.

AISLAMIENTO DEL STAPHYLOCOCCUS

Para el aislamiento vamos a utilizar:

 Medio enriquecido: Agar Sangre crecerá de todo

 Medio selectivo: Agar manitol salado solo va a permitir el desarrollo de
Staphylococcus y el mas usado en el medio
 Otro Medio: Agar Chapman

Vamos a sacar la muestra en estos medios y lo vamos a incubar a 37°C por 24 horas y vamos a
observar en el agar selectivo si las colonias con convexas, lisas, redondas, brillantes, blancas
pudiendo ser los Staphylococcus coagulasa negativo o amarillas pudiendo ser los
Staphylococcus coagulasa positivo, 2-3 mm

También vamos a ver que el agar manitol salado también es un medio diferencial porque en
este medio vamos a diferencias dos tipos de Staphylococcus coagulasa positivo y los coagulasa
negativo porque van a fermentar el manitol, se explicara más adelante.

Una vez que crecen estas colonias en nuestro medio hacemos las pruebas diferenciales:

 Catalasa sirve para diferenciar cocos gram + (Staphylococcus o Streptococcus)

 DNAasa
 Fermentación manitol la vamos a observar en el agar manitol salado
 Hemolisis la vamos a observar en el agar sangre donde principalmente el
Staphylococcus va a producir beta hemolisis
 Coagulasa
 Diferenciación Antibiótica

Vamos a utilizar el agar manitol saldado cultivando nuestra muestra problema y lo que
tenemos que observar es:

1. La presencia de colonias que me indica que está creciendo Staphylococcus

2. La fermentación del manitol que se evidencia con un cambio de color.

De lo que el medio es rosado por su indicador, si este Staphylococcus va a fermentar el

manitol, lo mismo que sucede cuando un azúcar se fermenta el ph cambia, y al cambiar el ph el
indicador cambia de color. El indicador es una sustancia química que va a variar de color de
acuerdo con el ph donde se encuentra en otras palabras el indicador me va a indicar un
cambio de ph. De lo que el medio era rosadito va a cambiar a un color amarillo y eso me indica
que es una reacción manitol positiva. si permanece rosado evidenciando un crecimiento de
colonias el medio no ha cambiado siendo una reacción manitol negativa.

Este es el agar manitol salado y se observa los dos tipos de Staphylococcus, el de color amarillo
viene a ser reacción manitol positiva y la colonia es de color oro y el de color rosado es una
reacción manitol negativa y la colonia es de color gris.

Si es una reacción manitol positiva ósea que el medio se tornó

de color amarillo debo suponer que se trata de un
Staphylococcus coagulasa positivo entonces para definir si es
coagulasa positivo tengo que hacer la prueba de la coagulasa
ya sea en lamina o en tubo ya que este Staphylococcus aureus
puede tener estos dos tipos de formas de la enzima ya sea en
forma libre o fija en su pared celular si esta fija a su pared
celular permite formar cadenas y eso lo evidencio poniendo
plasma en una lamina con EDTA y emulsifico una colonia problema y voy observando en la
lamina porque va haber una agregación si observo eso quiere decir que es una prueba en
lamina coagulasa positiva y se trata de n Staphylococcus aureus y si sale negativa paso a la
prueba coagulasa en tubo

La prueba coagulasa en tubo se hace colocando una muestra volumen a volumen con plasma
EDTA y con caldo BHI (caldo infusión cerebro corazón con siglas en ingles) y cojo una colonia
problema y la emulsifico en esa solución y lo incubo a 37°C por 24 horas cundo haya terminado
tenemos que observar si se formo coagulo.

El plasma es líquido y no se utiliza suero debido a, no es lo mimo que suero y plasma la

diferencia es que para conseguir suero se extrae la sangre y se coloca en un tubo seco que no
contenga nada por ende la sangre se va a coagular luego de ello se centrifuga y todos los
elementos formes de la sangre se van a ir al fondo y me va a quedar un sobrenadante que
viene a ser el suero es decir el elemento liquido de la sangre pero sin factores de coagulación
porque se ha coagulado es decir que ya se consumieron; en cambio el plasma se obtiene
extrayendo la sangre pero en un tubo que contenga un anticoagulante, ahora hay distintos
anticoagulantes esta la heparina, el citato de sodio, EDTA, y el que esta protocolizado para la
prueba de coagulasa es el EDTA, nosotros hemos utilizado plasma citratado porque utilizamos
la sangre que nos dio el banco de sangre que ya viene con citrato, no se utiliza el citrato
porque hay otro microrganismos que pueden producir pruebas coagulasa positiva pero en
plasma con citrato de sodio. El único que va a producir el coagulo de fibrina en plasma con
EDTA es el Staphylococcus Aureus. Si no se forma el coagulo quiere decir que son los
Staphylococcus coagulasa negativo.
DIFERENCIACION ANTIBIOTICA

Entre las bacterias esta lo que se llama la resistencia intrínseca y la resistencia extrínseca

 La resistencia intrínseca es aquel tipo de resistencia a antibióticos con el cual la

bacteria nace es propio de la bacteria y por esa propiedad es que nosotros la
utilizamos par poder identificarla
 La resistencia extrínseca es aquella que la bacteria la obtiene por exposición a un
antibiótico

ANTIBIOTICO RESISTENCIA SENSIBILIDAD

Bacitracina 0.04 U Staphylococcus SBHA micrococcus
Neomicina 30 Ug SBH Staphylococcus
Novobiocina o ac nalidixico Staphylococcus saprophyticus -

Los antibióticos que vamos a utilizar para identificar a los Staphylococcus son Bacitracina 0.04
U, Neomicina 30 Ug y Novobiocina o ac nalidixico.

SBHA: Staphylococcus betahemolítico del grupo A

La novobiocina nos va a poder ayudar a identificar al Staphylococcus saprophyticus porque va

a ser el único Staphylococcus resistente a estos antibióticos el resto de Staphylococcus son
sensibles. Este Staphylococcus saprophyticus lo vamos a observar generalmente en el tracto
urinario en personas con actividad sexual.

TRATAMIENTO

Hay distintos antibióticos

 Macrólidos entre ellos están la azitromicina, eritromicina

 Clindamicina que están el grupo de las glicosamidas
 Aminoglucósidos dentro de ellos están Estreptomicina, Neomicina, Gentamicina, etc
 Oxacilina que esta dentro de los beta lactamicos
 Tetraciclina
 Dicloxacilina que está dentro de los beta lactamicos
 Glucopéptidos su representante es la vancomicina

DESARROLLO DE LA PRACTICA

En esa clase también vamos a ver lo que es la lectura de sus colonias, en la siembra se va a
observar un montón de microrganismos, pero se va a ver que algunos son similares. Se tiene
que observar que tipos de colonias hay y sus características propias. Esto tiene que ir en el
informe, tiene que ir la coloración de gram y seguido con la foto de la siembra.
Acá vemos que ha habido reacción manitol +, por ello le haremos la prueba de la coagulasa.

En la prueba de Ana apareció pseudomona con olor a fruto o cuando remojan chuño

En la pruebo de Jorge apareció enterobacterias puede ser un portador

En la prueba de Claudia apareció enterobacterias para aislar tengo que cultivar en un medio
selectivo de gram –

En la prueba de Valeria se ve la batería grande y mucosa corresponde a enterobacteria.

Se va a ver el agar Chapman, el agar muller Hilton y el agar sangre.

Lo que se busca en una siembra se busca aislar el cultivo ya para el quinto trazo ya puedo tener
una siembra pura y solamente de un solo microrganismo para que no haya error en las
posibles pruebas de diferenciación y caracterización posteriores.

Las colonias tienen una pigmentación amarilla, redondas, grandes, brillntes de bordes enteros
de bordes convexos y se tiene que ver la beta hemolisis, se puede ver el halo. En los
Staphylococcus aureus también se le caracteriza por el olor a queso.

En la siembra se puede ver la diferencia entre Staphylococcus aureus y epidermidis; el aureus

sus colonias son grandes y amarillas y el epidermidis son pequeñas y de color gris y aparte se
ve en la hemolisis el aureus produce beta hemolisis y el epidermidis gamma hemolisis.

El agar Chapman es un medio selectivo para Staphylococcus las colonias son amarillas y de
color a queso.

Se ve una prueba taxonómica y se le puesto un disco de novobiocina y lo que se ve que

alrededor del disco ha crecido y eso quiere decir sensibilidad, ya que el único resistente es el
Staphylococcus saprofiticus

El agar de Müller Hilton también es para ver sensibilidad, el antibiograma se realiza cogiendo
una muestra de la colonia problema posteriormente se disuelve en agua destilada en un tubo
de ensayo estéril observando una turbidez de 0.5 de de mcfarland, En microbiología, los
estándares de turbidez de McFarland se usan como referencia en suspensiones bacteriológicas
para saber que el número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una escala que
va de 0.5 a 10. Estos estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1%
con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, es decir entre limpio y turbio
generalmente turbio posterior a ello se coge un hisopo estéril se embebe y se exprime dentro
del tubo y se siembra en tres direcciones de manera uniforme, acá ya no se busca aislamiento,
sino que crezca uniformemente para los discos de antibiótico.

Una vez ya sembrado con el hisopo se coloca los disco de antibiótico, cada disco es un
antibiótico diferente, lo que pasa es que cuando se coloca el disco este se humedece y ha
comienza a liberar el antibiótico de más a menos, si no crece alrededor quiere decir que ha
matado al microorganismo entonces es sensible a este antibiótico (neoX que viene a ser la
Dicloxacilina), pero en otros si ha crecido eso significa que es resistente (en el SAMP que es la
ampicilina con el sulfactan y con él cloranfenicol) hay tablas donde se mira el antibiótico sus
siglas y las medidas, se mide el diámetro y no el radio y posterior a ello se observa en la tabla
para que nos diga de tal rango a tal rango sensible, intermedio o resistente.

En el agar manitol salado el medio se ha conservado, pero donde ha crecido el Staphylococcus

se ha tornado de un color amarillo siendo una reacción manitol positiva mas que las colonias
son amarillas y hay un olor a queso esto me indicaría que es un Staphylococcus coagulasa + y
lo que queda es hacer la prueba de la coagulasa para confirmarlo que es un Staphylococcus
Aureus.

En la reacción de coagulasa se mezclo volumen a volumen el plasma con el caldo cerebro-

corazón y se evidenció una prueba positiva.