BLAD (Bovine leuckocyte adhesion deficiency)
¿Qué es?
Es una granulocitopatia bovina que se caracteriza por un aumento en la susceptibilidad de
agentes infecciosos en el animal durante los dos años de vida del mismo con una función
alterada de los neutrófilos donde se presenta una alta neutrofilia además es incapaz de de
iniciar una respuesta [Link] la base molecular de esta granulocitopatia
bovina como una deficiencia en el complejo de glicoproteínas Mac-1 (CD11b/CD18)
(Acosta A. & Odalys U,2009).
Fue descrita por primera vez por Hagemoser en 1983 en EEUU en una vaca Holstein
Friesian. Es una enfermedad hereditaria que afecta principalmente a los terneros de la
raza Holstein Friesian, raza lechera más productiva, por lo que se considera que es una
enfermedad que ha afectado la economía mundial en el área del agro. (Felez, 2006). Es
una enfermedad autosómica recesiva en la cual los animales homocigotas recesivos
mueren a los pocos meses de nacer (2 a 8 meses) con una sintomatología clínica
inespecífica. Al nacimiento los terneros afectados son aparentemente sanos pero a las
pocas semanas comienzan síntomas de: fiebre alta, diarrea crónica, falta de cicatrización
de heridas, gingivitis e infecciones generalizadas. Estas terminan con la muerte del
animal, no respondiendo a terapia antibiótica.(Llambi, 2005). BLAD es una enfermedad
caracterizada por una disminución de la expresión de las moléculas de adhesión en los
neutrófilos, denominados integrinas β (un complejo del CD11/CD18 familia de proteínas
que son estructuralmente y funcionalmente relacionada con glucoproteínas). La base
molecular de BLAD es un único punto, que reemplaza a la guanina adenina en la posición
383 del gen CD18 que cambia los aminoácidos , ácido aspártico de glicina en el
aminoácido en posición 128 de la proteína funcional ( Kotikalapudi, et al 2017).
Existen tres tipos de este padecimiento: Tipo-I, tipo-II y tipo-III.
Tipo-I, Está estimulado por un defecto en el gen ITGB2, el cual está encargado de
codificar beta-2-integrina, CD18, proteína fundamental para la adhesión de los
leucocitos en endotelio. Este tipo afecta a uno en un millón.
Tipo-II, está provocado por alteraciones en el gen SLC35C1 que es el encargado
de codificar para el transportador guanosina 5-difosfato fructosa, el cual está
ubicado en el aparato de Golgi. Esta enfermedad es muy rara, puesto que se han
detectado menos de 10 casos hasta el momento.
Tipo-III, se origina por mutaciones en el gen FERMT3, el que codifica para la
kindlin-3 en las células hematopoyéticas. Estas modificaciones alteran la
activación de todas las beta-integrinas. Este tipo es muy extraño.
El tipo I de esta enfermedad es el que afecta a los bovinos en el cual causa la muerte
prematura de estos, ocurriendo entre los 2 y 8 meses de edad y también existiendo
algunos casos en caninos (CLAD) (Oberreuter, 2009).
Síntomas
Los síntomas se manifiestan alrededor de los siete días después de que el animal ha
nacido y se presentan con anorexia, caquexia y retrasos del crecimiento. Otros síntomas y
lesiones que se presentan, son:
Infecciones bacterianas continuas y fiebre elevada
Infecciones recurrentes en tejidos blandos como estomatitis granulomatosa y
ulcerativa, enteritis, neumonitis, periodontitis.
cicatrización defectuosa
muerte antes de alcanzar la madurez sexual
linfocitosis moderada y neutrófilos funcionalmente anormales en cuanto a
motilidad, fagocitosis y capacidad oxidativa
Dermatitis, úlceras de decúbito y alopecias
Neutrofilia progresiva y muy temprana en el curso de enfermedad
Neumonía crónica
Hipertrofia de los ganglios linfáticos superficiales
Úlceras e inflamaciones granulomatosas de las membranas mucosas, orales y
gingivitis
Diarrea crónica recurrente
Después de que se presentan estos signos y síntomas, hay muerte alrededor de las siete
semanas. Sin embargo, existen casos en los que los animales logran sobrevivir por unos
meses más.
Una vez el animal haya muerto se debe realizar una necropsia. En las ya se han realizado
se ha podido observar lo siguiente:
Pielonefritis granulomatosa
serositis en rumen
mucosa necrosada en íleon, con hiperplasia de folículos linfoides e infiltración de
células plasmáticas, linfocitos y macrofagos.
Edema en las áreas paracorticales
Ausencia de neutrófilos en la lámina propia de tejidos inflamados
Macrofagos con estructuras citoplasmáticas con restos bacterianos
entre otras.
(Felez, 2006)
Genética: Se conoce la secuencia de gen normal que codifica la subunidad b de las
integrinas de la proteína bovina CD18 y se ha identificado el alelo bovino CD18
[Link] trata de dos mutaciones puntuales en el alelo que codifica el CD18 en
bovinos. una mutación es silenciosa en la que reemplaza una citocina con una timina en
el nucleótido 775 y la otra se reemplaza una adenina con una guanina en el nucleótido
383 lo cual comprende el cambio del aminoácido 128 (Hemati B, e at 2014) en el cual hay
cambio de ácido aspártico por glicina, lo que corresponde a la región extracelular, la
mutación afecta la función de un receptor de proteínas en los leucocitos, lo que incide en
la respuesta inflamatoria y en la defensa de organismos contra infecciones (Acosta A. &
Odalys U,2009).
Cuando se produce una infección o lesión en algún tejido del organismos; La primera
respuesta es la inflamación que ayuda a combatir el agente causante de esto y a reparar
los tejidos. Se debe producir vasodilatación con aumento de la permeabilidad capilar para
que el tejido pueda recibir sustancias que contengan grandes cantidades de
complemento, inmunoglobulinas y diferentes proteínas séricas. Así mismo se debe dar
una coagulación local en donde las células endoteliales expresan moléculas para
desencadenar la cascada enzimática de coagulación para que los capilares se cierran.
Esto se da con el propósito de evitar que el agente extraño se expanda por todo el
organismo (Jiménez, 2007).
Al momento de adquirir una infección, los leucocitos deben ser atraídos al tejido afectado
para combatir los microorganismos extraños. Estos leucocitos se atraen por medio de
moléculas que se encuentran en las paredes de los vasos sanguíneos de la zona que
está siendo afectada. Cuando llegan a la zona afectada, los leucocitos usan uno de esos
receptores para adherirse a las moléculas, fijarse y poder atravesar la pared de los vasos
sanguíneos para poder llegar al tejido. La mutación que se dan en BLAD modifica esos
receptores de los leucocitos, por lo que pierden la capacidad de fijarse a las paredes de
los vasos sanguíneos, lo que les impide llegar al tejido afectado. Esto lleva a que los
bovinos que están afectados por esta enfermedad no puedan combatir de manera
adecuada las enfermedades bacterianas que se consideran comunes, por lo que estas
persisten o recurren en el animal (Ricardo Felmer D., 2001). El endotelio produce
moléculas de adhesión celular, esto hace que aumente la capacidad de los leucocitos
polimorfonucleados (fundamentalmente neutrófilos) y de los monocitos para adherirse a
dicho endotelio lo que lleva a que se forme una extravasación (paso al tejido inflamado).
Una vez fuera del vaso las células fagociticas migran bajo el estímulo de las citoquinas
quimioatrayentes hasta que lleguen al foco de la infección, la extravasación ocurre en
cuatro fases: Fase de rodamiento, adhesión más fuerte, diapedesis y migración del
leucocito fagocitico hasta el lugar. (Canizal, 2015)
Diagnóstico
El diagnóstico de esta enfermedad generalmente se realiza basándose en la secuencia
del ADNc del gen C18 del bovino y comúnmente utilizando oligonucleicos y cebadores. (5
´-GTCAGGCAGTT GCGTTCAA-3´) y (5´-GAGGTCATCCACCATcG AGT-3´). en este
último se presenta un cambio en una base, lo cual introduce en el producto de
amplificación un nuevo sitio en la restricción para la enzima Tap1, con lo cual se puede
obtener 101pb de dicho gen, también otro autores también describen la digestión de este
mismo fragmento con la enzima Hae III que permite identificar el genotipo del ganado en
el locus determinado así como el diagnóstico de aquellos animales enfermos o portadores
de este defecto hereditario (Acosta A. & Odalys U,2009)
Se realiza la técnica de PCR (Reacción en cadena de la polimerasa) adicionando
digestión con enzimas de restricción (RFLP), el objetivo de esta técnica es identificar el
genotipo del ganado en el locus determinado.
Inicialmente se toma la muestra, sea esta de sangre, semen o leche, dependiendo del
estado del animal y se extrae la muestra de ADN, para el caso de la sangre se usa alguno
de los siguientes métodos: Método “Standard” que se basa en diferentes centrifugados y
agitaciones con el fin de aislar los leucocitos y dañen su membrana para poder extraer el
ADN ó la método “rápido” donde se realizan lavados con tampón N.E seguidos de un
centrifugado y posteriormente se dirige el precipitado con alcohol y se conserva a bajas
temperaturas. Para el caso del semen se extrae por los siguientes métodos: “Standard”
que es similar al anterior con la diferencia de que se trabaja con tubos con paredes de
silicona, el método “rápido” A donde la muestra se lava y se efectúa un proceso de
centrifugado con NaCl y después se suspende en una solución de NaOH y
DITHIOTREITOL para finalmente ser sometida a 100ºC por 10 minutos y por último se
puede utilizar el método “rápido” B que es similar al método “rápido” de la muestra de
sangre. Para la muestra de leche solamente se implementa el método “rápido”, donde se
realiza el centrifugado para eliminar la grasa y el suero, seguido de lavados con el tampón
y se suspende en una solución a temperaturas bajas inicialmente, y después
temperaturas altas (99ºC), esto con el fin de inactivar la proteinasa K y se vuelve a
congelar la muestra.
Finalmente la extracción se amplifica in vitro mediante la técnica PCR, se inicia con una
temperatura de 94ªC por 30 segundos con el fin de desnaturalizar el ADN, seguido de la
hibridación 56ªC durante un minuto y consecuentemente la extensión a 72ºC durante 30
segundos. Para concluir se reducirá la temperatura a 4ªC, con el objetivo de conservar el
material. El proceso final es la diferenciación alélica por medio de la restricción de las
enzimas Taq I, y Hae III. (Felez, 2006)
Tratamiento
BLAD resulta letal para los bovinos de raza holstein, causa la muerte de los animales a
los pocos meses de nacer entre los 2 a los 8 meses, con una sintomatología clínica
inespecífica al nacer, estos individuos que son afectados son aparentemente sanos, pero
después de pocas semanas comienza su sintomatología con infecciones generalizadas
que termina en la muerte del animal que no responde a tratamientos convencionales con
antibióticos (Atzel O. 2009).
La enfermedad en si no se puede curar pero si se puede prevenir, haciendo una selección
negativa contra el alelo defectuoso de los individuos que la portan (Felez, 2006).
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