RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los procesos de interés primario en esta investigación son el seguimiento:
celobiosa (aq) + HzO (liq) = 2 glucosa (aq) (A)
gentiobiosa (aq) + HzO (liq) = 2 glucosa (aq) (B)
isomaltosa (aq) + HzO (liq) = 2 glucosa (aq) (C)
maltosa (aq) + HzO (1iq) = 2 glucosa (aq) (D)
Las constantes de equilibrio termodinámico (K) para estas hidrólisis. las reacciones son dadas por
K = {[glucosa] 2 / (m0disacárido])). (1)
(yz (glucosa) / (a (HzO) y (disacárido)))
Aquí, los corchetes denotan las molalidades de cualquiera de los La glucosa o el disacárido en solución, y
es la actividad. coeficiente de la especie de soluto indicada, a (HzO) es la actividad del agua, y m0 es igual
a 1 mol kg kg '. El estandar Estado al que se ajustarán nuestras mediciones es, para el soluto, la solución
ideal hipotética de la unidad de la molalidad y, Para el agua, el solvente puro. La temperatura de referencia
y la presión son 298.15 K y 0.1 MPa, respectivamente. los La aplicación rigurosa de la Ecuación 1 requiere
un conocimiento de Los coeficientes de actividad de la glucosa y de los apropiados. disacárido en tampón
de acetato de sodio 0,1 M a un pH de 5,65. La actividad del agua se puede calcular a partir de la actividad.
coeficientes de los solutos usando la ecuación de Gibbs-Duhem. En ausencia de esta información, hemos
utilizado datos (11,12) en los coeficientes de actividad de la glucosa y la maltosa en pura Agua y datos
sobre las interacciones de azúcares con electrolitos. (13) para estimar un valor de 1.006 para el segundo
término en Ecuación 1. Del mismo modo, hemos utilizado entalpías de dilución de glucosa, maltosa y
celobiosa (11, 14) en agua pura para estimar una corrección de dilución de ~ 0.10 kJ mol "que podría Se
aplicará a nuestras entalpías medidas para ajustarlas a la estado estandar Desde la inclusión de estas
correcciones en el Los cálculos causan efectos sustancialmente menores que la dispersión. En los
resultados experimentales y como implican algunos. parámetros estimados, serán prescritos en el cálculos
posteriores.
Los resultados de las mediciones de equilibrio y calorimétricas. Se resumen en las Tablas I y 11,
respectivamente. los los datos también se muestran en las Figs. 1-3. Conjuntos separados de
experimentos Se realizaron comenzando con solo disacárido en solución. (la dirección hacia adelante) y
con solo glucosa en solución (la direccion contraria). Fue posible obtener un acuerdo entre constantes de
equilibrio determinadas desde el delantero y direcciones inversas sólo para los experimentos que
involucran Isomaltosa y gentiobiosa. Dentro del marco de tiempo de nuestro mediciones (hasta 14 días),
no fue posible obtener acuerdo entre los resultados del avance y retroceso Instrucciones en los
experimentos que implican celobiosa y maltosa. Esto se debe probablemente al efecto combinado del
producto. inhibición de las enzimas maltasa y @glucosidasa y la El hecho de que las constantes de
equilibrio para estas dos hidrólisis Las reacciones son significativamente mayores que las de la hidrólisis.
De isomaltosa y gentiobiosa. Sobre la base de los experimentos. que se realizaron con la hidrólisis de la
celobiosa. y maltosa, nuestros hallazgos fueron que las constantes de equilibrio para estas respectivas
hidrólisis fueron mayores o iguales a 155 y 513 a 298.15 K. Las desigualdades correspondientes para los
cambios de energía de Gibbs son AGO 5 -12.5 kJ mol "para el proceso
TABLA I
Datos de equilibrio para la hidrólisis de gentiobiosa e isomaltosa a
glucosa acuosa
El tampón era acetato de sodio 0,1 M a pH 5,65. Las enzimas 8-
Se utilizaron glucosidasa e isomaltasa, respectivamente, para la gentiobiosa
y experimentos de hidrólisis isomaltosa. Se acercó al equilibrio.
desde dos direcciones: comenzando con el disacárido (el delantero
Dirección) y partiendo de la glucosa (la dirección inversa). los
Concentraciones iniciales de gentiobiosa e isomaltosa en los experimentos.
desde la dirección de avance fueron -15 mM. Desde el reverso
En dirección, la concentración inicial de glucosa fue = 30 mM. los
Concentraciones de 8-glucosidasa e isomaltasa en estas soluciones.
fueron -5 g (kg de solución) ". Las constantes de equilibrio en las columnas dos
y tres son los promedios de tres a cinco mediciones. los
las constantes de equilibrio en la columna cuatro son los promedios de todas las
Datos obtenidos a las temperaturas especificadas. Las incertidumbres son
Límites de confianza del 95%.
Hidrólisis de la gentiobiosa
T/ K k (a partir de la gentiobiosa K (a partir de la glucosa) K
(promedio)
Hidrólisis de la isomaltosa.
T/K k a partir de la isomaltosa k (a partir de la glucosa K (promedio)
TABLA II
Datos calorimétricos para la hidrólisis de la celobiosa, gentiobiosa, isomaltosa, y maltosa
La hidrólisis de isomaltosa y maltosa se llevaron a cabo, respectivamente, Utilizando las enzimas
isomaltasa y maltasa. La enzima pglucosidasa. Se utilizó para la hidrólisis de celobiosa y gentiobiosa. Las
concentraciones iniciales de los disacáridos estaban en el rango 50- 75 mM. Las concentraciones de las
enzimas en estas soluciones fueron 10-25 g (kg de solución) ". El tampón era acetato de sodio 0.1 M a pH
5.65. Estas entalpías han sido corregidas por conversión incompleta A la glucosa y, en el caso de hidrólisis
de celobiosa, para la formación. De una pequeña cantidad de gentiobiosa. Las incertidumbres se refieren
al 95% de confianza. Limites
Celobiosa
Gentiobiosa
Isomaltosa
Maltosa
A y AGO 5 -15.5 kJ mol "para el proceso D a 298.15 K.
La dependencia de la temperatura de las constantes de equilibrio.
(K) y los cambios de entalpía (AH) están dados por:
AGt° = RTlnK = AH! + ACg (T - 8)
+ T (AG - m) / e - TACgln (T / B) AH ", = m + ACg (T - e) mirar pdf
En las ecuaciones anteriores T es la temperatura termodinámica, 0 es la temperatura de referencia
(298.15 K) y R es el gas constante (8.31451 J mol "K- '). La capacidad de calor cambia se asume que son
constantes en el rango de temperatura de interesar.
Ajuste de los cuadrados mínimos de los datos de entalpía en la Tabla II a La ecuación 3 lleva a AH°=
-2.43 ±0.31, 2.26 ±0.48, 5.86 ± 0.54 y -4.02 ± 0.15 kJ mol- 'a 298.15 K, respectivamente, para Procesa de
A a D arriba. Los valores correspondientes calculados. para AC son 17 ±38, -22 ±60, 13 ± 48 y 43 J mol
"K- '. Dado que los datos para la hidrólisis de la maltosa se realizaron a Solo dos temperaturas diferentes,
una incertidumbre significativa. No se pudo calcular el cambio de capacidad calorífica que acompaña. Su
hidrólisis. Las incertidumbres dadas aquí y en Los siguientes comentarios son, a menos que se indique lo
contrario, 95%. límites de confianza. Ninguno de estos cambios de capacidad de calor difiere
significativamente desde cero. Por lo tanto, adoptaremos un valor de AC igual a cero J mol "K" sobre el
intervalo de temperatura de nuestras medidas (286-316 K) en todos los cálculos futuros involucrando estos
procesos.
Ajustando los datos de equilibrio en la Tabla I a la Ecuación 2 con AC fijada a 0 J mol "K- 'conduce a
valores de AG° = -7.147 ±0.047 y AH°= 2.76 ± 1.4 kJ mol" para el proceso B, la Hidrólisis de la
gentiobiosa. Para el proceso C, la hidrólisis de isomaltosa, los valores calculados son AG° = -7.062 ± 0.049
y AH° = 6.06 ±1.4 kJ mol ". Por lo tanto, los valores de entalpías determinadas a partir de la temperatura
derivada de la Los datos de equilibrio están en buen acuerdo con las entalpías. Determinado a partir de las
medidas calorimétricas. Nosotros preferimos Los resultados calorimétricos sobre la base de su mayor
precisión.
fIG. 1. Constantes de equilibrio para la hidrólisis de la gentiobiosa. A la glucosa en función de la
temperatura. El experimental Los valores son los octágonos sólidos (●). La línea continua se calculó
usando Los siguientes valores para la reacción de hidrólisis: AG° = -7.15 ±0.10 kJ mol ", AH° = 2.26 ± 0.48
kJ mol", y AC: = 0 J mol "K-I. líneas discontinuas se obtuvieron a partir de los intervalos de incertidumbre
de estos valores.
Fig 2. Constantes de equilibrio para la hidrólisis de la isomaltosa.
A la glucosa en función de la temperatura. El experimental
Los valores son los octágonos sólidos (●). Se calculó la línea continua.
utilizando los siguientes valores para la reacción de hidrólisis: AG° = -7.06 k
±0.10 kJ mol ", AH° = 5.86 , ±0.54 kJ mol- ', y AC; = 0 J mol" K.
Las líneas discontinuas se obtuvieron a partir de los intervalos de incertidumbre de
estos valores
Si los valores de AH° en la ecuación 2 son fijos en esos valores
determinado a partir de los datos calorimétricos, los valores calculados
Los cambios de energía de Gibbs para los procesos B y C son -7.151.
±0.043 Y -7.064 ±0.040 KJ MOL-1 respectivamente
tabla I11 contiene los valores de los parámetros termodinámicos.
Para las reacciones de hidrólisis de los disacáridos estudiados.
Aquí en. Dado que las incertidumbres dadas en la tabla I no incluí
un componente debido a las incertidumbres en los factores de respuesta,
Las incertidumbres finales asignadas tanto a las constantes de equilibrio.
y los cambios de energía de Gibbs se han incrementado
apropiadamente. Las mejores representaciones del equilibrio.
constantes de estas reacciones de hidrólisis en función de
temperatura (ver Figs. 1 y 2) se calcularon usando el
Valores de los parámetros termodinámicos dados en la Tabla 111.
Pasamos ahora a una consideración de los datos disponibles en el
Literatura con la que se pueden comparar nuestros resultados.
Las únicas otras medidas de equilibrio directo en el
Literatura son las de van Beynum et al. (6). Usaron alto
cromatografía líquida a presión en un estudio de equilibrio de
La hidrólisis de los enlaces a-1,4 y a-1,6. Afirman que el
Constantes de equilibrio para la hidrólisis de a-1,4 y a-1,6.
Los enlaces son independientes de la longitud de la cadena y que son
igual a 194 y 33, respectivamente. Ellos reportan esencialmente solo
Sus datos resumidos y dan pocos detalles experimentales. Nosotros
ajusta sus resultados a 298.15 K y obtén los valores 224 y 27,
respectivamente, para la hidrólisis de maltosa e isomaltosa. Nuestro
los resultados fueron K 2 513 para la hidrólisis de maltosa (a-1,4
enlace) y K = 17.25 y 0.7 para la hidrólisis de isomaltosa
(enlace a-1,6) a 298.15 K. Van Beynum et al. (6) no
indicar qué procedimientos cromatográficos se utilizaron para la
Separación de los carbohidratos en su estudio. El anion
Columna de intercambio y detector amperométrico pulsado que
fueron utilizados en esta investigación siempre que las separaciones de la
Fig 3. Entalpitas de hidrólisis de disacáridos a glucosa.
En función de la temperatura. Los disacáridos son celobiosa (X),
gentiobiosa (+), isomaltosa (▲) y maltosa (●). Las lineas solidas son
Los mínimos cuadrados se ajustan a los datos.
Disacáridos que no pueden obtenerse mediante intercambio catiónico.
Columnas con detector de índice de refracción. Dado que el tipo de
arreglo cromatográfico utilizado en este estudio no fue
disponible en 1981 para van Beynum et al. (61, una posible fuente
de error en sus mediciones podría ser atribuible a insospechados
Interferencias cromatográficas y lado no detectado reacciones
Un método alternativo para obtener constantes de equilibrio.
Para la hidrólisis de la maltosa y la celobiosa se utilizan las enzimas.
maltosa fosforilasa y celobiosa fosforilasa, respectivamente,
Para catalizar las siguientes reacciones:
maltosa (aq) + HPO ( aq) = glucosa (aq) (E)
+ glucosa l-fosfato - '(aq)
celobiosa (aq) + HPO (aq) = glucosa (aq)
+ glucosa l-fosfato - '(aq) (F)
Las constantes de equilibrio determinadas para estos procesos pueden
Luego se combinan con datos de equilibrio para el proceso:
glucosa 1-fosfato (aq) + HoO (liq)
= glucosa + HPO:-(aq) (G)
Así, los cambios de energía de Gibbs para los procesos A y D pueden ser
calculadas AG°a = AG°f + AG°g y AG°d= AG°e + AG°g, respectivamente.
Un cambio de energía de Gibbs de -17.97 kJ mol "para
El proceso G se calcula utilizando las energías de formación de Gibbs.
dado en nuestra reciente revisión (l1). Alexander (4) reportó una
Constante de equilibrio de 0.23 para la fosforilación de la celobiosa.
a glucosa ya glucosa l-fosfato a 37 "C y a
pH 7. Aplicación de ionización, temperatura y fuerza iónica.
las correcciones (11, 16) a este resultado llevan a AG° = 3.64 kJ mol "
para el proceso F a 298.15 K. Combinación con el valor de AG°
para el proceso G conduce a AG° = -14.3 kJ mol "y K = 320 para
proceso A a 298.15 K. Por lo tanto, nuestro resultado para la hidrólisis de
La celobiosa (K ≥ 155) es consistente con la medición de Alexander (4)
y con los datos que conducen a AG° para el proceso G, el
Hidrólisis de la glucosa 1-fosfato. Este camino puede proporcionar
Los mejores valores actualmente disponibles para las constantes de equilibrio.
y Gibbs cambios energéticos para los procesos A y F. Ajuste.
y Doudoroff (5) reportan un valor de 0.23 para el equilibrio
constante para la fosforilación de maltosa a 37 °C y en
pH 7. Aplicando correcciones similares a las utilizadas en el
reacción de fosforilación de celobiosa, conduce a un valor de AG° =
-14.3 kJ mol "y K = 320 para el proceso D, la hidrólisis de
maltosa, a 298.15 K. Este resultado es inconsistente con nuestro
encontrando que la constante de equilibrio para este proceso era
Mayor o igual a 513.
Takahashi et al. (7, 8) han realizado mediciones calorimétricas.
Sobre la hidrólisis de isomaltosa y maltosa. Ellos
reportar cambios de entalpía de 5.44 ± 0.13 y -4.59 ±0.028 kJ
mol ", respectivamente, para la hidrólisis de isomaltosa y maltosa.
Nuestros resultados fueron 5.86 ± 0.54 y -4.02 ±0.15 kJ mol ",
respectivamente. Takahashi et al. (7, 8) no analizaron su final.
Mezclas de reacción y asumieron una completa hidrólisis de
TABLA I11
Parámetros termodinámicos para la hidrólisis de disacáridos a glucosa a 298.15 K
Los cambios de capacidad de calor son aproximadamente 0 J mol "K-I. El estado estándar es la solución
ideal hipotética
de la unidad de la molalidad.
Proceso K AGO AH0 AS '
kJ mol "J mol" K "
Celobiosa (aq) + HzO (liq) = 2 glucosa (aq) 2155 5-12.5
Gentiobiosa (aq) + HzO (liq) = 2 glucosa (aq) 17.89 f 0.7 -7.15 k 0.10
Isomaltosa (aq) + HaO (liq) = 2 glucosa (aq)
2.26 f 0.48 31.6 f 1.7
17.25 * 0.7
Maltosa (aq) + HzO (1iq) = 2 glucosa (aq)
-7.06 y 0.10 5.86 * 0.54 43.3 f 1.9
-2.43 f 0.31 233.8
2513 5-15.5 -4.02 f 0.15 238.5
estos dos disacáridos Si hubiéramos hecho lo mismo con nuestro
Datos experimentales, los resultados habrían sido 5.47 y -3.94.
kJ mol ", respectivamente. En cualquier caso, los resultados para la hidrólisis
De isomaltosa están claramente dentro de las incertidumbres experimentales.
La incertidumbre asignada por Takahashi et al. (8) a
El resultado de la hidrólisis de maltosa parece demasiado pequeño. Creemos que
Una asignación más realista de la incertidumbre a la maltosa.
la entalpía de hidrólisis determinada por ellos (8) mostraría la
Dos conjuntos de resultados para estar de acuerdo.
Cálculos de ciclos termoquímicos utilizando entalpías de combustión. y solución, tercera ley entropías,
solubilidades, y Los coeficientes de actividad se pueden utilizar para obtener energía de Gibbs y Cambios
de entalpía para las reacciones de hidrólisis en agua. solución. La precisión de estos cálculos del ciclo
termoquímico. Es altamente dependiente de la exactitud de las entalpías. De combustión y / o tercera ley
entropías. Por consiguiente, Requiere datos excepcionalmente precisos para acercarse a la precisión. de
la energía de Gibbs o los cambios de entalpía que son Obtenido de mediciones directas en soluciones
acuosas. Dado que muchos de los valores se basan en mediciones más antiguas donde la caracterización
adecuada de la muestra no fue posible, la Las incertidumbres en los valores calculados se consideran al
menos 5-10 kJ mol ". Por lo tanto, para la maltosa, utilizamos la entalpía de combustión seleccionada por
Domalski (17) en su revisión, una tercera entropía de ley de Anderson y Stegeman (18), la solubilidad (19)
y el coeficiente de actividad (12), y una evaluación crítica Energía de Gibbs de formación para glucosa
acuosa (11) para calcular. AG° = -55.2 kJ mol "para el proceso D, la hidrólisis de maltosa acuosa, a 298.15
K. Mientras que es consistente con el El resultado obtenido en este estudio (AG°≤ -15.5 kJ mol ") es
demasiado negativo por una cantidad sustancial. Cálculos similares en Datos de uso de monohidrato de
maltosa en entalpías de combustión. y la solución (17, 20) y llevan a un valor de ∆H° = 1.6 kJ mol- 'para la
hidrólisis de maltosa acuosa a 298.15 K. Este Está en acuerdo aproximado con la medición directa de
-4.02 ± 0.15 kJ mol ". Para la celobiosa informada (20, 21) Las entalpías de solución difieren en 4.2 kJ mol
". Usando estos dos Entalpías de solución y la entalpía de combustión dada. en la revisión de Domalski
(17), la entalpía de la hidrólisis de la celobiosa se calcula para estar entre -17.8 y -22.0 kJ mol " a 298.15
K. La medición directa arrojó un valor de -2.43 ±0.31 kJ mol ". Creemos que la diferencia es atribuible
Principalmente a errores en la entalpía de datos de combustión
Información sobre los cambios de capacidad calorífica de la hidrólisis. Las reacciones pueden obtenerse a
partir de mediciones directas de la capacidad calorífica. En soluciones acuosas. Jasra y Ahluwalia (20)
informan una capacidad de calor molar aparente (C :) de 635 J mol "K- 'para maltosa (aq). Kawaizumi et al.
(22) midió un valor de Cz de 614 ± 20 J mol- 'K-'. Estos resultados se combinan respectivamente con un
valor de 336 J mol "K" para C: para glucosa (aq) de nuestra revisión reciente (11) y la capacidad térmica
del agua (23) para obtener valores de AC; de -38 y -17 J mol "K" para proceso D, la hidrólisis de la
maltosa. Jasra y Ahluwalia (20) también determinó un valor de C $ de 649 J mol- 'K "para celobiosa (aq).
Esto conduce a un valor de AC; de -52 J mol "K" para proceso A, la hidrólisis de la celobiosa. Estos
calculan la capacidad calorífica. Los cambios pueden ser más precisos que los resultados obtenidos de
Los derivados de la temperatura de los cambios de entalpía medidos. en este estudio. Mientras que las
mediciones directas de capacidad de calor en Las soluciones acuosas de gentiobiosa e isomaltosa
también serían Útil para extrapolar constantes de equilibrio y entalpías. a temperaturas tanto superiores
como inferiores a las investigadas, Su uso tendría poco efecto en el cálculo. valores de la energía de
Gibbs o cambios de entalpía en 298.15 K obtenido en este estudio.
El examen de los resultados del resumen en la Tabla I11 muestra
que la entalpía cambia para la hidrólisis de la celobiosa y maltosa (1,4 enlaces) son exotérmicas mientras
que la entalpía Cambios para la hidrólisis de gentiobiosa e isomaltosa (1,6 Los enlaces) son endotérmicos.
Además, el valor absoluto de la entalpia de hidrólisis de la celobiosa ((BETA-1,4 enlace) es
aproximadamente la mitad del valor absoluto de la entalpía de Hidrólisis de la maltosa (ligamiento a-1,4
ALFA). Se encuentra una regla similar. Sostener para las entalpias de hidrólisis de gentiobiosa y
isomaltose que contienen los enlaces BETA y ALFA -1,6 correspondientes, respectivamente. Ono y
Takahashi (24) han examinado Los datos bibliográficos disponibles sobre la hidrólisis de tri y
oligosacáridos. Basado en sus propias medidas (7,25) en panosa (un enlace ALFA-1,4 y uno a-1,6),
maltotriosa (dos enlaces ALFA-1,4), y amilosa (~ 6000 ALFA-1,4 enlaces) presentar evidencia de que el
cambio de entalpía correspondiente a La hidrólisis de un enlace glucosídico individual es independiente.
del número de enlaces glucosídicos en un carbohidrato. Los datos sobre los cambios de energía de Gibbs
son más limitados y son Básicamente limitado al informe de van Beynum et al. (6). Ellos Estado que las
constantes de equilibrio para la hidrólisis de ALFA 1,4 y los enlaces ALFA-1,6 se encuentran constantes en
los almidones y dextrinas que tienen grados intermedios de polimerización. Cabe señalar que los cambios
de entropía (ver Tabla 111) para la hidrólisis de los disacáridos están razonablemente cerca de El uno al
otro. Cualquier explicación detallada de estas diferencias de entropía. Habría que implicar efectos
estructurales sutiles.
