Cromatografía

SOFIA CAROSSINO
• Introducción a la cromatografía: que es la cromatografía, PAULA PIREZ
características
• Clasificación de métodos cromatográficos: características de
técnicas cromatográficas, usos
• Cromatografía de gases: fundamentos y principios
• Cromatógrafos: componentes básicos, tipos de cromatógrafos
• Objetivos de la cromatografía de gases
•Aplicaciones de la cromatografía de gases

 Ventajas y desventajas
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INTRODUCCION A LA CROMATOGRAFIA

La cromatografía es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia y que permite la
separación, identificación y determinación de los componentes químicos en mezclas
complejas. Ningún otro método de separación es tan potente y de aplicación tan general como
la cromatografía.

La característica que distingue a la cromatografía de la mayoría de los métodos físicos y

químicos de separación, es que se ponen en contacto dos fases mutuamente inmiscibles. Una
fase es estacionaria y la otra móvil.

En todas las separaciones cromatográficas, la muestra se desplaza con una fase móvil, que
puede ser un gas, un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través
de una fase estacionaria con la que es inmiscible, y que se fija a una columna o a una
superficie sólida. Las dos fases se eligen de tal forma, que los componentes de la muestra se
distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes
que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de
la fase móvil; por el contrario, los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria,
se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la
muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.

LUGAR QUE OCUPA LA CROMATOGRAFIA EN LA CARACTERIZACION DE

MATERIALES

En el esquema 1, se presenta un diagrama en el que se muestran los pasos a seguir en

cuanto a la manipulación de una determinada muestra hasta que se la caracteriza mediante el
empleo de técnica o método instrumental.
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CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

La fase móvil puede ser un gas o un líquido, mientras que la fase estacionaria sólo puede ser
un líquido o un sólido, dando lugar a la cromatografía de gases y a la cromatografía líquida.
En la cromatografía líquida, cuando la separación involucra predominantemente un reparto
simple entre dos fases líquidas inmiscibles, una estacionaria y la otra móvil, el proceso se
llama cromatografía líquido-líquido (LLC). Cuando en la aptitud retentiva de la fase
estacionaria intervienen principalmente fuerzas físicas de superficie, el proceso se denomina
cromatografía líquido-sólido (LSC) (o de adsorción).Otros dos métodos de cromatografía
líquida difieren un poco en su modo de acción, En cromatografía de intercambio iónico (IEC,
de los componentes iónicos de la muestra se separan por el intercambio selectivo con
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contraiones de la fase estacionaria. En cromatografía de exclusión (EC) la fase estacionaria

proporciona una clasificación de moléculas basadas en su mayor parte en la geometría y el
tamaño molecular. Este método también se llama cromatografía de permeación en gel, en la
química de los polímeros, y de filtración en gel, en la bioquímica

Cuando la fase móvil es un gas, los métodos se llaman cromatografía gas-líquido (GLC), y
cromatografía gas-sólido (GSC). Los métodos que implican fases móviles gaseosas serán
tratados en forma individual.

CARACTERISTICAS DE LAS TECNICAS CROMATOGRAFICAS

Tipos Fase móvil Fase estacionaria

Cromatografía en papel Liquido Liquido (moléculas de agua
contenidas en la celulosa del
papel)
Cromatografía en capa fina Liquido Solido
Cromatografía de gases Gas Solido o liquido
Cromatografía liquida en fase Liquido (polar) Solido o liquido (menos polar)
inversa
Cromatografía liquida en fase Liquido (menos polar) Solido o liquido (polar)
normal
Cromatografía liquida de Liquido (polar) Solido
intercambio iónico
Cromatografía liquida de Liquido Solido
exclusión
Cromatografía liquida de Liquido Solido
absorción
 Cromatografía de fluidos Liquido
supercríticos 4

Solido

Cromatografía en papel

La cromatografía en papel es una técnica ampliamente utilizada en el laboratorio debido a su

bajo costo y a la rapidez del análisis.

Se realiza colocando el pimento sobre una hoja de papel filtro y posteriormente éste se coloca
en un disolvente (generalmente un disolvente fácil de evaporar).

El resultado del análisis será una separación de colores donde se puede identificar los
componentes de la sustancia, en caso de que esto no ocurra deben utilizarse técnicas de
revelado.

Cromatografía en capa fina

La técnica es similar a la cromatografía en papel, a excepción que en este caso el análisis se

realizará en una placa de plástico, aluminio o vidrio cubierta de una capa de sustancia
absorbente como alúmina o gel de sílice.
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Cromatografía de líquidos

Permite separar físicamente los componentes de muestras líquidas mediante el uso de una
fase líquida y una fase estacionaria

La fase móvil generalmente es un líquido y la fase estacionaria un sólido como alúmina o gel
de sílice.

Según técnicas clásicas se realiza en una columna.

Métodos de cromatografía liquida

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Cromatografía de fluidos supercríticos

Esta técnica presenta los procedimientos de la cromatografía de gases y de la cromatografía

de líquidos.

Se hace uso de un horno termostático y un restrictor.

Como fase móvil puede utilizarse el dióxido de carbono, exano, pentano, etc.Generalmente es
utilizada para analizar drogas, alimentos, herbicidas, polímeros, etc.
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Cromatografía de gases

Para esta técnica se utiliza un cromatógrafo de gases el cual volatiliza e inyecta los gases
dentro de una columna.

La fase móvil está formada por gas inerte.

Existen dos tipos: De gas sólido y de gas líquido.

En esta monografía nos enfocaremos especialmente en la cromatografía de gases.

FUNDAMENTOS Y PRINCIPIOS BÁSICOS DE CROMATOGRAFIA DE GASES

La cromatografía en fase gaseosa es un procedimiento para la separación de compuestos

volátiles, que fluyen en una corriente gaseosa a través de una fase estacionaria fijada a un
tubo largo y fino. El gas portador (inerte, por ej., nitrógeno, helio, hidrógeno y argón)
transporta una muestra representativa de la sustancia inyectada. En una separación se parte
de la base, de que cada componente será disuelto o adsorbido por la fase estacionaria. Los
distintos componentes serán retenidos por esta fase con mayor o menor fuerza y alcanzarán
correspondientemente el final de la columna, donde se encuentra el detector, después de un
tiempo de flujo de gas portador más o menos largo. La cromatografía de gases permite
obtener resultados tanto cualitativos como cuantitativos. Se utilizan fundamentalmente estas
alternativas de separación:
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1. A mayor disolución, la separación de compuestos con estructura química similar se

consigue utilizando tiempos relativamente largos.

2. A menor disolución se realiza la separación rápida de mezclas de compuestos sencillos

conocidos.

La cromatografía de gases es una técnica cromatográfica en la que la fase móvil es un gas.

fase móvil =gas portador = carrier

El analito en forma gaseosa pasa a través de la columna arrastrado por el gas portador.

Cromatografía gas-líquido de reparto: fase estacionaria es un líquido que recubre la pared

interior de una columna o un soporte sólido.

Cromatografía gas-sólido de adsorción: fase estacionaria es un sólido sobre el que se adsorbe

el analito.

Componentes basicos de un cromatografo de gases

Un cromatografo de gases consta de sistema de suministro de fase movil, sistema de

inyeccion de muestra, columna cromatografica situada en horno termostatizado y detector.
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1) Suministro de fase movil (gas portador).

Los gases mas usados son helio,argón, nitrogeno e hidrogeno. El gas suele venir determinado
por el tipo de detector que se va a emplear. Con el suministro de gas portador van asociados
reguladores de presion, manometros y medidores de flujo.

2)Sistema de inyeccion de muestra

Para que la separación sea eficaz es necesario un sistema que permita la introducción
de una muestra de tamaño adecuada de forma rápida. La introducción de muestra
grande o demasiado lentamente provoca la aparición de bandas anchas, lo que se
traduce a una resolución pobre. El método más sencillo de introducción de la muestra
es el empleo de una micro jeringa. La muestra se inyecta a través de un tapón de goma
(septum) en una cámara de vaporización situada en la cabeza de la columna (figura).
La temperatura de esta cámara está a unos 50°c por encima de la temperatura de
volatilización del componente menos volátil de la muestra. El volumen de muestra
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inyectado es de unos pocos micro litros. Las columnas denominadas capilares

necesitan mucha menos cantidad de muestra, por ello suele usarse un divisor de
muestra, que permite pasar a la columna solo una pequeña fracción del volumen
inyectado, desechando el resto. Este sistema de inyección manual tiene como principal
inconveniente la poca reproducibilidad de la inyección. Esto puede mejorarse con
inyectores automáticos

3)Columna cromatografica situada en horno termostatizado.

En ella se va a producir la separacion de los analitos. Existen dos tipos de columnas, la

columna empaquetada (o de relleno) y las capilares (o tobulares abiertas). Las empaquetadas
son columnas rellenas con un soporte solido de grano muy fino que bien actua como fase
estacionaria o esta recubierto de una fina capa de fase estacionaria liquida no volatil. El
material debe ser inerte y resistentes a elevadas temperaturas.

Las columnas tobulares abiertas o capilares son mas estrechas y suelen ser mucho mas
largas. La pared del interior de la columna se recubre con una pelicula de fase estacionaria,
(solida o liquida).

La cantidad de muestra necesaria para estas columnas es menor que para las empaquetadas.

Las columnas capilares poseen mucha mejor resolucion, mayor sensibilidad y necesitan
menor tiempo de analisis, por estos motivos han remplazado por completo a las
empaquetadas.

4)Detectores

El detector es el sistema encargado de poner de manifiesto la presencia de soluto que sale de

la columna cromatografica.

Las caracteristicas de un detector ideal en este tipo de cromatografias son:

-adecuada sensibilidad

-buena estabilidad y reproducibilidad

-respuesta linea en un intervalo amplio de concentracion

-amplio intervalo de temperatura de trabajo

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-tiempo de respuesta corto

CROMATOGRAFOS

Instrumento que se utiliza en los laboratorio para separar uno o varios tipos de moléculas,
relativamentre pequeñas, de una mezcla de sustancias o para purificar muestras

El detector de captura de electrones ha llegado a ser uno de los detectores más ampliamente
utilizados para el análisis de muestras medioambientales, debido a su selectividad para
detectar compuestos que contienen halógenos, tal es el caso de los pesticidas y de los
bifenilos policlorados (PCB´s). Incluso a concentraciones muy bajas (ppm y ppb) este detector
es efectivo.
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El detector de captura de electrones es de respuesta selectiva, siendo muy sensible a las

moléculas que contienen grupos funcionales electronegativos tales como halógenos,
peróxidos, quinonas, y grupos nitro; en cambio, no es sensible a grupos funcionales como
aminas, alcoholes e hidrocarburos. Una aplicación importante del detector de captura de
electrones es la detección y determinación de insecticidas clorados. Los detectores de captura
de electrones son altamente sensibles y tienen la ventaja de no alterar la muestra de manera
significativa. Por otra parte, su intervalo de respuesta lineal se limita a uno o dos órdenes de
magnitud.

OBJETIVOS DE LAS CROMATOGRAFIAS DE GASES

Un cromatógrafo de gases consiste en varios módulos básicos ensamblados para:

 Proporcionar un gasto o flujo constante del gas transportador (fase móvil)

 Permitir la introducción de vapores de la muestra en la corriente de gas que fluye
 Contener la longitud apropiada de fase estacionaria
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 Mantener la columna a temperatura apropiada (o la secuencia del programa de

temperatura)
 Detectar los componentes de la muestra conforme eluyen de la columna
 Proveer una señal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada componente

COEFICIENTE DE DISTRIBUCION O DE REPARTO

Cuando un soluto entra al sistema cromatográfico inmediatamente se reparte o distribuye

entre la fase móvil y la estacionaria. Si la fase móvil se para en cualquier momento, el soluto
establece un equilibrio de distribución entre las dos fases. La concentración en fase está dada
por el coeficiente termodinámico de reparto:

K = Cs/Cm

Donde Cs, y Cm son las concentraciones de soluto en la fase estacionaria y móvil,

respectivamente. Cuando K = 1, el soluto se encuentra igualmente distribuido entre las dos
fases. El coeficiente de reparto determina la velocidad promedio de cada zona de soluto
conforme la fase móvil avanza a lo largo de la columna.

APLICACIONES

Al análisis de alimento

Separación e identificación de azúcares de forma cualitativa y cuantitativa después de una

conversión a derivados volátiles termoestables.

Determinación rápida y precisa de la composición los Ácidos grasos en los aceites y las
grasas tras efectuar la conversión de los ésteres de triglicéridos en ésteres metílicos, que son
más volátiles. Así se conoce con más detalle la composición isomérica, geométrica y
posicional de los triglicéridos en la Ácidos grasos.

Identificación y determinación de ésteres metílicos de Ácidos grasos poli insaturados

individuales

Determinación del contenido de isómeros trans en aceites, grasas y alimentos grasos.

Separación entre α y β tocoferol (UPLE)

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Separación y determinación de alcoholes de azúcar de sus derivados del trimetilsililéter (TMS)

Determinación del sorbitol, el manitol y el xilitol en las frutas en capilares de vidrio

En medio ambiente

Análisis de plaguicidas (insecticidas, herbicidas, funguicidas), en aguas, suelos, etc.

Suelen emplearse distintos detectores según la naturaleza de los compuestos. Es

frecuentemente el análisis de pesticidas órganoclorado empleando el detector de captura
electrónica. Para los compuestos con átomos de fosforo y nitrógeno se emplea el detector
selectivo NPD. Si se contiene azufre puede usarse el fotométrico de llama.

Análisis de disolventes órganoclorado en aguas empleando el detector de captura electrónica.

Análisis de compuestos orgánicos en general, para los que se emplea el detector FID .

Además la cromatografía de gases es muy útil para e análisis de bases inorgánicos en

muestra de aire. En este caso casi sin preparación de la muestra. Para estos gases suele
usarse cromatografía gas-solido.

En la química Industrial

Alcoholes, ácidos orgánicos, aminas aldehídos cetonas, esteres y glicoles, hidrocarburos,

disolventes, anilinas y gases inorgánicos

En Biociencia

Drogas fármacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes residuales.

Derivadas del petróleo

Gas natural, gases permanentes, gas de refinería, gasolinas, gasóleos, parafinas…

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VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA CORMATOGRAFIA DE GASES

Ventajas Desvetajas
:-alta resolucion -solo muestras volatiles
-velocidad -es dificil tratar con compuestos ionicos,de
–sencibilidad elevada polaridad, compuestos de peso
-facilmente mide nanogramos molecular muy altos.
-sencillez -la inyeccion de la muestra debe ser exacta.
-muy buenos resultados cuantitativos