José Luis Morales Charnaud Cromatografía de Capa Fina
201122788 Laboratorio de Análisis Instrumental
Cromatografía de Capa Fina
1. Asignación:
Determinación de los componentes encontrados en los analitos de pericón y
valeriana con sus respectivos RF´s de cada componente comparado con sus
estándares y explicar los procedimientos necesarios para el experimento.
2. Instrumentación:
Pipeta 5 mL: PYREX VISTA™ ±0.5 mL
Beacker 50 mL: Boro 3.3 LMS Made in Germany ±0.06 mL
Probeta 100 mL: PYREX VISTA™ ±0.5 mL
ULTPS VIOLET CHROMATO VUE™ CABINET MODEL No aplica
PRODUCTS, ING: CG-20
3. Analito:
Rutina Quercetina
2-(3,4-dihidroxifenil)-5,7-dihidroxi-3- {[(2S,3R,4S,5S,6R) 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-4H-
-3,4,5-trihidroxi-6-({[(2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihidroxi chromen-4-one
-6-metiloxan-2-il]oxi}metil)oxan-2-il]oxi}-4H-cromen-4-ona
Ácido Clorogénico Hiperósido
(1S,3R,4R,5R)-3-{[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2- 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3-[(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-
enoyl]oxy}-1,4,5-trihydroxycyclohexanecarboxylic acid trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4H-
chromene-4,5,7-triol
4. Procedimiento:
Se extrajo un 1mL de material vegetal seco pulverizado con 10 mL de metanol por 5
minutos en baño de maría a 60°C, se filtró la solución y se aplicó a las cromatoplaca
de silica gel de 60 F254, se hizo obtuvo el extracto de 0.1g con 10 mL de metanol con el
mismo procedimiento, luego se utilizaron soluciones de flavonoides como estándares
al 0.05% en metanol de Quercetina, Rutina, Ácido Clorogénico y Hiperósido, se formó
la fase móvil en una base de 50 mL utilizando 33.6mL de Acetato de etilo, 3.7mL de
ácido fórmico y ácido acético glacial y 9mL de agua, se puso en contacto la fase móvil
con la fase estacionaria con lo cual se produjo el movimiento de los compuestos, se
puso a secar la cromatoplaca, se observó en la luz uv, luego se le aplicaron las
sustancias reveladores de solución metanólica al 1% de difenilboriloxietilamina y una
solución metanólica al 5% de polietilenglicol 4000, luego se observó nuevamente en la
luz uv y se caracterizó las marcas en la cromatoplaca.
5. Datos:
Planta Banda Distancia de la muestra(cm) Color
1 4.00 Naranja
Pericón 2 5.00 Verde
3 6.20 Verde
4 6.80 Naranja
1 4.00 Naranja
Extracto de Pericón 2 5.00 Verde
3 6.30 Verde
4 6.90 Naranja
1 3.40 Verde
Valerina 2 5.40 Verde
3 6.40 Verde
4 6.90 Verde
1 3.20 Verde
2 4.10 Verde
Extracto de 3 5.40 Verde
Valerina 4 6.30 Verde
5 7.00 Verde
Estándares
Rutina 1 2.00 Naranja
Quercetina 1 6.70 Naranja
1 3.40 Verde
2 5.40 Verde
Ácido Clorogénico 3 6.10 Verde
4 6.70 Verde
Hiperóxido 1 4.30 Naranja
6. Muestra de Calculo:
Calculo de las constantes RF´s cociente de frontera
LMO
RF=
LEO
Donde:
RF=cociente de frontera
LMO=Longitud de la muestra desde el origen(cm)
LEO=Longitud del eluyente desde e origen(cm)
Ejemplo: Calcular el RF de la planta pericón en la banda número 1 si la LMO es
4.00cm y la LEO es de 7.14cm.
4.00 cm
RF= =0.56
7.14 cm
7. Resultados:
Planta Banda RF Sustancia
1 0.5 Hiperóxido
Pericón 6
2 0.7 Ácido Clorogénico
0
3 0.8 Ácido Clorogénico
7
4 0.9 Quercetina
6
1 0.5 Hiperóxido
Extracto de Pericón 6
2 0.7 Ácido Clorogénico
0
3 0.8 Ácido Clorogénico
9
4 0.9 Quercetina
7
1 0.4 Ácido Clorogénico
Valerina 8
2 0.7 Ácido Clorogénico
6
3 0.9 Ácido Clorogénico
0
4 0.9 Ácido Clorogénico
7
1 0.4 Ácido Clorogénico
5
Extracto de 2 0.5 Ácido Clorogénico
Valerina 8
3 0.7 Ácido Clorogénico
6
4 0.8 Ácido Clorogénico
9
5 0.9 Ácido Clorogénico
9
Estándares
Rutina 1 0.2
8
Quercetina 1 0.9
4
1 0.4
8
Ácido Clorogénico 2 0.7
6
3 0.8
6
4 0.9
4
Hiperóxido 1 0.6
1
8. Interpretación:
Se utilizo la cromatografía de capa fina para realizar la separación de
componentes de los extracto vegetales de pericón y valeriana en las que utilizaron
una fase móvil y una fase estacionaria, la fase móvil es una mezcla de cuatro
componentes para tener una polaridad adecuada a las sustancias de estos
extractos en las que se utilizo una base de 50mL en las que hay 33.6mL de
acetato de etilo, 3.7mL de ácido fórmico, 3.7mL ácido acético glacial y 9mL de
agua, la fase estacionaria consta de una cromatoplaca de silica gel 60 F 254 en la
cual fueron colocadas el material vegetal y los extractos vegetales.
Para determinar las sustancias que componen estos analitos se utilizaron 4
estándares de flavonoides los cuales fueron Quercetina, Rutina, Ácido Clorogénico
y Hiperósido, una vez fueron armadas ambas fases se colocaron en contacto
donde inicio el proceso de separación en el que la relación entre las polaridades
de las sustancias y la de la fase estacionaria se movieron a alturas equivalentes a
esta relación, luego se procedió a secar la cromato placa y se realizó una primera
observación con luz uv en la cual no se apreciaban con claridad las separaciones
por lo que se le agrego dos soluciones que funcionan como reveladores en la luz
uv por lo que ya se observaron mejor, finalmente se procedió a caracterizar la
cromatoplaca donde se encerraban en un círculo la separaciones y se identifico el
color del cirulo, finalmente se determinó los RF’s que son la relación de la
distancia recorrida de la muestra y la distancia recorrida del eluyente donde se
identificaron las sustancias por medio de estas distancias.
Se identifico con los RF’s y los colores entre las muestras y los estándares
en el que en la muestra de pericón se obtuvo que se encontraban las sustancias
Hiperósido, Quercetina y Ácido Clorogénico, en el extracto de pericón se
identificaron las mismas sustancias, en la muestra de Valerina y extracto de
Valerina se identifico la sustancia de ácido clorogénico, en la mayoría de muestras
no coinciden los RF’s por lo que se identifico al RF’s más cercano al del estándar,
los estándar con valores cercanos para diferenciarlos se logró identificar con el
color obtenido por la muestra.
9. Referencias:
Douglas A. Skoog (6ta Ed.). Principios de Análisis Instrumental. (2008).
México: CENGAGE LEARNING.
10. Anexos:
Fase Estacionaria:
Fase móvil:
Cromatográfica de capa final:
Hoja de Datos Originales:
