ABC del laboratorio
Vitamina B12 activa (holotranscobalamina)
Active vitamin B-12 (holotranscobalamin)
Código SCPC (Sociedad Colombiana de Patología Clínica): 20040. Código CUPS (Codifica-
ción Única de Procedimientos en salud): No aplica. Sección: química clínica. Nivel de com-
plejidad: alto. Metodología: inmunoensayo quimioluminiscente de macropartículas (CMIA).
Sinónimos: holotranscobalamina
Definición
La prueba de la vitamina B12 activa (holotranscobalamina) es un inmunoensayo quimioluminis-
cente de macropartículas (CMIA) para la determinación cuantitativa de la holotranscobalamina
en suero, como ayuda para el diagnóstico y tratamiento de la deficiencia de vitamina B12 [1].
Espectro clínico de aplicación
La vitamina B12 (cobalamina) es una metaloenzima esencial para el metabolismo de aminoá-
cidos y, en particular, para la síntesis del ADN mediante la conversión del metiltetrahidro-
folato a tetrahidrofolato [2,3]. Esta vitamina no se sintetiza en el cuerpo humano sino que
es tomada de la dieta a partir de productos como las carnes y los lácteos. La vitamina B12
en el suero se encuentra unida a las proteínas transcobalamina y haptocorrina, siendo el
complejo formado por la vitamina B12 y la transcobalamina conocido como holotranscoba-
lamina y por la vitamina B12 y la haptocorrina como holohaptocorrina [4,5].
La holotranscobalamina contiene aproximadamente el 30% de la vitamina B12 circulante y
representa la vitamina B12 biológicamente activa, la cual es transportada a todas las células
e ingresa a través de un receptor específico, el CD320 [4-6]. La deficiencia congénita y
las alteraciones genéticas de la transcobalamina conducen a deficiencia de vitamina B12
poco después del nacimiento y se manifiestan clínicamente con afecciones hematológicas,
neurológicas y metabólicas propias de la deficiencia de esta vitamina, las cuales requieren
tratamientos agresivos incluso cuando el valor sérico de la vitamina B12 se encuentra nor-
mal [6-10]. Entretanto, la vitamina B12 unida a haptocorrina, a pesar de que representa
alrededor del 80% de la vitamina B12 circulante, se considera metabólicamente inerte de-
bido a que no existen receptores celulares para su captación en los tejidos, excepto en
el hígado [2]; además, la deficiencia genética de la haptocorrina es poco común y no se
considera grave [2,11].
La holotranscobalamina circulante presenta una vida media aproximadamente de 1-2 h,
mucho más corta que la de la holohaptocorrina que dura varios días, y es rápidamente
captada en los tejidos [5,6]. La holotranscobalamina se ha encontrado como uno de los
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primeros marcadores de deficiencia de vitamina B12 [12,13], con un mejor desempeño
para detectar la deficiencia que la medición sérica de vitamina B12 total [4,12,14-17], cuyos
niveles corresponden en mayor parte a la vitamina B12 unida a la haptocorrina. Además, se
ha demostrado la correlación de los niveles de holotranscobalamina con los de vitamina
B12 [2,16]; no obstante, en algunos casos pueden presentarse niveles bajos de holotransco-
balamina en presencia de valores altos de vitamina B12 [16].
La deficiencia de vitamina B12 en la población joven se encuentra entre el 5% y el 7%
mientras que la deficiencia funcional de esta vitamina, establecida por niveles bajos de
holotranscobalamina, es común en los ancianos y se ha encontrado en el 10% al 30% de
los individuos mayores de 65 años. Los grupos de riesgo que se han establecido para la
deficiencia de vitamina B12 incluyen: pacientes con anemia de origen desconocido, con
síntomas neurosiquiátricos inexplicables, con manifestaciones gastrointestinales (p. ej. es-
tomatitis, anorexia y diarrea), personas de edad avanzada, vegetarianos, pacientes con tras-
tornos gastrointestinales (p. ej. enfermedad de Crohn o infección con Helicobacter pylori)
y los pacientes con resección de estómago, entre otros [18], en los cuales se requiere
evaluar el estado de la vitamina B12 y la medición de la holotranscobalamina podría ayudar
a establecer la deficiencia.
Los valores de holotranscobalamina se han registrado disminuidos en individuos con signos
bioquímicos de deficiencia de vitamina B12 [15,19]; además, en aquellos con riesgo de su-
frirla como los vegetarianos [12,20], los veganos [21], los ancianos [17] y las personas con
bajo consumo de la vitamina [15]. De igual manera, en los pacientes con Alzheimer se han
encontrado concentraciones de holotranscobalamina reducidas, sin cambios en los niveles
de vitamina B12, en comparación con individuos sanos [22]. Contrariamente, las concentra-
ciones de holotranscobalamina han demostrado ser mayores en los sujetos con creatinina
elevada en comparación con aquellos con valores disminuidos de creatinina [16], por lo
cual es importante tener en cuenta el estado renal del individuo para la interpretación de
los resultados y el establecimiento del diagnóstico de deficiencia de vitamina B12 [18].
Actualmente, se disponen de nuevos métodos basados en anticuerpos monoclonales es-
pecíficos de la transcobalamina para el diagnóstico de la deficiencia de vitamina B12 [4],
en los cuales las concentraciones de holotranscobalamina determinadas reflejan el estado
de la vitamina B12 independiente de la absorción reciente de la vitamina [23]. Además, el
desarrollo de métodos automatizados para evaluar los niveles de holotranscobalamina he
hecho posible que los estudios de tamizaje puedan ser realizados a gran escala. De esta
manera, el efecto costo-beneficio de la detección temprana de la deficiencia de vitamina
B12 mediante el uso de holotranscobalamina anticipa que pronto reemplazará a la medición
de la vitamina B12 como un parámetro de laboratorio de primera línea para el tamizaje de
la deficiencia de vitamina B12 [18].
Fundamento
El ensayo de vitamina B12 activa (holotranscobalamina) es un inmunoanálisis de dos pasos que
utiliza la tecnología de inmunoensayo quimioluminiscente de macropartículas (CMIA) para la
determinación cuantitativa de holotranscobalamina en suero humano [1].
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En el primer paso se combina la muestra con las micropartículas paramagnéticas recubier-
tas de anticuerpos antiholotranscobalamina, los cuales se unen a la holotranscobalamina
presente en la muestra. En el segundo paso, luego de un lavado, se añade el conjugado de
anticuerpos monoclonales de ratón antiholotranscobalamina marcados con acridinio. Tras
otro ciclo de lavado se incluyen las soluciones preactivadora (peróxido de hidrogeno) y acti-
vadora (hidróxido de sodio) y la reacción quimioluminiscente resultante se mide en unidades
relativas de luz (URL) [1].
Las unidades relativas de luz detectadas en el sistema óptico del equipo son directamente pro-
porcionales a la cantidad de holotranscobalamina presente en la muestra [1].
Preparación del paciente
y manejo de las muestras
Preparación del paciente
El paciente requiere de un ayuno de 12 h.
Tipo de muestra
Suero humano recolectado en tubos secos (tapa roja) o con separador (tapa amarilla) [1].
Manejo y conservación de las muestras
Las muestras se pueden almacenar con o sin el coágulo durante máximo 16 h a temperatura
ambiente o hasta por tres días entre 2 °C y 8 °C. En caso de que el análisis tome más de tres
días en realizarse se debe retirar el coágulo del suero y almacenar este último a una tempera-
tura menor o igual que -20 °C por un período máximo de seis meses [1].
Las muestras congeladas se deben descongelar por completo antes de ser mezcladas. Una vez
descongeladas se mezclan en un agitador de tubos tipo Vortex a baja velocidad o por inversión
10 veces. En caso de observarse capas o estratificación se debe continuar mezclando hasta que
las muestras estén visiblemente homogéneas. Las muestras no se deben someter a más de tres
ciclos de congelación/descongelación [1].
Antes del análisis, si las muestras contienen fibrina, eritrocitos u otras partículas en suspensión
o han sido congeladas y descongeladas, deben transferirse a tubos de centrífuga y centrifugarse
durante 10 minutos a más de 10.000 g. Las muestras lipémicas deben transferirse a una copa
de muestra o a un segundo tubo procurando tomar solo la porción clarificada de la muestra
sin el material lipídico [1].
Para el análisis dispense la muestra aclarada en una copa de muestra o un segundo tubo [1].
El transporte de muestras se recomienda realizarla sin el coágulo y preparadas y etiquetadas
de acuerdo a las normativas vigentes para el transporte de muestras y sustancias infecciosas, a
una temperatura entre 2 °C y 8 °C (con hielo) o congeladas (con hielo seco), sin sobrepasar
los tiempos de almacenamiento mencionados previamente [1].
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Valores esperados
Los valores esperados en muestras de suero para el ensayo de vitamina B12 activa (holotransco-
balamina) en los sistemas de ARCHITECT i 2000SR son: 25,1 pmol/L a 165,0 pmol/L [1].
Interpretación de resultados
Los niveles de holotranscobalamina por debajo de 25,1 pmol/L son indicativos de una defi-
ciencia de transcobalamina, condición que da lugar a síntomas graves en la primera infancia y
que debe ser diagnosticada lo antes posible para evitar daños permanentes en esta población.
Teniendo en cuenta que los niveles de transcobalamina reflejan el estado de vitamina B12, un
valor por debajo del intervalo de referencia sugiere una deficiencia de vitamina B12 [4], la cual
se debe correlacionar con los hallazgos hematológicos y neurológicos, la información sobre la
ingesta de vitamina B12 y con la presencia de falla renal [24], condición clínica en la que general-
mente se encuentran aumentados los niveles de holotranscobalamina a pesar de la deficiencia
de vitamina B12 característica en estos individuos [18,25].
Los niveles de holotranscobalamina se pueden encontrar normales en los pacientes con anemia
perniciosa luego de la corrección de la deficiencia de vitamina B12 , aunque sus valores continúan
siendo menores respecto a las personas sanas [23], lo que sugiere una influencia independiente
del estado de absorción de la vitamina B12 sobre los valores de la holotranscobalamina.
Interferentes
Las muestras inactivadas con calor, mezcladas, intensamente hemolizadas, con contaminación
microbiana evidente, con fibrina, eritrocitos o partículas en suspensión no se deben utilizar
pues pueden arrojar resultados alterados [1].
Las muestras de suero de pacientes con tratamientos anticoagulantes o terapia trombolítica
pueden contener fibrina, debido a la formación incompleta del coágulo, la cual interfiere con
los resultados [1].
Las muestras no deben tener burbujas. En caso de presentarse se deben retirar con un palillo
antes del análisis [1].
Las muestras no homogéneas pueden dar resultados inconsistentes [1].
Las muestras con concentraciones de bilirrubina, hemoglobina, proteínas totales, triglicéridos
y factor reumatoide mayores que 20 mg/dL, 200 mg/dL, 10 g/dL, 850 mg/dL y 70 UI/mL,
respectivamente, pueden interferir con los resultados del ensayo de la vitamina B12 activa
(holotranscobalamina) de los sistemas de ARCHITECT i 2000SR [1].
Las muestras de pacientes que han recibido preparados de anticuerpos monoclonales de
ratón con fines diagnósticos o terapéuticos pueden contener anticuerpos humanos antiratón
que alteran los resultados del ensayo [1].
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Los anticuerpos heterófilos presentes en el suero humano pueden reaccionar con las in-
munoglobulinas del reactivo de la prueba e interferir con el ensayo in vitro. Los individuos
que están en contacto habitual con animales o productos con suero de origen animal son
propensos a presentar este tipo de interferencia y resultados alterados. En estos casos se
requiere información adicional del paciente para establecer el diagnóstico [1].
Limitaciones
Los resultados de la prueba deben ser coherentes con los datos clínicos, en caso contrario se
recomienda realizar otro análisis para confirmar los resultados [1].
Los resultados con fines diagnósticos se deben correlacionar con los síntomas, resultados de
otros análisis, la impresión clínica, entre otros [1].
No se recomienda usar otro tipo de tubos ni de muestra a los especificados [1].
Cada laboratorio debe establecer su propio intervalo de valores de referencia, según la población
que atiende y los factores geográficos, de pacientes, de alimentación y medioambientales [1].
El ensayo de vitamina B12 activa (holotranscobalamina) para los sistemas de ARCHITECT i 2000SR
está diseñado para tener un porcentaje de reactividad cruzada menor o igual al 10% con las
proteínas apotranscobalamina y haptocorrina, a las que también se une la vitamina B12, cuando
se encuentran a concentraciones entre 250 pmol/L y 500 pmol/L, y entre 2.500 pmol/L y 5.000
pmol/L, respectivamente [1].
Bibliografía
1. Abbott Laboratories. ARCHITECT Active-B12 Mittelman M. Hereditary partial transcobalamin II defi-
(Holotranscobalamin). Wiesbaden, Alemania; 2013. ciency with neurologic, mental and hematologic abnor-
2. Al Aisari F, Al-Hashmi H, Mula-Abed WA. Com- malities in children and adults. Isr Med Assoc J 2003; 5:
parison between Serum Holotranscobalamin and 868-872.
Total Vitamin B12 as Indicators of Vitamin B12 Sta- 9. Hall CA. Congenital disorders of vitamin B12 trans-
tus. Oman Med J 2010; 25: 9-12. port and their contributions to concepts. II. Yale J
3. Solomon LR. Disorders of cobalamin (vitamin B12) Biol Med 1981; 54: 485-495.
metabolism: emerging concepts in pathophysiology, 10. Li N, Rosenblatt DS, Seetharam B. Nonsense mu-
diagnosis and treatment. Blood Rev 2007; 21: 113-130. tations in human transcobalamin II deficiency. Bio-
4. Nexo E, Hoffmann-Lucke E. Holotranscobalamin, a chem Biophys Res Commun 1994; 204: 1111-1118.
marker of vitamin B-12 status: analytical aspects and 11. Markle HV. Cobalamin. Crit Rev Clin Lab Sci 1996;
clinical utility. Am J Clin Nutr 2011; 94: 359S-365S. 33: 247-356.
5. Chatthanawaree W. Biomarkers of cobalamin 12. Herrmann W, Obeid R, Schorr H, Geisel J. Func-
(vitamin B12) deficiency and its application. J Nutr tional vitamin B12 deficiency and determination
Health Aging 2011; 15: 227-231. of holotranscobalamin in populations at risk. Clin
6. Quadros EV. Advances in the understanding of co- Chem Lab Med 2003; 41: 1478-1488.
balamin assimilation and metabolism. Br J Haematol 13. Nexo E, Hvas AM, Bleie O, Refsum H, Fedosov
2010; 148: 195-204. SN, Vollset SE, et al. Holo-transcobalamin is an early
7. Hakami N, Neiman PE, Canellos GP, Lazerson J. marker of changes in cobalamin homeostasis. A ran-
Neonatal megaloblastic anemia due to inherited domized placebo-controlled study. Clin Chem 2002;
transcobalamin II deficiency in two siblings. N Engl J 48: 1768-1771.
Med 1971; 285: 1163-1170. 14. Woo KS, Kim KE, Park JS, Park JI, Han JY. Re-
8. Teplitsky V, Huminer D, Zoldan J, Pitlik S, Shohat M, lationship between the Levels of Holotranscobalamin
197
Medicina & Laboratorio Volumen 21, Números 3-4, 2015.
and Vitamin B12. Korean J Lab Med 2010; 30: 185-189. methylmalonic acid concentrations, and hyperhomo-
cysteinemia in vegetarians. Am J Clin Nutr 2003; 78:
15. Miller JW, Garrod MG, Rockwood AL, Kushnir 131-136.
MM, Allen LH, Haan MN, et al. Measurement of
total vitamin B12 and holotranscobalamin, singly 21. Lloyd-Wright Z, Hvas AM, Moller J, Sanders TA,
and in combination, in screening for metabolic vita- Nexo E. Holotranscobalamin as an indicator of di-
min B12 deficiency. Clin Chem 2006; 52: 278-285. etary vitamin B12 deficiency. Clin Chem 2003; 49:
2076-2078.
16. Herrmann W, Obeid R. Utility and limitations of
biochemical markers of vitamin B12 deficiency. Eur 22. Refsum H, Smith AD. Low vitamin B-12 status in
J Clin Invest 2013; 43: 231-237. confirmed Alzheimer’s disease as revealed by se-
rum holotranscobalamin. Journal of Neurology,
17. Valente E, Scott JM, Ueland PM, Cunningham C, Neurosurgery & Psychiatry 2003; 74: 959-961.
Casey M, Molloy AM. Diagnostic accuracy of ho-
lotranscobalamin, methylmalonic acid, serum cobal- 23. Chen X, Remacha AF, Sardà MP, Carmel R. Influ-
amin, and other indicators of tissue vitamin B(1)(2) ence of cobalamin deficiency compared with that of
status in the elderly. Clin Chem 2011; 57: 856-863. cobalamin absorption on serum holo-transcobalamin
II. The American Journal of Clinical Nutrition 2005; 81:
18. Herrmann W, Obeid R. Holotranscobalamin – An 110-114.
Early Marker for Laboratory Diagnosis of Vitamin B12
Deficiency. European Haematology 2009; 3: 7-11. 24. Green R. Indicators for assessing folate and vita-
min B-12 status and for monitoring the efficacy of
19. Obeid R, Jouma M, Herrmann W. Cobalamin sta- intervention strategies. Am J Clin Nutr 2011; 94:
tus (holo-transcobalamin, methylmalonic acid) and 666S-672S.
folate as determinants of homocysteine concentra-
tion. Clin Chem 2002; 48: 2064-2065. 25. Carmel R, Vasireddy H, Aurangzeb I, George
K. High serum cobalamin levels in the clinical set-
20. Herrmann W, Schorr H, Obeid R, Geisel J. Vitamin ting--clinical associations and holo-transcobalamin
B-12 status, particularly holotranscobalamin II and changes. Clin Lab Haematol 2001; 23: 365-371.
Parque Nacional de Los Lagos de Plitvice.
Croacia.
Carlos Alberto Lozano M.
[email protected]198
Volumen 21, Números 3-4, 2015. Medicina & Laboratorio
