INTERPRETACION
DEL
PROTEINOGRAMA
ELECTROFORETICO
E
INMUNOFIJACION.
UTILIDAD
DEL
TEST
DE
CADENAS
LIGERAS
LIBRES.
IBETH
NEYRA
VERA
MEDICA
PATOLOGA
CLINICA
SERVICIO
DE
INMUNOLOGIA
Y
BIOQUIMICA-‐
DPC
HNERM
Introducción
Las
gammapa2as
monoclonales
son
un
conjunto
de
trastornos
asociados
a
proliferación
de
células
B
maduras.
Caracterizadas
en
su
mayoría,
por
la
secreción
de
moléculas
de
inmunoglobulinas
(intactas
o
fragmentos)
homogéneas
desde
el
punto
de
vista
inmunoquímico
y
electroforéEco,
habitualmente
llamadas
componente
monoclonal.
En
la
mayoría
de
los
casos
sin
consecuencias
clínicas
importantes;
producen
manifestaciones
clínicas
debido
a
la
proliferación
celular
clonal
neoplásica
o
al
efecto
biológico
de
la
proteína
monoclonal
sobre
diferentes
órganos
o
sistemas.
La
concentración
del
componente
monoclonal
está
relacionada
con
la
masa
del
clon
que
la
produce.
Es
un
marcador
bioquímico
esencial.
DiagnósEco
PronósEco
Monitorización
Tratamiento
CM
ALB
ALFA1
ALFA2
BETA
GAMMA
Implica
tres
fases:
Detección
IdenEficación
CuanEficación
CuanEficación
de
proteínas
totales,
inmunoglobulinas
totales.
Electroforesis
de
suero
y
orina
Inmunofijación
de
suero
y
orina
CuanEficación
de
cadenas
ligeras
libres
(nefelometría
o
turbidimetría)
Cálculo
del
cociente
kappa/lambda
Fase
preanalíEca:
Suero
Orina
de
24
horas
Fase
analíEca:
Especificaciones
analíEcas
de
calidad
como
son:
CV,
Variabilidad
biológica,
error
sistemáEco
y
total.
Fase
post
analíEca:
Emisión
del
reporte
final
(gráficos,
interpretación,
cuanEficación
del
CM
de
ser
posible
(suero
y
orina)
Técnica
de
separación
consistente
en
el
transporte
de
iones
a
través
de
una
disolución
por
la
acción
de
un
campo
eléctrico.
Los
iones
presentes
en
la
disolución
se
mueven
hacia
uno
u
otro
electrodo
según
su
propia
carga.
DENSITOMETRO
Sensibilidad
analíEca
de
la
electroforesis
500-‐2000
mg/L
Métodos
colorimétricos
Biuret
(2-‐
12
g/dl)
Métodos
turbidimétricos
o
nefelométricos
(1.0
mg/dl)
ANALISIS
ELECTROFORETICO
DE
LOS
COMPONENTES
DE
UN
ESPECIMEN
CON
ELECTROFORESIS
DE
ZONA
• ANALISIS
CUALITATIVO:
IdenEficar,
visualizar,
localizar
• ANALISIS
CUANTITATIVO:
Densitometría
Albumina
α1 : Orosomucoide, α1 antitrypsina
α2 : Haptoglobina, α2 macroglobulina, α lipoproteina
β : Transferrina, hemopexina, C3 complemento,
β lipoproteina
γ : Immunoglobulinas
Análisis
electroforéEco
de
los
componentes
de
un
espécimen
con
electroforesis
capilar
Método
automaEzado
Separa
par2culas
cargadas
que
migran
a
disEnta
velocidad
en
un
campo
eléctrico,
en
un
capilar
de
sílice
fundido
Detector
de
lectura
UV
(220
nm),
lectura
directamente
proporcional
a
la
canEdad
de
enlace
pep2dico
de
la
muestra.
EF
en
gel
de
agarosa
EF
capilar
Sensibilidad
menor
de
0,5-‐2,0g/ Sensibilidad
0,2g/L
-‐0.5g/L
L
CuanEficación
del
CM
CuanEficación
del
CM
por
espectrofotometría
en
UV
densitometría
(colorante
fijado)
directamente
proporcional
a
la
SemiautomaEzada
canEdad
de
enlace
pep2dico
AutomaEzado
Criterios
que
definen
separación
electroforéEca
de
alta
calidad
JOHNSON
A
M
et
al
Serum
protein
in
clinical
medicine
Vol1
1Ed-‐1996
COEFICIENTE
DE
VARIACION
TOTAL
ANALITICO
Y
BIOLOGICO
PICO
PICO
MONOCLONAL
MONOCLONAL
CLL>100
SUERO
ORINA
mg/L
IgG
suero
>10g/L
>=200MG/24Hr
CV
TOTAL
8.1
35.8
28.4
13
CV
ANALITICO
2.1
4.5
5.8
4.2
CV
BIOLOGICO
7.8
35.5
27.8
12.3
de
la
electroforesis
en
gammapaVas
Las
bandas
Ig
A
pueden
ocultarse
por
la
transferrina
El
metabolismo
de
la
IgG
es
variable
Cambios
en
el
hematocrito
y
volumen
plasmáEco
afectan
las
mediciones
Predominantemente
IgG
Kappa.
Pueden
ser
interpretados
de
modo
erróneo
como
recaída
Suelen
ser
debido
a:
Respuesta
inmune
en
individuo
sano
AutoanEcuerpos
Ac.
a
proteínas
virales
Pacientes
post
transplantados
(10-‐73%)
Algunos
ejemplos
MODELO
DE
PROTEINOGRAMA
MONOCLONAL
EN
ORINA
Inmunofijación
Combina
electroforesis
de
zona
con
inmunoprecipitación
Separa
proteínas
por
electroforesis,
empleando
luego
anEsueros
monoespecíficos
Si
el
an2geno
está
presente
se
forma
una
banda
de
inmunoprecipitación
caracterísEca
Sensibilidad
analíEca
de
150-‐500
mg/L
INMUNOFIJACION
INMUNOFIJACION
Etapas:
1. Separación
de
proteínas
mediante
electroforesis
en
gel
de
agarosa.
2. Inmunofijación
(inmunoprecipitación)
de
las
proteínas
separadas
:
Los
carriles
de
migración
electroforéEca
apropiados
son
recubiertos
con
anEsueros
individuales,
que
difunden
dentro
del
gel
y
precipitan
los
an2genos
correspondientes.
3. Las
proteínas
del
carril
de
referencia
son
fijadas
con
una
solución
fijadora.
4.
Proteínas
no
precipitadas
se
eliminan
del
gel
mediante
un
blojng
y
un
lavado.
5.
La
precipitación
del
complejo
an2geno-‐
anEcuerpo
queda
fijada
en
la
matriz
del
gel
6.
Los
precipitados
y
las
proteínas
fijadas
son
visualizadas
mediante
Ención
PATRON
NORMAL
DE
INMUNOFIJACION
Electroforesis
de
Proteínas
en
suero
e
Inmunofijación
Suero
Normal
Mieloma
MúlEple
Hipergammaglobulinemia
policlonal
INMUNOFIJACION
Componente monoclonal tipo cadena ligera
lambda. Se busca determinar si corresponde a
una cadena ligera libre o es parte de otra Ig no
evaluada aquí (Ig D o Ig E)
Descartar
fenómenos
de
polimerización
INMUNOFIJACIÓN:
APLICACIONES
Sospecha
de
proteína
monoclonal
de
cadena
pesada
o
ligera
simple
Esclarecimiento
de
bandas
enmascaradas.
IdenEficación
de
proteína
de
Bence
Jones
en
orina.
Búsqueda
de
proteínas
monoclonales
luego
de
desaparición
en
proteinograma
por
tratamiento.
Reconocimiento
de
gammapa2a
biclonal.
Criterio
diagnosEco
estricto
y
de
remisión
completa
CUANTIFICACIÓN
DE
INMUNOGLOBULINAS
CADENAS
LIBRES
POR
NEFELOMETRÍA
/TURBIDIMETRÍA
La
nefelometría
es
una
técnica
inmunológica
que
evidencia
si
una
proteína
esta
presente
en
la
muestra
y
en
que
concentración
pero
no
es
capaz
de
prever
la
distribución
ni
la
clonalidad
Alta
sensibilidad.
Detecta
concentraciones
inferiores
a
1
mg/L
de
IGS
kappa
y
lambda
en
comparación
con
los
150-‐500
mg/L
de
la
IFE
y
los
500-‐2000
m/L
de
la
electroforesis
Precauciones
Siempre
chequear
las
unidades
(mg/l,
mg/dl)
Considere:
ü Exceso
de
an2genos
ü Polimerización
ü Variación
de
lote
a
lote
ü No
hay
dilución
lineal
ü Impacto
de
la
disfunción
renal
ü Impacto
de
las
terapias
en
curso
COMPARACIÓN
DE
LOS
DIFERENTES
ENSAYOS
EXISTENTES
PARA
LA
MEDICIÓN
VENTAJAS DESVENTAJAS
PROTEÍNAS
TOTALES
EN
Simple,
barato,
ampliamente
usado Sensibilidad
inadecuada
para
detección
de
cadenas
ligeras
libres
ORINA
TIRAS
REACTIVAS
DE
Simple,
barato,
ampliamente
usado Sensibilidad
inadecuada
para
detección
de
cadenas
ligeras
libres
ORINA
ELECTROFORESIS
DE
Simple,
método
manual/
Poco
sensible
(500-‐2,000
mg/L)
PROTEINAS
EN
SUERO semiautomaEzado
bien
establecido,
No
puede
detectar
cadenas
ligeras
libres
a
bajas
concentraciones
barato,
bandas
monoclonales
se
Interpretación
subjeEva
de
los
resultados
visualizan
Resultado
´´cuanEtaEvo´´
con
scanner
ELECTROFORESIS
DE
Simple,
método
manual/
Interpretación
subjeEva
de
los
resultados
PROTEINAS
EN
ORINA semiautomaEzado
bien
establecido,
La
orina
puede
requerir
concentración
con
posible
pérdida
de
proteínas
barato,
bandas
monoclonales
se
Bandas
falsas
en
orinas
concentradas
visualizan
Proteinuria
pesada
obscurece
resultados
Resultado
´´cuanEtaEvo´´
con
scanner
Requiere
colectar
orina
de
24
hrs
ELECTROFORESIS
DE
Bien
establecida
No
es
cuanEtaEva
INMUNOFIJACION
EN
Buena
sensibilidad
en
suero
y
muy
Sensibilidad
en
suero
(150
mg/L)
inadecuada
para
niveles
séricos
SUERO
Y
EN
ORINA sensible
en
orina
concentrada
normales
(5-‐30
mg/L) Técnica
manual,
semiautomaEzada
AnEsueros
costosos
ELECTROFORESIS
Tecnología
nueva
automaEzada
Menos
sensible
(400
mg/L)
que
la
electroforesis
de
inmunofijación
para
CAPILAR
EN
ZONA cuanEtaEva el
suero
K/L
TOTAL Inmunoensayo
automaEzado Sensibilidad
(>1000
mg/L)
inadecuada
par
detectar
pacientes
con
mieloma
mílEple
de
cadenas
ligeras
NIVELES
DE
SENSIBILIDAD
ANALITICA
REPRESENTATIVA
DE
ENSAYOS
COMUNMENTE
USADOS
PARA
CUANTIFICAR
CADENAS
LIGERAS
KAPPA LAMBDA REQUERIMIENTOS
DIAGNOSTICOS
ELECTROFORESIS 500-2000 mg/L 500-2000 mg/L Banda Monoclonal
DE PROTEINAS EN
SUERO
ELECTROFORESIS 150-500 mg/L 150-500 mg/L Banda Monoclonal
DE INMUNOFIJACION
CADENAS LIGERAS 1.5 mg/L 3.0 mg/L Razón K/L ANORMAL
LIBRES 0.26-1.65
rango renal (0.37-3.1)
GRACI
