Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Química
Laboratorio de Bioquímica Experimental
Clave: 0141. Semestre 2020-1.
Horario: Martes 2:30-6:30 pm y Jueves 3:00-5:00 pm
Equipo No. 2
Luz Andrea Vega Duarte
REGULACIÓN DEL METABOLISMO: REGULACIÓN GENÉTICA EN EL OPERÓN LAC.
1-¿Qué es la regulación genética?
Capacidad de una bacteria o célula de controlar la expresión de sus genes, o modular las
velocidades con las que los diferentes genes son expresados. Existen genes con
una función más especializada y cuya participación sólo es requerida por la célula
bajo ciertas circunstancias. Por ello, todos los organismos son capaces de regular
la expresión de sus genes.
2-¿Cuáles son las diferencias entre la expresión genética constitutiva, la inducible y la
represible?
En la expresión genética constitutiva los genes se expresan de manera continua en la
célula y sus productos tienen funciones en el metabolismo básico celular, hecho
por el cual es requerida la expresión genética en todo momento. Para la expresión
genética inducible los genes solo se expresan en determinadas condiciones del
desarrollo o en respuesta al ambiente externo como la presencia de nutrientes, el
estrés, entre otros.
La expresión represible se caracteriza por la capacidad de expresar genes estructurales
aun en ausencia de inductor, y en respuesta a un agente represor se activan. El
inductor funciona como represor y se une al operador, inhibiendo el
funcionamiento del promotor y la transcripción de los genes estructurales.
3-¿Cómo funcionan los mecanismos de control positivo de la expresión genética?
El control positivo se da cuando el producto del gen regulador activa la expresión de los
genes, actúa como un activador.
4-¿Cómo funcionan los mecanismos de control negativo de la expresión genética?
El control negativo se da cuando el producto del gen regulador reprime o impide la
expresión de los genes, actúa como un represor.
5- Investiga que reacciones catalizan las enzimas del operón de la lactosa
- β-galactosidasa: cataliza la hidrolisis de la lactosa en glucosa más galactosa
- Galactósido permeasa: transporta β-galactósidos al interior de la célula
bacteriana.
- Tiogalactósido transacetilasa: cataliza la transferencia del grupo acetil del
Acetil Coenzima A al 6-OH de un aceptor tiogalactósido. Este gen no esta
relacionado con el metabolismo de la lactosa.
6-¿Qué son un activador y un inductor?
El activador es una proteína que al asociarse a un elemento regulador del DNA que actúa
en cis, como operador o intensificador, activa la transcripción a partir de un
promotor adyacente.
El inductor puede ser sustrato o compuesto cuya presencia induce la expresión de los
genes.
7-¿Qué son un represor y un correpresor?
El represor es una proteína que actúa al adherirse a la región promotora del gen, lo que
impide la producción de RNA mensajero, es decir, desactiva la expresión de uno o
más genes.
El correpresor puede ser un proteína o complejo que actúa conjuntamente con una
proteína represora para reprimir la transcripción. Normalmente el correpresor no se
une directamente al DNA.
8-¿Qué es un operón y cuáles son sus componentes?
Un operón se define como un conjunto de genes estructurales que pueden regular su
propia expresión a partir de elementos de control dependiendo de la presencia o
ausencia de un sustrato. Los principales elementos que constituyen un operón
son los siguientes: Elementos de control (Promotor y Operador), Genes
estructurales (codifican para polipéptidos), Gen regulador (codifica para proteína
reguladora), moléculas difusibles (proteínas reguladoras, promotores, inductores).
9-¿Cuál es la estructura del operón de la lactosa en E. coli?
10-¿Cómo funciona este operón en ausencia y en presencia de lactosa?
En ausencia de lactosa, la proteína represora se une a la región operadora del gen. Dicha
unión de la proteína represora impide el acceso de la RNA polimerasa al promotor,
y con ello se bloquea la transcripción de genes.
En presencia de lactosa actúa como inductor para el operón lac. La lactosa al unirse al
represor provoca que éste se separe del operador dejando el sitio libre para que la
RNA polimerasa pueda transcribir los genes.
11-¿Qué es la represión catabólica?
La represión catabólica es otro factor que influye en la expresión del operón lac, q ue
involucra a una segunda proteína reguladora, CAP (proteína activadora de
catabolito), y un segundo sitio de unión, el sitio CAP, adyacente al promotor.
La CAP se une al sitio CAP sólo en presencia de AMP cíclico (AMPc), un nucleótido
modificado derivado del ATP por la adenilato ciclasa. La cantidad de AMPc en la
célula depende de la concentración de glucosa, y por ende de ATP, que inhibe a la
adenilato ciclasa. Si los niveles de glucosa son altos (nivel de ATP alto) hay poco
AMPc y si son bajos hay mucho AMPc (niveles de ATP bajos). Al controlar la
cantidad de AMPc en la célula, la glucosa indirectamente regula la unión del
complejo CAP-AMPc al sitio CAP. Esto es muy importante porque cuando el
complejo CAP-AMPc está unido, se estimula la unión de la RNA polimerasa al
promotor (regulación positiva), lo que ocasiona la transcripción de los genes
estructurales del operón de lactosa.
12-Explica que ocurre en los tubos A-E de la práctica.
Tubo A: La célula bacteriana asimila la glucosa agregada como única fuente de nutrientes
para sus requerimientos energéticos.
Tubo B: La célula bacteriana asimila la lactosa como única fuente de nutrientes y para ello
lleva a cabo la transcripción de genes (en el operón lac) que codifican las enzimas
para poder asimilarla.
Tubo C: La célula bacteriana utiliza primeramente la glucosa como fuente de carbono sin
asimilar la lactosa presente (no se lleva a cabo la transcripción del operón a pesar
de que el carbohidrato está en el medio). Una vez que en el medio ya no hay
glucosa, la bacteria empieza asimilar la lactosa ya que hay un incremento en los
niveles de AM P C y ello favorece la transcripción del operón lac.
Tubo D: La expresión de los genes para asimilar la lactosa se da de manera tardía ya que
dicho carbohidrato se agrega a los 7 minutos y medio de incubación. A pesar de
que si hay expresión, esta es baja.
Tubo E: Es el tubo control. Dado que no hay células bacterianas para asimilar los
carbohidratos presentes en el medio no hay desarrollo de color al agregar el
ONPG. Sirve en la comparación del desarrollo del color con los demás tubos.
13-¿Qué reacción es responsable del color amarillo observado en los tubos?
Corresponde a la ruptura del compuesto ONPG, el cual normalmente es incoloro, sin
embargo al estar presente la enzima β-galactosidasa, hidroliza la molécula ONPG
en galactosa y orto-nitrofenol, el cual tiene un color amarillo.
14-¿Qué ocurriría si a los tubos B y C se agregara ATP?
La actividad enzimática disminuiría ya que los altos niveles de ATP inhiben la formación
de AM P C lo cual desfavorece la expresión genética del operón lac.
15-¿Qué importancia tiene la regulación de la expresión genética en procariontes?
Es de gran importancia ya que por medio de estos mecanismos es como pueden evitar un
gasto energético que, en condiciones favorables, seria innecesario. En condiciones
adversas pueden poner en marcha dichos genes los cuales ayudaran en su
supervivencia por asimilación de diferentes nutrientes o expresión de enzimas,
receptores etc.
16-¿Cuáles son las principales diferencias en la regulación genética entre procariontes y
eucariontes?
El tiempo de vida de un RNAm interviene en la regulación de la expresión en eucariontes
ya que si no se utilizan estos pueden ser cortados y desechados.
La regulación genética en eucariontes no se lleva a cabo por medio de operones.
La estructura que adquiere el DNA puede estar regulada por diversas proteínas lo que
conlleva a la expresión o no de genes en la célula eucariota.
17-¿Qué aplicaciones tienen en su práctica profesional o en su vida cotidiana los
conceptos adquiridos al realizar esta práctica?
Desarrollo de herramientas biológicas para la expresión de proteínas de interés utilizando los
microorganismos como fábricas celulares.
RESULTADOS
A partir de las muestras preparadas y etiquetadas en los tubos de microfuga como A, B,
C, D, y E, y posterior al agregado el reactivo ONPG, y a la incubación a temperatura
ambiente durante 2 minutos, a continuación se muestra el desarrollo del color amarillo
presentado en los diferentes tubos después de detener la reacción con la solución
N a2 CO3 1M.
I) II)
Figura 1. I) Tubos con cultivo de células de E. coli cepa W3110. Tubo A (Glucosa 2%), Tubo
B (lactosa 2%), Tubo C (glucosa 2% + lactosa 2%), Tubo D (Glucosa 2%, a los 7.5 min de
incubación se le agregó lactosa 2%), y Tubo E control con ambos carbohidratos, pero sin el
epa W3110. II) Visualización del desrrollo de color en los
cultivo de células de E. coli c
diferentes tubos.
Tabla 1. Marcaje del desarrollo del color mediante sistema de cruces
Tubo Desarrollo del Color
A +
B ++++
C +++
D ++
E No desarrollo color
Análisis de Resultados
Según lo que podemos observar en la figura 1, en el tubo A que contenía como nutriente
en el medio glucosa tuvo una coloración amarilla muy ténue, lo que era de esperarse ya
que la preferencia de las células bacterianas por metabolizar la glucosa y la ausencia de
lactosa en el medio, no indujeron la expresión genética del operón lac. La ligera coloración
amarilla pudo deberse a adición del compuesto ONPG, que es estructuralmente similar a
la lactosa lo que provocó que las bacterias intentaran asimilarlo. Notamos que el tubo en
el cual se muestra un color amarillo más intenso fue en el B, el cual contenía únicamente
lactosa como nutriente, en el cual la cepa bacteriana ante la presencia de lactosa reguló la
expresión del operón lac, proceso que fue llevado a cabo satisfactoriamente ya que no
hubo interferencia de algún otro carbohidrato o reactivo (como ATP) que afectara la
expresión de las enzimas para el metabolismo de la lactosa. El segundo tubo que
desarrolló una gran coloración amarilla fue en C, el cual contiene dos carbohidratos
s más fácil metabolizar la
distintos glucosa y lactosa. Para la cepa bacteriana de E coli., e
glucosa ya que no requiere expresar las enzimas para consumirla lo cual le confiere un
ahorro energético. Sin embargo una vez que la glucosa se agotó en el medio las bacterias
se ven en la necesidad de regular la expresión del operon lac, para que de esta forma
puedan metabolizar la lactosa presente en el medio, a diferencia que en el tubo B su
desarrollo de coloración amarilla fue menor debido a que primeramente consumió la
glucosa y tardo más en expresar el operón lac. En el tubo D observamos una disminución
en el desarrollo de coloración amarilla en comparación con los tubos B y C pero una
coloración un poco mayor al tubo A, esto pudo deberse a que en el medio se añadió
primero glucosa como único nutriente lo que la célula consumió durante los primeros 7.5
min, pasado este tiempo se añadió lactosa al medio. Una vez añadida la lactosa la
bacteria opta por expresar lo genes que le permitan metabolizarla sin embargo esta
actividad se ve interrumpida principalmente por la presencia de ATP en el medio obtenido
a partir de la metabolización de la glucosa anteriormente, ante altas concentraciones de
ATP, disminuye la formación de AMPc, por lo que no es posible formar el complejo
CAP-AMPc, el cual reprime la expresión genética del operón lac. Y por último en el tubo E
que solo contenía los carbohidratos glucosa y lactosa en el medio pero no células
bacterianas que pudiesen metabolizarlo no hubo un desarrollo de color amarillo por lo
que funciono como muestra control que nos permite validar nuestro ejercicio experimental.
Conclusiones
La modificación de la expresión genética en células procariontes se debe a las distintas
condiciones en las cuales las células se desarrollen, tales modificaciones le confieren
ventajas metabólicas al poder asimilar distintos nutrientes así como a su supervivencia
gracias a la expresión de enzimas que degraden antibióticos.
