Universidad del atlántico sede regional sur
Informe microbiología
Técnicas de cultivo y aislamiento de bacterias
Biotransformación de residuos orgánicos
Facultad de ingeniería
Maria Fernanda Barrios
Nayelis Garcia
Elian Gonzalez
Sandy Orozco
Ithatis Quintero
Luis Carlos Rodríguez
02/octubre/2019
INTRODUCCIÓN
En Ia naturaleza, las bacterias hacen parte de los diferentes ecosistemas. Como los
demás seres vivos, para su crecimiento necesitan nutrientes apropiados y condiciones
ambientales optimas, tales como pH, presión osmótica, oxígeno, temperatura y humedad
entre otros.
Para el cultivo, aislamiento, identificación y determinación de las actividades metabólicas
de las bacterias en el laboratorio se utilizan medios adecuados, los cuales según su
consistencia pueden ser sólidos, semi-sólidos y líquidos; esta consistencia se obtiene por
Ia adición de un polisacárido denominado agar-agar extraído de algas marinas del genero
Gellidium, su concentración en el medio sólido es de 1,5% a 2%, en el semi-solido de
0,5% y los medios líquidos son sin agar.
Los medios simples se preparan con agua, extracto de carne, peptona, extracto de
levadura, sales inorgánicas y carbohidratos. A algunos medios se les adicionan
sustancias como: Líquido ascítico, vitaminas, antibióticos, colorantes, sales biliares,
sangre y suero o glicerina, obteniéndose de esta forma, medios enriquecidos, de
enriquecimiento, diferenciales, selectivos y de transporte.
En el aislamiento de bacterias se utilizan varias técnicas, una de las cuales es la siembra
por estrías en superficie que busca agotar Ia muestra sobre Ia superficie del medio para
obtener colonias separadas y poder observar sus características.
Es importante tener en cuenta que la inoculación de los microorganismos en los medios
de cultivo, siempre deberá realizarse en condiciones asépticas (cerca del mechero o en
campana de flujo laminar), que limitan la presencia de microorganismos contaminantes.
OBJETIVOS
1. Conocer los métodos más utilizados para el aislamiento y cultivo de bacterias a
partir de diferentes muestras.
2. Conocer Ia composición y el uso de los diferentes medios de cultivo utilizados en
el laboratorio.
3. Diferenciar las características de crecimiento de las bacterias, según el medio de cultivo
utilizado.
MATERIALES Y REACTIVOS
1 caja de Petri con agar nutritivo (por grupo de trabajo)
1 caja de Petri estéril vacía
20 mL de agar nutritivo fundido y temperado a 45°C
1 tubo con agua destilada estéril
1 tubo con caldo nutritivo
1 tubo con agar nutritivo en plano inclinado
1 asa de inoculación
1 aguja de inoculación
1 Mechero de alcohol
1 encendedor
Cinta de rotular
Marcador (Sharpie)
Cepa Gram positivas (Staphylococcus aureus) suministrada por el profesor
Cepa Gram negativa (Escherichia coli) suministrada por el profesor
PROCEDIMIENTO
Cultivo en cajas de agar: siembra por estrías cruzadas en la superficie para obtener
colonias separadas. Proceda de la siguiente manera:
a. En la parte posterior externa de la caja y con la ayuda del marcador realice una división
en cuatro cuadrantes. Tome una muestra con el asa previamente flameada y fría, inocule
la muestra haciendo 4-5 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el primer
cuadrante de la caja y cierre la caja.
b. Flamee el asa de inoculación y gire la caja en un cuarto. Abra nuevamente la caja y
enfrié el asa tocando la superficie del medio lejos de la zona de estrías recién hechas.
c. Roce con el asa una vez la superficie del primer cuadrante y haga un segundo grupo
de estrías en el segundo cuadrante.
d. Repita el procedimiento b y c en el tercer cuadrante y efectué la siembra en el último
cuadrante sin flamear el asa y haciendo estrías más abiertas.
e. Incube las cajas de Petri a 37°C durante 24 a 48 horas, colocándolas en forma invertida
para evitar que el agua de condensación caiga sobre el cultivo.
Cultivo en tubos con caldo nutritivo: siembre un cultivo puro de la cepa
asignada por el profesor de la siguiente manera:
a. Tome el tubo que contiene el cultivo puro, retire la tapa del tubo y flamee la boca del
tubo.
b. Introduzca el asa en el tubo sin tocar las paredes y tome un poco del cultivo, flamee
nuevamente la boca del tubo, tápelo y déjelo en una gradilla.
c. Tome el tubo de caldo nutritivo estéril en el cual va a colocar la muestra, destápelo,
flameando la boca el tubo con el mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida.
Realice movimientos de rotación con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del
tubo. Retire el asa, flamee la boca
del tubo y tape.
d. Esterilice el asa en el mechero después de usarla.
e. Incube los tubos a 37ºC por 24 horas. Observar el crecimiento obtenido
Cultivo en tubos con agar inclinado:
Procede de la misma forma que en la siembra anterior pero con la aguja de inoculación
realice una punción y estríe en el plano inclinado.
RESULTADOS
Después del período de incubación, observe cada una de las cajas y tubos inoculados.
Recopilar la información de la caracterización colonial de cada cepa. De acuerdo a sus
observaciones identifique las especies presentes en la muestra problema
- Color
- Forma
- Tamaño
- Cantidad de crecimiento ( escaso, moderado, abundante )
Figura 1. Método para inocular las cajas de Agar
Figura 3. Método para inocular tubos con agar inclinado
Observaciones:
Luego de haber realizado el adecuado procedimiento de incubación a las colonias
observamos unos cambios muy sobresalientes en los cultivos de microorganismo,
cabe destacar que nuestra colonia tuvo un crecimiento abundante en cuanto a
cantidad se refiere.
En una de las divisiones de la caja de Petri en la cual colocamos una hebra de
cabello y se presenció un crecimiento de bacterias estrepbacilos gram positivos y
estreptobacilos gram negativos mostrando un color beige un poco oscuro, del otro
lado de la caja de Petri se presenció un abundante crecimiento de microorganismo,
una de las formas que observamos en esta colonia fue una cadena de
estreptobacilos gram negativos que recorría la mayor parte de la división.
Preguntas de investigación
1. ¿Qué es el agar y de donde se obtiene?
2.¿Por qué el agar nutritivo es un medio general para el cultivo de bacterias?
3. ¿Cuáles son las ventajas de un cultivo puro?
4. ¿Por qué razón no debes compartir el mechero de Bunsen?
5. ¿Cuál es la razón para flamear los tubos antes y después de cada transferencia?
6. Explica por qué debes evitar que el asa llena de inóculo toque la boca del tubo fuente o del
tubo a ser inoculado.
7. Cuando tomas un inóculo de una caja de Petri. ¿Por qué es necesario tocar una parte estéril del
agar con el asa antes de tocar el crecimiento bacteriano?
8. ¿Por qué el asa debe ser flameada antes y después de todos los procedimientos de siembra?
9. ¿Por qué las cajas de agar deben mantenerse invertidas durante la incubación?
Solución
1. Es el medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacterias. Es muy útil
porque pertenece solido incluso a relativamente altas temperaturas además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo general se distingue las colonias pequeñas.
Preparado y contenido en una placa de Petri es claro e incoloro o con tonalidad amarillenta. El
tiempo, la temperatura y la atmosfera de incubación de incubación, dependerán de
microorganismos. https://brainly.lat/tarea/10503430
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tm
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2. Es muy útil porque pertenece solido incluso a relativamente altas temperaturas además, el
crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo general se distingue las
colonias pequeñas.
3.Las ventajas de un cultivo puro es que la cosecha va a salir sana sin problemas, va a salir bien
no va a salir con insectos ni se va a dallar.
Un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismos. Sólo
después de haber obtenido un cultivo puro se puede identificar un microorganismo y/o
estudiar sus características bioquímicas o de otro tipo. La obtención de un cultivo puro
se hace mediante una técnica de aislamiento.
4.Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona
aséptica).
En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama
Antes de comenzar a trabajar se procurará disponer de todo el material necesario para el
procesamiento de la muestra Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminación de
las muestras o/ y cultivo por microorganismos ambientales
5.para lograr eliminar la mayor cantidad de microbios y microorganismos que se encuentren en
estos tubos. Se utiliza como una medida preventiva para obtener buenos resultados y para lograr
manejar instrumentos óptimos.
6.Para que no se vaya a infectar con otras bacterias o sea contaminado el medio en que nos
encontramos asiendo la práctica.
7.para evitar su contaminación con los microorganismos presentes en el medio ambiente. Él
mechero Bunsen no sólo permite crear una zona aséptica de trabajo, también nos permite
esterilizar diverso instrumental como el asa de siembra o el asa de vidrio, mediante la aplicación
directa de calor.
8.Para no contaminar los cultivos bacterianos que vamos a utilizar para la muestra en la placa de
Petri.
9.Las placas que no se usan son siempre invertidas o apoyadas sobre las tapas durante el
almacenamiento. Esto para evitar la evaporación si la placa es almacenada durante períodos
prolongados de tiempo, la que puede afectar la eficiencia del crecimiento
bacteriano, o permitir el crecimiento de organismos indeseados, como el moho.
CONCLUSIÓN
En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se encuentran
diversos microorganismos, el primer paso para proceder a su estudio es el aislamiento,
es decir la separación de cada uno de los posibles integrantes microbianos de la
muestra.
Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría de ellos basados
en la inmovilización de las células microbianas en la superficie de los medios de cultivo
sólidos. Al depositar una célula bacteriana o una levadura en un punto del medio de
cultivo, ésta quedará inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por absorción de
los nutrientes del medio. Las nuevas células generadas permanecerán igualmente
inmóviles y tras sucesivas generaciones conformarán lo que denominamos una
"colonia" que no es más que un montón de células derivadas de una sola célula madre
inicial, es decir, un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta colonia es
visible al ojo humano y presenta diferentes características según el microorganismo que
la genera. Esto nos permite distinguir las diferentes poblaciones microbianas que se
encuentran en la muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia de cada tipo
a un nuevo medio de cultivo estéril, a estos cultivos los consideraremos "puros" por
poseer un sólo tipo de microorganismo. (El fundamento es válido teniendo en cuenta
sólo microorganismos cultivables)
BIBLIOGRAFÍA
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