UNIVERSIDAD DE COSTA RICA

ESCUELA DE QUÍMICA
SECCIÓN DE QUIMÍCA ORGÁNICA
Laboratorio de Fundamentos de Química Orgánica (QU-0211)
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Reporte
“Cromatografía”
Estudiante: Julián Bolaños Reyes Carné: B91141

Asistente: Brayan Leiva Montero Grupo de laboratorio: 06

Introducción
La cromatografía es un método por el cual una mezcla se separa distribuyendo sus componentes entre
dos fases. La fase estacionaria permanece fija en su lugar mientras que la fase móvil transporta los componentes
de la mezcla a través del medio que se utiliza. La fase estacionaria actúa como una restricción en muchos de los
componentes de una mezcla, ralentizándolos para moverse más lentamente que la fase móvil. El movimiento
de los componentes en la fase móvil está controlado por la importancia de sus interacciones con las fases móvil
y estacionaria. Debido a las diferencias en factores como la solubilidad de ciertos componentes en la fase móvil
y la fuerza de sus afinidades por la fase estacionaria, algunos componentes se moverán más rápido que otros,
lo que facilitará la separación de los componentes dentro de esa mezcla.1 Existen varias técnicas para realizar el
proceso de cromatografía, entre las cuales se encuentran la cromatografía de capa fina (TLC), la cual se usa para
separar los componentes de una mezcla, donde una fase es una fase móvil de disolvente líquido y la otra fase
es una fase sólida estacionaria con un área de superficie alta. Se puede realizar en la escala analítica como un
medio para monitorear el progreso de una reacción, o en la escala preparativa para purificar pequeñas
cantidades de un compuesto. Este proceso es una herramienta analítica ampliamente utilizada debido a su
simplicidad, bajo costo relativo, alta sensibilidad y velocidad de separación.2 La cromatografía de columna es
una extensión de la cromatografía en capa fina. En lugar de aplicar una muestra en una capa delgada de sílice o
alúmina, una muestra se deposita en un cilindro de adsorbente y el disolvente se aplica continuamente con
presión hasta que los componentes drenan completamente del cilindro. Con esta modificación, los
componentes no solo se pueden separar, sino también recolectar en diferentes contenedores, lo que permite
la purificación de las mezclas3 y en la cromatografía de papel las interacciones del soluto con el papel hacen que
los compuestos se desplacen a velocidades diferentes, a medida que el disolvente asciende por el papel,
encuentra la muestra que empieza a viajar por el papel con el disolvente. Los diferentes compuestos de la
muestra recorren distancias diferentes dependiendo de la fuerza de sus interacciones químicas con el papel. La
cromatografía en papel requiere algún tiempo, habitualmente se necesitan varios minutos para completarse.4
La técnica de cromatografía es una herramienta valiosa para los bioquímicos, además se puede aplicar
fácilmente durante los estudios realizados en laboratorios clínicos. Por ejemplo, la cromatografía en papel se
utiliza para determinar algunos tipos de azúcar y aminoácidos en los fluidos corporales que están asociados con
trastornos metabólicos hereditarios. La técnica también se utiliza en la separación de vitaminas y proteínas. 5
Entre los objetivos de la práctica se encuentran realizar una cromatografía de columna, realizar una
cromatografía en papel y separar e identificar los pigmentos principales de un material vegetal. A continuación,
se realiza la descripción de los resultados y la discusión del procedimiento realizado en el laboratorio.
Sección experimental
Para este experimento se siguió la metodología explicada en el Manual de Laboratorio Fundamentos de
Química Orgánica (QU-0211). La cámara de desarrollo fue un beaker con un vidrio reloj encima. 6

Resultados
La cromatografía de capa fina es utilizada en el laboratorio por su composición sencilla, ya que solo se
necesita una cámara de desarrollo, una placa fina y el disolvente adecuado. Es una técnica relativamente rápida
y permite una eficaz observación del proceso cromatográfico con la luz ultravioleta.
Cuadro I. Valores de Rf obtenidos en la cromatografía de capa fina y analgésicos.
Sustancia (Analgésicos) Valor de Rf
Muestra 1 0.44 0.82
Muestra 2 0.29 0.73 0.93
Cafeína 0.44
Aspirina 0.82
Paracetamol 0.73
Ibuprofeno 0.29 0.93
Fuente: Laboratorio de Fundamentos de Química Orgánica (QU-0211). Grupo 06. Universidad de Costa Rica.
Fecha 01/10/19
Observaciones: Para la identificación de la muestra 1 y 2, se utilizaron los datos obtenidos en la placa fina, ya
que la distancia de los analgésicos coincidió con las distancias obtenidas en la muestra. Con el uso de la luz
ultravioleta, se observó como la sustancia se mantenía en el papel a pesar de no poder ser observado a simple
vista, ya que se había secado, además se pudo observar el movimiento de esta sustancia luego de utilizar el
disolvente, de la misma manera, por medio de la luz ultravioleta.

La cromatografía de papel presenta una metodología similar a la cromatografía de capa fina, su

diferencia radica en el uso de un papel filtro en vez de una capa fina, en ésta separación se pueden observar los
colores sin necesidad de luz ultravioleta, mientras los colores se desprenden de la sustancia, por lo cual es una
forma eficaz de explicar el proceso cromatográfico en el laboratorio.

Cuadro II. Valores de Rf obtenidos en la cromatografía de papel.

Sustancia (Color de M&M) Valor de Rf
Azul 0.75
Rojo 0.09
Verde 0.39 0.64
Anaranjado 0.28
Café 0.13 0.29
Amarillo 0.46

Fuente: Laboratorio de Fundamentos de Química Orgánica (QU-0211). Grupo 06. Universidad de Costa Rica.
Fecha 01/10/19
Observaciones: A la hora de realizar la separación luego de aplicar el papel filtro en el disolvente, se pudo
observar que algunos colores, como el verde, empezaron a separarse para formar sus colores primarios, el
amarillo y azul. Luego de sacar el papel filtro del beaker, el disolvente seguía subiendo por el papel. Se esperó a
que se secaran las primeras gotas al aplicar el colorante en el papel, para luego aplicar dos o tres gotas más.
Discusión
Con respecto a la separación de los pigmentos naturales de la espinaca, el uso del etanol y el hexano con
el éter de petróleo es debido a la diferencia de polaridades que beneficia la extracción de los pigmentos de la
espinaca, principalmente la clorofila a, clorofila b y β-caroteno. Ambas clorofilas contienen enlaces C-O y C-N
(grupos polares) y también contienen magnesio unido al nitrógeno, formando un enlace tan polar que es casi
iónico. Ambas clorofilas son mucho más polares que el β-caroteno, el cual solo presenta hidrocarburos en su
estructura. Después de aislar el pigmento mezcla de las hojas en una disolución de hexano y éter de petróleo,
se usó la diferencia de polaridad con etanol para separar los diversos pigmentos usados en la cromatografía de
columna.7

Figura 1. Estructura de a) clorofila a, b) clorofila b y c) β-caroteno

Fuente: Elaboración propia mediante el programa MolView.
En la cromatografía de columna, la fase estacionaria sirve como un adsorbente, la sílice, a través del cual
se pasa la fase móvil, la cual fue hexano y acetato de etilo en una proporción 1:1. Se pueden usar muchos
compuestos con diferentes grupos funcionales como fase estacionaria y varios tipos de interacciones pueden
ayudar a desarrollar la separación deseada (enlaces de hidrógeno, dipolo-dipolo, fuerzas de Van der Waals,
afinidad). Por la polaridad de la sílice, los componentes más polares se sujetan a la ésta polar con mayor fuerza
y, por lo tanto, se mueven a través de la columna más lentamente, mientras que los componentes menos
polares se mueven más rápidamente a través de la fase móvil por su afinidad con los compuestos utilizados.8 La
arena se utiliza para prevenir la perturbación del adsorbente al agregar el disolvente, por lo que es importante
que esté distribuida de manera homogénea en la columna. Entre los cuidados que deben tenerse al realizar este
proceso, se debe mantener siempre una cantidad de disolvente por encima de la columna, ya que esto
posibilitaría la formación de canales provocando que la separación fuera poco eficiente y a la hora de golpear la
bureta para distribuir la sílice, no se deben utilizar objetos de metal o vidrio que puedan provocar daños en el
equipo con facilidad.5
 En la cromatografía de capa fina, el fondo de la placa de TLC se coloca en un beaker con un poco de
disolvente, en este caso, 95% acetato de etilo 5% ácido acético, que luego sube por la placa por acción capilar.
A medida que el disolvente sube por la placa, los analgésicos, disueltos en etanol para poder colocarse sobre la
placa, se mueven sobre el punto original. Se establece una competencia entre la placa de gel de sílice y el
disolvente con respecto al material manchado. El gel de sílice muy polar intenta mantener la mancha en su lugar
original y el disolvente intenta mover la mancha junto con ella a medida que sube por la placa. El resultado
depende de un equilibrio entre tres polaridades: la de la placa, el disolvente y el analgésico. Si el disolvente es
lo suficientemente polar, el punto se moverá cierta distancia desde su ubicación original. Cuanto más polar la
sustancia, tenderá a adherirse más firmemente a la placa y menos polar tenderá a moverse más libremente con
el disolvente. Sin embargo, como la mayoría de los compuestos son incoloros, se necesita un método de
visualización. El gel de sílice en la placa de TLC está impregnado con un material fluorescente que brilla bajo la
luz ultravioleta (UV), una mancha interferirá con la fluorescencia y aparecerá como una mancha oscura sobre
un fondo brillante.9 Se observó una coloración del paracetamol principalmente sobre los otros compuestos al
utilizar la cámara de yodo, debido a que éste método se basa en la observación de que el yodo tiene una alta
afinidad por los compuestos tanto insaturados como aromáticos. El yodo tiene una alta presión de vapor para
un sólido y la cámara se saturará rápidamente con vapor de yodo. Comúnmente, si el compuesto tiene afinidad
por el yodo, aparecerá como una mancha marrón oscura sobre un fondo marrón más claro, la coloración ocurre
porque el yodo forma complejos coloreados con muchos compuestos orgánicos..10 Entre los cuidados que deben
tenerse al utilizar el proceso de cromatografía de capa fina, la placa no debe tocarse con los dedos ni dejarse
caer, ya que esta ensucia fácilmente la superficie y puede producir grandes variaciones a la hora de analizar los
resultados, además, la placa debe estar colocado en una posición recostada dentro del beaker para facilitar la
capilaridad del disolvente. Las divisiones de medidas en el papel deben estar dibujadas en lápiz, ya que la tinta
del lapicero puede provocar cambios en el experimento deseado.
La cromatografía de papel es muy similar a la cromatografía de capa fina, la única diferencia, además de
las sustancias utilizadas (M&M), es que se empleó como disolvente el cloruro de sodio, al estar en su fase
acuosa, esto permite que haya una diferencia de polaridades y esta disolución funcione como la fase móvil par
este experimento.4
Con respecto a los valores obtenidos de Rf, se puede observar que, para la cromatografía de capa fina,
el ibuprofeno obtuvo uno de los valores más altos, esto se debe a que, como se observa en su estructura, es
una molécula muy poco polar por la presencia del anillo de benceno y grupo alquilo que reduce
significativamente la polaridad. Mientras que la cafeína obtuvo el valor más bajo, por su alta polaridad también
observada en su estructura, en este caso, no hay presencia de anillos de benceno, sino moléculas de nitrógeno
y oxígeno que aumentan la polaridad.
 Figura 2. Estructura química de a) la cafeína e b) ibuprofeno
Fuente: Elaboración propia mediante el programa MolView
Para la cromatografía de papel, el valor de Rf más bajo fue el del colorante rojo, y el valor más alto fue
el del colorante azul. Como se observa en sus estructuras, el azul presenta una mayor cantidad de anillos de
benceno por lo que su polaridad se ve disminuida en comparación con el colorante rojo.

Figura 3. Estructura química del a) colorante rojo Allura AC y b) el colorante azul brillante FCP.
Fuente: Elaboración propia mediante el programa MolView
La presencia de más de un valor de Rf para algunas estructuras se puede dar por contaminación del
equipo utilizado, pero principalmente, se debe a que éstos compuestos pueden tener sustancias incipientes,
por lo que la prueba realizada no es únicamente con el compuesto original, sino que se puede haber obtenido
un resultado de otra sustancia incluida en su elaboración.
Conclusiones
El valor más alto obtenido durante la cromatografía de capa fina fue de 0.93 para el ibuprofeno y el valor
más bajo fue de 0.44 para la cafeína, éstas diferencias se presentan debido a las variaciones en la polaridad de
las sustancias y el disolvente empleado. El valor más alto obtenido durante la cromatografía de papel fue de
0.75 para el colorante azul y el más bajo fue de 0.09 para el colorante rojo, esto también se debe a la polaridad
de las sustancias con respecto al disolvente utilizado. En la cromatografía de columna se observó la separación
de los pigmentos de la espinaca al haber un desplazamiento por afinidad hacia la fase móvil o estacionaria por
el disolvente utilizado. Se recomienda utilizar un adsorbente más polar para la fase estacionaria de los procesos
de cromatografía realizados, como la alúmina, ya que permite obtener resultados más claros y eficientes.
Bibliografía
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