SUERO ANTI-HUMANO
(MONOCLONAL/POLICLONAL) POLIESPECIFICO ANTI-IgG/C3d
Para la prueba de Coombs
El suero anti-humano LAFON se prepara utilizando suero monoclonal Anti-C3d e
hiperinmunizando conejos con globulinas de suero humano. Después de eliminar
hemolisinas y aglutininas no específicas se agrega al suero azida de sodio al 0.1% como
conservador. El suero deberá mantenerse entre 2°C y 8° C mientras no esté en uso para
evitar su desnaturalización y contaminación.
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR ISOINMUNIZACION
Y EFECTUAR PRUEBAS CRUZADAS (COOMBS INDIRECTO)
Esta prueba es útil en el estudio de la isoinmunización resultante del embarazo, así como un
procedimiento adicional para la determinación de anticuerpos no revelados en la prueba
cruzada común. Con el objeto de hacer más sensible la prueba se recomienda agregar a la
mezcla glóbulos rojos-suero problema, una solución que contenga alta concentración de
proteína (albúmina de bovino al 22%). Paralelamente se puede hacer la misma prueba
incubando la mezcla solamente con solución salina.
Los glóbulos que se utilicen en la prueba de isoinmunización deberán ser tipo O y Rh
A
positivo (CDE ó CDe/cDE). Es posible también, hacer pruebas por separado usando
glóbulos rojos tipo O, Rh (CDe/CDe) unos y Rh (cDE/cDE) los otros. El carácter
homocigótico de estos glóbulos incrementa la cantidad de antígeno Rh y por lo tanto la
S
sensibilidad de la prueba.
MÉTODO
1.
A M
Prepare una suspensión al 2% de glóbulos rojos lavados previamente tres veces en
solución salina. Para la prueba cruzada mayor use glóbulos rojos del donador. En la
prueba menor use glóbulos rojos del receptor.
A
2. Ponga 2 gotas de suero problema fresco en cada uno de los tubos marcados como S
(para salina) y A (para albúmina). En el caso de la prueba cruzada mayor úsese suero
del receptor.
En la prueba menor use suero del donador.
3.
4.
5.
6.
G
A cada tubo añada dos gotas de suspensión de glóbulos rojos lavados.
Al tubo marcado como A agregue tres gotas de solución de albúmina de bovino al 22%.
Mezcle bien ambos tubos e inmediatamente centrifúguelos a 1000 r.p.m. durante 1
minuto ó a 3000 r.p.m. durante 20 segundos.
La centrifugación inmediata evita el fenómeno de prozona.
Desprenda suavemente los glóbulos sedimentados y observe si hay aglutinación
macroscópica. En caso de ser negativa o débilmente positiva, resuspenda los
eritrocitos e incube ambos tubos en baño maría a 37°C durante 15 ó 30 minutos.
Centrifugue nuevamente y observe si hay aglutinación (o hemólisis). En caso de que
ambas sean negativas descarte al tubo S y continúe con A.
7. Lave 4 veces los glóbulos del tubo A. Resuspéndalos en la solución salina remanente
luego de escurrir en el último lavado.
8. Añada 2 gotas de suero anti-humano LAFON. Mezcle bien y centrifugue.
9. Desprenda el botón suavemente y observe macroscópicamente si hay aglutinación.
CONTROLES
Negativo: En un tubo ponga solución salina en lugar de suero anti-humano.
Positivo: Prepárelo añadiendo una gota de suero humano anti Rh (anti-D) diluido 1:16 en
solución salina, a una gota de glóbulos Rh positivos (D) lavados y al 2%. Incube la mezcla
durante 15 minutos en baño maría a 37°C y continúe con el inciso 7 del método para
Coombs indirecto.
En las pruebas cruzadas debe incluirse un control que contenga glóbulos y suero del
paciente.
INTERPRETACIÓN
La aglutinación o hemólisis en los pasos 6 ó 9 indica isoinmunización ó incompatibilidad
(según haya sido la prueba realizada).
TITULACIÓN DE ANTICUERPOS
Prepare diluciones al doble, en solución salina, del suero del paciente. Con cada una de las
diluciones realice el método en tubo, colocando, en lugar de gotas, 0.1 mL de cada dilución
del suero y 0.1 mL de la suspensión de glóbulos rojos lavados al 2%. El título de aglutininas
salinas es la mayor dilución del suero que produce aglutinación en el inciso 6, y el título de
anticuerpos incompletos es la mayor dilución del suero que presenta aglutinación en el
inciso 9.
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR GLÓBULOS ROJOS SENSIBILIZADOS
(COOMBS DIRECTO)
Esta prueba es importante en el diagnóstico y estudio de la eritroblastosis fetal, en la que los
glóbulos rojos del niño se encuentran sensibilizados con anticuerpo materno. Es útil
también en el diagnóstico de la anemia hemolítica adquirida (autoanticuerpos sobre los
glóbulo rojos del mismo paciente), así como en la determinación de eritrocitos sesibilizados
en sangre usuadas para transfusión.
MÉTODO
1. Prepare una suspensión de glóbulos rojos al 2% en solución salina. Los glóbulos
deben lavarse previamente 5 veces en salina con el objeto de eliminar las proteínas del
plasma.
2. Ponga 2 gotas de la suspensión lavadas en un tubo.
3. Añada 2 gotas de suero anti-humano LAFON
4. Mezcle bien y centrifugue a 1000 r.p.m. durante un minuto ó a 3000 r.p.m. durante 20
segundos.
5. Desprenda el botón suavemente y observe macroscópicamente si hay aglutinación.
CONTROLES
Negativo: Ponga un tubo con solución salina en lugar de suero anti-humano, y otro que lleve
suspensión de glóbulos normales al 2% en lugar de los glóbulos problema.
Positivo: El mismo que se indica en el Coombs indirecto.
INTERPRETACIÓN
La aglutinación de los eritrocitos del paciente, por el suero anti-humano, indica que éstos se
encontraban sensibilizados por anticuerpo.
DETECCIÓN DE SANGRE Du
Los glóbulos rojos Du generalmente presentan reacciones negativas con sueros
tipificadores anti- Rh (anti-D). Sin embargo, después de exponerlos a un suero anti-Rh (anti-
D), dan reacción positiva de Coombs.
A
Para propósitos prácticos, el antígeno Du deberá considerarse en antigenicidad, igual al
factor D.
MÉTODO
S
M
1. Prepare una suspensión de glóbulos rojos al 2% del problema, lavados previamente en
solución salina.
2. Ponga en un tubo 2 gotas de la suspensión de glóbulos rojos.
A
3. Añada una gota de suero humano anti-Rh (anti-D) y mezcle bien.
4. Incube el tubo a 37°C por 15 minutos.
5. Lave 3 veces los glóbulos con solución salina y luego de escurrir bien en el último
6.
A
lavado resuspéndalos en la solución salina remanente.
Agregue 2 gotas de suero anti-humano LAFON. Mezcle bien y centrifugue a 1000
r.p.m. durante un minuto ó a 3000 r.p.m. durante 20 segundos.
7.
macroscópica.
CONTROLES
G
Desprenda suavemente los glóbulos sedimentados y observe si hay aglutinación
Negativo: Prepare una suspensión de glóbulos rojos Rh negativos al 2%, lavados
previamente en solución salina. Continúe con las mismas indicaciones dadas para los
glóbulos problema.
Positivo: El mismo procedimiento anterior pero utilizando glóbulos Rh positivos.
IMPORTANTE: Es imprescindible hacer una prueba directa de Coombs a la sangre que se
somete a la detección del Factor Du para eliminar la posibilidad de que los glóbulos
problema se encuentren cubiertos previamente con anticuerpos específicos.
INTERPRETACIÓN: Si no se presenta aglutinación en los glóbulos problema se consideran
Rh negativos. La aglutinación de los eritrocitos del paciente indican la presencia del Factor
Du. En caso de que la prueba de Coombs directa sea positiva con los glóbulos del paciente,
la aglutinación encontrada en la detección del Factor Du se invalida y deberán considerarse
como Rh negativo.
REFERENCIAS:
Greendyke M.R. Introduction to blood banking.
Medical examination publishing Company cap. 12: 111-121
Kohler G. and Milstein, C. Nature 1975: 256,495.
Dunsford and Grant J. The Anti-Globulin (Coombs) Terti Oliver and Boyd.,
1959:120.
Hecho en México por: LABORATORIOS LAFON S.A. DE C.V.
Reg. No. 86526 D .S.S.A.
