Universidad Mariano Gálvez de Guatemala

Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud

Biología Celular y Molecular Humana II
Lic. Luisa Lemus

Emma Teresa del Rosario Portales Castañeda 200-19-820

Rashella Lubia Yolanda Roque Pérez 200-19-1387

Práctica No. 7
Estructura del ADN - Reacción en cadena de la Polimerasa- (PCR)

La reacción en cadena de la polimerasa, o PCR, es una técnica para hacer muchas

copias de una determinada región de ADN ​in vitro (en un tubo de ensayo en lugar
de un organismo).
La PCR depende de una ADN polimerasa termoestable, la ​Taq polimerasa, y
requiere de cebadores de ADN diseñados específicamente para la región de ADN
de interés.
En la PCR, la reacción se somete repetidamente a un ciclo de cambios de
temperatura que permiten la producción de muchas copias de la región blanco.
La PCR tiene muchas aplicaciones en la investigación y en la práctica. Se utiliza de
forma rutinaria en la clonación de ADN, el diagnóstico médico y el análisis forense
de ADN.
● Cuestionario
- ¿Por qué existen 2 diferentes primers que se utilizan en PCR?
Se necesita un partidor porque la mayoría de ​ADN polimerasas​, ​enzimas que
catalizan la ​replicación del ADN​, no pueden empezar a sintetizar una nueva cadena
de ADN de la nada, sino que solo pueden añadir nucleótidos a una hebra
preexistente
- ¿De qué bacteria se obtiene la Taq ADN polimerasa?
De la bacteria Thermus aquaticus
 - ¿Por qué se utiliza una Taq ADN polimerasa y no una ADN polimerasa
en PCR?
Porque una Taq vive en condiciones de temperatura muy altas para que su ADN
polimerasa sea capaz de soportar ese tipo de temperaturas.
- Mencione 2 secuencias que se pueden amplificar con una PCR?
El método utiliza secuencias cortas de ADN llamados cebadores para seleccionar la
parte del genoma a amplificar
- ¿Cuántos ciclos pueden llevarse a cabo por un termociclador en una
PCR?
1) desnaturalización, 2) alineamiento y 3) extensión del ADN
- ¿Cuántas copias de ADN pueden generarse al finalizar una PCR de 30
ciclos?
Teóricamente el proceso permite generar en 30 ciclos de amplificación más de dos
billones de copias de ADN a partir de una sola molécula
- ¿Qué significa dATP, dGTP, dCTP y dTTP?
dATP: ​La desoxiadenosina trifosfato
dGTP:​Guanosín trifosfato
dCTP:​desoxicitidina-5'-trifosfato
dTTP:​Timidina trifosfato
- ¿Mencione 2 aplicaciones en las que se utilice una PCR?
Se utiliza en huella digital genética y detección de enfermedades hereditarias.

● Discusión
En la PCR, el templado son las cadenas de ADN que se separan y funcionan como
molde para que la enzima sintetice las nuevas cadenas que llevan la secuencia
blanco de interés. Por su parte, la ADN polimerasa se encarga de la catálisis de la
reacción, sintetizando las nuevas cadenas de ADN que llevan la secuencia blanco.
La enzima más usada con frecuencia se llama Taq ADN polimerasa, que proviene
de una bacteria termófila llamada Thermus aquaticus, la cual vive en condiciones de
temperatura muy altas y por eso su ADN polimerasa es capaz de soportar ese tipo
de temperaturas. El rasgo que distingue a esta enzima bacteriana de otras ADN
polimerasas de otros organismos es su capacidad para mantener su funcionalidad a
temperaturas altas, por lo que se le considera una enzima termoestable. Los tipos
de PCR son:
• Tipos de PCR PCR ANIDADA: En esta variante de PCR, el producto de una
amplificación es utilizado como molde para realizar una segunda amplificación con
iniciadores que se ubican dentro de la primera secuencia amplificada. Este tipo de
PCR es altamente específica

• PCR IN SITU: Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un

portaobjeto. Consiste en una reacción de PCR en secciones histológicas o células,
donde los productos generados pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Se
realiza para ello una primera amplificación del ADN blanco y luego detección
mediante hibridación in situ convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera
puede detectarse cantidades pequeñísimas del material genético

• PCR MULTIPLEX Es una PCR en la cual se amplifica más de una secuencia

en una misma reacción. Emplea dos o más pares de iniciadores en un único tubo de
reacción con el fin de amplificar simultáneamente múltiples segmentos de ADN.
Consiste en combinar en una única reacción todos los pares de iniciadores de los
sistemas que queremos amplificar simultáneamente, junto con el resto de los
reactivos de la reacción en cantidades suficientes. La ventaja de esta PCR es que
se obtiene la información de varios loci en una sola reacción, utilizando menor
cantidad de molde para el análisis y menor cantidad de reactivos. Se puede generar
rápidamente la construcción de una base de datos

• PCR con transcriptasa inversa: Es una variante de la PCR en la que usamos

ARN como molde inicial en vez de ADN, y emplea una transcriptasa inversa (como
Tth) para realizar la síntesis de un ADN complementario al ARN (ADNc). De esta
forma, el desarrollo inicial de una RT-PCR sería: 1er paso: retrotranscripción a partir
del ARN. 2º paso: amplificación a partir de la primera hebra de ADNc.

• PCR TIEMPO REAL Es una reacción de PRC cuya principal característica es

que permite cuantificar la cantidad de ADN o ARN presente en la muestra original 9.
Se puede dividir en: a-Técnica basada en fluorocromos no específicos. b-Técnica
basada en sondas específicas

Los diferentes tipos de PCR tienen como utilidad en la medicina permitr el

diagnóstico de enfermedades infecciosas en unas horas frente a la espera de los
cultivos. Además, las cantidades necesarias son mínimas, por lo que ese
inconveniente es obviado. También tiene esta técnica interés para la demostración
de genes indicadores de diversos rasgos que conduzcan a patología. Del máximo
interés parece ser la demostración de oncogenes, genes supresores de tumor que
en oncología van teniendo valor en el estudio pronóstico de ciertos tumores.
 ● Conclusión
La PCR se utiliza en muchos laboratorios de investigación, y también tiene
aplicaciones prácticas en medicina forense, pruebas genéticas y diagnósticas. Por
ejemplo, la PCR se utiliza para amplificar genes asociados con trastornos genéticos
a partir del ADN de los pacientes (o de ADN fetal, en el caso de pruebas
prenatales). La PCR también puede utilizarse para detectar el ADN de una bacteria
o un virus en el cuerpo de un paciente: si el patógeno está presente, es posible
amplificar regiones de su ADN de una muestra de sangre o tejido.
El INVEGEM (instituto de investigación y Educación en Enfermedades Genéticas y
Metabólicas) en Guatemala, realizó un estudio de: “CUANTIFICACIÓN POR PCR
EN TIEMPO REAL DE LOS DISTINTOS TRANSCRITOS DE BCR-ABL Y SU
UTILIZACIÓN PARA EL ESTUDIO DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL EN
LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA Y LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA”

Se incluyeron 30 pacientes con leucemia mieloide crónica que reciben tratamiento

con imatinib o nilotinib; a los cuales se les realizaron 4 monitoreos trimestralmente;
haciendo un total de 120 determinaciones. Para ello se obtuvieron los glóbulos
blancos y/o blastos de médula ósea y/o sangre periférica, mediante lisis de amonio.
Se realizó extracción de ARN y retrotranscripción.

Posteriormente se cuantifican las copias del gen quimérico BCR-ABL y del gen
control ABL, mediante PCR en Tiempo Real. Cada monitoreo se reportó en el
sistema internacional (%IS).

APLICACIONES DE:“REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA”

Huella digital genética es una técnica forense que permite identificar a una persona
comparando su DNA con el de una muestra obtenida, por ejemplo, de la escena de
un crimen. Como la muestra puede ser muy escasa, la PCR permite aumentar la
cantidad de DNA amplificando ciertos segmentos polimórficos (variables en la
población), para luego separarlos mediante electroforesis, lo que se conoce como
DNA fingerprint o huella digital.

HUELLA DIGITAL

Test de Paternidad• Amplificando por PCR fragmentos polimórficos de DNA de la

madre, del niño y de él o los presuntos padres, y separándolo mediante
electroforesis, se puede visualizar una serie de segmentos que tiene el niño, que
debe compartir con la madre y padre biológicos.

Detección de Enfermedades Hereditarias• ​Cada gen en estudio puede ser

amplificado fácilmente por PCR, con los partidores adecuados, y luego ser
secuenciado, para así determinar si un individuo porta alguna mutación que explica
la presencia de una enfermedad o su aparición en el futuro, la que puede ser
heredada a sus hijos.

Comparación de la expresión génica• ​Al introducir una modificación en la PCR

clásica se puede estimar la cantidad de mRNA de un gen determinado en ciertas
condiciones experimentales. Al extraer el RNA total de una célula y con el uso de la
transcriptasa inversa, se puede producir un DNA complementario (cDNA) de todos
los mRNA o de alguno en particular. Con este cDNA se puede hacer una PCR para
amplificarlo y facilitar su cuantificación. Esto se conoce como RT-PCR y permite
estimar cuanto se expresa uno o varios genes en una célula en una condición de
cultivo determinada.

Mutagénesis• Con variaciones en la secuencia de los partidores, se puede producir

un segmento de DNA que presente diferencia en una o mas bases respecto al DNA
original. Así se puede alterar una proteína para estudiar o anular su función. Esta
mutación puede ser en un sitio determinado de un gen (sitio dirigida) o en un lugar al
azar de un gen o genoma.

Genotipificacion de polimorfismos• ​Mediante el uso de la PCR se puede

determinar el genotipo de un individuo para un polimorfismo dado, como un
microsatélite o un SNP (single nucleotide polymorphism).

Referencias Bibliográficas:

● Slidesharenet. Slidesharenet. [Online]. Available from:

[Link] [Accessed 7
September 2019].
● Khanacademyorg. Khan Academy. [Online]. Available from:
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encing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr [Accessed 7
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● Invegemorg. Invegemorg. [Online]. Available from:
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os-distintos-transcritos-de-bcr-abl-y-su-utilizacion-para-el-estudio-de-enferme
dad-minima-residual-en-leucemia-linfoblastica-aguda-y-leucemia-mieloide-cro
nica/ [Accessed 7 September 2019].