Centro de Estudios Tecnológico, Industrial y de

Servicios No. 70

Realiza análisis citoquímicos a líquidos

Espermatobioscopía.
Equipo 6
Integrantes:
Monserrat Salvador García (46)
Kevin Enrique Sánchez García (47)
Roberto Carlos Sánchez Izquierdo (48)
Estephanie Silvan Cerino (49)
María Alejandra Torres Evia (50)
Moisés Alberto Trejo Sánchez (51)
Teresita del Socorro Vargas Estrada (52)
Nicsy Merary Vázquez Ruiz (53)
Héctor Iván Zapata Serino. (54)

Docente:
QFB. Juana Ortiz Avalos.

Fecha de entrega:
Abril 2018

Villahermosa, Tabasco
 Introducción.
El semen es el conjunto de espermatozoides y sustancias fluidas que se producen en el aparato
reproductor masculino de todos los animales, entre ellos la especie humana. El semen es un líquido
viscoso y blanquecino que es expulsado a través de la uretra durante la eyaculación. Está
compuesto por espermatozoides y plasma seminal que se forma por el aporte de los testículos, el
epidídimo, las vesículas seminales, la próstata, las glándulas de Cowper, las glándulas de Littre y
los vasos deferentes.
El líquido seminal sirve como vehículo para los espermatozoides, además de brindarles protección
y nutrición.
El análisis de líquido seminal o Espermograma tiene múltiples aplicaciones; por ejemplo, la
evaluación de la infertilidad, en la exclusión de paternidad, en casos de violación alegada o
sospechada y para la comprobación de la vasectomía. En este análisis se evalúan de manera
directa las alteraciones cualitativas y cuantitativas de los espermatozoides, el plasma y la presencia
de otras células como leucocitos, macrófagos y células de la línea germinal.
Los parámetros que se evalúan en la espermatobioscopía son: el volumen de la muestra, el número
de espermatozoides que contiene cada mililitro de semen y el porcentaje de ellos que presentan
movilidad. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), la calidad puede ser muy buena (tipo
A), buena (tipo B) in situ (tipo C) y muy mala (los que no se mueven, tipo D). También se evalúa el
porcentaje de espermatozoides cuya forma es "normal" (debe ser mayor del 14 por ciento) y el
número total de espermatozoides móviles útiles. Debe considerarse que las muestras fluctúan en
un rango que varía en función de diferencias individuales, del tiempo de abstinencia y de detalles
finos en la recolección, así como del intervalo transcurrido entre la obtención y el procesamiento
de la muestra. Los anteriores factores pueden hacer variar los resultados. Nunca se deberá
establecer un diagnóstico con la evaluación de una sola muestra. Son necesarias cuando menos
dos o tres más para establecer un diagnóstico certero.
En algunos casos, cuando se ha demostrado alguna anomalía, existen pruebas especiales que
permiten profundizar en el funcionamiento espermático, tales como la reacción acrosomal o
reacción acrosómica, la prueba de supervivencia espermática y la de penetración en huevo de
Hámster.
Morfología de los espermatozoides.
La morfología de los espermatozoides es una característica que se estudia en el seminograma
para ver si en el semen hay espermatozoides anormales, en qué cantidad se encuentran y qué
alteraciones tienen estas células.
Cuando una muestra seminal no alcanza los valores mínimos de normalidad en la morfología se
dice que presenta teratozoospermia.
Es importante tener en cuenta que todos los hombres producen espermatozoides anormales y que
una gran parte de los espermatozoides de una muestra de semen considerada normal tienen forma
anormal.
¿Cómo saber si un espermatozoide es normal?
Para poder estudiar la morfología de los gametos masculinos, es necesario la fijación de una
pequeña muestra del total del eyaculado en un portaobjetos, lo cual implica la muerte de los
espermatozoides. Esto impide que esta muestra sea empleada tras su evaluación, pero servirá
como representación del resto de la muestra seminal total.
Una vez fijada, se procede a una tinción biológica, como la hematoxilina-eosina: la eosina, se une
a los elementos electropositivos de la célula y tiene una coloración rosada y la hematoxilina se une
a las moléculas electronegativas de los espermatozoides, obteniendo una coloración en tonos
azulados.
La tinción de las distintas estructuras permite una mejor observación al microscopio al incrementar
la definición de las membranas.
Para valorar la forma de un espermatozoide, se observan sus tres estructuras principales: cabeza,
pieza intermedia y cola.
La cabeza del espermatozoide debe ser ovalada y lisa, de 5 a 6 micrómetros de largo y de 2,5 a
3,5 micrómetros de ancho. El acrosoma debe abarcar un 40-70% del volumen de la cabeza, y si
hay vacuolas deben ser escasas y ocupar menos de la mitad del volumen de la cabeza ya que si
son numerosas o grandes puede significar que el ADN está dañado.
La pieza intermedia o cuello, como su nombre indican, está situada entre la cabeza y el flagelo, y
es una zona un poco más ensanchada que la base de la cola. Su función es primordial porque
alberga las mitocondrias, consideradas el motor del movimiento del espermatozoide, pues son las
responsables de generar energía.
El flagelo o cola está conformado por las mismas moléculas estructurales responsables del correcto
reparto de cromosomas en la mitosis y meiosis, con lo que un flagelo irregular reflejará problemas
en el reparto de cromosomas, y ante todo, su movimiento no podrá competir con el bateo> de un
espermatozoide normal.
La valoración de la muestra teñida de espermatozoides consiste en contar el número de
espermatozoides normales y anormales. Generalmente se valoran 200 espermatozoides y a
continuación se estima el porcentaje de espermatozoides con forma normal.
Espermatozoides anormales: causas y alteraciones
Las alteraciones en la morfología pueden tener un origen genético, de ahí la importancia de
presentar una correcta morfología. Un espermatozoide cuya información genética, la mitad del
futuro embrión, no esté bien codificada y organizada no dará lugar a un embrión viable.
Además, los espermatozoides con forma normal (en azul en la imagen inferior) nadan más rápido
y de forma adecuada. En cambio, la mayoría de espermatozoides anormales son inmóviles o tienen
una movilidad lenta.
En los inicios del estudio de morfología espermática, había una lista de anomalías y si no las
cumplía se determinaba que el espermatozoide era normal.
Con el paso del tiempo, se vio que la variedad de alteraciones era tan elevada que se optó por
estandarizar cómo era la estructura de un espermatozoide de buena morfología, y las desviaciones
de forma respecto a este patrón se consideran alteraciones (en rosa en la imagen inferior).
Morfología espermática
¿Qué es un espermatozoide anormal?
Los espermatozoides con morfología anormal pueden presentar cabeza, pieza intermedia y/o cola
anormal. Así, puede haber las siguientes anomalías:
Alteraciones de cabeza: espermatozoides sin cabeza (cabeza de alfiler), cabeza pequeña,
amorfa, redonda, alargada, grande (globozoospermia), con forma de pera (piriforme), con
acrosoma grande, con acrosoma pequeño, sin acrosoma, con muchas vacuolas, con vacuolas
grandes o con dos cabezas.
Alteraciones de cola: espermatozoides sin cola, cola enrollada, corta, larga, doblada o doble cola.
Alteraciones de pieza intermedia: espermatozoides sin pieza intermedia, con una curvatura,
asimétrica, engrosada, delgada, irregular o con una protuberancia de un tamaño superior a la
tercera parte del área de la cabeza.
Existen alteraciones muy claras, como son la duplicación o ausencia de estas estructuras,
espermatozoides con doble cola, microcefálicos o macrocefálicos, que no pueden dar lugar a un
embrión viable nunca de forma natural.
Según el criterio de la OMS un valor igual o superior al 4% de espermatozoides con morfología
normal es considerado dentro de los valores normales. Si el índice de anormales es mayor del 96%
estamos ante un caso de teratozoospermia.
Existe otro criterio de análisis de la morfología algo más estricto, se trata del criterio o morfología
de Kruger, según el cual, el límite de normalidad se sitúa en el 14%, es decir, una muestra con más
del 86% de sus espermatozoides anormales se considerará teratozoospérmica.
Valores normales para una espermatobioscopía:
 Volumen de la muestra ≥ de 1,5 ml
 pH entre 7,2 y 8,0
 Concentración espermática ≥ de 15 millones/ml
 Total de espermatozoides > de 40 millones
 Movilidad progresiva (A+B) ≥ de 32%
 Espermatozoides vivos > de 58%
 Espermatozoides normales ≥ de 4%
 REM (capacitación espermática) > de 5 millones, siendo este el parámetro más
determinante del seminograma
 Fundamento.
Una espermatobioscopía evalúa la cantidad y la calidad de los espermatozoides, este examen es
de gran utilidad para la evaluación de la fertilidad en hombres. La espermatobioscopía incluye
técnicas que se basan en la posibilidad que existe de estudiar en forma más o menos exacta el
número, la morfología, la motilidad y la vitalidad de los espermas, directamente del eyaculado
masculino.

Objetivo.
Realizar mediante métodos manuales el examen físico, químico y microscópico de una muestra de
semen para valorar la cantidad y calidad de espermatozoides presentes en una muestra de líquido
seminal para apoyar el diagnóstico de enfermedades como la subfertilidad o la valoración de
métodos anticonceptivos como la vasectomía.

Material y Equipo.
Para la elaboración de esta práctica se usaron los siguientes materiales:
- Frasco para muestra.
- Gradilla.
- Tubos de ensayo.
- Pipeta.
- Semen.
- Portaobjetos.
- Cubreobjetos
- Tiras reactivas.
- Microscopio.
- Azul de metileno.
 Procedimiento o Técnica.

 Examen físico.
A. Determinación de aspecto.
1. Revisen el aspecto de la muestra de semen dentro de los primeros 15 minutos
después de su emisión.
2. Determinar si su aspecto es homogéneo o heterogéneo.

B. Determinación de volumen.
1. Con la ayuda de una pipeta serológica de 5 ml colocar semen en un tubo de
ensayo y medir el volumen.

C. Determinación de color.
1. En el tubo de ensayo donde se determinó el volumen, observar el color de la
muestra sobre un fondo blanco.

D. Determinación de la viscosidad.
1. Con la ayuda de una pipeta Pasteur con bulbo, coloquen una gota de semen
en un portaobjetos.
2. Utilizando una regla, medir el filamento que se forma entre la pipeta y el
portaobjetos.

E. Determinación de la licuefacción.
1. En el recipiente de recolección de la muestra de semen, medir el tiempo que
tarda en volverse completamente líquida. (El tiempo es de 15-30 minutos)

 Examen químico.
A. Determinación de la capacidad fecundante.
1. Colocar en un tubo de ensayo 1 ml de azul de metileno y 1 ml de líquido
seminal con no más de una hora de emitido; mezclar perfectamente.
2. Llenar ¾ partes dos tubos capilares sin heparina; uno con la mezcla anterior
y otro únicamente con colorante y etiquetarlo como “Problema” y “Testigo”.

B. Determinación de pH.
1. Este estudio se debe realizar una vez que se haya licuado la muestra: se debe
medir con papel pH de rango 6.0 a 10.0.
2. Extender una gota de semen de manera uniforme sobre la tira de papel pH.
3. Esperar a que el color de la zona impregnada se encuentre uniforme (30 seg.)
4. Comparar la tira con la escala cromática provista por el fabricante.
 Examen microscópico.
A. Determinación de la morfología en extendidos teñidos con colorante de Wright.
1. Realizar un frotis delgado sobre un portaobjetos. La mejor manera de hacerlo
es con un aplicador de madera.
2. Para teñir el frotis, seguir la técnica estudiada.
3. Observar en la laminilla en zigzag. Revisar la morfología espermática de 100
células. Considerar las formas normales y anormales.

B. Determinación de vitalidad.
1. Mezclar en un portaobjetos limpio y seco 5 ml de semen y 5 ml de colorante
Eosina/Nigrosina.
2. Cubrirlo con un cubreobjetos de 22 x 22, procurando no hacer burbujas.
3. Dejar la preparación en reposo durante 30 segundos.
4. Examinar en el microscopio con aumento 40x; contar 200 espermatozoides,
tanto los coloreados (muertos) como los no coloreados (vivos). Estos últimos
pueden ser móviles e inmóviles.
5. Establecer el porcentaje.
 Observaciones.

Preparación del Muestra de Prueba de vitalidad Elaboración de la

“Problema” y “Testigo” en Anormalidad en la

Variaciones en la
Morfología de los
espermatozoides.
 Resultados.
 Examen Físico.
1) Aspecto, volumen y color.
El aspecto de la muestra era heterogéneo y su volumen era de 1.5 ml mientras que
su color era blanco amarillento.

2) Viscosidad.
No presentó viscosidad

3) Licuefacción.
El tiempo que tardó en volverse completamente líquido fue de 30 minutos.

 Examen químico.
1) Capacidad fecundante.
El tubo capilar que contenía la mezcla de semen y azul de metileno a diferencia del que
sólo tenía azul de metileno se decoloró y se tornó de un color azul más claro en un tiempo
de 30 minutos.

2) Determinación de pH.
Después de echar el líquido seminal en las tiras reactivas y de esperar un rato, nos dio
como resultado que el valor de pH era “7”
 Examen Microscópico.
1) Tinción de Wright.
Al realizar la tinción de Wright, observamos en el microscopio con aceite de inmersión
con el objetivo 100x y pudimos observar la morfología de los espermatozoides.
Encontrando muy pocas anormalidades (Aproximadamente un 20%)

2) Vitalidad.
Como la muestra con la que trabajamos era fresca, al observar en el microscopio
había aproximadamente un 75% de espermatozoides vivos ya que la mayoría de
estos aún se movía y sólo una parte no tenían movilidad.
 Conclusión.
El espermograma es el examen de diagnóstico más importante y sencillo para iniciar el estudio de
la fertilidad masculina ya que estudia una gran cantidad de parámetros que pueden ser de gran
importancia, por ejemplo: en parejas que deseen tener un bebé, para saber si se es fértil o no y
también para saber qué tan efectiva resultó una vasectomía.
El realizar esta prueba fue muy importante para saber más acerca del líquido seminal y cómo se
analiza, ya que ninguno de nosotros tenía conocimiento previo de todo lo que este líquido conlleva.
Lo más que más nos sorprendió a todos es ver cómo en tan poca cantidad de líquido seminal
pueden ser encontrados una gran cantidad de espermatozoides mientras estaban en movimiento
y ver qué tanto puede variar en su forma.

Anexos.
 Bibliografía.
- [Link]

- [Link]
espermatozoides/

- [Link]

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