DETERMINACION DE ESCHERICHIA COLI (E.
COLI) EN AGUAS DE CONSUMO
HUMANO POR EL METODO NMP (Número más Probable).
1. DEFINICION
La norma UNE-EN ISO 9308-2, describe el método para la detección y/o recuento de E.
coli y bacterias coliformes en aguas según el método NMP (Número más Probable). La
detección de [Link] se basa en la expresión de la enzima ß-D-glucoronidasa. El producto
Colilert-18/Quanti-Tray, fabricado por la empresa Idexx, ha sido reconocido como método
de referencia en esta UNE-EN ISO 9308-2, incluida en la actual Directiva sobre Aguas de
Consumo Humano (CEE 2015/1787), la cual será traspuesta a la legislación española
antes del 27 de octubre de 2017.
Colilert-18 es un método muy sencillo, rápido y con confirmación directa. Para la
determinación de presencia/ausencia, únicamente es necesario añadir a 100 ml de la
muestra problema, el reactivo Colilert-18. Tras homogeneizar y disolver el reactivo, se
incuba la muestra durante 18 horas a 35 ºC. Transcurrido ese tiempo, la presencia de
coliformes vendría dada por una coloración amarilla de la muestra, mientras que la
presencia de E. coli estaría marcada por la fluorescencia en la muestra cuando ésta es
observada bajo una luz UV a 365 nm.
Cuando se requiere cuantificación, la muestra con el reactivo se vierte en un blíster de 51
pocillos el cual, una vez sellado, se incuba tal y como se ha descrito anteriormente. En este
caso, se contarán los pocillos que desarrollan coloración amarilla y fluorescencia, datos
que se llevarán a unas tablas de NMP para la cuantificación de coliformes y E. coli en la
muestra de agua.
ANALISIS COLILERT 18
ALMACEMNAMIENTO:
Almacenar a una temperatura de 2 - 25 °C, alejado de la luz
PROCEDIMIENTO
PRESENCIA/ AUSENCIA (P/A):
1. Añadir el contenido de un paquete a una muestra de 100 mL, en un recipiente
estéril transparente, no fluorescente.
2. Tapar y agitar al recipiente.
3. Si la muestra no esté ya a temperatura de 33 °C - 38ºC, colocar el recipiente en
un baño termostático a 35ºC durante 20 minutos o, como alternativa, en un
baño termostático a 44,5°C entre 7 a 1O minutos.
4. Incubar a 35 ± 0,5ºC durante el resto de las 18 horas.
5. Leer los resultados de acuerdo con el cuadro de interpretación de resultados,
(más abajo).
PROCEDIMIENTO DE ENUMERACIÓN QUANTL-TRAY:
1. Añadir el contenido de un paquete a una muestra de 100 mL de agua a
temperatura ambiente, en un recipiente estéril.
2. Tapar y agitar el recipiente hasta disolver.
3. Verter la mezcla de muestra/reactivo en una Quanti Tray o una Quanti-
Tray/2000 y sellar en un IDEXX Quenti-Tray Sealer.
4. Colocar la bandeja sellada en una estufa de incubación a 35 ± 0,5ºC (o a 44,5
± 0,2ºC para los coliformes fecales) durante 18 horas (no se necesita
precalentar a 35ºC). Si se incuba en un baño termostático, sumergir la
Quanti-Tray con la ayuda de un anillo pesado, hasta situarla por debajo del
nivel del agua.
5. Leer los resultados de acuerdo con el cuadro de interpretación de resultados.
(más abajo). Contar el número de pocillos positivos y referirse al cuadro NMP
proporcionado con las bandejas para obtener et número más probable.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
ASPECTOS RESULTADOS
Menos amarillo que el comparador Negativo para coliformes totales y
cuando se incuba a 35 ±0.5 C° o a [Link] , negativo para coliformes
44.5±0.2 C°. fecales
Amarillo igual o mayor que del positivo para coliformes totales
comparador cuando se incuba a 35
±0.5 C°
Amarillo igual o mayor que del positivo para coliformes fecales
comparador cuando se incuba a
44.5 ±0.2 C°
Amarillo y fluorescencia igual o Positivo para [Link]
mayores que los del comparador
cuando se incuba a 35 ±0.5 C°
Buscar fluorescencia usando una luz UV de 6 vatios 365 nm a distancia de unos 13
cm de la nuestra en un ambiente oscuro. Apuntar el haz de la luz en dirección
contraria a los ojos y hacia la muestra.
Los resultados de Colilert-18 se deben leer a las 18 horas de incubación.
Es posible prolongar el tiempo de lectura -4 horas más, hasta las 22 horas, para que
en raro pero posible caso de duda el color o la fluorescencia se intensifiquen.
Los resultados positivos para coliformes totales y E. coli antes de las 18 horas y
negativos tras 22 horas también son válidos.
Asimismo, los laboratorios pueden incubar muestras (hasta 22 horas en total) si
to de desean, para mayor comodidad.
Notas sobre el procedimiento:
Cuando se agrega Colilert-18 a la muestra es posible que se observe una tinción leve.
Es posible que este prospecto no refleje sus regulaciones locales. Para las pruebas
de conformidad, asegúrese de seguir los procedimientos reglamentarios apropiados.
Por ejemplo, las pruebas realizadas en otros países deben incubar a 36 ±0.5
C° durante 18 a 22 horas
Colilert-18 puede procesarse en cualquier forma de múltiples tubos. Deben usarse los
métodos estándares para examen de agua y las tabletas NMP de aguas residuales
para encontrar.
Si la muestra de agua tiene un cierto color de fondo, comparar la muestra Inoculada
de Colilert- 18 con un blanco de testigo de la misma muestra de agua.
Colllert-18 es una prueba principalmente para agua. Las características de
rendimiento de Colllert-18 no se aplican a muestras alteradas por
enriquecimiento o concentración previos.
En el caso de muestras con un exceso de cloro, tal vez se observe un destello azul al
añadir Colilert-18. Si se observa, considerar que la muestra no es válida y
suspender la prueba.
Siempre debe utilizar una técnica aséptica cuando se use Colilert 18. Desechar
en cumplimiento con las Buenas Prácticas de Laboratorio.
2. RANGO DE ANALISIS
Este método puede medir de 25.3 NMP hasta 2419.6 NMP
Límite de detección inigualable: 1 NMP/ 100 Ml
3. MATERIASLES Y EQUIPOS
4. COSTOS DE INSUMOS Y EQUIPOS
