UNIVERSIDAD NACIONAL “SANTIAGO ANTÚNEZ DE MAYOLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE

Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental

INFORME DE LABORATORIO N°02

“APLICACION DE BIOENSAYOS EN LA MEDICION DE TOXICIDAD POR METALES

PESADOS, HIDROCARBUROS Y PESTICIDAS, DE MUESTRAS DE AGUAS, SOBRE EL
CRECIMIENTO DE LA RAIZ ALLIUM CEPA”

ALUMNOS:

 Alvarado Zamudio Karla.

 Chávez Rímac Katherine
 Huamán Aguilar Lorgio
 López Egusquiza Mary
 Rosales López Ángel

DOCENTE:

Montano Chávez Yeidy Nayclin

CURSO:

Biotecnología Ambiental
 I. INTRODUCCION

Los bioensayos de toxicidad con semillas se evalúan los efectos adversos de los
contaminantes en el proceso de germinación y en el desarrollo de las plántulas durante los
primeros días de crecimiento. Como respuesta se determina la inhibición en la germinación
y de la elongación de la radícula y del hipocotílo. La división celular de los ápices radicular
puede afectarse, retardando el proceso de mitosis o alterando el proceso de alargamiento
radicular, por lo que la fitotoxicidad de un compuesto puede ser determinada a través de la
medición de dichas respuestas.

Algunas plantas son más sensibles que otras a los efectos de los contaminantes, sin embargo,
se sabe que generalmente las comunidades vegetales son afectadas por las aguas
contaminados, es por esto, que se estudia y evalúa ciertas especies vegetales (cebolla, esta
ocasión) y observar el nivel de resistencia para desarrollarse en este tipo de aguas
contaminadas como son los hidrocarburos, metales pesados, pesticidas y de ríos.

En esta oportunidad nos centraremos con la Allium cepa (cebolla de papa) a la cual
introduciremos en las muestras de agua, sean: agua con metales, agua con hidrocarburos,
agua del rio y por último agua con pesticidas, en ella veremos su desarrollo de las raíces, del
cual estimaremos que tan contaminado están las muestras de agua de los ríos, en cuanto a la
muestra de hidrocarburos y pesticidas, la concentración se puede manipular.

El desarrollo o no de las raíces nos darán un indicio de que tan contaminado están las
muestras traídas (agua del rio y agua con metales) y las muestras preparadas (hidrocarburos
y pesticidas)
 II. OBJETIVOS

[Link] general

 Determinar la toxicidad en la aplicación de bioensayos por; metales pesados,

hidrocarburos, pesticidas y agua de rio, en nuestras de aguas sobre el crecimiento de
la raíz del Allium cepa.

[Link] específicos

 Realizar un buen tratamiento del Allium cepa y dejarlos en las muestra de agua, para
su desarrollo.
 Visualizar la resistencia del Allium cepa en las diferentes muestras
 Analizar en qué muestra de agua se desarrolla mejor la raíz del Allium cepa.
 III. FUNDAMENTO TEORICO

ECOTOXICOLOGÍA

La ecotoxicología tiene como materia fundamental de estudio a la contaminación, los

sistemas bióticos en forma de toxicidad, alteración de especies, reducción de una determinada
productividad, entre otras, puesto que no siempre un polutante se comporta como un tóxico
neto, sino que puede suponer solo la creación de un nivel indeseable en un determinado
ecosistema (M.A.C, 2003). Según Truhaut (1975), quien estableció el término de
ecotoxicología en lugar de toxicología ambiental, usada hasta ese tiempo. Los estudios eco
toxicológicos, se componen de tres secuencias.

o La liberación del polutante, abarcando su formación y la génesis en esas fuentes de

polución, los medios y vías de transporte (suelo, aire, agua, alimentos, etc.), los
factores que influyen en su difusión, sus absorciones geológicas y las posibles
alteraciones de sus propiedades fisicoquímicas debidas a los diversos componentes
abióticos del ecosistema, dando lugar a su acumulación o degradación.
o El ingreso de los polutantes en el medio biológico, es decir, su entrada en las cadenas
biológicas, alimentarias, de comunidad, etc., con cinéticas propias.
o Calificación y cuantificación de los efectos patológicos sobre los seres vivos y sus
ecosistemas, con las consiguientes deducciones epidemiológicas y profilácticas.

BIOINDICADORES

Un bioindicador es un organismo o un conjunto de ellos (Baltanas, 2009) de diferentes

especies que presentan mayor fragilidad en el ambiente desde el punto de vista biótico, la
comunidad hidrobiológica y la edafofauna ([Link], 2004). De tal manera que la
respuesta quede reflejada en el cambio de valor en una o más variables de cualquier nivel
del organismo; estas variables o características, o sus cambios, pueden llamarse también
variables bioindicadores (Baltanas, 2009). Los bioindicadores deben poseer las siguientes
características: presentar alta sensibilidad ante sustancias tóxicas, ser de fácil manejo,
amplia distribución, fácilmente disponible (cultivo/captura), poseer una alta adaptación a
diversos ecosistemas y condiciones de laboratorio y presentar ciclos de vida cortos. Estos
indicadores permiten simplificar, cuantificar, evaluar, seguir, comparar y comunicar
fenómenos muy complejos (Albert, 2004).

LOS ENSAYOS TOXICOLÓGICOS

Los bioensayos son herramientas de diagnóstico empleadas para determinar el efecto de

agentes físicos y químicos sobre organismos de prueba bajo condiciones experimentales
específicas y controladas. Los efectos pueden ser de inhibición o de magnificación evaluados
por la muerte del individuo (efecto letal), o por respuestas biológicas (efectos subletales) que
van desde alteraciones bioquímicas y celulares (genotoxicidad y disrupciones endócrinas),
alteraciones en el crecimiento y desarrollo, alteraciones en la proliferación y multiplicación
y cambios morfológicos, fisiológicos o histológicos de los organismos. En cada bioensayo
se cuantifica uno o varios de estos efectos nocivos y cada uno de estos parámetros
seleccionados se denomina “punto final de evaluación de la toxicidad”. La toxicidad será la
capacidad de una sustancia para ejercer un efecto nocivo sobre un organismo y dependerá
tanto de las propiedades químicas del compuesto como de su concentración, según sea la
duración y frecuencia de la exposición al tóxico, y su relación con el ciclo de vida del
organismo. Las pruebas podrán ser de tipo agudo o crónico (Castillo, 2000). Las pruebas
toxicológicas son conocidas generalmente para evaluar los efectos tóxicos de las mezclas
complejas que se encuentran comúnmente en las descargas de aguas residuales industriales
(Sanchez-Meza, 2007). La carga contaminante es cualitativa y cuantitativamente variable y
su impacto en el entorno natural es difícil de pronosticar, por ende, es necesario medir el
impacto para determinar la toxicidad del efluente y así identificar las principales sustancias
o combinaciones de sustancias presentes que están causando los efectos negativos ([Link],
2011). El uso de plantas vasculares ha estado dirigido principalmente a la evaluación de
efectos citotóxicos y genotóxicos, así como también a estudios de exposición en ecosistemas
terrestres y estudios de contaminación atmosférica (Sobrero, 2004). Los bioensayos
utilizando cepas de semillas son un importante indicador de toxicidad, ya que muestran de
una forma rápida y clara los posibles efectos fitotóxicos que una sustancia puede llegar a
causar en organismos vegetales. De esta manera, los ensayos toxicológicos pueden ayudar a
determinar si un efluente vertido a un ecosistema, representa un potencial riesgo tóxico para
el mismo (Y., 2012). Los ensayos con plantas terrestres presentan un mínimo costo de
mantenimiento en el laboratorio y son ventajosos porque requieren poco volumen de muestra
(1mL por envase), comparado con otros organismos que requieren de 50 a 200mL por envase.
Las plantas vasculares han sido recomendadas por la Agencia de Protección Ambiental
(EPA) y por la Administración de Drogas y Alimentos (FDA), ambas de [Link]., debido a
su buena sensibilidad en comparación con otros sistemas de ensayos disponibles, además
porque son de bajo costo, de fácil manipulación y almacenaje, y porque presentan una buena
correlación con otros sistemas de pruebas. Las diferentes respuestas de las plantas vasculares
a metales pesados pueden ser atribuidas a factores genéticos y fisiológicos (Y., 2012).

ENSAYOS ECO-TOXICOLÓGICOS

Para evaluar los efectos tóxicos de los metales sobre el ecosistema, se han venido utilizando
desde hace mucho tiempo los bioensayos. Varios análisis de fitotoxicidad se han llevado a
cabo mediante el uso de semillas germinadas que son simples, versátiles y útiles para evaluar
la toxicidad de aguas, sedimentos y muestras de suelo, siendo una contribución para valorar
los impactos en los ecosistemas y promover alternativas de biorremediación ([Link]ño,
2005). Metales como el Cr, Hg y Pb han sido estudiados en ensayos fitotóxicos con semillas
de cuatro especies como la cebolla (Allium cepa L., Liliaceae), betarraga (Beta vulgaris L.,
Chenopodiaceae), arroz (Oriza sativa L., Poaceae) y rabanito (Raphanus sativus L.,
Brassicaceae) a 192 h de exposición, para determinar el crecimiento radicular de las mismas.
La semilla B. vulgaris demostró mayor sensibilidad a la acción de los tres metales,
aconsejándose su uso para el monitoreo ecotoxicológico de suelos contaminados por relaves
mineros o por otras fuentes antrópicas ([Link]ño, 2005).Los drenes ácidos de minas con
concentraciones de metales pesados como Pb, Zn, Cd y Cu, también fueron estudiados en
bioensayos con semillas de Lactuca sativa, Cucumis sativus, Brassica juncea y Nasturtium
officinale, y se estimó la toxicidad través de la elongación radicular y el porcentaje de
germinación de las cuatro especies. Lactuca sativa y Cucumis sativus mostraron una mejor
sensibilidad con relación a la germinación y a la elongación radicular ante los drenes ácidos
(Camarillo-Ravelo, 2015).

se concluyó que existen respuestas muy diferentes entre distintas especies de plantas
vasculares expuestas a metales pesados, según los niveles de tolerancia. Semillas de Lactuca
sativa, Lemna gibba (macrófitas) y L. minor (lemnáceas), fueron evaluadas en su sensibilidad
frente al herbicida glifosato y ante los metales pesados Cu (II), Cr (VI) y Cd (II). Los
resultados de estos estudios sugieren el posible uso de estas especies como herramienta de
control ambiental, debido a su alta sensibilidad para detectar considerables niveles de metales
pesados en efluentes industriales, mediante la evaluación los puntos finales como la
germinación, la longitud radicular y la longitud del hipocotilo. En adición, W. Wang (1987)
hace una comparación entre las respuestas de tres especies de plantas vasculares como
Lactuca sativa, Cucumis sativus y Panicum miliaceum, expuestas a compuestos orgánicos y
metales pesados, observándose una mayor sensibilidad de Lactuca. sativa por los metales y
una sensibilidad de Panicum miliaceum ante la toxicidad de los compuestos orgánicos.
Charles et al. (2011) realizaron pruebas de toxicidad con efluentes industriales que
presentaban trazas de varios metales (Cu, Ni, Zn, Al). Se utilizaron semillas de lechuga para
pruebas de germinación y crecimiento, demostrándose que las muestras contaminantes con
niveles altos de cobre y níquel tuvieron el mayor impacto. Los estudios de germinación
realizadas con soluciones sintéticas confirmaron que las mezclas de metales son más tóxicas
que los metales considerados por separado y que el efluente real era más tóxico que las
soluciones sintéticas. Las semillas de lechuga tienen su aceptación en bioensayos para
investigaciones con diferentes contaminantes. Como se conoce, con esta especie se ha podido
determinar la concentración de inhibición media de metales como el vanadio y el calcio; el
manganeso, bario y hierro y el cromo, así también, se ha usado para el análisis de toxicidad
de efluentes resultantes de plantas de tratamiento de aguas residuales o para la valoración
ecotoxicológica de algunas sustancias químicas y mezclas complejas tóxicas por su
simplicidad en la ejecución de la prueba; siendo recomendadas en monitoreos de control
ambiental por sus buenos resultados de manera inmediata. La diferencia en los valores de
toxicidad, mutagenicidad, genotoxicidad y citotoxicidad, indica la importancia de utilizar
pruebas que combinen varios métodos, con el fin de obtener una estimación más objetiva y
realista de una toxicidad química. Existen estudios realizado, en donde se llevaron a cabo
pruebas con tres organismos como son: Allium cepa, Lactuca sativa e Hydra attenuata, para
la evaluación de los efectos tóxicos, mutagénicos, genotóxicos y citotóxicos, ante diferentes
sustancias tóxicas orgánicas e inorgánicas. Se determinó que no existe una aparente
correlación entre estos parámetros. Al parecer, ante la exposición a los contaminantes, existe
una especificidad de reacciones y efectos observables, tanto en el organismo como en las
células. En otra investigación de Castillo, Vila, & Neild (2000), se efectuaron pruebas
multitróficas mediante el uso de Bacillus cereus, Hydra attenuata, Panagrellus redivivus,
Daphnia magna, Lactuca sativa y Oncorhynchus mykiss, que se usaron para determinar la
toxicidad aguda, la toxicidad crónica y la mutagenicidad en diferentes muestras que
incluyeron los siguientes metales: Cd (II), Cu (II), Cr (VI), Hg (II). Así mismo, los resultados
arrojaron diferentes sensibilidades y resistencias, en donde se demostró que el mercurio era
el elemento más tóxico seguido por el cobre, el cromo y el cadmio. Los bulbos de Allium
cepa L. han tenido también una amplia aplicación en varias valoraciones de toxicidad. El
efecto tóxico de los metales pesados (cobre, zinc, plomo, aluminio, hierro, cadmio, cromo,
níquel y manganeso) presentes en ríos, lagos o en drenajes de actividades mineras, ha sido
estimado en varios estudios, en donde se manifestaron alteraciones como inhibición y
reducción en la longitud de la raíz de la especie, cambios significativos en la frecuencia de
aberraciones cromosómicas y en el índice mitótico, así como una alta toxicidad sub-crónica
manifestada en el aumento del estrés oxidativo y la genotoxicidad, posiblemente debido a la
acidez y la presencia de los metales y iones sulfato. Los investigadores, emplearon esta
especie para analizar los efectos en la longitud de raíz ante concentraciones de metales como
Cu, Pb y Zn, además de fenol y sodio, lo que dio como resultado una mayor sensibilidad de
la cebolla hacia los metales pesados, considerándose al Cu como el más tóxico. El efecto
mitotóxico, citotóxico y genotóxico del plomo, también fue valorado en células
meristemáticas de cebolla, en las cuales se presentaron una toxicidad inducida que dependía
de la concentración y tiempo de exposición, manifestándose en una disminución en el
crecimiento de la raíz y el índice mitótico, alteraciones en la morfología nuclear y la
inducción de aberraciones cromosómicas. Allium cepa también ha estado presente como
bioindicador en la determinación de los efectos potenciales de citotoxicidad y genotoxicidad
en aguas residuales industriales y en descargas de plantas de tratamiento de agua residual. En
varios ensayos realizados, se observaron diferentes efectos que van desde modificaciones
morfológicas de las raíces, inhibición del crecimiento de la raíz, división celular e inducción
de aberraciones mitóticas y cromosómicas.
PRUEBAS CON ALLIUM CEPA

Las pruebas con cebolla (Allium cepa) han sido utilizadas por muchos investigadores
principalmente como un bioindicador de contaminación ambiental ya que su modelo es
adecuadamente sensible para detectar innumerables sustancias que causan alteraciones
cromosómicas (R. Geremias, 2012). Esta planta monocotiledónea se ha empleado en varias
pruebas para supervisar los posibles efectos sinérgicos de una mezcla de contaminantes,
incluidos los metales pesados y los productos químicos hidrófilos y lipófilos (Radić, 2010)

Cuando un bulbo de cebolla (Allium sp.) se rehidrata se produce una estimulación del
crecimiento de las células, lo cual permite la elongación de las raíces de la planta. Sin
embargo, cuando la hidratación se lleva a cabo en presencia de sustancias tóxicas, la
división celular de los meristemos radiculares puede inhibirse, ya sea retardando el proceso
de mitosis o destruyendo las células. Este tipo de alteraciones generalmente impide el
crecimiento normal de la raíz, y por tanto su elongación. El efecto puede determinarse en
forma indirecta, mediante la comparación de la elongación de las raíces de cebollas
expuestas al compuesto tóxico contra la de cebollas no expuestas, luego de un período de
72 horas de prueba. La cuantificación del efecto se realiza estableciendo el porcentaje de
inhibición del crecimiento de las raíces respecto a la longitud promedio de las raíces del
control (M. Diaz, 2004).

El sistema de prueba con Allium cepa es importante por ser un excelente modelo in vivo, lo
que proporciona información para evaluar los mecanismos genotóxicos de un agente (efectos
clastogénicos y/o aneugénicos) en el material genético, y es también una herramienta útil en
el estudio de una gran cantidad de agentes químicos en el control ambiental. La inhibición
de la longitud de la raíz es adecuada para la evaluación de sustancias en diversas
concentraciones. Las agencias internacionales de protección ambiental la recomiendan por
la simplicidad del procedimiento de prueba para estimar la contaminación ambiental y la
toxicidad causada por efluentes industriales, aguas residuales municipales o domésticas no
tratadas. Los ensayos con Allium cepa, en comparación con otros ensayos a corto plazo que
requieren preparaciones previas de muestras probadas y la adición de un sistema metabólico
exógeno, cuentan con ventajas significativas como son: fácil manejo, bajo costo, pequeños
volúmenes de muestra, sensibilidad, reproducibilidad y alto rendimiento.
UTILIZACIÓN DE LA PRUEBA DE Allium cepa PARA DETECTAR DIFERENTES
CLASES DE CONTAMINANTES AMBIENTALES

METALES PESADOS

Se denomina metales pesados a todos aquellos elementos químicos cuya densidad es mayor
a 5 gr/cm3 en la forma elemental o su peso atómico es superior a 23. Una característica
importante muy importante de estos es su incapacidad para degradarse químicamente y
Geoquimicamte lo que ocasiona una persistencia y en muchos casos una bioacumulación que
aun potencia su toxicidad. Su efecto de concentraciones elevadas de los metales pesados
ocasiona daños a distintos niveles de acuerdo a los organismos que estemos estudiando y de
acuerdo al metal que particular del cual se trate.

En algunas plantas pueden utilizar parte de estos elementos como micronutrientes

favoreciendo el correcto desarrollo de sus funciones vitales, pero cuando estas
concentraciones se sobrepasan los efectos pueden producir alteraciones al nivel de inhibir
crecimiento, reproducción, etc. En el caso de los seres humanos, estos elementos resultan
altamente tóxicos produciendo alteraciones en diversos órganos y tejidos, afectando al
correcto desenvolvimiento de los mismos, también en algunos casos originando mutaciones,
daños genéticos. Para los efectos específicos de los metales revisar (Rosane, 2009, p. 41).

PESTICIDAS

Estudios conducidos en cultivos de Allium cepa L. han coincidido que la aplicación de

insectidas foliares puede afectar la fotosíntesis, u obstruir parcialmente las estomas de la
planta — esos poros microscópicos en las hojas por los cuales los gases (vapor de agua y
CO2) son intercambiados. Los valores fotosintéticos reducidos pueden atrasar el tiempo de
producción o reducir la calidad de la planta, al igual que causar daños visibles, debido a la
toxicidad química. Efectos negativos sutiles de los insecticidas en cultivos individuales,
pueden acumularse y resultar en pérdidas económicas cuando son producidos múltiples
cultivos.

Los agroquímicos generalmente se utilizan para combatir las enfermedades en los cultivos
como por ejemplo el Trips, Orius sp. y Aeolothrips intermedius, esta aplicación sin medida
o sin una previa 11 evaluación de las plantas trae consigo un efecto desfavorable. Además de
ver el efecto de los agroquímicos, se debe realizar una buena planificación en cuanto a la
preparación del terreno, eliminando las malezas que aun persisten de la cosecha anterior.

HIDROCARBUROS

Los derrames de hidrocarburos de petróleo son una de las principales fuentes de

contaminación de suelos y aguas ya que ocasionan perturbaciones en los ecosistemas al
afectar su estructura y bioprocesos. Este tipo de contingencias ambientales originan efectos
directos sobre la biota, ya que el petróleo contiene compuestos químicos tóxicos que
producen daños a plantas, animales y humanos, pero principalmente sobre las poblaciones
de microorganismos, los cuales representan parte importante del ecosistema y son claves para
los procesos biogeoquímicos (Vasudevan y Rajaram, 2001).

Permite hacer una evaluación precisa de sus propiedades, tales como capacidad de
recuperación y regeneración, resistencia a cambios ambientales y potencial degradativo. La
contaminación con los HIDROCARBUROS induce cambios en las propiedades químicas del
suelo, disminuyendo el pH, la conductividad eléctrica y la capacidad de intercambio
catiónico, lo cual incrementa el porcentaje de saturación con aluminio. Estos cambios hacen
menos diversa la estructura funcional de la comunidad bacteriana. También, ocurre una
restricción de la diversidad funcional. La ingesta de los hidrocarburos puede afectar a tres
sistemas orgánicos fundamentales: Pulmón, parato0 gastrointestinal y sistema nervioso.
IV. MATERIALES Y REACTIVOS
 1 lt de agua con pesticidas.

 1 lt de agua con hidrocarburo

 1 lt de agua con metales

 1 lt de agua de río

 28 unidades de Allium cepa (cebolla)

 28 vasos descartables
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Se procedió a limpiar adecuadamente los bulbos de las cebollas, sin dejar que quede
alguna raíz de ningún tamaño. Sacándolas a mano y en algunos casos cortándolos.

2. Se procedió a mezclar cada sustancia (pesticida, hidrocarburo, agua con metales) con
el agua potable, menos el agua de río pues fue vertido sin combinarse con agua
potable.

AGUA CON METALES AGUA CON HIDROCARBUROS AGUA CON PESTICIDA

3. Se vertió la cantidad adecuada en 7 vasos (previamente rotulados) de cada mezcla.

La cantidad fue la necesaria como para que el bulbo de la cebolla sea sumergido.
 AGUA CON HIDROCARBUROS AGUA CON METALES AGUA CON PESTICIDA AGUA DE RÍO

4. Luego de ello se procedió a colocar cuidadosamente las cebollas sobre los vasos con
las sustancias anteriormente mencionadas. Con la ayuda de los mondadientes se dejó
un espacio entre cebolla y vaso para el ingreso de oxígeno.
5. Finalmente se midió con papel milimetrado las raíces crecidas, las cuales fueron en
dos tiempos, la primera toma de medidas fue luego de tres días de haber colocado las
cebollas y la segunda toma de medidas fue a los siete días de haber colocado las
cebollas.
 VI. RESULTADO Y ANALISIS

Cantidad inicial de las raíces del Allium cepa después de 3 días. (06 / 05 / 19)

TIPO DE PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA

01 02 03 04 05 06 07
AGUA
Agua de 18 4 31 36 12 5 9
Control
Agua con 3 3 1 5 2 0 0
Hidrocarburo
Agua con 1 3 9 7 10 11 0
Metales
Agua con 0 7 15 14 13 22 20
Pesticida

Cantidad inicial de las raíces del Allium cepa después de 7 días. (10 / 05 / 19)
TIPO DE PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA PRUEBA
01 02 03 04 05 06 07
AGUA
Agua de 34 5 34 54 39 10 14
Control
Agua con 4 3 1 9 3 0 0
Hidrocarburo
Agua con 1 0 13 18 11 23 6
Metales
Agua con 1 5 14 11 14 28 25
Pesticida

Datos y promedio de las raíces del Allium cepa, después de 3 días. (06 / 05 / 19)
AGUA CONTROL
MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 0.8 1.3 1.1 1.1 1.3 0.19 0.2
2 1 1.7 1.1 1.3 1.4 0.2 0.3
3 1.1 3.4 1.2 1.6 2 0.2 0.3
4 1.2 1.4 1.73 2.3 0.3 0.45
5 1.4 1.4 1.88 2.45 0.35 0.5
6 1.4 1.45 1.99 2.5 0.5
7 2.4 1.5 2.15 2.5 0.6
8 2.5 1.5 2.25 2.6 0.7
9 2.5 1.5 2.29 0.8
10 2.55 1.7 2.35
 11 1.8 2.45
12 1.85 2.45
13 1.9 2.75
14 1.9 2.75
15 2.1 2.75
16 2.78
17 2.85
18 2.85
19 2.95
20 2.98
PROMEDIO 1.7 2.1 1.6 2.3 2.1 0.2 0.5

AGUA CON HIDROCARBURO

MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 0.1 0.13 0.2 0.03 0.15
2 0.1 0.13 0.05 0.2
3 0.17 0.2 0.08
4 0.1
5 0.12
PROMEDIO 0.1 0.2 0.2 0.1 0.2 0 0

AGUA CON METALES

MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 0.04 0.02 0.19 0.15 0.1 0.25
2 0.03 0.2 0.2 0.1 0.27
3 0.1 0.2 0.2 0.15 0.3
4 0.2 0.25 0.15 0.3
5 0.2 0.3 0.17 0.35
6 0.25 0.3 0.2 0.35
7 0.27 0.35 0.2 0.35
8 0.38 0.2 0.4
9 0.25 0.4
10 0.45
11 0.45
PROMEDIO 0.04 0.05 0.24 0.25 0.17 0.35 0

AGUA CON PESTICDA

MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
2 0.12 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
 3 0.15 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
4 0.2 0.15 0.1 0.1 0.1 0.15
5 0.23 0.15 0.1 0.13 0.15 0.2
6 0.25 0.15 0.15 0.15 0.15 0.2
7 0.3 0.15 0.15 0.15 0.19 0.2
8 0.15 0.2 0.15 0.2 0.25
9 0.17 0.2 0.15 0.2 0.25
10 0.2 0.2 0.18 0.2 0.25
11 0.2 0.25 0.25 0.24 0.25
12 0.2 0.25 0.3
13 0.39 0.3 0.35
14 0.3 0.4
15 0.3 0.5
16 0.33 0.6
17 0.48 0.65
18 0.5 0.8
19 0.51 0.8
PROMEDIO 0 0.2 0.2 0.2 0.1 0.2 0.3

Datos de las raíces del Allium cepa, después de 7 días. (10 / 05 / 19)
AGUA CONTROL
MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 1.6 6.01 2.33 3.67 2.18 3.05 1.61
2 1.7 7.15 2.48 3.68 3.18 3.3 2.4
3 2.13 2.5 3.8 3.68 3.9 2.42
4 2.18 2.75 4.23 4.89 3.04
5 2.3 3 4.45 5.29 3.15
6 2.37 3.12 5.15 5.42 3.93
7 2.55 3.35 5.49 5.79
8 2.68 4.5 5.57 6
9 2.75 4.6 5.7 6.47
10 2.89 4.72 5.89 6.62
11 3 4.83 6.2 6.7
12 3.05 5.45 6.44 7
13 3.11 5.9 6.45
14 3.28 6 6.48
15 3.32 6.1 6.49
16 3.88 6.4 6.49
17 4.18 6.5 6.78
18 4.95 6.87
 19 5.71 6.88
20 5.92 7
PROMEDIO 3.2 6.6 4.4 5.7 5.3 3.4 2.8

AGUA CON HIDROCARBURO

MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 0.11 0.03 0.2 0.08 0.1
2 0.11 0.11 0.1 0.1
3 0.11 0.1 0.11
4 0.12
5 0.2
PROMEDIO 0.1 0.1 0.2 0.1 0.1 0 0

AGUA CON METALES

MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 0.05 0.12 0.13 0.09 0.15 0.05
2 0.13 0.15 0.09 0.15 0.05
3 0.15 0.15 0.1 0.19 0.05
4 0.15 0.18 0.13 0.2 0.06
5 0.18 0.18 0.13 0.2 0.09
6 0.18 0.19 0.15 0.21 0.15
7 0.19 0.2 0.15 0.23
8 0.2 0.2 0.15 0.23
9 0.2 0.2 0.25
10 0.21 0.2 0.25
11 0.25 0.21 0.27
12 0.28 0.21 0.28
13 0.29 0.21 0.28
14 0.28 0.28
15 0.28 0.3
16 0.3 0.3
17 0.3
18 0.31
19 0.33
20 0.33
21 0.35
22 0.37
23 0.38
PROMEDIO 0.05 0 0.2 0.2 0.1 0.3 0.1
 AGUA CON PESTICIDA
MUESTRA 1 2 3 4 5 6 7
1 0.2 0.15 0.11 0.11 0.2 0.25 0.2
2 0.25 0.13 0.11 0.2 0.25 0.2
3 0.25 0.15 0.18 0.2 0.3 0.21
4 0.3 0.2 0.18 0.2 0.3 0.25
5 0.2 0.2 0.2 0.3 0.26
6 0.2 0.2 0.25 0.3 0.3
7 0.21 0.2 0.25 0.3 0.31
8 0.21 0.35 0.3 0.3 0.31
9 0.24 0.3 0.35 0.31
10 0.29 0.31 0.4 0.35
11 0.3 0.5 0.4 0.4
12 0.4 0.6 0.4 0.4
13 0.4 0.4
14 0.4 0.4
15 0.4 0.49
16 0.45 0.51
17 0.45 0.51
18 0.5 0.515
19 0.5 0.6
20 0.5 0.61
21 0.5 0.7
22 0.5 0.7
23 0.5 0.8
24 0.6
PROMEDIO 0.2 0.2 0.2 0.2 0.3 0.4 0.4

Tabla de resultados del crecimiento radicular del Allium cepa (Promedio) y porcentaje de
inhibición de la primera evaluación.
MUESTRA Longitud de la raíz en cm DS PROM %INHI
EDIO BICIÓ
Replica Replica Replica Replica Replica Replica Replica N
01 02 03 04 05 06 07
Control 1.7 2.1 1.6 2.3 2.1 0.2 0.5 0.8 1.5 0.0
Negativo
Agua con 0.04 0.05 0.24 0.25 0.17 0.35 0.00 0.1 0.2 89.6
metales
Agua con 0.1 0.2 0.2 0.1 0.2 0.0 0.0 0.1 0.1 93.1
hidrocarb
uros
Agua con 0.0 0.2 0.2 0.2 0.1 0.2 0.3 0.1 0.2 88.2
pesticida
Tabla de resultados del crecimiento radicular del Allium cepa (Promedio), porcentaje de
crecimiento y porcentaje de inhibición de la primera evaluación.
MUESTRA LONGITUD %CRECIMIENTO %INHIBICION
DE LA RAIZ
EN cm
(PROMEDIO)
Control Negativo 1.5 100.0 0.0
Agua con metales 0.2 10.4 89.6
Agua con 0.1 6.9 93.1
hidrocarburos
Agua con pesticida 0.2 11.8 88.2

%CRECIMIENTO DE LOS 3 DÍAS DE TOMA DE

DATOS

Agua con pesticida 11.8

TIPOS DE AGUA

Agua con hidrocarburos 6.9

Agua con metales 10.4

Control Negativo 100.0

0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0

% DE CRECIMIENTO

%INHIBICION DE LOS 3 DÍAS DE TOMA DE

DATOS
100.0 89.6 93.1
88.2
90.0
% DE INHIBICION

80.0
70.0
60.0
50.0
40.0
30.0
20.0
10.0 0.0
0.0
Control Agua con Agua con Agua con
Negativo metales hidrocarburos pesticida
TIPOS DE AGUA
 %CRECIMENTO VS %INHIBICION DE LOS 3 DÍAS
DE TOMA DE DATOS

%INHIBICION %CRECIMIENTO

Agua con pesticida 88.2

11.8
TIPOS DE AGUA

Agua con hidrocarburos 93.1

6.9
Agua con metales 89.6
10.4
Control Negativo 0.0
100.0

0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0

%CRECIMIENTO Y %INHIBICION

Tabla de resultados del crecimiento radicular del Allium cepa (Promedio) y porcentaje de
inhibición de la segunda evaluación.
MUESTRA Longitud de la raíz en cm DS PRO %INHI
MEDI BICIÓ
Replica Replica Replica Replica Replica Replica Replica O N
01 02 03 04 05 06 07
Control 3.2 6.6 4.4 5.7 5.3 3.4 2.8 1.4 4.5 0.0
Negativo
Agua con 0.1 0.0 0.2 0.2 0.1 0.3 0.1 0.1 0.1 97.1
metales
Agua con 0.1 0.1 0.2 0.1 0.1 0.0 0.0 0.1 0.1 98.1
hidrocarb
uros
Agua con 0.2 0.2 0.2 0.2 0.3 0.4 0.4 0.1 0.3 93.7
pesticida

Tabla de resultados del crecimiento radicular del Allium cepa (Promedio), porcentaje de
crecimiento y porcentaje de inhibición de la segunda evaluación.
MUESTRA LONGITUD %CRECIMIENTO %INHIBICION
DE LA RAIZ
EN cm
(PROMEDIO)
Control Negativo 4.5 100.0 0.0
Agua con metales 0.1 2.9 97.1
Agua con 0.1 1.9 98.1
hidrocarburos
Agua con pesticida 0.3 6.3 93.7
 %CRECIMIENTO DE LOS 7 DÍAS DE TOMA DE
DATOS
120.0
100.0
100.0
% DE CRECIMIENTO 80.0
60.0
40.0
20.0 6.3
2.9 1.9
0.0
Control Agua con Agua con Agua con
Negativo metales hidrocarburos pesticida
TIPOS DE AGUA

%INHIBICION DE LOS 7 DÍAS DE TOMA DE DATOS

Agua con pesticida 93.7

Agua con hidrocarburos 98.1

TIPOS DE AGUA

Agua con metales 97.1

Control Negativo 0.0

0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0

% DE INHIBICION

%CRECIMENTO VS %INHIBICION DE LOS 7 DÍAS

DE TOMA DE DATOS
%INHIBICION %CRECIMIENTO

Agua con pesticida 93.7

6.3
TIPOS DE AGUA

Agua con hidrocarburos 98.1

1.9
Agua con metales 97.1
2.9
Control Negativo 0.0
100.0

0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0

%CRECIMIENTO Y %INHIBICION
Tabla de resultados del crecimiento radicular del Allium cepa (Promedio), porcentaje de
crecimiento y porcentaje de inhibición de las dos evaluaciones.
MUESTRA LONGITUD %CRECIMIENTO %INHIBICION
DE LA RAIZ
EN cm
(PROMEDIO)
Control Negativo 3.0 100.0 0.0
Agua con metales 0.1 4.8 95.2
Agua con 0.1 3.2 96.8
hidrocarburos
Agua con pesticida 0.2 7.7 92.3

%CRECIMIENTO
120.0

100.0
100.0
% DE CRECIMIENTO

80.0

60.0

40.0

20.0
4.8 7.7
3.2
0.0
Control Negativo Agua con metales Agua con Agua con
hidrocarburos pesticida
TIPO DE AGUA
 %INHIBICION

Agua con pesticida 92.3

Agua con hidrocarburos 96.8

TIPO DE AGUA

Agua con metales 95.2

Control Negativo 0.0

0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0

% DE INHIBICIÓN

% CRECIMIENTO VS %INHIBICION
%INHIBICION %CRECIMIENTO

Agua con pesticida 92.3

7.7
96.8
TIPOS DE AGUA

Agua con hidrocarburos 3.2

Agua con metales 95.2

4.8

Control Negativo 0.0

100.0

0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0

% DE CRECIMIENTO Y % DE INHIBICION

Detalles del agua de rio, grafica de comparación del crecimiento radicular por replicas
entre los 3 días y 7 días.
AGUA CONTROL
REPLICA TERCER SEPTIMO
DIA DIA
1 1.7 3.2
2 2.1 6.6
3 1.6 4.4
4 2.3 5.7
5 2.1 5.3
6 0.2 3.4
7 0.5 2.8
 Crecimiento de las raices en el
agua control
AGUA CONTROL TERCER DIA AGUA CONTROL SEPTIMO DIA

7.0 6.6

CRECIMIENTO DE LA RAIZ
5.7
6.0 5.3
5.0 4.4
4.0 3.2 3.4
2.8
3.0 2.1 2.3 2.1
1.7 1.6
2.0
1.0 0.2 0.5
0.0
1 2 3 4 5 6 7
REPLICA

Detalles del agua con metales, grafica de comparación del crecimiento radicular por
replicas entre los 3 días y 7 días.
AGUA CON METALES
REPLICA TERCER SEPTIMO
DIA DIA
1 0.04 0.05
2 0.05 0.00
3 0.24 0.19
4 0.25 0.20
5 0.17 0.12
6 0.35 0.27
7 0.00 0.08
VII.
 Crecimiento de las raices en el agua
con metales
AGUA CON METALES TERCER DIA AGUA CON METALES SEPTIMO DIA

CRECIMIENTO DE LA RAIZ 0.40 0.35

0.30 0.25 0.27

0.24
0.19 0.20
0.20 0.17
0.12
0.10 0.08
0.05
0.04 0.05
0.00 0.00
0.00
1 2 3 4 5 6 7
REPLICA

Detalles del agua con hidrocarburos, grafica de comparación del crecimiento radicular por replicas
entre los 3 días y 7 días.
AGUA CON HIDROCARBURO
REPLICA TERCER SEPTIMO
DIA DIA
1 0.1 0.1
2 0.2 0.1
3 0.2 0.2
4 0.1 0.1
5 0.2 0.1
6 0.0 0.0
7 0.0 0.0

Crecimiento de las raices en el agua

con hidrocarburo
AGUA CON HIDROCARBURO TERCER DIA
AGUA CON HIDROCARBURO SEPTIMO DIA
0.3
0.20.2
CRECIMEINTO DE LA RAIZ

0.2 0.2
0.2
0.2 0.10.1 0.1
0.1
0.1 0.1 0.1
0.1
0.00.0 0.00.0
0.0
1 2 3 4 5 6 7
REPLICA
Detalles del agua con pesticidas, grafica de comparación del crecimiento radicular por
replicas entre los 3 días y 7 días.
AGUA CON PESTICIDA
REPLICA TERCER SEPTIMO
DIA DIA
1 0.0 0.2
2 0.2 0.2
3 0.2 0.2
4 0.2 0.2
5 0.1 0.3
6 0.2 0.4
7 0.3 0.4

Crecimiento de las raices en el agua

con pesticida
AGUA CON PESTICIDA TERCER DIA AGUA CON PESTICIDA SEPTIMO DIA

0.5 0.4
CRECIMIENTO DE LA RAIZ

0.4
0.4 0.3
0.3
0.3 0.2 0.2
0.2 0.2
0.2 0.2 0.2
0.2 0.2 0.1
0.1
0.0
0.0
1 2 3 4 5 6 7
REPLICA
 VIII. CONCLUSIONES

Se determinó la toxicidad en la aplicación de bioensayos, para lo cual se usó cuatro tipo de

muestras, la primera siendo la de hidrocarburos, dependiendo de la concentración de mezcla
que se realice la raíz de Alliun cepa puede desarrollarse o no, con lo que se hizo la raíz de
esta especie se pudrió, no tolero el grado de toxicidad; lo segundo es el agua con pesticidas,
se observó un crecimiento insignificativo ya que apenas pudo crecer y en pocas cantidades,
siendo la muestra bastante toxico; lo tercero fue el agua de metales, cabe indicar esta muestra
fue recogida un día antes de la práctica, desde la cancha relavera de Mesapata ubicado en
Catac provincia de Recuay, las raíces de Alliun cepa apenas pudieron desarrollarse y unos
cuantos, la cual nos indica que esta agua tiene un alto grado de concentración de metales
pesados; por último es la muestra del agua de rio, se tomó la muestra del agua de rio Santa a
aguas arriba de puente Parco que está ubicado en Catac, el desarrollo de las raíces fue bastante
buena muy grandes y en bastante cantidad, ello nos da un indicio de que el rio Santa en esta
altura de su cuenca es de buena calidad, la cual podría servir muy bien para el crecimiento
de las biodiversidades y también para el regadío en la área agrícola.

Para que Alliun cepa se desarrolle bien en las diferentes muestras, hicimos los pasos
concernientes como indica varias fuentes, también lo que inculco la docente del curso, ello
nos garantiza un buen realce de la práctica desarrollada.

En la muestra de hidrocarburo no hubo crecimiento, Alliun cepa se pudrió, no tolero el grado

de toxicidad, el mejor desarrollo pudimos observar en la muestra del agua de rio, la cual es
un buen indicio para calificar a esta agua como de buena calidad, la cual podría servir para
varios usos, como en regadíos, cultivos agrícolas, entre otras.
IX. RECOMENDACIÓN

o Se recomienda hacer la aplicación de bioensayos para determinar la toxicidad en otras

fuentes de agua, un caso interesante es el rio Negro ubicado por olleros, para así poder
ver su grado de toxicidad.
o Se debe de tener muy en cuenta los pasos a seguir para poder realizar bien la práctica
de laboratorio concerniente, entonces se recomienda leer bien los procedimientos y
tener muy en claro a las indicaciones del docente para reducir errores en los
resultados.
o Se recomienda hacer mezcla de concentraciones con otra dosis, un poco más
concentrado y uno menos concentrado a lo que se realizó en la presente práctica, con
la finalidad de obtener mejor el grado de toxicidad y la resistencia que pueda tolerar
la Allium ceba en cuanto a su crecimiento de raíces.
 X. BIBLIOGRAFIA

Albert, L. (2004). Toxicologia ambiental. Mexico: Universidad Autonoma de Ciudad de Juarez.

Baltanas, R. (2009). Empleo de bioindicadores en estudios de evaluacion de la calidad ambiental.

Camarillo-Ravelo, D. B.-A. (2015). EvaluaciÓn de la fitotoxicidad de jales mineros en cuatro

especies empleadas Como bioindicadoras de metales pesados. Revista Internacional de
Contaminacion Ambiental.

Castillo, G. (2000). Ecotoxicity assessment of metals and wastewater using multitrophic assays.
Obtenido de [Link]

[Link]. (2011). Evaluation of the phytotoxicity of polycontaminated industrial effluents using the
lettuce plant (Lactuca sativa) as a bioindicator. Obtenido de
[Link]

[Link]ño, J. L. (2005). Efecto Ecotoxicológico de tres Metales Pesados Sobre el Crecimiento

Radicular de Cuatro Plantas Vasculares. Agricultura Técnica. Obtenido de
[Link] 28072005000200009

[Link], L. &. (2004). Bioindicadores como herramienta de evaluacion de la calidad ambiental en

la parte alta de la microcuenca Las Delicias. Umbral Cientifico.

M. Diaz, A. P. (2004). Ensayo de toxicidad aguda con bulbos de cebolla Allium cepa L. Mediante la
evaluacion de la inhibicion del crecimiento promedio de raices. Instituto Nacional de
Ecologia y Cambio Climatico-Mexico.

M.A.C, M. (2003). La ecotoxicologia, una ciencia de hoy.

R. Geremias, B. T. (2012). Efficacy assessment of acid mine drainage treatment with coal mining
waste using Allium cepa L. as a bioindicator. Obtenido de
[Link]

Radić, S. S.-K. (2010). The evaluation of surface and wastewater genotoxicity using the Allium cepa
test. Science of the Total Environment. Obtenido de
[Link]
Sanchez-Meza. (2007). Toxicity assessment of a complex industrial wastewater using aquatic and
terrestrial bioassays Daphnia pulex and Lactuca sativa. Journal of Environmental Science
and Health. Obtenido de [Link]

Sobrero, M. (2004). Ensayo de toxicidad aguda con semillas de lechuga Lactuca sativa L. Obtenido
de [Link]

Y., G. P. (2012). Aplicación de un bioensayo ecotoxicológico en la evaluación de una mezcla

compleja ambiental. Higiene y Sanidad Ambienta, .