“AÑO DEL DIÁLOGO Y LA RECONCILIACIÓN NACIONAL”
UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
DETERMINACION DE ANTOCIANINAS
FARMACOGNOSIA
DOCENTE: Q.F. SONIA VARGAS MENESES
ALUMNOS:
CICLO: VI
HUANCAYO - PERÚ
2019
OBJETIVOS
Recolectar la doga vegetal y seleccionar de manera minuciosa.
Realizar la extracción de estos compuestos de los productos naturales.
Determinar la presencia de antocianinas en diversas muestras vegetales
INTRODUCCION
Los metabolitos secundario de las plantas responsables de la coloración roja, rosa, azul y
violeta de flores, frutos y hojas; se consideran colorantes atóxicos estables naturales en
forma de sales y se encuentran presentes en las vacuolas de las células epidérmicas de
tejidos jóvenes especialmente en órganos aéreos, hojas y flores
El termino antocianina se aplica para heterosidos y el de la antocianina para el aglicon y se
puede extraer en el medio acido.
MARCO TEORICO
Las antocianinas representan los principales pigmentos solubles en agua visibles al ojo
humano. Pertenecen al grupo de los flavonoides y su estructura básica es un núcleo de
flavón, el cual consta de dos anillos aromáticos unidos por una unidad de tres carbonos.
El nivel de hidroxilación y metilación en el anillo “B” de la molécula determina el tipo de
antocianidina, que es la aglicona de la antocianina. Aunque se han descrito doce diferentes
antocianidinas, las más comunes en plantas son: pelargonidina, cianidina, delfinidina,
peonidina, petunidina y malvidina. Las tres primeras son más frecuentes en frutos, en tanto
que el resto lo son en flores. En las plantas las antocianidinas no se acumulan como tal, sino
en su forma glucosilada; esto es, unidas a algún azúcar y en cuyo caso se denominan
antocianinas. El azúcar presente en la molécula les confiere una gran solubilidad y
estabilidad, generalmente se une a la antocianidina en la posición 3 del grupo fenólico, pero
puede también hacerlo en las posiciones 5 y 7. Con base en el número de azúcares
presentes en su estructura, las antocianinas se clasifican en: Monoglucósidos (un azúcar),
diglucósidos (dos azúcares) y triglucósidos (tres azúcares). Los tipos de azúcares presentes
pueden ser: monosacáridos, disacáridos o trisacáridos.
Los monosacáridos más comunes son: pentosas como arabinosa y xilosa, o bien hexosas,
de las cuales la Dglucosa es la más frecuente, aunque también pueden estar presentes
galactosa o ramnosa.
Los disacáridos más frecuentes son gentobiosa, soforosa, sambubiosa y rutinosa.
Los trisacáridos reportados pueden ser lineales como la gentotriosa, o bien ramificados
como xilosilrutinosa o glucosilrutinosa. En algunos casos, los azúcares están acilados con
grupos derivados del ácido acético o alguno de los cuatro ácidos cinámicos (p-cumárico,
caféico, ferúlico o sináptico). Se ha observado que la presencia de estos grupos acilo en la
molécula de antocianidina le confiere estabilidad ante condiciones extremas de pH y
temperatura. Cuando en la molécula de antocianina se encuentran únicamente azúcares,
se denominan no aciladas; si además de los azúcares están presentes uno o varios radicales
acilo, se catalogan como aciladas.
Fuentes
Las antocianinas están presentes en diferentes órganos de las plantas, tales como frutas,
flores, tallos, hojas y raíces. Estos pigmentos son normalmente encontrados disueltos
uniformemente en la solución vacuolar de células epidérmicas. Sin embargo, en ciertas
especies, las antocianinas son localizadas en regiones discretas de la vacuola celular,
llamadas antocianoplastos. La principal fuente de antocianinas son frutas rojas,
principalmente bayas y uvas rojas, cereales, principalmente maíz morado, vegetales y vino
rojo entre las bebidas.
Extracción
La extracción de antocianinas es comúnmente llevada a cabo con metanol o etanol
conteniendo una pequeña cantidad de ácido (15%, HCl 1M) con el objetivo de obtener la
forma del catión flavilio, el cual es estable en un medio altamente ácido. No hay diferencia
significativa en lecturas de absorbancia o eficiencia de extracción entre el etanol y metanol.
Es preferible usar etanol ya que es menos tóxico, particularmente en usos alimenticios y
ensayos clínicos. Adicionalmente, si los extractos contienen materiales lipídicos, la adición
de un solvente orgánico tal como hexano al extracto puede eliminar algunas sustancias que
contenga dichos materiales.
El ácido puede causar hidrólisis parcial de las fracciones acil en antocianinas aciladas,
especialmente en aquellas con ácidos dicarboxílicos tales como ácido malónico, por lo que
el uso de ácidos débiles es deseable, tal como ácido tartárico o cítrico para mantener los
sustituyentes dicarboxílicos intactos.
El pH también ha mostrado que tiene una influencia significante sobre el color de los
extractos de antocianinas, las lecturas de absorbancia y la recuperación del extracto. A
valores de pH más bajos (pH < 2), los extractos de trigo azul y morados exhibieron un cambio
de color rojo a rojo oscuro después de la extracción, mientras a pH más alto (pH > 4), los
extractos presentaron un color amarillo (AbdelAal y Hucl, 1999).
Separación y cuantificación
La técnica empleada más comúnmente hoy en día es la cromatografía líquida de alta
resolución en fase reversa (RP-HPLC) puesto que esta permite la separación simultánea, la
identificación y cuantificación de los compuestos de antocianinas sin requerir pureza
excesiva de los extractos. Las columnas (diámetro interno 4.6 mm y largo 100-300 mm) son
usualmente mantenidas a temperatura ambiente, y los sistemas de elusión son binarios,
usando solventes acidificados acuosos tales como ácido acético, ácido perclórico o ácido
fórmico en un solvente orgánico tal como metanol o acetonitrilo. Las antocianinas
separadas son detectadas y cuantificadas a 525 nm y la identificación de antocianinas está
basada en los tiempos de retención correspondientes y espectros ultravioletavisibles (UV-
Vis) comparado con la de los estándares auténticos puros tales como delfinidina-3-
glucósido, delfinidina-3-rutinósido, cianidina-3-glucósido, cianidina3galactósido, cianidina-
3-rutinósido, peonidina-3- glucósido,petunidina-3-glucósido,pelargonidina -3-glucósido y
cloruro de cianidina que están comercialmente disponibles.
Detección e identificación
Las propiedades espectrales son a menudo usadas para la caracterización de antocianinas,
especialmente para identificar el tipo de antocianina. El análisis espectrométrico UV es la
técnica usada comúnmente para identificar y cuantificar antocianinas. Como se describió
anteriormente, el espectro de absorción de las antocianinas depende del pH. La absorción
máxima a 520-540 nm en la región visible es la longitud de onda más común usada en la
medición espectrofotométrica de antocianinas. La espectrometría de masas (MS) es una
técnica usada comúnmente que permite la identificación de antocianinas determinando la
masa de los iones moleculares en la muestra y los fragmentos de la separación de estos
compuestos a través de la aplicación de energías ionizantes más altas.
Propiedades funcionales
El interés en los pigmentos antociánicos se ha intensificado recientemente debido a sus propiedades
farmacológicas y terapéuticas. Durante el paso del tracto digestivo al torrente sanguíneo de los
mamíferos, las antocianinas permanecen intactas y ejercen efectos terapéuticos conocidos que
incluyen la reducción de la enfermedad coronaria, efectos anticancerígenos, antitumorales,
antiinflamatorios y antidiabéticos; además del mejoramiento de la agudeza visual y del
comportamiento cognitivo.
MATERIALES
MATERIA PRIMA
ANTOCIANINAS
PROCEDIMIENTO
M.P Hollejo de uva negra
Agregar 50 ml de HCL y hacer hervir (concentrado)
En un tubo de ensayo 1ml del concentrado del hollejo de uva negra
Al tubo agregar 2 ml de etanol + 2ml Hcl
Poner en baño maria por 30’
Agregar 1 ml de alcohol amílico
Separar Aglicona ( antocianidina)
RECONOCIMIENTO DE AZUCARES
En la fase acuosa agregar 5 gotas de cloroformo y agregar Fehling A y Fehling B
Llevar a Baño Maria
Materia Prima: Maiz Morado
En vaso agregar 10 gramos de maíz morado y agregar 50 ml de H2O
Llevar a desecación por 30’ (extracto concentrado)
En 2 tubos de ensayo colocar 2 Ml del extracto concentrado agregar 5 gotas de
HCL y 5 gotas de NaOH
RESULTADOS
HOLLEJO DE UVA NEGRA
RECONOCIMIENTO DE AZUCARES
CONCLUSIONES
Los extractos presentaron buena capacidad protectora contra radicales
libres; en la práctica realizada hubo la presencia del precipitado rojo ladrillo
por tanto se los considera como antocianina.
A través del reactivo de NaOH principalmente podemos identificar azúcares
reductores y también poder diferenciar si esta en medio alcalino.
Con el reactivo de HCL principalmente podemos identificar azúcares
reductores y también poder diferenciar si esta en medio acido.
CUESTIONARIO
1.- QUE SUCEDE CON LA PRESENCIA DE ANTOCIANINAS EN MEDIO ACIDO Y EN MEDIO
ALCALINO?
El ácido puede causar hidrólisis parcial de las fracciones acil en antocianinas aciladas, especialmente
en aquellas con ácidos dicarboxílicos tales como ácido malónico, por lo que el uso de ácidos débiles
es deseable, tal como ácido tartárico o cítrico para mantener los sustituyentes dicarboxílicos intactos
El pH también ha mostrado que tiene una influencia significante sobre el color de los extractos de
antocianinas, las lecturas de absorbancia y la recuperación del extracto.
A valores de pH más bajos (pH < 2), los extractos de trigo azul y morados exhibieron un cambio de
color rojo a rojo oscuro Aguilera Ortíz et al.: Propiedades funcionales de las antocianinas 18 después
de la extracción, mientras a pH más alto (pH > 4), los extractos presentaron un color amarillo
(AbdelAal y Hucl, 1999).
2.- ¿CUAL ES EL FUNDAMENTO POR EL QUE LAS ANTOCIANINAS TIENEN FLUORESCENCIA A LA
LUZ UV?
Las antocianinas son compuestos fenólicos que se encuentran principalmente en frutos, flores y
hojas de las plantas, y son las responsables de conferir los colores rojo, azul y violeta. Se sintetizan
a partir de la conversión de los precursores fenilalanina y acetato, vía el metabolismo del fenil
propanoide, y se acumulan en las vacuolas de las células hipodermales. Las enzimas de la
biosíntesis son reguladas a nivel de transcripción, y en uvas su punto crítico está a la altura del gen
que codifica para la enzima UDP glucosa: flavonoide-3-glucosil transferasa (UFGT), lo que implica
una regulación más tardía que en otras especies. Se sintetizan durante el cambio de color de la baya
y son los pigmentos más importantes en las uvas coloreadas. Su estructura corresponde a
heterociclos formados por la combinación de una aglicona y un azúcar. Tienen una alta capacidad
antioxidante, y han sido difíciles de estudiar debido a su inestabilidad, a pesar que la acetilación
contribuye a su estabilización y son estas las que se almacenan más eficientemente en vacuolas.
Su función se asocia con la coloración de la fruta y con la protección ante el estrés lumínico, como
parte del sistema antioxidante. De ahí lo importante de su estudio. La concentración y perfil de
antocianinas varían entre especies, cultivares, estados de madurez, condiciones estacionales, áreas
de producción, prácticas culturales y niveles de rendimiento. La luminosidad y la temperatura son las
principales variables ambientales que regulan síntesis de estos compuestos; la primera la estimula
y las altas temperaturas parecen inhibirla.
3.- MENCIONE ALGUNAS PLANTAS DE LA REGION QUE CONTENGAN ANTOCIANIDINAS YA
PROBADAS
La principal fuente de antocianinas son frutas rojas, principalmente bayas y uvas rojas, cereales,
principalmente maíz morado, vegetales y vino rojo entre las bebidas
BIBLIOGRAFIA
Alba, L. y González, A. Uso de la luz ultravioleta para el estudio del estado de
conservación de la pintura de caballete. Actas del II Congreso del GEIIC.
Investigación en Conservación y Restauración. 2005. 12 p.
Atkins P. y Jones, L. Principios de química. Los caminos del descubrimiento.
Montevideo, Uruguay: Editorial Médica Panamericana, 2005.
Antelo, T.; Bueso, M.; Galdón A. y Veja, C. La ciencia y el arte. Ciencias
experimentales y conservación del Patrimonio Histórico. Madrid, España: Ministerio
de Cultura, 2008. pp. 25-38.
