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Análisis de Clostridium perfringens en agua

Este documento proporciona instrucciones para el aislamiento y recuento de Clostridium perfringens de acuerdo con la norma ISO 14189. El procedimiento incluye pretratamiento térmico de la muestra, filtración en agar selectivo TSC, incubación anaeróbica a 44°C durante 21-24 horas, recuento de colonias presuntivas negras/grisáceas, subcultivo en agar sangre e identificación de colonias mediante prueba de fosfatasa ácida.

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Análisis de Clostridium perfringens en agua

Este documento proporciona instrucciones para el aislamiento y recuento de Clostridium perfringens de acuerdo con la norma ISO 14189. El procedimiento incluye pretratamiento térmico de la muestra, filtración en agar selectivo TSC, incubación anaeróbica a 44°C durante 21-24 horas, recuento de colonias presuntivas negras/grisáceas, subcultivo en agar sangre e identificación de colonias mediante prueba de fosfatasa ácida.

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Clostridium perfringens.

UNE-EN ISO 14189:2017


Procedimiento

Pretratamiento para seleccionar esporas

Calentar un volumen de mayor que la muestra a analizar y calentar a 60ºC ± 2ºC durante 15 ± 1 min

Filtración por membrana

Filtrar 100 ml de agua en TSC Agar. Realizar diluciones si fuera necesario (ver ISO 8199)
Inscrita el 31 octubre de 2012, en el Registro Mercantil de Valladolid, tomo 1429, folio 218, inscripción 1ª, hoja VA-25213.

CM0587B TSC Agar base (ISO) (500 g) +


SR0088E TSC Selective Supplement (ISO) (10 viales)
PO5315A Tryptose Sulfite Cycloserine Agar (TSC Agar ISO) (20 placas)
BO0634M Perfringens Agar Base (TS Agar sin cicloserina) (10 x 100 ml)
De manera alternativa se puede añadir una capa de 5 a 10 ml de TSC sin antibióticos fundido y mantenido a 45ºC ± 1ºC.

Incubar anaeróbicamente a 44ºC ± 1ºC durante 21 ± 3 h


AN0025A AnaeroGen 2,5 l (10 sobres)
AG0025A AnaeroJar 2,5 l (Unidad)

Recuento

Tras la incubación, enumerar los C. perfringens presuntivos, contando aquellas


colonias que muestren un color de negro o gris a marrón amarillento.

Confirmación presuntivos

Si 1-10 colonias negro / gris a marrón Si >10 colonias negro / gris a marrón
amarillento, subcultivar todas las amarillento, subcultivar al menos 10
colonias en agar sangre colonias en agar sangre
PB5039A Agar sangre (20 placas) PB5039A Agar sangre (20 placas)

Incubar anaeróbicamente a 36ºC ± 2ºC durante 21 ± 3 h

Seleccionar colonias crecidas anaeróbicamente y realizar la prueba


de fosfatasa ácida (TN1519 70 test) sobre papel de filtro.
Se considera positivo un cambio de color a violáceo (rojo oscuro a
marrón, según reactivo) en 3 – 4 minutos

Recuento de colonias totales y confirmadas (C.


perfringens presuntivos y C. perfringens confirmados)

SISTEMAS AVANZADOS DE ANALISIS S.L.


Cardenal Torquemada 24. 47010 VALLADOLID.
Tno / Fax: 983 251143 Móvil: 637 596017
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22112018

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