ESPECTROFOTOMETRÍA
Flores Chinchayhuara J.J
Escuela Profesional de Ingeniería Agroindustrial, EPIA, Universidad Nacional del Santa, Nuevo Chimbote, Perú
I. INTRODUCCIÓN debe mantener en refrigeración. Para la
En la siguiente practica se realizó una de las de preparación del estándar de trabajo se tomó 4 ml
las técnicas experimentales más utilizadas para la de la solución madre y se llevó a una fiola de 10
detección específica de moléculas. Se caracteriza 0ml y se aforo con una solución de ácido oxálico
por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a al 0.4%.
moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, Determinación de la longitud de onda de
biomoléculas, etc) y estado de agregación máxima duración
(sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico- Primero se tomaron 2 tubos de prueba a los
químicos de la espectrofotometría son cuales se les enumeró del 2 y 4, la absorbancia
relativamente sencillos. fue ajustada a 0 utilizando el filtro y
Permite determinar la concentración de un seleccionando. Al tuvo 2 se le añadió 9 ml. de
compuesto en solución. Se basa en que las colorante y después se observó las absorbancias.
moléculas absorben las radiaciones Al tubo 4 se le añadió también 9 ml. de colorante
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de y después se observaron las absorbancias.
luz absorbida depende de forma lineal de la
concentración. Determinación del coeficiente de extinción
El objetivo de la siguiente practica es Determinar Primero se preparó una solución de ácido
la longitud de onda de máxima absorción, los ascórbico al 0.005M para lo cual se usó la fórmula
niveles de concentración adecuados para el C1V1=C2V2, mediante esta fórmula calculamos
análisis cuantitativo por espectrofotometría y el la cantidad de volumen que debía sacar de la
solución madre de ácido ascórbico para poder
coeficiente de extinción molar.
preparar esta nueva solución al 0.005M. La
cantidad que nosotros empleamos fue para esta
II. MATERIALES Y MÉTODOS nueva solución fue 8,806 ml la colocamos en una
Para esta práctica los materiales que se utilizaron, fiola de 100 ml. y aforamos con ácido oxálico.
fueron: vasos de precipitado, pipetas, ácido Pasado esto, se realizó la lectura de la absorbancia
oxálico, ácido ascórbico, Espectrofotómetro UV- a la longitud de onda de máxima absorbancia
Visible, fiolas, papel filtro, papel tissue, 2,6 obtenida en el procedimiento inicial. Ya con los
diclorofenolindofenol, celdas de cuarzo. datos obtenidos de absorbancia, espesor de las
cubetas de prueba, concentración se calculó el
Preparación de reactivos coeficiente de extinción molar.
Para preparar una solución de ácido oxálico al III. RESULTADOS
0.4% lo que hicimos fue pesar 4 gr de ácido
oxálico, lo llevamos a una fiola de 1L y aforamos En la tabla 1, tenemos nuestros datos los datos de
con agua destilada. Debemos de tener en cuenta la absorbancia y transmitancia. En la gráfica 1,
que para preparar una solución madre se debe observamos las variaciones de la absorbancia con
pesar 100mg de ácido ascórbico y se lleva a una un rango de 200 a 720 nm. Rápidamente se pudo
fiola de 100ml y se afora con una solución de ácido dar cuenta que la mayor longitud de onda se
oxálico al 0.4%. Para la preparación del colorante encuentra en una longitud de 354nm y la mínima
se tiene que pesar 12 mg de 2,6 fue de 280nm.
diclorofenolindofenol llevar a una fiola y aforar
con 1000ml de agua destilada, un punto principal,
es que el envase que contendrá el colorante debe
estar forrado, en este caso de aluminio para poder
evitar el deterioro de este, otro punto sería que se
Tabla n°1: Absorbancia, transmitancia de la
solución de ácido oxálico con colorante
a diferentes longitudes de onda. Absorbancia vs Longitud de onda
5
4
L.O (nm) Absorbancia T% 3
Absorbancia
200 0 100 2
280 -1.016 1037.5
1
354 2.3113 0.49
0
500 0.1249 75.01
600 0.2258 59.46 -1
200240280320360400440480520560600640680720
720 0.0423 90.72
Longitud de onda
En la tabla 2, tenemos los datos de la absorbancia,
transmitancia de la solución estándar de trabajo
Absorbancia vs Longitud de onda (ET), con un agregado de 2-6
3
2.5
diclorofenolindofenol al 0.0012% con diferentes
2 longitudes de onda.
Absorbancia
1.5 Tabla n°2: Absorbancia, transmitancia de la
1 solución de estándar de trabajo con
0.5 colorante a diferentes longitudes de
0 onda.
-0.5
-1
-1.5
L.O (nm) Abs. T%
200 240 280 320 360 400 440 480 520 560 600 640 680 720 760 200 0 100
Longitud de onda (nm) 354 4.0187 0.01
400 0.2249 59.58
Fig. 1 Variación de la absorbancia de la 500 0.0934 80.64
solución ácido oxálico al 0.4% y 600 0.1569 69.67
colorante con el aumento de la longitud 720 0.0418 90.83
de onda.
(Vidotti, 2015), nos indica que, el espectro de
absorción del colorante asignado muestra una
creciente al comenzar porque la concentración es
Fig. 2 Variación de la absorbancia de la solución de
muy parecida a la del blanco, entonces comienza estándar de trabajo y colorante con el aumento de
a separar poco a poco del rango inicial y alcanza la longitud de onda.
su punto máximo de absorbancia para así entonces,
permitir asegurar que la concentración es la más En la tabla 3 se utilizaron para la determinación
importante dentro de la solución, puesto que si de la absortividad molar, para lo cual utilizamos
tiene muy poca va ser una absorbancia baja, la ley de Lambert- Beer en donde ya obtenido la
porque se absorben aquellas frecuencias que son absorbancia, concentración, y el espesor de la
capaces de producir excitación electrónica, pero cubeta de las muestras; como resultado se tuvo
luego desciende debido a que ya no existe un una absortividad molar de 76.02.
equilibrio en la solución que le permita al
colorante absorber intensidad incidente
optimizando la transmitancia mucho más que la
absorbancia.
Tabla n°3: Absorbancia de una solución de ácido
ascórbico al 0.005M V. REFERENCIAS
ascórbico al 0.005M Referencias
Vidotti, Eliane Cristina. 2015. "Estrategias simples
L.O (nm) C(M) d (cm) Absorbancia para la determinación simultanea decolorantes en
354 0.005 1 0.3801 alimentos". s.l. : Departamento de Química,
Universidade Estadual de Maringá, 2015.
Ley de Lambert – Beer —. "UMA ESTRATÉGIA SIMPLES PARA A
DETERMINAÇÃO".
ε: Absortividad molar o coeficiente de extinción
A: Absorbancia
d: Espesor de la cubeta (ruta de las muestras)
C: Concentración molar
ε = A/d*C
ε= 76.02
IV. CONCLUSIONES
La absorbancia es la capacidad que tiene algunos
compuestos para absorber la radiación
electromagnética, pudimos observar cómo,
dependiendo de la concentración y la longitud a
la cual se le aplique un rayo, puede alcanzar un
punto máximo de absorción.
Según esto la longitud y la absorbancia son
proporcionales hasta alcanzar el punto máximo y
de allí empieza a descender.
Según la concentración varia la absorbanncia del
compuesto.
