INMUNOAGLUTINACIÓN
Yenny Corpas1 • Manuel Alvarez1
1 Universidad de Sucre, Facultad de Educación y Ciencias, Programa de Biología, Línea de
profundización en Biotecnología, Inmunología, Sincelejo Colombia.
PROCEDIMIENTO
INMUNOAGLUTINACIÓN
Se extraen 5ml de sangre de Se centrifuga a 2500 RPM
tipo A y B de Alumnos de la por 10 min y se retira el De una suspensión de
plasma con pipeta eritrocitos A y B al 2%.
asignatura
Se prepararon por duplicado dos
series de diluciones dobles del
suero problema.
A la placa micro tituladora se
añaden 50 µl de suero fisiológico
(SF) a partir del segundo pozo en
Observar los resultados, las
todos los pozos de 4 hileras.
células aglutinadas forman
una serie de alfombra que
cubre el fondo del pozo.
Mezclar los inmureactantes dándole golpes
laterales a la placa o rotándola varias veces
cubrirla y dejarla incubando durante 1 hora.
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RESULTADOS
Para la prueba de laboratorio de inmunología, técnica de inmunoaglutinación se tiene como
practica para el fomento del aprendizaje y a su vez el manejo de placas micro tituladoras con el fin
de analizar la aglutinación el cual consiste en agregado de células (en nuestro caso sangre con su
respectivo tipo diferente) o partículas debido a una formación entrelazada.
En base a lo descrito en el apartado anterior en una aglutinación, los anticuerpos pueden estar
dirigidos contra componentes propios de las partículas, como eritrocitos, bacterias, otras células,
etc. El fundamento de la aglutinación es una reacción inmunoquímica que produce la agregación
de partículas o células recubiertas de antígeno o anticuerpo, podemos observar cómo se da este
fundamento en el resultado a la práctica del puesto número 3.
50 µl solución salina
Figura 1. Distribución de la
slp
muestra problema y muestras de
sangre en la placa microtituladora.
50 µl (A)
Filas A y B contienen muestra de
sangre tipo anti-A, 50 µl en cada
uno de los pozos. Filas D y C
50 µl (B)
contienen muestra de sangre tipo
anti-B, 50 l en cada uno de los
pozos.
Slp: solución problema 100 µl
contenida en la columna 1, la cual
es diluida en 1/50 hasta las
columnas número 12.
Figura 2. Resultado de los distintos pozos Especificidad de las inmunoglobulinas presentes
en sangre. Observación del antígeno en unión a la aglutinina.
sangre tipo anti-A, 50 µl sangre tipo anti-A, 50 µl sangre tipo anti-B, 50 µl sangre tipo anti-B, 50 µl
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Tabla 1. Ensayo de hemaglutinación a dilución de 1:50.
Prueba Reacción de aglutinación
sangre tipo anti-A, 50 µl Negativa (-)
sangre tipo anti-A, 50 µl repetición Negativa (-)
sangre tipo anti-B, 50 µl Negativa (-)
sangre tipo anti-B, 50 µl repetición Negativa (-)
Para la reacción de aglutinación se tiene en cuenta que positivo poca aglutinación (+),
positivo mucha aglutinación (++) y negativo (-) cero aglutinacion.
Tabla 2. Reacción de aglutinación del reactivo.
Dilución Porcentaje Grado de aglutinación
1/50 2% Negativa (-)
1/100 1% Negativa (-)
1/200 0.5% Negativa (-)
1/400 0.25% Negativa (-)
1/800 0.125% Negativa (-)
1/1600 0.0625% Negativa (-)
1/3200 0.03125% Negativa (-)
1/6400 0.015625% Negativa (-)
1/12800 0.78125% Negativa (-)
1/25600 -3
3.90625 X10 % Negativa (-)
1/51200 -5
1.953125 X10 % Negativa (-)
1/10240 9.765625 X10-5 % Negativa (-)
No se observó aglutinación en ninguna de las diluciones, a partir de una concentración de 2%
con un volumen de 50 μl, lo que significa que el suero problema viene de un grupo sanguíneo AB el cual
contiene Anti-A y Anti-B sin aglutininas.
ANÁLISIS DE RESULTADOS
En la práctica se analizó una muestra problema de la cual se buscaba la automatización de todo el proceso
descrito, adaptándose así a las disponibilidades de análisis de Sangre con distintos tipos. Es evidente que la
relación costo-beneficio, con aplicación de tecnología de alto costo, se justifica para el procesamiento de
grandes volúmenes. Sin embargo, la adopción de un sistema modular puede ser rentabilizado para diferentes
situaciones intermedias, nuestro caso el análisis es de una pequeña muestra.
Las técnicas en microplaca empezaron a realizarse de forma exclusivamente manual, (ahorro de tiempo de
técnico, rapidez, ahorro de reactivo y poco utillaje preciso). Dependiendo del volumen de trabajo y de las
posibilidades de los laboratorios, los procesos pueden ir automatizándose de forma progresiva. Para todas
las técnicas las muestras problema y reactivos pueden ser dispensados por medio de pipeteadores-
muestreadores automáticos, programando mediante la localización que queramos dar a cada muestra y
reactivo en la microplaca. De forma igualmente automática se preparan las suspensiones de hematíes. Los
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pipeteadores automáticos son versátiles y programables para realizar distintas funciones tales como diluir,
distribuir, dispensar reactivos, etc.1
Para la figura 1. Muy frecuentes en estudios biológicos, se intenta analizar la variación de algún parámetro
que depende de la concentración de un soluto y se necesita preparar soluciones con distintas
concentraciones del mismo. En este caso es muy conveniente hacer un banco de diluciones seriadas que no
son más que un tipo de diluciones sucesivas manteniendo constante el factor de dilución en cada paso.
En la figura 2. Podemos observar como no se forma aglutinación en ninguna de las diluciones, a partir de
una concentración de 2% con un volumen de 50 μl, lo que significa que el suero problema viene de un
grupo sanguíneo AB el cual contiene Anti-A y Anti-B sin aglutininas.
La determinación de grupos sanguíneos del sistema ABO se efectúa enfrentando los glóbulos rojos del
paciente con anticuerpos monoclonales Anti-A, Anti-B o Anti-AB.2 La aglutinación o no de los hematíes
ensayados frente a cada uno de los reactivos indica la presencia o ausencia de los correspondientes
antígenos.
Reacción negativa: no se observa aglutinación a los 2 minutos, indicando ausencia del antígeno
correspondiente, se puede observar en la figura 2 (sangre tipo anti-A, 50 µl y sangre tipo anti-B, 50 µl). La
reacción de aglutinación consiste en el agrupamiento de una suspensión de partículas debida a la reacción
producida entre un antígeno presente en las partículas (aglutinógeno) y un anticuerpo específico de él
(aglutinina), formando un complejo antígeno-anticuerpo con un aglutinógeno y una aglutinina, lo que da
lugar a la formación del complejo aglutinógeno-aglutinina, visto de manera macroscópica.3
CONCLUSIÓN
El volumen necesario se asume que es el mismo para todas las concentraciones y depende de cada
experimento. Es fácil ver que el volumen final que se consigue de cada concentración es exactamente
igual al volumen fijo de solvente con que se cargan.
Para la práctica se puede observar como el antígeno se encuentra unido o formando parte de células,
bacterias o partículas, la reacción Ag-Ac se puede detectar y cuantificar por el aglutinado para el caso de
nuestro grupo de trabajo tal reacción no se pudo identificar debido a que se presentaba que el suero
problema viene de un grupo sanguíneo AB el cual contiene Anti-A y Anti-B sin aglutininas.
Los resultados fueron correctos a lo ya esperado, ya que individualmente los donadores de sangre ya
conocíamos nuestros respectivos grupos sanguíneos. El sistema de identificación de grupos sanguíneos
ABO, resulta muy sencillo y eficaz.
BIBLIOGRAFÍA
1. http://www.educadist.buap.mx/libros/Microplacas/Portada.htm
2. Widmann F.K. ed Technical Manual 10th Ed Washington DC, American Association of
Blood Banks 1990, Chapter 11.
3. José Botella Llusiá y José A.Clavero Núñes. 1993. Trarado deginecología. Fisiología,
obstetricia,perinatología, ginecología yreproducción. 14ª edición. Ed. Díazde Santos.
