IDENTIFICACIÓN Y PODER PATÓGENO DE

MICRORGANISMOS DEL GÉNERO

“CORYNEBACTERIUM” AISLADOS DE
MUESTRAS CLÍNICAS.

MEMORIA PARA OPTAR AL GRADO DE DOCTOR

PRESENTADA POR

María Isabel Fernández Natal

Bajo la dirección del doctor

Francisco Soriano García

 Madrid, 2010

ISBN: 978-84-693-4788-1 ​© María Isabel Fernández Natal , 2009

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

FACULTAD DE MEDICINA
Departamento de Microbiología I

IDENTIFICACIÓN Y PODER PATÓGENO

DE MICROORGANISMOS

DEL GÉNERO Corynebacterium

AISLADOS DE MUESTRAS CLÍNICAS

 Memoria presentada por María Isabel Fernández Natal para optar al

Grado de Doctor en la Facultad de Medicina

Madrid, 2009
UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

FACULTAD DE MEDICINA

Departamento de Microbiología I

Dr. Francisco Soriano García, Jefe de la Unidad de Investigación en Microbiología

Médica y Quimioterapia Antimicrobiana de la Fundación Jiménez Díaz –

Capio.

CERTIFICA:

Que la presente memoria titulada “Identificación y poder patógeno de

microorganismos del género Corynebacterium aislados de muestras clínicas”, ha

sido realizada bajo mi dirección por María Isabel Fernández Natal en la Unidad de

Investigación Microbiología Médica y Quimioterapia Antimicrobiana de la

Fundación

Jiménez Díaz – Capio. Estimando que se encuentra finalizada y en condiciones de

optar
al grado de Doctor por la Universidad Complutense de Madrid, se solicita sea
admitida

a trámite para su lectura y defensa

pública.

Madrid, a 22 de junio de 2009

Francisco Soriano García

RESUMEN

En el estudio bacteriológico de muestras clínicas seleccionadas se aislaron bacterias

corineformes en el 3,7% de las mismas (431 de un total de 47.360 muestras) perteneciendo el

82,3% al género Corynebacterium. Las especies más frecuentemente identificadas del género

Corynebacterium fueron: C. amycolatum (30,9%), C. striatum (13,5%), C. coyleae (10,9%) y C.

jeikeium (9,3%). Entre los corineformes no pertenecientes al género Corynebacterium

predominó: Brevibacterium spp. (31,9%), Dermabacter hominis (9,4%) y Gordona sputi (9,4%).

La concordancia de la identificación fenotípica con el análisis de la fracción 16S del ADN

ribosómico fue del 14,2% para el sistema API CoryneTM V2.0, 70,0% para el sistema BiologTM

GP2 y del 90,3% para el sistema API CoryneTM V2.0 con pruebas complementarias, pudiendo

ser éste último un método adecuado para la identificación de estos microorganismos.

 Todos los aislados del género Corynebacterium fueron sensibles a vancomicina (CMI <2

mg/L) y linezolida (CMI <1 mg/L). Otros antibióticos significativamente activos fueron: ácido

fusídico, telitromicina, tetraciclina y quinupristina/dalfopristina. La tasa de resistencia a

ampicilina fue superior al 90% en C. amycolatum, C. jeikeium y C. urealyticum y menor del 6%

en C. coyleae, C. aurimucosum, C. ureicelerivorans, C. striatum y C. afermentans subsp.

afermentans. La resistencia global a los antibióticos fue mucho más alta en C. urealyticum, C.

amycolatum, C. jeikeium y C.striatum mientras que fue más baja en C. afermentans subsp.

afermentans, C. coyleae, C. aurimucosum y C. ureicelerivorans.

Se observó una alta tasa de resistencia a eritromicina (51,5-100%) y a clindamicina

(62,5-100%) entre las diferentes especies identificadas haciendo poco recomendable el

tratamiento empírico con estos antibióticos. El fenotipo de resistencia a antibióticos del grupo

MLS​B ​fue MLS​B ​constitutivo (85,5%), seguido del fenotipo M eflujo (6,6%) y MLS​B ​inducible

(1,9%). El gen erm(X) fue detectado en 88 de los 93 aislados con fenotipo de resistencia MLS​B

(94,6%). ​Las especies que más se asociaron a aislamiento con significado clínico (definitivo y

probable) fueron C. jeikeium (84,2%), C. ureicelerivorans (83,3%) y C. urealyticum (75,0%). Por

el contrario, las especies con menor significado clínico fueron C. aurimucosum (25,0%) y C.
amycolatum (38,0%). Se observó una diferencia estadísticamente significativa (p = 0.000; OR:

11,7; IC95%: 3,6-38,1) entre la evolución favorable o no y el tratamiento administrado. Cuando

el fármaco era activo in vitro frente al microorganismo, la evolución fue favorable en el 89,3%

de los casos mientras que, en caso contrario, dicha evolución favorable aconteció sólo en el

41,7% de los casos.

AGRADECIMIENTOS
 Al Dr. Francisco Soriano García, por la dirección y supervisión de esta tesis, así como el

estímulo y la confianza depositada en mí.

A la Dra. María Luisa Gómez-Lus Centelles, por su labor facilitadora y generosidad.

Al Dr. Juan Antonio Sáez Nieto y a la Dra. Sylvia Valdezate Ramos, por su eficaz

colaboración en este trabajo.

Al Dr. Antonio Blanco Mercadé, mi marido, por su disponibilidad y apoyo.

A mis padres, Isidro y Valentina, y a mis hijas, Isabel y Sofía, por su confianza y apoyo.

A los compañeros que me han prestado su ayuda.

Este trabajo ha sido posible gracias a la financiación del Fondo de Investigaciones

Sanitarias (PI 03/0534) del Instituto de Salud Carlos III (Madrid) del Ministerio de Sanidad y

Política Social.

A mi familia
 ÍNDICE

ABREVIATURAS​...........................................................................................................................13

1. ​INTRODUCCIÓN​.......................................................................................................................15

1.1 Etimología del término “Coryne”.......................................................................................17

1.2 Bacterias corineformes y género Corynebacterium. Taxonomía...................................18

1.3 Género Corynebacterium. Descripción de especies .......................................................26

1.3.1 Especies relacionadas con la medicina humana. Patología asociada ..................54

1.3.2 Otras especies del género Corynebacterium...........................................................62

1.4 Identificación de especies del género Corynebacterium................................................65

1.4.1 Identificación fenotípica .............................................................................................65

1.4.2 Identificación genotípica ............................................................................................76

1.5 Sensibilidad de los organismos del género Corynebacterium a los antimicrobianos 82

2. ​JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS​............................................................................................87

2.1 Justificación.........................................................................................................................89

2.2 Objetivos ..............................................................................................................................90

2.2.1 Objetivo general ..........................................................................................................90

2.2.2 Objetivos específicos..................................................................................................90

3. ​MATERIAL Y MÉTODOS​.........................................................................................................91

3.1 Muestras ...............................................................................................................................93

3.1.1 Botellas de hemocultivo .............................................................................................94

3.1.2 Catéteres vasculares...................................................................................................97

9
3.2 Caracterización fenotípica..................................................................................................97

3.2.1 Métodos convencionales............................................................................................97

3.2.2 Identificación con medios comerciales ....................................................................98

3.3 Caracterización genotípica. análisis de la secuencia de la fracción de 16S del ADN

ribosómico (16S rADN) y del gen rpoB ................................................................................. 100

3.4 Estudio de sensibilidad a antimicrobianos.....................................................................101

3.4.1 Determinación de las concentraciones mínimas inhibitorias y estudio de

sensibilidad por técnica de difusión disco-placa ...........................................................101

3.4.2 Estudio de fenotipos de resistencia a antimicrobianos del grupo MLS​B​............103

3.4.3 Estudio de genotipos de resistencia a macrólidos. Detección de genes erm(X),

mef(A) y mef(E) ................................................................................................................... 103

3.5 Estudio clínico ...................................................................................................................106

3.5.1 Definiciones. Criterios de diagnóstico microbiológico.........................................106

3.5.2 Evaluación del significado clínico de los aislamientos. .......................................107

3.6 Análisis estadístico ...........................................................................................................108

4. ​RESULTADOS​.........................................................................................................................111

4.1 Muestras positivas a corineformes y número de aislados ...........................................113

4.2 Caracterización fenotípica................................................................................................125

4.2.1. API CoryneTM V2.0 ....................................................................................................125

4.2.2. API CoryneTM V2.0 más pruebas complementarias. .............................................129

4.2.3. BiologTM GP2.............................................................................................................131

4.3. Comparación de resultados de la caracterización fenotípica y genotípica ..............134

4.4. Estudio de sensibilidad a antimicrobianos ...................................................................140

4.4.1 Concentraciones Mínimas Inhibitorias ( g/mL) de 17 antibióticos frente a 247

aislados del género Corynebacterium y tasa de resistencia.........................................140

10
4.4.2 Actividad in vitro de siete antimicrobianos frente a 247 aislados del género

Corynebacterium determinada por técnica de difusión disco-placa............................149

4.4.3 Especies de Corynebacterium resistentes a antimicrobianos del grupo MLS​B​.

Fenotipos y genes de resistencia.....................................................................................157

4.5 Estudio clínico-epidemiológico .......................................................................................162

4.5.1 Pacientes .................................................................................................................... 162

4.5.2 Epidemiología, clínica, significado, tratamiento y evolución del aislamiento de

organismos del género Corynebacterium. Descripción por especies. ........................165

4.5.3 Cultivos mixtos..........................................................................................................201

 4.5.4 Manipulación diagnóstico-terapéutica....................................................................204

4.5.5 Bacteriemias relacionadas con catéter vascular ...................................................206

4.5.6 Evolución y tratamiento............................................................................................207

5. ​DISCUSIÓN​..............................................................................................................................211

5.1. Datos microbiológicos.....................................................................................................213

5.2. Datos clínico-epidemiológicos........................................................................................246

6. ​CONCLUSIONES​....................................................................................................................279

7. ​BIBLIOGRAFÍA ​.......................................................................................................................283

ANEXO I​........................................................................................................................................335

Ficha de recogida de datos ....................................................................................................337

ANEXO II​.......................................................................................................................................339

Publicaciones relacionadas con el tema...............................................................................341

11
ABREVIATURAS

αGLU: α-glucosidasa

βGAL: β-galactosidasa
βGUR: β-glucuronidasa

βNAG: N-acetil-β-glucosaminidasa

βGLU: β-glucosidasa

ACV: accidente cerebrovascular

ADN: Ácido desoxirribonucleico

AFLP: Amplified fragment lengh polymorphism

ARN: Ácido ribonucleico

ATCC: American type culture collection

ARDRA: Amplified rDNA restriction analysis

BHI: Infusión corazón cerebro

BRC: Bacteriemia relacionada con catéter

CAMP: Prueba de Christie Atkins Munch Peterson

CA-SFM: Comité de l ́Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie

CDC: Center for Diseases Control

CIP: Colección del Instituto Pasteur de cepas tipo

CLSI (antes NCCLS): Clinical and Laboratory Standards Institute (antes, National Committee

for Clinical Laboratory Standards)

CMI: Concentración mínima inhibitoria

CMI​50​: Concentración mínima inhibitoria frente al 50% de las cepas

CMI​90​: Concentración mínima inhibitoria frente al 90% de las cepas

DNAsa: Desoxirribonucleasa

DTP3: Difteria, tétanos y tosferina, triple vacuna

E: Especificidad
IC95: Intervalo de confianza del 95%

IRC: Infección relacionada con catéter

ITS: Espacio intergénico

ITU: Infección del tracto urinario

13
LCR: Líquido cefalorraquídeo

M (Fenotipo): Bomba de expulsión

MLS​B​: Macrólidos, lincosaminas y estreptograminas grupo B

cMLS​B​: Fenotipo de resistencia constitutivo MLS​B

iMLS​B​: Fenotipo de resistencia inducible MLS​B

NAG: N-acetil-glucosamina

OSCDP: Orificio de salida de catéter de diálisis peritoneal

PAAF: Punción aspiración con aguja fina

PAC: Fenilacetato

PAL: Fosfatasa alcalina

PFGE: Pulsed-field gel electrophoresis

OR: Odds Ratio

pb: Pares de bases

PCR: Reacción en cadena de la polimerasa

PyrA: Pirrolidonil arilamidasa

PYZ: Pirazinamidasa

RAPD: Random amplification of polymorphic DNA

RPLP: Rectriction fragment length polimorphism

RPM: Rotura prolongada de membranas

S: Sensibilidad

SBA: Agar sangre de oveja

SEIMC: Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica

SIDA: Síndrome de inmunodeficiencia adquirida

SNC: Sistema nervioso central

TBSA: Ácido tuberculoesteárico

TD: Toxina diftérica

TSA: Agar tripticasa soja

UFC: Unidades formadoras de colonias

VPN: Valor predictivo negativo

VPP: Valor predictivo positivo

14
Introducción
 1. INTRODUCCIÓN
Introducción

1.1 ETIMOLOGÍA DEL TÉRMINO “Coryne”

ΚΟΡΎΝΗ, ΗΣ
Κορύνη, ης

Palabra empleada por Homero en la Ilíada 7, 141, cuando Néstor, rey de Pilos, recuerda

una lucha antigua entre los pilios y los arcadios junto al río Celadonte ante las murallas de Fea

(ciudad entre la Élide y el reino de Pilo, al norte del río Alfeo) en la que destacó Ereutalión: vv.

136-141.

“Ereutalión se destacó en vanguardia, mortal igual a un dios,

con las armas del soberano Areítoo en los hombros. Areítoo,
de la casa de Zeus, al que, como apodo, macero solían llamar
los hombres y las mujeres, de bella cintura, porque no luchaba
ni con el arco ni con la larga lanza, sino con la férrea maza,
con la que destrozaba batallones.“

La palabra tiene que ver originariamente con el micénico κόρυς, “yelmo” (en las tablillas

del silabario micénico el genitivo koruto y el plural instrumental korupi). A través de esta

relación queda emparentado con un tipo de casco con cresta κορνδός, y con la palabra que

significa “cabeza”, “cima de un monte” κόρνμβος o “mascarón de proa de un barco” κόρνμβα, y

finalmente con el jefe del coro en las representaciones teatrales de la tragedia κορνφή. En

sentido propio se refiere a diversos objetos naturales y artificiales de aspecto vagamente

tubular con ensanchamientos o nudos. En el mundo natural designa los bulbos de las plantas, y

el miembro viril. En la familia de palabras de ese sustantivo se registra el verbo denominativo

κορυνάω ”formar botones en forma de bulbo” (Chantraine, 1990).

En la Ilíada se emplea también con la acepción de “maza” (en el compuesto κορυνήζης,

“portador de la maza”, que después modificaría Heródoto siguiendo la derivación clásica en

κορυνηφόρος), pero parece tratarse de un arma de madera, con los nudos y defectos de una

rama de árbol; podríamos imaginar un basto semejante al inseparable atributo de Hércules, en

la iconografía bien difundida y divulgada sobre todo en el arte y la imprenta por el

neoestoicismo a partir del Renacimiento.

17
Introducción

1.2 BACTERIAS CORINEFORMES Y GÉNERO Corynebacterium.

TAXONOMÍA

La terminología utilizada de difteromorfo, corineforme y corinebacteria es ambigua y

puede conducir a confusión al hacer referencia, en general, a bacilos grampositivos.

“Difteromorfo”. Término genérico que hace referencia a bacterias de morfología similar a

Corynebacterium diphtheriae, primero y más conocido patógeno humano de este género

descrito por Kruse en 1886, agente causal de la difteria (Bernard, 2005; Funke y Bernard,

2007). ​“Corineforme”. Término común y admitido por muchos microbiólogos utilizado para

designar a bacilos grampositivos de morfología irregular, crecimiento aeróbico, no esporulados

y no o parcialmente ácido-alcohol resistentes. No todas las bacterias corineformes pertenecen

al género Corynebacterium spp. (Bernard, 2005; Funke y Bernard, 2007).

“Corinebacteria”. Bacterias que pertenecen al verdadero género Corynebacterium spp.

 que muestra una morfología típica en forma de maza, porra o bastón, término que deriva del

griego antiguo “coryne” (Bernard, 2005; Funke y Bernard, 2007).

Aunque el término difteromorfo se sigue utilizando por algunos microbiólogos, las

bacterias que con la tinción de Gram presentan una morfología similar a especies del género

Corynebacterium (pertenezcan o no a este género), se definen mejor como “corineformes”.

Todos los géneros incluidos como bacterias corineformes pertenecen a la clase

Actinobacteria, por poseer una secuencia específica del gen 16S ADN ribosomal (16S rADN).

En las dos últimas revisiones taxonómicas (Bernard, 2005; Funke y Bernard, 2007) hay

diferencias. En Bernard, 2005 se incluyen 14 géneros: Corynebacterium, Turicella, y otros 12

géneros de bacterias corineformes: Arthrobacter, Brevibacterium, Cellulomonas,

Cellulosimicrobium, Curtobacterium, Dermabacter, Dermatophilus, Exiguobacterium, Leifsonia,

Microbacterium (que incluye al anterior Aureobacterium), Oerskovia y Rothia. En Funke y

Bernard, 2007, se incluyen 19 géneros, diferenciándose de la anterior revisión en la no

inclusión de Dermatophilus (Burd et al., 2007) y en la inclusión de géneros nuevos: Janibacter,

Pseudoclavibacter/Zimmermannella, Brachibacterium y Knoellia, y de Gardnerella, aunque se

discute aparte. En la Tabla 1 se resume la evolución histórica de los cambios en la inclusión de

géneros de bacterias corineformes desde 1997 a 2007.

18
Introducción
Tabla 1. Bacterias corineformes: Reclasificaciones en la última década (1997-2007). Revisión
bibliográfica.
Funke et al., 1997e
19 ​Janda, 1998a
Funke y Bernard, 1999
Funke y Bernard, 2003
Bernard, 2005
Funke y Bernard, 2007
Corynebacterium Corynebacterium Corynebacterium Corynebacterium Corynebacterium Corynebacterium Turicella Turicella
Turicella Turicella Turicella Turicella Arthrobacter Arthrobacter Arthrobacter Arthrobacter Arthrobacter Arthrobacter Brevibacterium
Brevibacterium Brevibacterium Brevibacterium Brevibacterium Brevibacterium Dermabacter Dermabacter Dermabacter
Dermabacter Dermabacter Dermabacter Rothia Rothia Rothia Rothia Rothia Rothia Exiguobacterium Exiguobacterium
Exiguobacterium Exiguobacterium Exiguobacterium Exiguobacterium Oerskovia Oerskovia Oerskovia Oerskovia Oerskovia
Oerskovia Cellulomonas Cellulomonas Cellulomonas Cellulomonas Cellulomonas Cellulomonas
Cellulosimicrobium Cellulosimicrobium Cellulosimicrobium Microbacterium Microbacterium Microbacterium Microbacterium
Microbacterium Microbacterium Curtobacterium Curtobacterium Curtobacterium Curtobacterium “Corynebacterium aquaticum”
“Corynebacterium aquaticum”
Leifsonia Leifsonia Leifsonia
Arcanobacterium Arcanobacterium Arcanobacterium Arcanobacterium
Aureobacterium Aureobacterium Aureobacterium Propionibacterium Propionibacterium Propioniferax Propioniferax Actinomyces
Actinomyces Sanguibacter Dermatophilus
Janibacter Pseudoclavibacter /Zimmermannella Brachybacterium Knoellia Gardnerella* Gardnerella* Gardnerella*
* Se incluye en esta clasificación pero se estudia separadamente.
Todos estos géneros descritos pertenecen al linaje de bacterias grampositivas, no
esporuladas, con alto contenido en guanina y citosina (G+C), excepto Exiguobacterium y
Gardnerella. En nuestro trabajo hemos considerado corineformes los organismos
pertenecientes a los siguientes géneros: Corynebacterium, Arthrobacter, Brevibacterium,
Dermabacter, Janibacter, Microbacterium, Rothia, Actinomyces, Dietzia, Gordona, Listeria,
Mycobacterium y Rhodococcus.
La diferenciación entre los géneros viene establecida por aspectos quimiotaxonómicos
(principales ácidos grasos celulares, ácidos micólicos, ácido diamino peptidoglicano y tipo acil).
Los ácidos micólicos, únicamente están presentes en la mayoría de las especies del género
Corynebacterium. La diferenciación quimiotaxonómica ha sido confirmada por investigaciones
filogenéticas. La taxonomía de las bacterias corineformes y género Corynebacterium en función
Introducción

de la comparación de las secuencias de genes 16S rADN, características quimiotaxonómicas y

fenotípicas (Bernard, 2005) se expone en la Tabla 2.

Los géneros Corynebacterium y Turicella son los más estrechamente relacionados. La

diferencia entre ellos y el resto de bacterias corineformes radica en los ácidos grasos celulares,

siendo en éstas últimas, saturados, de cadena larga y ramificada, con diferencias cualitativas

importantes, así como en no producir productos finales de fermentación (Funke y Bernard,

2007). Por otro lado, la diferencia entre el género Corynebacterium y Turicella está en que en el

género Corynebacterium se detecta la presencia de ácidos micólicos a excepción de tres

especies (C. amycolatum, C. atypicum y C. kroppenstedtii) y ausencia de ácido

tuberculoesteárico (TBSA) a excepción de algunas especies en que también está presente (C.

appendicis, C. bovis, C. confusum, C. kroppenstedtii, algunas cepas de C. minutissimum, C.

mucifaciens, C. tuberculoestearicum, C. urealyticum (Funke y Bernard, 2007) y C.

ureicelerivorans (Yassin, 2007). En el género Turicella, está presente siempre el TBSA pero

nunca ácidos micólicos.

La secuenciación de la fracción 16S rADN ha demostrado que el género

Corynebacterium y Turicella están más estrechamente relacionados con bacterias parcialmente

ácido-alcohol resistentes y el género Mycobacterium que otros organismos corineformes. El

género Arthrobacter (bacilos con forma rectangular, articulación, del griego “arthros”), está muy

relacionado con el género Micrococcus (cocos), y el género Rothia contiene bacilos (R.

dentocariosa) y cocos (R. mucilaginosa, antes Stomatococcus mucilaginosus). Otros géneros

que filogenéticamente están estrechamente relacionados son Oerskovia, Cellulomonas y

Cellulosimicrobium. Dermabacter está ligeramente relacionado con Arthrobacter y Micrococcus.

Brevibacterium forma otra línea de ascendencia diferenciada (Bernard, 2005; Funke y Bernard,

2007).

20
Introducción

Tabla 2. Taxonomía de bacterias corineformes en función de la comparación de las secuencias de

genes 16S rADN.
En azul​: Géneros incluidos como corineformes en la última reclasificación (Funke y Bernard, 2007) (Tabla 1). *Géneros identificados en este
estudio.

Algunas especies del género Corynebacterium tienen su hábitat en el ambiente, pero la

mayoría forman parte de la flora normal de piel y mucosas en humanos y otros mamíferos. No
siempre se distribuyen de manera uniforme, en ocasiones ocupan nichos específicos. C.

diphtheriae puede aislarse de la nasofaringe y de la piel. C. amycolatum, C. striatum y D.

hominis, además de ser flora normal de la piel, también se aíslan de garganta en personas

21
Introducción

sanas. C. durum y R. dentocariosa predominan en la orofaringe. C. auris y T. otitidis tienen

preferencia por el conducto auditivo externo. C. macginleyi se ha aislado sobre todo de

muestras oculares, donde se ha observado que la flora predominante de corinebacterias en la

conjuntiva es lipófila. C. glucuronolyticum es casi exclusivo de muestras genitourinarias del

hombre y también de animales. C. urealyticum, además de patógeno genitourinario, también se

aísla en otras muestras clínicas y en el ambiente hospitalario (Bernard, 2005; Funke y Bernard,

2007). ​Brevibacterium spp. ha sido aislado de productos lácteos y de piel en humanos.

Especies del género Arthrobacter se aíslan con frecuencia en el suelo, pero A. cumminsii está

presente en la piel humana. Miembros de los géneros Exiguobacterium, Oerskovia,

Cellulomonas, Cellulosimicrobium y Microbacterium su hábitat es el ambiente inanimado.

Microbacterium se ha aislado del ambiente hospitalario. Curtobacterium es también un

fitopatógeno.

Todas las bacterias corineformes médicamente relevantes son catalasa positiva a

excepción de las pertenecientes al género Arcanobacterium que es negativa y variable en los

géneros Rothia y Microbacterium. La movilidad es variable y el metabolismo puede ser

fermentativo u oxidativo (Bernard, 2005; Funke y Bernard, 2007). Estas características y las

especies de cada uno de estos géneros con relevancia en clínica médica se exponen en la

Tabla 3. El género Corynebacterium se trata en el apartado siguiente.

 22
Introducción
Tabla 3. Identificación de bacterias corineformes médicamente relevantes.
Géneros Catalasa Movilidad Metabolismo Núm. especies Morfología Otras características
Corynebacterium + - F/O 68 BGP forma de maza a​ ​Poseen ácidos micólicos b​
Turicella + - O T. otitidis BGP largos Reacción CAMP positiva
Arthrobacter + V O 20 CBGP rectangular
Brevibacterium + - O 8 BGP cortos Olor semejante a queso
Dermabacter + - F D. hominis BGP muy cortos
Rothia V - F R. dentocariosa
R. mucilaginosa
23
Pleomorfismo.
Filamentación
infrecuente
Familia Micrococcaceae
Exiguobacterium + + F 2 c​
E. acetylicum
BGN cortos Oxidasa positiva frecuente
Oerskovia + V F O. turbata C o BGP filamentosos.
Hifas vegetativas, no
aéreas
Penetración en agar
Cellulomonas + V F 9 BGP cortos y finos Hidrolizan la celulosa
excepto C. hominis
Cellulosimicrobium + V F C. cellulans Micelio en cultivos
jóvenes que más tarde
se fragmente en BGP
curvados, en maza
Estrecha relación, pero
diferenciado de Oerskovia
sp.
Microbacterium V V F/O 40 BGP cortos y finos. No
ramificación
Unificación de géneros
Microbacterium y
Aureobacterium Curtobacterium + V d​ ​O (lento) 6 BGP cortos.
No ramificación
Patógeno en plantas y
humano Leifsonia ​e ​+ + O L. aquatica BGP Oxidasa positiva
Arcanobacterium - - F A. haemolyticum
A. pyogenes
A. bernardiae
BGP irregulares Muy relacionado con
Actinomyces. Otras tres
especies descritas (no en
humanos)
Janibacter + - O J. limosus
J. sanguinis
Gram variable: cocos o bacilos aislados, o agrupados en pares o grupos irregulares
Crecimiento óptimo a 25-30a C. Colonias blancas o amarillas Pseudoclavibacter (2004)
+ - O P. helvolum BGP cortos,
ramificación rudimentaria
Crecimiento óptimo a 30a C. Colonias blancas o amarillas Brachybacterium + - F 2 aislados cocoide Knoellia + - O 1 aislado Cocos o bacilos
irregulares

Crecimiento óptimo en capnofilia (5% CO​2​) 37oC Gardnerella

​ - - F lento G. vaginalis Bacilos o cocobacilos
finos, decolorados

Crecimiento óptimo en capnofilia (5% CO​2​) 37oC +:

​ positiva.; -: negativa; V: variable; O. oxidativo; F: fermentativo; BGP: bacilos Gram-positivos;
CBGP: cocobacilos Gram-positivos; BGN: bacilos Gram-negativos. BCBGV: bacilos y cocobacilos Gram-variable; CGP: cocos Gram-positivos. a​
excepto: C. matruchotii, C. durum y C. sundsvallense. ​b ​excepto: C. amycolatum, C. atypicum, C. kroppenstedtii. ​c ​otra especie: E. aurantiacum (no en
humanos). d​ ​la mayoría son móviles (Evtushenko et al., 2000).
En las Tabla 4-6, se resume la taxonomía de las bacterias corineformes y su implicación
en patología médica humana o el tipo de muestra clínica donde se han aislado (Bernard, 2005;
Funke y Bernard, 2007).
Introducción
Tabla 4. Bacterias corineformes: géneros con relevancia en patología médica humana: orden
Actinomycetales, suborden Micrococcineae.
Clase Actinobacteria Subclase Actinobacteridae Orden Actinomycetales
Suborden Micrococcineae (13 familias)
Familia Géneros/especies con relevancia médica Clínica, localización, enfermedad
asociada con infección.
Actinomycetaceae Arcanobacterium bernardiae
Arcanobacterium haemolyticum
Arcanobacterium pyogenes
24
Abscesos junto con flora anaerobia Faringitis, infección de heridas y tejidos blandos Infección de tejidos blandos. Abscesos.
Brevibacteriaceae Brevibacterium Endocarditis, peritonitis, bacteriemia, infección de oído y material protésico. Pies malolientes.
Cellulomonas (antes, CDC grupo A-3) LCR, bacteriemia, infección de herida Cellulomonadaceae
Oerskovia Endocarditis, bacteriemias, abscesos
Dermabacteraceae Dermabacter (D. hominis) (antes, CDC grupos 3 y 5)
Brachybacterium
Bacteriemia, absceso cerebral, hepático y de mama, LCR, Infección respiratoria y de herida, artritis séptica y peritonitis.
Bacteriemia (2 aislados)
Intrasporangiaceae Janibacter
Knoellia
Bacteriemia Bacteriemia (1 aislado) Microbacteriaceae
Curtobacterium Sangre, LCR, infección de herida, aspirado de rodilla. Además de fitopatógeno. Leifsonia (L. aquatica) (antes, C.
aquaticum) Sangre, senos paranasales
Microbacterium (antes, CDC grupos A-4 y A-5)
Incluye Aureobacterium en la actualidad.
Pseudoclavibacter (antes, Brevibacterium helvolum). Género posterior, Zimmermannella, es sinónimo.
Bacteriemia, endoftalmitis, médula ósea, LCR, infección de herida, infección de cuerpo extraño Bacteriemia, infección de orina y
herida
Micrococcaceae
Arthrobacter Bacteriemia, endocarditis, endoftalmitis, poliartritis, infección tracto urinario, infección de cuerpo extraño.
Rothia Aneurisma micótico, bacteriemia,
endocarditis, infección respiratoria. Promicromonosporaceae Cellulosimicrobium (antes, CDC grupo A-4 y
Oerskovia xanthineolytica)
Endocarditis, bacteriemia, infección cuerpo extraño.
Introducción
​ acterias corineformes: géneros con relevancia en patología médica humana: orden
Tabla 5​. B
Bifidobacteriales.
Clase Actinobacteria Subclase Actinobacteridae Orden Bifidobacteriales
Familia Géneros/especies con relevancia médica Clínica, localización, enfermedad
asociada con infección. Bifidobacteriales Turicella otitidis
Gardnerella vaginalis
25
Otorrea. Bacteriemia. ​Vaginosis bacteriana. Bacteriemia postparto o aborto. Endometritis. Flora normal vaginal y anorrectal en ambos sexos.
Tabla 6. Bacterias corineformes: géneros con relevancia en patología médica humana: orden Bacillales.
Clase “Bacilli” Orden Bacillales
Suborden Bacillales ​(bacilos Grampositivos predominantemente esporulados como el género Bacillus, no incluido como corineforme)
Familia Géneros/especies con relevancia médica Clínica, localización, enfermedad
asociada con infección. Bacillaceae Exiguobacterium (E. acetylicum)
(antes, Brevibacterium acetylicum)
Piel, heridas, LCR, Bacteriemia.
Introducción

1.3 GÉNERO Corynebacterium. DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

El género Corynebacterium fue descrito por Lehmann y Neumann en 1896. Su filogenia es:

Dominio:”Bacteria”

División:” Actinobacteria”

Clase: Actinobacteria

Subclase: Actinobacteridae

Orden: Actinomycetales

Suborden: Corynebacterineae

Familia: Corynebacteriaceae

Género: Corynebacterium

Especies: 68, 44 aisladas en humanos y 24 en huéspedes no humanos.

Dos subespecies: C. afermentans subsp. afermentans y C. afermentans subsp. lipophilum.

Cuatro biotipos de C. diphtheriae: gravis, mitis, belfanti e intermedius. Dos biovar: en C.

pseudotuberculosis biovar ovis y C. pseudotuberculosis biovar equi.

Dos subgrupos en C. coyleae: subgrupo 1 y 2 (Van den Velde et al., 2006)

Taxones: CDC gr F1 taxón 1 y CDC gr F1 taxón 2. C. ulcerans 1 y C. ulcerans 2. C. xerosis 1 y

C. xerosis 2. (Riegel et al., 1995c).

Disponible en http://www.bacterio.cict.fr/c/corynebacterium.htlm.

La diferenciación entre el género Corynebacterium de otras bacterias corineformes está

en la positividad de la catalasa, la negatividad de la motilidad, citrato, hidrólisis de gelatina y

esculina (excepto C. kroppenstedtii y en algunas cepas de C. aurimucosum, C. durum, C.

matruchotii y C. glucuronolyticum), oxidasa (excepto C. bovis), así como en las características

morfológicas.

La tinción de Gram muestra bacilos grampositivos irregulares ligeramente curvados con

lados no paralelos y a veces con extremos ensanchados, dando el típico aspecto de maza.

Sólo tres auténticas especies muestran un inusual aspecto, “no-coryne “, sino filamentoso,

curvado, con ensanchamiento en uno de los extremos: C. matruchottii (como un látigo), C.

durum y C. atypicum, o protuberancias en los extremos como C. sundsvallense. Si la tinción se

26

realiza a partir de medios líquidos, las corinebacterias aparecen como células aisladas, en

pares, forma de uve, empalizada o agrupadas formando letras chinas (Figura 1).

Figura 1. Tinción de Gram (izda.) y microscopía de barrido (dcha.) de Corynebacterium spp.

Introducción
 Este género incluye especies con metabolismo fermentativo y no fermentativo u

oxidativo. Algunas especies son lipófilas, es decir, requieren la presencia de lípidos para su

desarrollo en medios de cultivo.

Desde el punto de vista quimiotaxonómico, las bacterias del género Corynebacterium

contienen en su pared arabinosa, galactosa y ácido meso-diaminopimélico (m-DAP), ácidos

micólicos de cadena corta con 22 a 36 átomos de carbono, a excepción de C. amycolatum, C.

atypicum y C. kroppenstedtii. Los principales ácidos grasos celulares son el ácido palmítico

(C​16:O​), oleico (C​18:1w9c​) y esteárico (C​18:O​) y TBSA que puede encontrarse en algunas especies

como C. appendicis, C. bovis, C. confusum, C. kroppenstedtii, algunas cepas de C.

minutissimum, C. mucifaciens, C. tuberculoestearicum, C. urealyticum (Funke y Bernard, 2007)

y C. ureicelerivorans (Yassin, 2007).

El género Turicella es más próximo al género Corynebacterium. Los principales ácidos

grasos celulares son los mismos que para Corynebacterium. Contiene una única especie, T.

otitidis, que contiene TBSA (2 a 10% de estos ácidos grasos) y reacción CAMP positiva como

algunas especies Corynebacterium.

27

El contenido habitual de guanina más citosina (G+C) en el ADN del género

Corynebacterium está en un rango entre 51 y 63 mol %, pero varía desde 46 mol % (en C.

kutcheri) a 74 mol % (en C. auris), indicando la gran diversidad de este género. La relación

filogenética fue establecida en 1995 (Ruimy et al., 1995; Pascual et al., 1995) creándose una

amplia base de datos para futuros estudios comparativos de la secuenciación del gen 16S

rADN, y poder incluir o excluir miembros en este género.

Para la identificación de especies se utilizan tres tipos de técnicas (Janda, 1999; Bernard

et al., 2002): i) fenotípicas: características de cultivo, asimilación/fermentación de carbohidratos

y pruebas enzimáticas. Existen sistemas comerciales para la caracterización bioquímica y en

ocasiones es necesario además recurrir a pruebas individuales complementarias, ii)

quimiotaxonómicas, y iii) genéticas: la más utilizada es la secuenciación de 16S rARN. La

cronología en su identificación se recoge en la Figura 2 y Tabla 7.

Figura 2. Cronología de la descripción de especies del género Corynebacterium relacionadas con la

medicina humana.
 Ninguna nueva especie relacionada con
patología humana descrita en 58 años
(1924-1981)

Atendiendo al origen de las especies del género Corynebacterium reconocidas

actualmente: i) han sido aisladas 44 especies de muestras clínicas humanas causando

enfermedad o sin asociación a patología (Tabla 7), ii) de animales, mamíferos y aves, se han

aislado 25 especies; 10 de ellas comunes en humanos, iii) y 14 especies de vegetales y/o

muestras ambientales cinco de ellas comunes en humanos (se expone en apartado 1.3.2.

Otras especies del género Corynebacterium).

Introducción
Introducción
Tabla 7. Cronología en la identificación de especies del género Corynebacterium con relevancia en
patología infecciosa humana.
Orden Intervalo de tiempo
(núm. nuevas especies)
29 ​Especie del género Corynebacterium Referencia bibliográfica
Años 1886-1923 (6)
1 C. diphtheriae Kruse 1886. Lehmann y Neumann 1896.
2 C. pseudodiphtheriticum Lehmann y Neumann 1896.
3 C. xerosis* Lehmann y Neumann “Bacterium xerosis“, 1896
4 C. pseudotuberculosis* Eberson, 1918
(Buchanan 1911. “Bacillus pseudotuberculosis”)
5 C. striatum Eberson, 1918.
(Chester 1901. “Bacterium striatum).
6 C. bovis* Bergey et al., 1923
Años 1982-1988 (5)
7 C. matruchotii Collins et al., 1982
(Mendel 1919. ”Bacterionema matruchotii”)
8 C. minutissimum* (Collins y Jones, 1983). Yassin et al., 2002
9 C. mycetoides* Collins (ex Castellani 1942), 1983
10 C. jeikeium* Jackman et al., 1987
11 C. amycolatum* Collins et al., 1988
Años 1990-1999 (23)
12 C. accolens Neubauer et al., 1991
13 C. urealyticum* Pitcher et al., 1992
14 C. afermentans subsp. afermentans
C. afermentans subsp. lipophilum
Riegel et al., 1993a
15 C. propinquum Riegel et al., 1993b
16 C. argentoratense Riegel et al., 1995a 17 C. glucuronolyticum a​ ​* Funke et al., 1995a
18 C. auris Funke et al., 1995b
19 C. macginleyi Riegel et al., 1995c
20 CDC gr F1 Riegel et al., 1995c
21 CDC gr G Riegel et al., 1995c
22 C. ulcerans* Riegel et al., 1995d
23 C. coyleae Funke et al., 1997a
24 C. durum Riegel et al., 1997a
25 C. imitans Funke et al., 1997b
26 C. lipophiloflavum Funke et al., 1997c
27 C. mucifaciens Funke et al., 1997d
28 C. singulare Riegel et al., 1997b
29 C. confusum Funke et al., 1998a
30 C. falsenii* Sjödén et al., 1998
31 C. kroppenstedtii Collins et al., 1998
32 C. riegelii Funke et al., 1998b
33 C. thomssenii* Zimmermann et al., 1998
34 C. sundsvallense Collins et al., 1999
Años 2000-2007 (10)
35 C. simulans Wattiau et al., 2000 36 C. freneyi ​b ​Renaud et al., 2001 37 C. aurimucosum ​c ​Yassin et al., 2002a
38 C. appendicis Yassin et al., 2002b
39 C. atypicum Hall et al., 2003
40 C. tuberculoestearicum* Feurer et al., 2004
41 C. resistens Otsuka et al., 2005
42 C. tuscaniae Riegel et al., 2006
43 C. hansenii Renaud et al., 2007
44 C. ureicelerivorans Yassin et al., 2007 ​*Aislamiento no exclusivo en humanos (13 especies). a​​ Sinónimo de C. seminale (Riegel et al.,
1995b).​b​Enmendado por Funke y Frodl, 2008.​c​Sinónimo de C. nigricans y bacterias con pigmentación negra CDC grupo 4 (Shukla
et al., 2003; Daneshvar et al., 2004)
Introducción
 De las 68 especies de corinebacterias descritas en total: 31 se han aislado de forma

exclusiva en humanos, 24 nunca en humanos (15 solo en animales y 9 solo en vegetales o

ambiente) y 14 en humanos y además en animales o vegetales y/o ambiente, que se exponen

a continuación:

C. amycolatum (mastitis en vaca) (Hommez et al., 1999),

C. bovis (pielonefritis y mastitis en bóvidos) (Martínez-Martínez, 1998; Watts y Rossbach, 2000;

Dutly et al., 2003),

C. falsenii (tracto respiratorio de águila) (Fernández- Garayzábal et al., 2003),

C. jeikeium (ITU gato, ambiente hospitalario) (Puskar et al., 2007; Rosato et al., 2001; Tauch et

al., 2005),

C. glucuronolyticum: (cerdo) (Devriese et al., 2000),

C. minutissimum (mastitis en vaca) (Hommez et al.,1999),

C. mucifaciens (polvo del ambiente en granjas) (Korthals et al., 2008),

C. mycetoides (plantas) (Mungelluzzi y Caprilli, 1965),

C. pseudotuberculosis (équidos, bóvidos, óvidos) (Peel et al., 1997; Hommez et al., 1999),

C. thomssenii (ambiental, muestra de aire) (Bernard et al., 2002)

C. tuberculoestearicum (atún enlatado y polvo del ambiente en granjas) (Feurer et al., 2004;

Korthals et al., 2008),

C. ulcerans (mastitis en vaca (Hommez et al., 1999), exudado nasofaríngeo de perro (Lartigue

et al., 2005) y gato (De Zoysa et al., 2005),

C. urealyticum (cistitis incrustante en perros y gatos (Gómez et al., 1995; Bailiff et al., 2005),

infección nosocomial por transmisión aérea y contacto (Nieto et al., 1996; Soriano y Tauch,
2008) y

C. xerosis (cerdo y cabra) (Vela et al., 2006).

Desde la descripción de C. diphtheriae en 1886, primera especie que da nombre a un

conjunto de bacterias de morfología similar con el término de “difteroides”, hasta la década de

los años 80 del siglo pasado, sólo se reconocieron como patógenos humanos seis especies

que aún siguen vigentes (Tabla 7). C. diphtheriae, había sido eliminado en los países

30

desarrollados del oeste europeo debido a la incorporación en el calendario vacunal infantil; sin

embargo, se han descrito casos aislados en relación con pacientes inmunosuprimidos y brotes

de enfermedad invasiva producidos por cepas no toxigénicas en los países del este europeo

(Martínez-Martínez, 1998) con la importancia que deriva de ello en la actualidad el movimiento

poblacional desde estos países. En la década de los 90, se produjo una epidemia de difteria en

la Federación Rusa, poniendo de nuevo el foco de atención a nivel global en esta enfermedad

(De Zoysa et al., 2008). En la Figura 3 se representa la incidencia de casos declarados de

difteria y la estimación de la vacunación (DTP3) desde el año 1980 hasta octubre de 2007. En

el año 2006 se declararon 3.978 casos, una estimación del 79% de cobertura vacunal.

Disponible en: http://www.who.int/immunization_monitoring/diseases/diphtheria/en/index.html

Figura 3. Incidencia de casos declarados de difteria y estimación de vacunación nivel mundial

desde el año 1980.
Introducción
Se han descrito infecciones por cepas no toxigénicas de C. diphtheriae aisladas en
faringe y lesiones cutáneas en el Reino Unido, éstas últimas en pacientes de procedencia de

áreas endémicas (Wren y Shetty, 2005). Estos autores apuntan que la incidencia universal

puede ser no real debido a que la detección sistemática de este microorganismo no sea una

31
Introducción

técnica de rutina en todos los laboratorios. Aislamiento de cepas no toxigénicas en infecciones

(como endocarditis) en grupos marginales en Europa occidental (Gubler et al., 1998).

Se han comparado cuatro métodos moleculares, para monitorizar la expansión de C.

diphtheriae, como patógeno emergente a nivel mundial. El método de elección, por su alta

reproducibilidad y capacidad discriminatoria fue el ribotipado, frente a PFGE, AFLP y RAPD. Se

observaron varios genotipos de C. diphtheriae circulantes en los diferentes continentes y cada

brote fue causado por un clon distinto; los ribotipos observados en Europa fueron distintos a los

de otros lugares e, incluso, algunos aparecen solo en un determinado país (De Zoysa et al.,

2008). ​C. bovis, C. pseudotuberculosis y C. xerosis pueden ser patógenos animales y humanos

(salto interespecie) y por otra parte, C. xerosis y C. striatum están de actualidad, tanto por la

problemática de su correcta identificación (Renaud et al., 2001; Letek et al., 2006) como por su

incidencia, repercusión clínica y aparición de resistencias a antimicrobianos (Otsuka et al.,

2006). ​Ninguna nueva especie de corinebacteria reconocida como patógeno humano se

describió en 58 años (1924-1981) (Figura 2).

En la década de los años 80 del pasado siglo, se describieron cinco especies. C.

matruchotii y C. mycetoides (esta última también aislada de plantas) son infrecuentemente

patógenos humanos. C. minutissimum es motivo de publicaciones por su implicación clínica,

dudosa asignación como causa de eritrasma, así como por su problemática identificación

fenotípica debido a la semejanza que presenta con otras corinebacterias como C. aurimucosum

(Khamis et al., 2004) y C. singulare (Riegel et al., 1997b), con las que tiene además un alto

porcentaje de semejanza genotípica (98,7% y 99,1% respectivamente). Pero son C.

amycolatum y C. jeikeium, ambas descritas en 1988, dos de las especies que han sido objeto

de mayor número de publicaciones. C. amycolatum es una de las especies aisladas con mayor

frecuencia de muestras clínicas (Wauters y et al., 1998), y ambas han destacado por la

resistencia a múltiples antibióticos (Riegel et al., 1994; Esteban et al., 1999; Tauch et al., 2005).

Ha sido a partir de la década de los años 90 coincidiendo, por una parte, con el

desarrollo e implementación de nuevas técnicas quimiotaxonómicas y moleculares en los

laboratorios de Microbiología, y por otra parte, con el reconocimiento y valoración del

32
Introducción

microbiólogo clínico de las corinebacterias aisladas en muestras clínicas humanas, cuando se

han descrito el mayor número de especies. Otras han sido reclasificadas o reasignadas como

ocurrió con la descripción de C. seminale (Riegel et al., 1995b) que posteriormente se

reconoció como sinónimo de C. glucuronolyticum descrito poco tiempo antes (Funke et al.,

1995a), la descripción de C. aurimucosum como nueva especie y enmendar la descripción de

otra especie estrechamente relacionada con ella, C. minutissimum (Yassin et al., 2002a), y

establecer como sinónimo de ella a C. nigricans, previamente descrita (Shukla et al., 2003), y

bacterias fermentativas con pigmentación negra CDC gr 4 ( Daneshvar et al., 2004), así como

la más reciente descripción ampliada de C. freneyi, (Renaud et al., 2001; Funke y Frodl, 2008)

(Tabla 7).
 Desde comienzo del siglo XXI, se han descrito 10 nuevas especies, las dos más

recientes: C. hansenii (Renaud et al., 2007), fermentativa no lipófila con rasgos genotípicos y

fenotípicos semejantes a C. xerosis, y C. ureicelerivorans (Yassin, 2007), lipófila y de

crecimiento lento con perfil bioquímico semejante a C. urealyticum y C. appendicis, que

destaca por su potente capacidad ureásica.

Por otra parte, en esta primera década del siglo XXI, se ha secuenciado el genoma

completo de cinco corinebacterias: C. diphtheriae (Cerdeño-Tárraga et al., 2003), C. jeikeium

(Tauch et al., 2005), C. urealyticum (Tauch et al., 2008), C. kroppenstedtii (Tauch et al., 2008) y

C. aurimucosum (Tauch, 2008, comunicación personal).

DESCRIPCIÓN DE ESPECIES

Se describen las características microbiológicas más destacables de cada una de las 45

especies, mencionadas por orden alfabético.

C. accolens (Neubauer et al., 1991). Lipófila. Fermentativa. En la última clasificación de

difteromorfos lipófilos (Riegel et al., 1995c) se han establecido cinco genoespecies de las

cuales solo dos muestran la homogeneidad suficiente para definirlas a nivel de especies: la

genoespecie II como C. accolens, y la genoespecieIII como C. macginleyi. El resto incluiría

distintos grupos de organismos donde se encontrarían los grupos G2, parte del grupo G1 y F1

del CDC. Presenta colonias convexas, pequeñas, y satelitismo en torno a colonias de

33
Introducción

Staphylococcus aureus. Es negativa la reacción de fosfatasa alcalina (PAL) y variable la

pirazinamidasa (PYZ). Sensible a antibióticos de amplio espectro.

C. afermentans subsp. afermentans (Riegel et al., 1993a). No lipófila. Oxidativa.

Colonias blanquecinas, convexas, cremosas. Reacción de CAMP positiva en el 60% de las

cepas. Presenta un perfil API 2100004 que es común para C. auris (consistencia de las

colonias ligeramente adherentes), T. otitidis (morfología de las células, más largas en la tinción

de Gram) y C. afermentans subsp. lipophilum (lipófila). Puede confundirse con C. coyleae,

(fermentador de glucosa y ribosa), si la incubación no se prolonga 48 h. Es sensible a

antibióticos betalactámicos.

C. afermentans subsp. lipophilum (Riegel et al., 1993a). Lipófila. Oxidativa. Única

corinebacteria lipófila que puede dar positiva la reacción de CAMP. No está incluida en la base

de datos del sistema API Coryne y tiene el mismo perfil API y de sensibilidad antibiótica que C.

afermentans subsp. afermentans.

C. amycolatum (Collins et al., 1988). No lipófila. Fermentativa. Colonias secas, de

aspecto encerado, gris blanquecino, con bordes irregulares y de 1 a 2 mm de diámetro a las 24

h de incubación. Es destacable la variabilidad en las reacciones bioquímicas básicas, como la

reducción de nitratos, capacidad ureásica, α-glucosidasa (αGLU) y la producción de ácido a

partir de maltosa y sucrosa. No se identifica como especie independiente en el sistema API

Coryne, sino como C. striatum/amycolatum con posibilidad de C. minutissimum. Para la

discriminación de C. amycolatun con C. striatum y C. minutissimum (y C. aurimucosum, de

perfil bioquímico muy parecido al de C. minutissimum pero con colonias amarillentas y

pegajosas en medio de cultivo con sangre, o pigmentación negra, o sin coloración en TSA sin

sangre), además de la morfología de las colonias, son necesarias pruebas complementarias.

(Wauters et al., 1998) (Tabla 8). También es necesario establecer el diagnóstico diferencial con
 otras corinebacterias con quien comparte semejanzas morfológicas, bioquímicas y proximidad

filogenética: C. xerosis, C. freneyi y C. hansenii (Renaud et al., 2007) (Tabla 9). Para la

identificación de certeza es necesario recurrir a técnicas moleculares (identificación polifásica)

(Vandamme et al., 1996).

34
Introducción
Tabla 8. Discriminación fenotípica entre C. amycolatum, C. striatum y C.minutissimum: pruebas
complementarias útiles junto con API Coryne.
C. amycolatum C. striatum C. minutissimum Aspecto colonias Secas,
enceradas
35
Húmedas, cremosas
Húmedas, cremosas Bordes Estriados Lisos Lisos Reducción de nitratos V + - Crecimiento en agar sangre a 20oC / 3 d - + -
Fermentación glucosa 42aC / 3 d + + + α- glucosidasa (-) a​ ​- - Factor vibrióstático 0 / 129 b​ ​(150 g) R S S Hidrólisis de tirosina - + +
DNAsa - - + Multirresistencia antibiótica b​ ​Si V No Asimilación de
maltosa + - + NAG - - + PAC - + + Reacción positiva: +, negativa: -, variable: V. Resistente: R. Sensible: S. a​ ​La mayoría es
negativa, un escaso número de cepas puede ser positiva (–).​b ​La mayoría de las cepas.
Tabla 9. Rasgos y pruebas fenotípicas para discriminar cuatro corinebacterias fermentativas no lipófilas,
de colonias secas, pequeñas y bordes irregulares.
C. amycolatum C. xerosis C. hansenii C. freneyi
Morfología de colonias Enceradas, Rugosas, Rugosas, Rugosas, plegadas,
blanco-grisáceas amarillenta amarillenta blanco-grisáceas y
amarillenta
Reducción de Nitratos V V - V
Fosfatasa alcalina + + - +
α- glucosidasa (–) b​ ​(+) c​ ​- +
Ureasa V - - -
Crecimiento en agar sangre a 20oC / 3 d - + + +
Fermentación glucosa 42aC / 3 d + - - +
Factor vibrióstático 0/129 (150 g) R d​ ​S d​ ​S d​ ​S d​
Multirresistencia antibiótica + - - -
Asimilación de maltosa + + - +
Reacción positiva:+, negativa: -, variable: V. Resistente: R. Sensible: S. ​b ​La mayoría es negativa, un escaso número de cepas puede ser positiva (–). ​c
La mayoría es positiva, un escaso número de cepas puede ser negativa (​+).​d ​La mayoría de las cepas.
Todas las cepas producen ácido propiónico como producto predominante del
metabolismo de la glucosa. En contraste con otras corinebacterias, el fosfolípido predominante
es el fosfatidilglicerol, no tiene ácidos micólicos y presenta una reacción débil de leucin
arylamidasa. La multirresistencia antibiótica, rasgo frecuente en aislados de C. amycolatum de
procedencia humana, puede ser útil en su identificación (Bernard, 2005). En los aislados de
Introducción
procedencia animal (mastitis bovina), el nivel de resistencia a antibióticos es más bajo (Watts y
Rossbach, 2000).
C. appendicis (Yassin et al., 2002b). Lipófila. Anaerobio facultativo. Colonias muy
pequeñas, secas y grisáceas en agar sangre Columbia. Tiene capacidad ureásica y produce
ácido del glicerol. La producción de ácido a partir de glucosa y maltosa es lenta y débil;
dependiendo del sistema comercial utilizado puede variar entre tres y siete días. Son positivas
las pruebas de PAL y PYZ, y negativas las pruebas de reducción de nitratos, hidrólisis de
esculina, gelatina e hipurato. Las pruebas para discriminar esta especie del resto de
corinebacterias lipófilas con capacidad ueásica se exponen en Tabla 10. El lactato es el
producto final predominante de la fermentación de la glucosa. Contiene ácidos micólicos y el
contenido G+C de su ADN es de 65,8 ± 0,1 mol %. Contiene TBSA. Las especies con mayor
proximidad filogenética son C. afermentans, C. coyleae y C. lipophiloflavum con 97- 97,1% de
semejanza en las secuencias del gen 16S rADN.
Tabla 10. Corinebacterias lipófilas con capacidad ureásica: pruebas fenotípicas útiles para su
discriminación.
C. appendicis CDC gr F1 C. lipophiloflavum C. urealyticum C. ​ureicelerivorans ​Metabolismo Fermentativo
lento (3-7d)
36 ​Fermentativo Oxidativo Oxidativo Fermentativo lento
(3 d) Morfología de las colonias
Puntiformes, grises
Pequeñas, gris- blanquecinas
Amarillas Puntiformes,
gris- blanquecinas
Pequeñas, secas
Reducción de nitratos
-V---
Capacidad ureásica Menos rápida Menos rápida Débil Rápida Muy rápida
(60 seg) Pirazinamidasa + + + + + Fosfatasa alcalina + - + + + Producción de ácido a partir de:
g​lucosa ​maltosa sucrosa

(+​a​) ​(+​a​) ​-

+ ​+ +

- ​- -

- ​- -

+ ​- - TBSA
​ + - - + + Resistencia antibiótica (frecuente)
nd (1 cepa) Macrólidos No
multirresistencia
Multirresistencia nd
Hipurato (hidrólisis) - - - - +
Reacción positiva: +, negativa: -, variable: V.​a ​Reacción lenta. N
​ o datos: nd.
C. argentoratense (Riegel et al., 1995a). No lipófila. Fermentativa. Colonias color crema,
no hemolíticas, ligeramente rugosas. CAMP negativa. Las escasas cepas de C. coyleae ribosa-
Introducción

negativa, se diferencian por la lenta fermentación de la glucosa, reacción CAMP positiva y

colonias húmedas. Las cepas que expresan actividad α-quimotripsina, observada en API ZYM

(bioMérieux), son las más relevantes desde el punto de vista médico. Se detecta ácido
propiónico como producto del metabolismo de la glucosa. Filogenéticamente está

estrechamente relacionado con C. diphtheriae, pero no produce TD.

C. atypicum (Hall et al., 2003). No lipófila. Fermentiva. Anaerobio facultativo. En medio

de agar Columbia con 5% de sangre de caballo a las 48 h de incubación crecen colonias

puntiformes, convexas, brillantes, blancas, de bordes lisos y no hemolíticas. Se trata de bacilos

Grampositivos pleomórfico, cortos, agrupados en pares extremo con extremo, cadenas, o

filamentos curvados con extremos engrosados. Destaca la producción de ácido a partir de

glucosa, ribosa, maltosa y sucrosa. Es positiva la reacción de βGUR y el resto de reacciones

recogidas en API Coryne son negativas. Como excepción a la definición del género

Corynebacterium, carece de ácidos micólicos en su pared, al igual que C. amycolatum y C.

kroppenstedtii. Solo se ha descrito una cepa aislada de una muestra clínica humana pero de

origen desconocido. Filogenéticamente, la especie más próxima es C. mastitidis (aislada de

leche de ovejas con mastitis subclínica), mostrando una divergencia del 6% en la secuencia

completa de gen 16S rADN; además posee ácidos micólicos y las reacciones de producción de

βGUR, PYZ, PAL y ácido de glucosa, ribosa, maltosa y sucrosa, son las opuestas. De C.

kroppenstedtii, que también carece de ácidos micólicos, se diferencia por hidrolizar esculina,

sintetizar TBSA y divergen sus secuencias de 16S rADN un 7%. De C. amycolatum, se

diferencia por la producción de PAL y PYZ, y βGUR negativa (resultados opuestos). De C.

glucuronolyticum, donde destaca la positividad de βGUR como dato identificativo de esta

especie, se diferencia de C. atypicum por poseer ácidos micólicos, ser negativa la PYZ y

algunas cepas pueden hidrolizar esculina y urea (Tabla 11).

 37
Introducción
Tabla 11. Discriminación entre las tres corinebacterias carentes de ácidos micólicos y otras relacionadas
filogenéticamente.
C. atypicum C. amycolatum C. kroppenstedtii C. glucuronolyticum C. mastitidi Producción de ácido de:
glucosa maltosa ribosa sucrosa

38 ​+ ​+ + +
+ ​V + V

+ ​+ - +

+ ​+ V +

- ​- - - Producción
​ de:
β- glucuronidasa Fosfatasa alcalina Pirazinamidasa Ureasa

+ ​- - -

- ​+ + V

- ​V + -

+ ​- + V

- ​+ + V ​Hidrólisis de esculina - - + V - Lipofilia - - + - + Presencia de ​Ácidos micólicos ​TBSA

- ​-

- ​-

- ​+

+ ​-

+ ​-
Reacción positiva: +, negativa: -, variable: V.
C. aurimucosum (Yassin et al., 2002a; Daneshvar et al., 2004). No lipófila.
Fermentativa. Anaerobio facultativo. Su descripción inicial estuvo basada en una cepa que
presentaba colonias húmedas, brillantes, amarillentas y con diámetro de 1 a 2 mm en medio de
cultivo con sangre. En TSA sin sangre, no mostraban pigmento y eran pegajosas, adherentes.
Su perfil bioquímico es similar a C. minutissimum con quien tiene un porcentaje de semejanza
en la secuenciación del gen 16S rADN del 98,8% y un 42% de homología en la hibridación
ADN-ADN. Fenotípicamente se pueden diferenciar por la hidrólisis del hipurato positiva y
pigmentación de C. aurimucosum, mientras que C. minutissimum no presenta pigmentación
pero produce DNAsa y puede fermentar manitol (Zinkernagel et al., 1996). C. aurimucosum
puede dar lugar a un precipitado coraloide en medio de agar BHI suplementado con 1% de
Tween 80 e incubado en aerobiosis o CO​2​, (Yassin et al., 2002a).
Posteriormente se ha comprobado que las bacterias con pigmentación negra CDC
grupo 4 y C. nigricans previamente descrita (Shukla et al., 2003), son sinónimos de C.
aurimucosum (Daneshvar et al., 2004), Por tanto es la única auténtica corinebacteria que
puede presentar pigmentación negra. Esta característica es también observable en R.
dentocariosa, siendo útil para su diferenciación la reducción de los nitratos positiva y la
catalasa que puede ser negativa en R. dentocariosa. Los perfiles API de las cepas
pigmentadas de C. aurimucosum incluyen 0000125, 2000125 y 2100327. Su genoma ha sido
recientemente secuenciado (Tauch, 2008, comunicación personal).
Introducción

C. auris (Funke et al., 1995b). No lipófila. Oxidativa. Colonias ligeramente secas y

adherentes pero sin penetrar en el agar, de 1 a 2 mm de diámetro; en incubación prolongada

pueden adquirir una pigmentación amarillenta. Todas las cepas tienen una reacción CAMP

positiva y DNAsa negativa. El perfil API 2100004 es compartido con C. afermentans subsp.

afermentans (aspecto colonias secas y adherentes, CAMP variable) y C. afermentans subsp.

lipophilum (lipófila) y T. otitidis (células más largas en tinción de Gram y ausencia de ácidos

micólicos, y DNAsa positiva) (Renaud et al., 1996). Para su discriminación también es útil el

sistema comercial Biolog y las pruebas complementarias señaladas. Se han observado CMIs

elevadas de antibióticos betalactámicos para C. auris.

C. bovis (Bergey et al., 1923). Lipófila. Fermentativa. Muy raro su hallazgo en muestras

humanas. Es una de las pocas corinebacterias en que se detecta TBSA. El perfil API es

0101104. Produce PAL y βGAL, ureasa positiva en API pero negativa en medios

convencionales. En API Coryne fermenta glucosa a las 48-72 h pero no maltosa siendo ésta

positiva por métodos convencionales. Fermenta fructosa. Es la única especie del género

Corynebacterium con reacción oxidasa positiva.

CDC grupo F1 (Riegel et al., 1995c). Lipófila. Fermentativa. Junto con la recientemente
descrita C. ureicelerivorans, son las dos únicas corinebacterias lipófilas fermentativas con

capacidad ureásica, aunque más potente (60 seg) en C. ureicelerivorans. En la Tabla 10 se

recogen las pruebas fenotípicas más importantes para su discriminación.

CDC grupo G (Riegel et al., 1995c). Lipófila. Fermentativa. Comparte con C. jeikeium,

además de la lipofilia, el carácter de multirresistencia que puede presentar y se diferencia por el

crecimiento en anaerobiosis y la fermentación de fructosa en CDC gr G y la negatividad de

ambas pruebas en C. jeikeium además de su metabolismo oxidativo. También ha de tenerse en

cuenta a C. bovis, aunque raro en muestras clínicas humanas, por ser lipófilo que también

fermenta fructosa y crece en anaerobiosis como CDC gr G, pero se diferencian por ser PYZ

positiva en CDC gr G y negativa en C. bovis.

C. confusum (Funke et al., 1998a). No lipófila. Fermentativa. Crecimiento incipiente en

anaerobiosis. Colonias blanquecinas, húmedas, brillantes, convexas y de bordes lisos. Perfil

API 3100304, fermentación de la glucosa débil y a las 48 h (cambio de color respecto a la

lectura a las 24 h), y por esto se puede confundir con C. propinquum que no fermenta la

39
Introducción

glucosa pero hidroliza la tirosina, o con C. coyleae que también es fermentador lento de

glucosa pero es negativa la reducción de nitratos y CAMP positiva, y con C. argentoratense,

que tampoco reduce nitratos. Contiene TBSA.

C. coyleae (Funke et al., 1997a). No lipófila. Fermentativa. Colonias blanquecinas,

húmedas, brillantes, convexas y de bordes lisos. Fermentación lenta de glucosa, y de ribosa,

siempre positiva y que la diferencia de C. argentoratense. Destaca en su identificación la

reacción de CAMP positiva. El sistema API no la identifica de manera individual sino como C.
afermentans/coyleae a las 24 h de incubación, con perfil 2100004, pudiéndose identificar de

manera errónea como C. afermentans, especie estrechamente relacionada filogenéticamente y

que puede dar positiva la reacción de CAMP en el 60 % de las cepas. Los perfiles API a las 48

h son 2100304 y 6100304 que se interpretan en la base de datos como C. jeikeium del que se

diferencia por el aspecto de las colonias, la prueba de CAMP y la lipofilia, además, no presenta

multirresistencia antibiótica pero sí altas tasas de resistencia a clindamicina (casi la totalidad de

las cepas son resistentes) y macrólidos con predominio del fenotipo cMLS​B ​y detección del gen

erm(X) (Fernández-Natal et al., 2006; Fernández-Roblas et al., 2006; Fernández-Natal et al.,

2008). ​C. diphtheriae, descrita por primera vez por Kruse en 1886 y posteriormente por

Lehmann y Neumann en 1896 y Skerman et al., en 1980. Se diferencian cuatro biotipos: gravis,

intermedius, mitis y belfantis. No lipófilos a excepción del biotipo intermedius. Fermentativa. Las

colonias de C. diphtheriae biotipo intermedius son pequeñas, grises y traslúcidas, mientras que

el resto de biotipos son más grandes, blancas y opacas. Todos producen ácido de glucosa y

maltosa, es negativa la PYZ y PAL, y el ácido propiónico es el producto predominante en el

metabolismo de la glucosa. C. diphtheriae biotipo gravis es fermentador de glucógeno. C.

diphtheriae biotipo intermedius raramente se aísla en infecciones clínicas. C. diphtheriae biotipo

belfanti casi nunca produce TD. Se requiere establecer el diagnóstico diferencial con otras

corinebacterias que pueden dar lugar a cuadros clínicos similares y que pueden producir o

expresar TD, como son C. ulcerans y C. pseudotuberculosis (Tabla 14), con las que tiene una

estrecha relación filogenética. La TD es transportada en el gen tox y su detección in vitro se

puede realizar mediante: prueba de Elek o Elek modificado (colocación de un disco de

antitoxina en el centro de una placa con siembra/s de cepa/s a estudio) (Engler et al., 1997),
 40
Introducción
por ICS (tira de inmunocromatografía) (Engler et al., 2001) en una placa con cultivo puro de la
cepa a estudiar, o detección del gen tox y dtxR (elemento regulador de la toxina diftérica)
mediante PCR. La positividad de esta prueba no permite el diagnóstico de C. diphtheriae
porque también pueden ser portadoras de este gen tox C. ulcerans y C. pseudotuberculosis. Se
calificaría como “posible difteria” la positividad de la detección de toxina, acompañado de otros
datos de laboratorio, histopatológicos, clínicos y epidemiológicos, no como un dato aislado. Ha
sido secuenciado su genoma (Cerdeño-Tárraga et al., 2003).
C. durum (Riegel et al., 1997a). No lipófila. Fermentativa. Crecimiento incipiente en
anaerobiosis. Colonias de morfología peculiar, pequeñas de 0.5 a 1 mm de diámetro a las 72 h
de incubación en aerobiosis. La primera descripción fue como colonias rugosas, con
circunvoluciones y bordes irregulares, muy adherentes al agar. Más tarde se han descrito como
más lisas y no tan adherentes. La tinción de Gram de cultivos aeróbicos muestra células largas
filamentosas con ocasionales ensanchamientos. Siempre reducen los nitratos pero la hidrólisis
de urea y esculina es variable. Los numerosos perfiles API recogidos de publicaciones sugieren
que, en la mayoría, son negativas las reacciones de PAL y PyrA. En el pasado se ha podido
identificar erróneamente como C. matruchotii por su semejanza bioquímica. Las diferencias
fenotípicas más destacables entre ambas especies con morfología celular “no-coryne” se
señalan en la Tabla 12.
Tabla 12. Diferencias fenotípicas entre C. durum y C. matruchotii.
C. durum C. matruchotii Gram Filamentosas, a veces con
ensanchamientos.
41
Forma de “látigo”
Colonias pequeñas Adherentes, a veces rugosas Filamentosas, lisas, con forma de araña Hidrólisis de urea V - Fosfatasa alcalina
- + α-glucosidasa - + Fermentación de:
manitol galactosa ribosa

+ ​+ +

- ​- -
Reacción positiva: +, negativa: -, variable: V
C. falsenii (Sjödén et al., 1998). No lipófila. Fermentativa. Colonias húmedas,
blanquecinas de bordes lisos, de 1 a 2 mm de diámetro a las 24 h de incubación en aerobiosis.
A las 72 h de incubación o más, desarrollan un intenso pigmento amarillo, rasgo poco frecuente
Introducción

en corinebacterias fermentativas no lipófilas de colonias húmedas, excepto por C.

aurimucosum cultivado en un medio con sangre. Los perfiles API publicados han sido 2101104

y 2101304. Los datos bioquímicos más característicos son la lenta fermentación de la glucosa,

débil reacción de PYZ e hidrólisis de la urea visible en API o medio de Christensen las 24 h.
 C. freneyi (Renaud et al., 2001; Funke y Frodl, 2008). No lipófila. Fermentativa. Colonias

blanco-grisáceas (la mayoría) y amarillentas, secas, rugosas, plegadas, con surcos, de bordes

irregulares, de 0,5 a 1 mm de diámetro después de 48 h de incubación. Estrechamente

relacionada filogenéticamente con C. xerosis y también en sus perfiles bioquímicos. No está en

la base de datos de API Coryne, y presenta perfiles 3110325 (reducción de nitratos positiva) y

2110325 (reducción de nitratos negativa), los mismos que para C. xerosis. Las 22 cepas

descritas se han aislado: 13 de tracto genital femenino sin asociación a enfermedad, cinco de

lesiones cutáneas, una de conducto auditivo externo, una biopsia duodenal, una orina y una de

sangre. Todas producen αGLU y PAL, pero CAMP negativa. Es necesario recurrir a pruebas

complementarias (Tabla 9), como el crecimiento en agar sangre a 20oC o la fermentación de

glucosa a 42oC durante tres días, positivas ambas en la mayoría de los aislados, y a técnicas

moleculares para su correcta discriminación (identificación polifásica). La morfología de las

colonias y la secuenciación del ITS 16S-23S rADN permiten la diferenciación con C. xerosis,

especie estrechamente relacionada, pero no la secuenciación 16S rADN.

C. glucuronolyticum (Funke et al., 1995a). No lipófila. Fermentativa. A las 24 h de

incubación crecen colonias húmedas, cremosas, blanco-amarillentas, convexas, de 1 a 1.5 mm

de diámetro. Es destacable la variabilidad que puede presentar en las reacciones bioquímicas

básicas. Reacción de CAMP positiva. Junto con C. atypicum son las dos únicas especies

médicamente relevantes que tienen positiva la reacción βGUR (Tabla 11). Es una de las 4

corinebacterias que pueden hidrolizar la esculina, además de C. kroppenstedtii, C. durum y C.

matruchotii. Puede producir ureasa. En el mismo año de su descripción, poco tiempo después,

se describió C. seminale (Riegel et al., 1995b). Se comprobó que se trataba de la misma

especie, considerándose C. seminale como sinónimo de C. glucuronolyticum.

 C. hansenii (Renaud et al., 2007). No lipófila. Fermentativa. Colonias secas, rugosas,

amarillentas, muy pequeñas, de 0.5 a 1 mm de diámetro. Estrechamente relacionada con C.

xerosis, por proximidad filogenética, morfología de las colonias y patrón bioquímico, así como

42
Introducción

con C. freneyi y C. amycolatum (Tabla 9). Todas estas especies se pueden aislar de muestras

cutáneas, crecen formando colonias secas de bordes irregulares con ligeras variaciones en su

pigmentación entre blanquecinas y amarillentas. En un primer intento de identificación

bioquímica con sistemas comerciales, destaca la negatividad de PAL. La negatividad en la

producción de αGLU, la diferencia de C. freneyi pero no de C. xerosis ya que existen cepas

αGLU-negativas a la vez que se han descrito cepas de C. amycolatum αGLU-positivas. El perfil

API 2000325 no la identifica. Es necesario recurrir a pruebas complementarias fenotípicas,

donde destaca la falta de asimilación de maltosa de C. hansenii para diferenciarla de las tres

especies mencionadas, y técnicas moleculares. C. hansenii no se discriminó de otras

corinebacterias por la secuenciación del gen 16S rADN (954 pb), ni el gen rpoB (95 % de

semejanza con C. xerosis y C. freneyi, y 85 % con C. amycolatum) ni por PCR del ITS 16-23S

(fueron idénticos los de C. xerosis ATCC 373​T ​y C. hansenii ATCC 138​T​); solo se logró

mediante hibridación ADN-ADN obteniéndose <40%, <47% y <45% de semejanza con C.

xerosis, C. freneyi y C. amycolatum respectivamente (Renaud et al., 2007). La única cepa

descrita no se mostró multirresistente a antibióticos.

C. imitans (Funke et al., 1997b). No lipófila. Fermentativa. Crecen colonias blanquecino-

grisáceas, húmedas, brillantes, de bordes lisos con un diámetro entre 1 y 2 mm. No produce

halo marrón en el medio de Tinsdale pero la reacción de reducción de telurito es positiva.

Debido a una débil positividad de PYZ, puede llevar a una identificación inicial errónea con C.

diphtheriae (sumado a la sintomatología semejante que puede presentar el paciente) de la que

se distingue por la negatividad de la reacción de αGLU, resistencia al factor vibrióstático O/129

y negatividad de las pruebas para la detección de la TD, frente a los resultados opuestos de C.

diphtheriae. Por otro lado, tiene una gran semejanza bioquímica, además de la morfología de

las colonias, con C. minutissimum, probablemente identificado erróneamente en el pasado. C.

imitans es CAMP positiva, no hidroliza la tirosina, y es resistente a O/129, mientras que en la

mayoría de las cepas de C. minutissimum se observa lo contrario.

C. jeikeium (Jackman et al., 1988). Lipófila. Metabolismo oxidativo. Aeróbica estricta.

Colonias pequeñas de crecimiento lento, gris-blanquecinas, de bordes lisos. Puede producir

ácido de glucosa y a veces de maltosa oxidativamente, pero no de fructosa. Una característica

frecuente es la multirresistencia antibiótica; sin embargo, de las 4 genoespecies de C. jeikeium

43
Introducción

descritas (A, B, C y D), dos (C y D) son sensibles a betalactámicos y aminoglucósidos (Riegel

et al., 1994). La discriminación con corinebacterias CDC gr G, también lipófilas y

multirresistentes, está en que éstas son anaerobias facultativas y fermentan la fructosa,

mientras que C. jeikeium es aerobia estricta y no fermenta fructosa. Su genoma ha sido

secuenciado (Tauch et al., 2005).

C. kroppenstedtii (Collins et al., 1998). Lipófila. Fermentativa. Colonias grisáceas

traslúcidas, pequeñas, de menos de 0,5 mm de diámetro y ligeramente secas después de 24 h

incubadas a 37oC. Su rasgo bioquímico más característico, por su infrecuencia en las

corinebacterias, es la capacidad para hidrolizar esculina; algunas cepas de C. durum, C.

matruchotii y C. glucuronolyticum también puede ser positiva esta reacción pero se diferencian

por la morfología de las colonias y además de C. glucuronolyticum, por ser βGUR y CAMP

negativa. Es una de las tres especies del género Corynebacterium que no contienen ácidos

micólicos junto con C. amycolatum y C. atypicum; sin embargo, es la única de las tres que

TBSA está presente en la composición de su pared celular (Tabla 11). Su genoma ha sido

secuenciado (Tauch et al., 2008).

C. lipophiloflavum (Funke et al., 1997c). Lipófila. Metabolismo oxidativo. Reacciones

bioquímicas muy similares a C. urealyticum del que se diferencia por la pigmentación intensa

amarilla de sus colonias, la actividad urealítica más débil y no se ha observado multirresistencia

antibiótica en la única cepa descrita, aislada en una paciente con vaginosis bacteriana.

C. macginleyi (Riegel et al., 1995c). Lipófila. Fermentativa. Perteneciente a la

genoespecie III de las cinco establecidas en la última clasificación de corineformes lipófilos.

Presenta colonias convexas y pequeñas, típicas de corinebacterias lipófilas. Los rasgos

fenotípicos que la diferencian de la mayoría de corinebacterias son la negatividad de PYZ, la

fermentación de manitol y el crecimiento de colonias con pigmento rosado en placas con medio

SBA suplementado con Tween 80 (mejor al 0,1 % que al 1%). Estrechamente relacionada con

C. accolens (genoespecie II) de la que se diferencia por la negatividad de PAL y positividad de

PYZ.

C. matruchotii (Collins et al., 1982), previamente denominada por Mendel en 1912

como “Bacterionema matruchotii”. No lipófila. Fermentativa. Forma colonias pequeñas, planas y

filamentosas con forma de araña, aunque a veces, más grandes y con aspecto variable.

44
Introducción
Destaca la morfología inusual de sus células en la tinción de Gram, que se observa incluso en

cultivos de colección después de su mantenimiento durante años, en forma de látigo (forma

filamentosa con un extremo bacilar corto). Puede ser confundido con C. durum por la gran

semejanza en sus perfiles bioquímicos (Tabla 12). La discriminación fenotípica se centra

principalmente en el aspecto de las colonias y la tinción de Gram. Ambos producen ácido

propiónico a partir del metabolismo de la glucosa. No consta en la base de datos del sistema

​ ​y sus perfiles pueden ser 7000325, 7010325 y 7050325. Tiene capacidad

API Coryne TM

calcificante (Cohen et al., 2004).

C. minutissimum (Collins y Jones, 1983; Yassin et al., 2002a​). ​No lipófila. Fermentativa.

Colonias blanco-grisáceas, cremosas (a veces ligeramente secas), brillantes, circulares de

bordes lisos, de 1 a 1,5 mm de diámetro después de 24 h de incubación. Perfil bioquímico

similar a C. aurimucosum. Produce ácido de glucosa, ribosa, maltosa y manitol, pero variable

de sacarosa. La mayoría de las cepas son PyrA positiva. El sistema API Coryne no identifica

por sí solo C. minutissimum, requiere de pruebas complementarias como: actividad DNAsa,

asimilación de maltosa, NAG y PAC, sensibilidad al factor vibrióstático O/129 y positividad de la

hidrólisis de tirosina. Solo unas pocas cepas son CAMP positivas y algunas poseen TBSA

(Tablas 8 y 13).

C. mucifaciens (Funke et al., 1997d). No lipófila. Metabolismo oxidativo. La morfología

de las colonias es un rasgo que las caracteriza: muy mucoides, amarillas, bordes lisos y de 1 a

1,5 mm de diámetro a las 24 h de incubación. Una sustancia extracelular, probablemente un

polisacárido, une las células mediante filamentos. Se ha descrito una cepa atípica, NML 97-

0160, denominada en GenBank como “closest to C. mucifaciens”, que presenta colonias

blanquecinas, no mucoides, de 1 mm de diámetro a las 24 y 72 h, y perfil API 2100104

 (Cantarelli et al., 2006). Los perfiles API publicados 2000004, 2000104, 2000105, 2100104,

6000004, 6100104 sugieren que la oxidación de glucosa es lenta. Es menos activa

enzimáticamente que Rhodococcus equi con quien tiene semejanza en la morfología mucoide

de las colonias. En R. equi es positiva la reacción de αGLU y βGLU, negativas en C.

mucifaciens. Además, C. mucifaciens produce ácido de fructosa, glicerol y manosa, negativos

en R. equi. Posee de 1 a 2% de TBSA. Suele ser sensible a antibióticos betalactámicos y

aminoglucósidos.

45
Introducción
Tabla 13. Características diferenciales de cuatro especies de Corynebacterium de crecimiento similar*,
fermentativas, no lipófilas e hidrolizantes de la tirosina.
C. minutissimum C. simulans C. striatum C. singulare C. aurimucosum Reducción de nitratos - + + - - Reducción de nitritos - + V - -
Ureasa - - - + - Pirazinamidasa + V + + + Producción de ácido a partir de:
sucrosa maltosa galactosa

46 ​V ​+ -
+ ​- V

V ​- +

+ ​+ -

+ ​+ nd ​Crecimiento en AS a 20oC 3 d - - + - nd Fermentación glucosa a 42oC V V + + nd CAMP (-) b​ ​- V - nd Ácido de etilenglicol - -

+ - - *Colonias de aspecto “húmedo”. Reacción positiva: +, negativa: -, variable: V. Agar sangre: AS. a​ ​en muy pocas cepas puede
ser positiva (-). No datos: nd.
C. mycetoides (Collins (ex Castellani 1942), 1983). Se ha descrito como patógeno en
plantas y hombre, sin embargo, son escasas y no recientes las referencias de su implicación en
medicina humana. No se ha hecho referencia alguna a esta especie en los manuales de
Microbiología Clínica de los últimos años (Funke y Bernard, 1999; Funke y Bernard, 2003;
Funke y Bernard, 2007).
C. propinquum (Riegel et al., 1993b). No lipófila. Metabolismo oxidativo. Crece
formando colonias blanquecinas, en ocasiones ligeramente secas, de bordes lisos y de 1 a 2
mm de diámetro después de 24 h de incubación. Con C. pseudodiphtheriticum comparte nicho
ecológico, la nasofaringe, y una estrecha relación filogenética con una semejanza en la
secuenciación del gen 16S rADN del 99,3 %. Ambos tienen metabolismo oxidativo y no son
lipófilos. Fenotípicamente se pueden diferenciar porque en C. propinquum la actividad ureásica
es negativa, y positiva en C. pseudodiphtheriticum. Ambas reducen los nitratos. La hidrólisis de
la tirosina es positiva en C. propinquum, mientras que solo lo es en unas pocas cepas de C.
pseudodiphtheriticum. API Coryne lo identifica bien.
C. pseudodiphtheriticum (Lehmann y Neumann, 1896; Skerman et al., 1980). No
lipófila. Metabolismo oxidativo. Como ya se refirió en C. propinquum es con quien guarda
muchas semejanzas: nicho ecológico, filogenia, morfología de las colonias y reacciones
bioquímicas, siendo la más reseñable la capacidad ureásica de C. pseudodiphthericum. API
Coryne lo identifica bien, no produciendo ácido de los azúcares contenidos en el sistema. A su
vez, comparte semejanza bioquímica con C. urealyticum, descrito inicialmente como variante
Introducción
nitrato-negativa de C. pseudodiphtheriticum (Hollis y Weaver, 1981). Ambas se diferencian
además por la lipofilia, morfología y velocidad de crecimiento de las colonias, y habitual
multirresistencia antimicrobiana presente en C. urealyticum.
C. pseudotuberculosis (Eberson, 1918), previamente denominada por Buchanan en
1911 como “Bacillus pseudotuberculosis”. No lipófila. Fermentativa. Sus colonias son
blanquecino-amarillentas, opacas, convexas, de aproximadamente 1 mm de diámetro a las 24
h de incubación. Se diferencian dos biovar: C. pseudotuberculosis biovar ovis y C.
pseudotuberculosis biovar equi. En su filogenia está muy próximo a C. ulcerans y C.
diphtheriae (98,5% de semejanza en sus secuencias 16S rADN) y los cuadros clínicos pueden
ser parecidos. API Coryne lo identifica bien. Al igual que C. ulcerans, produce TD, tiene
capacidad ureásica, reacción CAMP inversa (inhibida) y reducción de nitratos variable. Se
diferencian por el comportamiento frente al factor vibriostático O/129, resistente en C.
pseudotuberculosis y sensible en C. ulcerans y por la fermentación del glucógeno, negativa en
C. pseudotuberculosis y positiva en C. ulcerans. Las características de las corinebacterias con
capacidad de producir TD se resumen en la Tabla 14 siendo todas fermentativas, PYZ
negativa, y no lipófilas excepto C. diphtheriae biotipo intermedius.
Tabla 14. Corinebacterias con capacidad de producir toxina diftérica.
C. diphtheriae ​4 biotipos
47 ​C. pseudotuberculosis C. ulcerans
Morfología de las colonias Difiere según
Amarillentas, opacas, ​
biotipo​a ​convexas
Grisáceas, blanquecinas, ligeramente hemolíticas Reducción de nitratos + - - Ureasa - + + Producción de ácido a partir de:
glucosa maltosa sucrosa

+ ​+ -

+ ​+ V

+ ​+ - ​Fermentación de glucógeno - b​ ​- + CAMP - Inversa Inversa Factor vibriostático 0/129 S R S ​a ​C. diphtheriae biotipo

intermedius: grises, pequeñas, traslúcidas. C. diphtheriae biotipo gravis, mitis, belfanti: grandes, blanquecinas,
​ opacas. Reacción
b​
positiva: +, negativa: -, variable: V. ​ Solo positiva en C. diphtheriae biotipo gravis
C. resistens (Otsuka et al., 2005). Lipófila. Fermentativa. Colonias nacaradas gris-
blanquecinas, de 1 mm de diámetro en TSA a las 24 h. Incipiente crecimiento en anaerobiosis.
Cuatro de las cinco cepas descritas han mostrado multirresistencia antibiótica. La ausencia de
actividad PYZ en C. resistens (también observable en C. atypicum, C. macginleyi y las tres
Introducción
corinebacterias con capacidad de producir TD) permite su diferenciación de otras
corinebacterias lipófilas y en especial de aquellas que en la mayoría de cepas también son
multirresistente a antibióticos: C. jeikeium, C. urealyticum y CDC grupo G. El perfil bioquímico
de C. resistens y el resto de corinebacterias lipófilas con relevancia médica humana se expone
en la Tabla 15.
Tabla 15. Características bioquímicas de las 15 corinebacterias lipófilas con relevancia médica humana.
F/O NIT URE ESC PYZ PAL CAMP
Producción de ácido a partir de: Glu Mal Suc Man
48
Otras
C. accolens F + - - V - - + - V V C. appendicis F ​a ​- + - + + - (+) (+) - - C. afermentans subsp. lipophilum
O---++V----
C. bovis O - - - V + - + - - - βGAL + C. diphtheriae biotipo intermedius
F+-----++--

C. jeikeium O - - - + + - + V - - MR ​AN -
Fruc - C. kroppenstedtii F - - + + - - + V - - TBSA C. lipophiloflavum O - - - + + - - - - - Amarilla C. macginleyi F + - - - + - + - + V C.

resistens F - - - - + - + - - - MR ​AN lento

Fruc - C. urealyticum O - + - + V - - - - - MR
TBSA C. ureicelerivorans F a​ ​- + - + + - + - - - HIP + TBSA C. tuberculoestearicum​b ​F V - - + V nd + V V V * TBSA CDC grupo F1 F
V + - + - - + + + - CDC grupo G F V - - + + - + V V - MR
Fruc + AN +
F/O, metabolismo Fermentativo / Oxidativo. NIT, reducción de nitratos.URE, hidrólisis de urea. ESC, hidrólisis de, esculina. PYZ,
pirazinamidasa. PAL fosfatasa alcalina. βGAL, β-galactosidasa. Glu, glucosa. Mal, maltosa. Suc, sucrosa. Man, manitol. HIP,
hidrólisis de hipurato. Fruc, fermentación de fructosa. MR, multirresistencia antibiótica en la mayoría de cepas. AN, crecimiento en
anaerobiosis; nd, no datos.+ reacción positiva, - negativa, V, variable, (+) positiva en API Coryne a los 3-7 d de incubación. a​ ​lento
(3 días). b​ ​Los resultados positivos son referidos a >80% de las cepas estudiadas. V *, negativa en Funke y Bernard, 2007; positiva
en Feurer et al., 2004.
C. riegelii (Funke et al., 1998b). No lipófila. Fermentativa. Incipiente crecimiento en
anaerobiosis. Se muestra con colonias blanquecinas, brillantes, convexas de bordes lisos y de
1,5 mm de diámetro o mayor a las 48 h de incubación. Su consistencia suele ser cremosa,
aunque a veces es algo leñosa, seca. Su rasgo más característico es la intensa actividad
Introducción

ureásica: puede ser positiva en cinco minutos a temperatura ambiente en medio líquido de

Christensen, y por la ausencia de fermentación de glucosa y lenta de maltosa. No está incluida

en la base de datos de API Coryne.

C. simulans (Wattiau et al., 2000). No lipófila. Fermentativa. Previamente denominada

C. striatum-like. Sus colonias son grisáceo-blanquecinas, húmedas, brillantes, cremosas, con

bordes lisos de 1 a 2 mm de diámetro. Comparte semejanzas de morfología de cultivo (colonias

húmedas), bioquímicas y filogenéticos (≥97% de semejanza en secuenciación del gen 16S

rADN) con C. minutissimum, C. singulare y C. striatum. Todas ellas hidrolizan tirosina. API

Coryne (perfiles 2100105, 2100301, 2100305 para C. simulans) no las identifica como especies

individualizadas, siendo necesario recurrir a pruebas complementarias que se exponen en la

Tabla 13. Su rasgo más distintivo es la capacidad de reducir nitritos.

C. singulare (Riegel et al., 1997b). No lipófila. Fermentativa. Colonias húmedas,

circulares convexas de bordes lisos y consistencia cremosa. Como ya se ha expuesto,

comparte muchas características fenotípicas y filogenéticas con C. minutissimum, C. striatum y

C. simulans (Tabla 13). Su rasgo fenotípico más característico es la producción de ureasa.

C. striatum (Eberson, 1918, y anteriormente denominada por Chester en 1901 como

“Bacterium striatum). No lipófila. Fermentativa. Colonias húmedas, convexas, brillantes de

bordes lisos y consistencia cremosa. Pueden recordar a las colonias de estafilococos

coagulasa negativa. La descripción de la cepa tipo se realizó por Coyle et al., 1993. Presenta

características fenotípicas y genotípicas semejantes a C. minutissimum, C. singulare y C.

simulans (Tabla 13). Destaca la positividad de la reacción de CAMP y la sensibilidad al factor

vibriostático O/129. Puede ser resistente a tetraciclinas, quinolonas y macrólidos. Se han

descrito cepas con multirresistencia antibiótica (Otsuka et al., 2006).

C. sundsvallense (Collins et al., 1999). No lipófila. Fermentativa. Colonias adherentes al

agar de color ante o amarillentas, de consistencia seca, leñosa. Lo más significativo, por no

parecerse a ninguna otra corinebacteria, es la morfología de sus células en la tinción de Gram,

algunas ramificadas y donde se pueden observar protuberancias en sus extremos, hecho que

no aparece en ninguna otra corinebacteria. Destaca por producir ureasa. La producción de

αGLU y la negatividad en la reducción de nitratos lo diferencia de C. durum con resultados

opuestos.

49
Introducción

C. thomssenii (Zimmermann et al., 1998). No lipófila. Fermentativa. Es una especie rara,

de crecimiento muy lento, con colonias pequeñas, de 0,5 mm de diámetro a las 48 h de

incubación y a las 96 h de incubación tienen un aspecto molar, muy secas y ligeramente

adherentes al agar. Es la única corinebacteria capaz de producir N-Acetyl-β-Glucosaminidasa

(βNAG). Produce ureasa. El perfil API Coryne es 2121125 pero no la identifica en su base de

datos. ​C. tuberculoestearicum (Feurer et al., 2004). Lipófila. Fermentativa. Su denominación

se debe a la producción de TBSA. En la clasificación taxonómica de las corinebacterias lipófilas

(Riegel et al., 1995), mediante hibridación ADN-ADN, se distinguen 5 genoespecies. La

genoespecie I incluye:”C. tuberculoestearicum” LCD8, cepa CDC G 5840 (grupo G2), cepa

CDC F 8156 (grupoG1) y 3 biotipos diferentes de “C. pseudogenitalicum”. En TSA

suplementado con 1% de Tween 80, las colonias son blanquecinas y brillantes, de bordes lisos,

con 1 mm de diámetro después de 24-48 h de incubación a 37oC. En la tinción de Gram se

observan bacilos grampositivos con uno de sus extremos hinchados. Las principales

características bioquímicas se exponen en la Tabla 15. Están basadas en los resultados

obtenidos del estudio de 11 cepas de la colección del Instituto Pasteur, nueve de ellas

provenientes de muestras clínicas humanas y alimentos y dos cepas tipo de C.

“tuberculoestearicum” CIP 107291​T ​y CIP 107067​T​. Los resultados referidos como positivos

corresponden a >80% de las cepas, y se comprobó una elevada coincidencia con los

resultados obtenidos de las cepas tipo “C. pseudogenitalicum” CIP 106714 (difieren en la

fermentación de la maltosa, negativa en éste último). Otras características bioquímicas son: la

fermentación de galactosa y glicerol, y la negatividad de αGLU en todas las cepas estudiadas.

Cuatro especies lipófilas, una oxidativa y tres fermentativas, contienen TBSA: C. urealyticum,

C. kroppenstedtii, C. ureicelerivorans y C. tuberculoestearicum (Tabla 15). Esta doble

característica permite su diferenciación de otras corinebacterias lipófilas con algunas

reacciones bioquímicas variables: C. accolens y CDC grupo G.

C. tuscaniae (Riegel et al., 2006). No lipófila. Oxidativa. Aerobia estricta. Colonias

 blancas, redondas, de bordes lisos y no hemolíticas. Fenotípicamente comparte semejanzas

con otras corinebacterias fermentativas con actividad PYZ y PAL, sobre todo con C.

minutissimum con quien puede ser confundida (Tabla 16). El perfil API es 2100124. C.

50
Introducción

tuscaniae hidroliza el hipurato pero no la tirosina, produce ácido de la fermentación de maltosa

y la reacción de CAMP es negativa; estos resultados son opuestos en C. coyleae. De C.

minutissimum se diferencia por su capacidad de crecer en anaerobiosis, hidrolizar tirosina

además de fermentar manitol y poseer DNAsa. De C. aurimucosum, de perfil bioquímico muy

parecido a C. minutissimum, se diferencia porque produce pigmentación amarilla en medio de

cultivo con sangre, hidroliza la tirosina pero no posee DNAsa, y puede hidrolizar hipurato. De C.

amycolatum se diferencia por el aspecto de las colonias, secas y enceradas con bordes

irregulares además de no poseer ácidos micólicos. La única cepa descrita, aislada en sangre,

ha sido resistente a ceftazidima y fosfomicina pero sensible a amoxicilina, eritromicina,

tetraciclina, gentamicina y vancomicina. En su filogenia, la especie más próxima es C.

appendicis (97,4% de semejanza en la secuencia del gen 16S rADN) de la que se diferencia

por tener actividad ureásica y ser lipófila. Con C. coyleae, la semejanza es del 97%.

Tabla 16. Discriminación de C. tuscaniae de otras corinebacterias relacionadas: todas PAL y PYZ
positivas.

F/O LIP URE HIP TIR CAMP

Producción de ácido a partir de:
Glucosa Maltosa Sucrosa
 Otras
Otras

51

C. tuscaniae O - - + - - + + - Oxidativa C. coyleae F - - - - + +​a ​- - C. minutissimum F - - - + V + + V DNAsa

Fermenta manitol C.
aurimucosum F - - + + nd + + + Colonias
pigmentadas (amarillentas, negras) C. appendicis F + + - - - + b​ ​+ b​ ​- Crecimiento lento
Colonias pequeñas F/O
metabolismo Fermentativo/Oxidativo Reacción positiva (+), negativa (-), variable (V).​a ​Fermentación lenta, las 48 h. ​b

Fermentación muy lenta, hasta siete días en API Coryne. LIP, lipofilia. URE, ureasa. HIP, hidrólisis de hipurato. TIR,
hidrólisis de tirosina. nd, no datos.

C. ulcerans (Riegel et al., 1995d). No lipófila. Fermentativa. Colonias secas, enceradas,

grisáceo blanquecinas, con ligera hemólisis y de 1 a 2 mm de diámetro a las 24 h.

Filogenéticamente muy relacionada con C. diphtheriae y C. pseudotuberculosis, todas ellas

pueden producir TD y cuadros clínicos semejantes. API Coryne ​TM ​lo identifica bien. Las

diferencias fenotípicas entre ellas se recogen en la Tabla 14.

 C. urealyticum (Pitcher et al., 1992). Lipófila. Metabolismo oxidativo. Es aeróbica

estricta. Colonias puntiformes de crecimiento lento, blanco-grisáceas, convexas y lisas en agar

Introducción

sangre. Los sistemas comerciales la identifican bien. Destaca su intensa y rápida capacidad

ureásica. Anteriormente denominada Corynebacterium grupo D2, y considerada por Hollis y

Weaver en 1981 como variante nitrato-negativa de C. pseudodiphtheriticum (mismas

reacciones en API Coryne salvo esta prueba) además de no ser lipófila. Aunque hay cepas

sensibles a antibióticos (Zapardiel et al., 1997; Funke y Bernard, 2007), es frecuente observar

multirresistencia (Soriano et al., 1990; Soriano et al., 1995; Fernández-Natal et al., 2001). La

diferenciación de otras corinebacterias lipófilas con capacidad ureásica se describe en la Tabla

10. El contenido medio de G+C de 64,2% y el genoma de la cepa tipo consiste en un

cromosoma circular de 2.369. 219 pb, explican su comportamiento (Tauch et al., 2008; Soriano

y Tauch, 2008).

C. ureicelerivorans (Yassin, 2007). Lipófila. Fermentativa. Anaerobia facultativa.

Colonias blanco-grisáceas, pequeñas (0,1 a 1 mm de diámetro) y secas, de bordes lisos, no

hemolíticas. Debe su nombre a la rápida utilización de la urea, siendo positiva su hidrólisis en

60 seg en la galería API Coryne. Sin embargo la producción de ácido a partir de azúcares ha

de interpretarse a las 48-72 h: produce ácido de glucosa, débilmente de ribosa y xilosa pero no

de maltosa y sacarosa. Contiene ácidos corinomicólicos y TBSA (4,8%). Perfil API: 6101104,

que lo interpreta como C. bovis pero se diferencia porque ésta es βGAL positiva y la única

corinebacteria oxidasa-positiva; además de ureasa negativa y fermentación de maltosa positiva

en medios convencionales. Otras reacciones bioquímicas: reducción de nitratos, hidrólisis de

esculina, gelatina y esculina negativa. La positividad de PAL e hidrólisis del hipurato, así como
la no fermentación de maltosa y sacarosa, la diferencian de CDC gr F1 (Tabla 10). La especie

con características fenotípicas más parecidas es C. urealyticum, ambas lipófilas con colonias

pequeñas de crecimiento lento, y potente capacidad ureásica, pero C. urealyticum es oxidativa,

aerobia estricta y con frecuencia presenta multirresistencia antibiótica y no utiliza ningún

carbohidrato, siendo importante la lectura de la galería API Coryne a las 72 h para no

interpretar una reacción falsa negativa e identificación errónea de C. ureicelerivorans. De C.

appendicis, lipófila, fermentativa, de crecimiento lento y morfología de las colonias semejante,

se diferencia por la capacidad ureásica más débil, no hidroliza hipurato y la fermentación aún

más lenta de carbohidratos (hasta siete días de incubación). La relación filogenética más

próxima es con C. mucifaciens con quien presenta una divergencia en la secuencia del gen

16S rADN de solo 1,4%, pero con fenotipo muy diferente: ureasa negativa, no lipofilia y

52
Introducción

colonias muy mucosas y amarillas, aunque no todas presentan esta morfología, como la cepa

denominada en GenBank “closest to C. mucifaciens”, que presenta colonias blanquecinas de 1

mm de diámetro y no mucoides (Cantarelli et al., 2006).

C. xerosis (Lehmann y Neumann “Bacterium xerosis“, 1896; Skerman et al., 1980). No

lipófila. Fermentativa. Colonias secas, rugosas, de bordes irregulares, pigmentación amarilla,

de 1 a 1,5 mm de diámetro después de 24 h de incubación. En el pasado ha podido ser

identificada erróneamente tratándose en realidad de C. amycolatum (Funke et al., 1996a). No

consta en la base de datos de API Coryne ni Biolog (Lindemann et al., 1995) y los perfiles

obtenidos con API han sido 2110325 y 3110325, por la variabilidad en la reducción de los

nitratos. Una prueba que destaca en su identificación es la positividad de αGLU, como prueba
diferenciadora de C. amycolatum; sin embargo, se han descrito cepas de C. amycolatum

αGLU-positiva y cepas de C. xerosis αGLU-negativa (Wauters et al., 1998), y existen otras

especies que también la producen como C. freneyi con características fenotípicas muy

similares (Tabla 9), siendo la morfología de las colonias y la secuenciación del ITS 16S-23S las

pruebas más útiles para su discriminación (Funke y Frodl, 2008). Por otro lado, C. hansenii es

una especie αGLU negativa pero estrechamente relacionada con C. xerosis, coincidiendo en

resultados de pruebas fenotípicas como el aspecto de las colonias secas y amarillentas o el

crecimiento en agar sangre a 20oC y la no fermentación de glucosa a 42oC; la secuenciación

16S rADN e ITS 16S-23S no permiten su discriminación, únicamente mediante hibridación

ADN-ADN (Renaud et al., 2007). Por tanto se requiere una identificación polifásica para una

acertada discriminación entre un grupo de corinebacterias fermentativas y no lipófilas

estrechamente relacionadas, tanto en la caracterización microbiológica como en las

implicaciones en clínica humana.

53
Introducción

1.3.1 Especies relacionadas con la medicina humana. Patología asociada

 A continuación se detallan, por orden alfabético, las 45 especies de corinebacterias con

relevancia clínica humana, el tipo de muestra donde se han aislado y/o la enfermedad asociada

con la infección (Coyle y Lipsky, 1990; Esteban y Soriano, 1997; Bernard, 2002; Bernard,

2005; Funke y Bernard, 2007). Se indican las referencias bibliográficas no incluidas en las

anteriores.

C. accolens. Se ha relacionado con diversos cuadros clínicos como endocarditis nativa

aórtica y mitral, sepsis, meningitis, queratoconjuntivitis, sinusitis, tonsilitis, absceso lingual,

endocervicitis y úlcera cervical, así como de muestras respiratorias y conjuntiva sana.

C. afermentans subsp. afermentans. Forma parte de la flora normal de la piel y se ha

descrito su implicación en sepsis, bacteriemias, exudado de oído medio (Simonet et al., 1993;

Renaud et al., 1996) y absceso pleuropulmonar (Minkin et al., 2004).

C. afermentans subsp. lipophilum. Esta corinebacteria ha sido aislada en cuadros de

bacteriemia, endocarditis sobre válvula protésica (Sewell et al., 1995), infección de partes

blandas (abscesos y heridas superficiales) y en empiema de pulmón (Minkin et al., 2004).

También se ha aislado de conjuntiva sana.

C. amycolatum. Forma parte de la flora normal de la piel y es una de las corinebacterias

más frecuentemente aisladas en muestras clínicas humanas. Se ha aislado en diversas

situaciones clínicas como bacteriemia, sepsis, endocarditis sobre válvula nativa, infección de

material protésico (catéteres, válvulas cardiacas, artroplastias, marcapasos, etc.), osteomielitis,

infección de herida quirúrgica y del tracto urinario.

C. appendicis. El único aislado descrito ha sido a partir de un absceso abdominal en un

paciente diagnosticado de apendicitis.

C. argentoratense. Se ha aislado de sangre, y exudados faríngeos con y sin faringitis.

Su asentamiento en una biopelícula en el tejido adenoide explicaría la patogenicidad de otitis

recurrentes en niños (Kania et al., 2008).

C. atypicum. La única cepa descrita se aisló de una muestra clínica humana no

identificada que fue enviada a una unidad de referencia de microorganismos anaerobios en el

Reino Unido.

54
Introducción

C. aurimucosum. Su primera descripción fue a partir de una cepa aislada de sangre en

un paciente con bronquitis con significado clínico indeterminado. Posteriormente, y como

corinebacteria productora de pigmento negro inicialmente propuesta como C. nigricans y

considerada sinónimo de C. aurimucosum en la actualidad. Ha sido aislada de LCR pero

principalmente de muestras genitourinarias femeninas: orina, vulva, glándula de Bartolino,

vagina, cérvix, endometrio y también de placenta y líquido amniótico, produciendo en

ocasiones complicaciones del embarazo como aborto espontáneo, muerte fetal y parto

pretérmino, considerándose un posible patógeno oportunista durante el embarazo. También se

ha aislado de infecciones articulares y óseas, siendo la segunda corinebacteria más frecuente

en estas muestras después de C. striatum.

C. auris. Se ha aislado del conducto auditivo externo normal o patológico (otitis) y de

hemocultivos (Babay et al., 2004) sin indicación de su significado clínico.

C. bovis. Normalmente asociado con enfermedad bovina (pielonefritis y mastitis). En

humanos ha sido recuperada de mastoiditis, otitis media, infección del SNC, endocarditis sobre

válvula protésica, úlcera cutánea crónica, hemocultivo y conjuntivitis (Dutly et al., 2003).
 CDC grupo F1. Aislada de diversas muestras clínicas (Chudnicka et al., 2003) como

sangre, exudados de herida y conjuntival, cérvix, líquido de diálisis y en ITU; en un caso esta

corinebacteria fastidiosa con capacidad ureásica, capaz de producir cristales de estruvita

(Digenis et al., 1992) y sensible a antibióticos se aisló en un paciente con cistitis incrustante e

ITU previas persistente por C. urealyticum y con buena evolución microbiológica al mes de ser

tratado con amoxicilina y ácido acetohidroxámico (Soriano y Ponte, 1992).

CDC grupo G. Forma parte de la microflora de la axila (Taylor D et al., 2003). Se ha

descrito en prostatitis, con mayor concentración en semen que en orina (Türk et al., 2007),

bacteriemia, LCR, infecciones de catéter y marcapaso, infección de herida, esputo, líquido de

mediastino y sinovial. Puede ser multirresistente a antibióticos.

C. confusum. Es una corinebacteria infrecuente en muestras humanas. La descripción

de esta especie se hizo a partir de dos cepas aisladas de exudados de una infección de pie y

una aislada de sangre. Posteriormente se identificó otra cepa procedente de un absceso de

mama.

55
Introducción

C. coyleae. Se ha descrito como causa de sepsis en pacientes adultos

inmunocomprometidos o no y con manipulación diagnóstico-terapéutica, y de bacteriemias en

neonatos a término y prematuros, con antecedentes de parto vaginal precedido con frecuencia

de rotura prolongada de membranas o instrumentalización del mismo. También ha sido aislado

de infecciones de partes blandas (exudado superficial y absceso subcutáneo postraumático),

de bolsa de concentrado de hematíes en reacción febril post-transfusional (Fernández- Natal et

al., 2008), de orina y de líquido prostático en pacientes con prostatitis y sanos.

C. diphtheriae. Agente causal de la difteria clásica faríngea y difteria cutánea. La difteria

clásica faríngea está producida por cepas toxigénicas, mientras que las aisladas de lesiones

cutáneas pueden o no producir toxina. Las cepas no toxigénicas pueden producir faringitis,

endocarditis o infección de cuerpo extraño. Tanto las cepas no toxigénicas o toxigénicas de

localización no faríngea pueden causar enfermedad importante en cierto tipo de población: sin

techo, de instituciones cerradas, alcohólicos y drogadictos (Huber-Schneider et al., 1994). Son

susceptibles todos aquellos que no hayan sido vacunados durante la infancia o no revacunados

en edad adulta. La afectación sistémica puede dar lugar a fiebre, neuritis, nefritis, discitis,

miocarditis y pérdida de la audición. Tanto la difteria clásica (cepas toxigénicas) como las

cepas no toxigénicas de C. diphtheriae y las toxigénicas de C. ulcerans y C.

pseudotuberculosis han de ser notificadas. Aunque el tratamiento de elección son penicilinas o

macrólidos, se han descrito resistencias a eritromicina y rifampicina. Telitromicina también se

ha mostrado eficaz. Entre el 20 y 60% de los adultos de Estados Unidos de América no están

protegidos con anticuerpos frente a la toxina diftérica, lo que significa un riesgo potencial para

la salud pública, debiendo además considerarla como una enfermedad re emergente. En

España, desde el año 2000 a 2007, el porcentaje de población diana vacunada ha sido del 98%

y no ha sido declarado ningún caso de difteria.

Disponible en: http://www.who.int/vaccines/globalsummary/inmunization/country

C. durum. Su primer aislamiento fue a partir de medios no selectivos donde se habían

cultivado muestras respiratorias, esputo y lavado bronquial. Es la corinebacteria que más se

aísla de garganta en personas sanas. Posteriormente se ha aislado en bacteriemia, gingivitis y

abscesos. Su potencial patógeno no está claro.

 56
Introducción

C. falsenii. La única información disponible sobre el aislamiento en muestras clínicas

humanas de esta corinebacteria, de colonias con pigmentación amarilla, es la referencia

bibliográfica donde se describe como nueva especie a partir de cuatro cepas aisladas entre

1991 y 1995 de dos adultos y dos niños, procedentes de líquidos biológicos estériles, tres de

sangre, dos de ellas aisladas de pacientes con enfermedad oncohematológica, y una de LCR

sin más información sobre su aislamiento primario.

C. freneyi. Se ha aislado en infecciones de tejidos blandos (abscesos, úlceras

cutáneas), bacteriemia, muestras del tracto genital femenino sin patología asociada, biopsia de

duodeno, testículo, conducto auditivo externo y orina (Funke y Frodl, 2008).

C. glucuronolyticum (sinónimo de C. seminale). Probablemente forme parte de la flora

genitourinaria masculina normal y puede causar infecciones, mientras que su presencia en

mujeres es de significación incierta. También se ha aislado de sangre, líquido peritoneal y

líquido de diálisis. Algunas cepas han mostrado multirresistencia a antibióticos.

C. hansenii. El único caso publicado de esta corinebacteria procedió de una muestra

de pus de drenaje de liposarcoma en cultivo mixto con S. aureus meticilín-sensible y C.

pseudodiphtheriticum (Renaud et al., 2007).

C. imitans. La primera cepa descrita fue aislada de un exudado nasofaríngeo de un niño

rumano de cinco meses no vacunado frente a la difteria, con cuadro clínico similar a esta

enfermedad donde se probó la transmisión persona-persona (a tres adultos).

 C. jeikeium. Es una de las corinebacterias que con más frecuencia y diversidad se ha

relacionado con patología infecciosa humana, destacando su aislamiento de sangre como

responsable de sepsis en pacientes inmunocomprometidos hospitalizados y endocarditis,

destacando las relacionadas con válvula protésica mecánica (Mookadam et al., 2006), así

como meningitis (Johnson et al., 1992; Klibanov et al., 2003), neumonía, infección de material

protésico, infección de herida, osteomielitis (von Graevenitz et al., 1998; Ordóñez-Palau et al.,

2007), ITU, otitis media e infección nosocomial (coloniza la piel de pacientes hospitalizados

sobre todo en axila) (Knox y Holmes, 2002). Habitualmente presenta multirresistencia

antibiótica, reduciendo las posibilidades terapéuticas.

C. kroppenstedtii. La primera descripción fue a partir de un aislado procedente de

esputo de una mujer de 82 años. Posteriormente se ha aislado de un absceso de mama

57
Introducción

(Riegel et al., 2004), mastitis granulomatosa, enfermedad inflamatoria de origen desconocido,

predominando este hallazgo en mujeres maoríes y de islas del Pácifico Sur (Taylor et al., 2003;

Kieffer et al., 2006), en bacteriemia y en biopsia pulmonar (Tauch et al., 2008).

C. lipophiloflavum. El único aislado descrito en 1997 fue de un cuadro de vaginosis

atribuido a esta especie lipófila, ureásica, oxidativa y con colonias de pigmentación amarilla.

C. macginleyi. Se ha relacionado su aislamiento fundamentalmente de muestras

oculares, tanto de conjuntiva sana como de conjuntivitis. Otros aislados procedieron de

muestras genitourinarias (orina, uretra, semen y vagina), respiratorias (exudado nasal, esputo y

lavado broncoalveolar), abscesos, sangre (cuadros de bacteriemia y endocarditis), LCR

(catéter de derivación) y catéter endovenoso.

 C. matruchotii. Es un patógeno humano infrecuente. Se ha aislado a partir de muestras

de cavidad oral como flora no habitual, principalmente de cálculos y placas de depósito. Por su

capacidad calcificante se ha relacionado con estenosis aórtica, reproducida en modelo animal

(conejos de Nueva Zelanda) (Cohen et al., 2004)

C. minutissimum. Se aísla de la flora normal de la piel y se ha aislado en procesos

infecciosos como endoftalmitis, peritonitis, bacteriemia, endocarditis (Aperis y Moyssakis,

2007), meningitis (Dalal y Likhi, 2008), pielonefritis (Ahmad y Ahmad, 2005), infección del tracto

respiratorio e infecciones de partes blandas como infección de herida superficial y celulitis y

bacteriemia (Granok et al., 2002), absceso costocondral en paciente inmunodeprimido

(Bandera et al., 2000) y dudosa asociación con eritrasma.

C. mucifaciens. Se ha aislado, junto a otras especies del género Corynebacterium, de la

microflora normal cutánea de la axila (Taylor D et al., 2003) y del polvo en granja, siendo

motivo de interés la menor prevalencia de asma y atopia en niños que viven en este ambiente

(Korthals et al., 2008), pero también se plantea la posibilidad de patógeno respiratorio, por su

inhalación. Se ha propuesto como agente potencial de otitis media secretora, sinusitis crónica y

poliposis nasal (Morinaka et al., 2006). La muestra de procedencia más frecuente de su

aislamiento en cuadros infecciosos ha sido la sangre y otros líquidos estériles como líquido

articular (artritis), peritoneal y de diálisis. También se ha aislado en infecciones de tejidos

blandos como abscesos, heridas superficiales (por mordedura de gato), úlceras de pie

diabético (Dowd et al., 2008), biopsias de tejidos. “Closest to C. mucifaciens” es la

58
Introducción

denominación de aislados de esta especie que no presentan las características fenotípicas

normales, con colonias blanquecinas, pequeñas, no mucosas, y se han descrito bacteriemias,

en algún caso de evolución fatal, por esta variante (Bernard et al., 2002; Cantarelli et al., 2006)

C. mycetoides. Patógeno humano muy infrecuente y conocido desde hace muchos

años, Se ha comunicado su aislamiento de úlceras cutáneas (Collins (ex Castellani 1942),

1983) y no se ha hecho referencia alguna a esta especie en los manuales de Microbiología en

los últimos años (Funke y Bernard, 1999).

C. propinquum. Forma parte de la flora normal orofarínge y está considerado como

patógeno respiratorio así como causa de endocarditis sobre válvula nativa. Ha sido la

corinebacteria más frecuente en alguna serie publicada de bacteriemias (Babay et al., 2004).

C. pseudodiphtheriticum. Forma parte de la flora normal orofaríngea. En alguna

publicación se ha señalado como la especie del género Corynebacterium más frecuentemente

aislada de muestras respiratorias (Riegel et al, 1996) pudiendo ocasionar neumonía

(ocasionalmente con formación de pseudomembranas que semeja difteria) y sobre todo

neumonía extrahospitalaria (Chudnicka y Koziol-Montewka, 2003). Otras patologías

ocasionadas han sido endocarditis, infección de piel, queratitis y conjuntivitis.

C. pseudotuberculosis. Aislada de linfadenitis ocupacional (manipuladores de ovejas).

También puede ocasionar cuadros clínicos de afectación faríngea similar a difteria como ocurre

con C. ulcerans y C. imitans. Algunas cepas pueden producir toxina diftérica.

C. resistens. Únicamente se han descrito cinco aislados procedentes de bacteriemia,

celulitis y aspirado bronquial. Cuatro de las cinco cepas descritas presentaron multirresistencia

antibiótica.

C. riegelii. Desde su descripción en 1998, esta infrecuente corinebacteria se había

relacionado exclusivamente con ITU femenino (Ferrer et al., 2001; Verdaguer et al., 2008)
hasta la publicación de Bernard et al., en 2002, que recoge su aislamiento, por primera vez, de

cultivos de sangre en tres casos: dos adultos y una sangre de cordón.

C. simulans. Se ha descrito su aislamiento en tres muestras clínicas: de un absceso de

pie obtenido por punción y en cultivo puro, de una biopsia de nódulo linfático y de un forúnculo;

Posteriormente se ha aislado también de sangre y bilis. Sin embargo su significado clínico no

está claramente definido.

59
Introducción

C. singulare. Los dos únicos aislados descritos procedían de sangre y semen sin

información clínica añadida.

C. striatum. Había sido considerado como contaminante y de baja patogenicidad hasta

la década de los 80, y sin embargo desde entonces ha sido creciente su valoración e

implicación en diversas patología infecciosas como meningitis (Weiss et al., 1996) sepsis en

adultos y niños (Adderson et al., 2008), endocarditis sobre válvula nativa y protésica,

neumonía, peritonitis (Ubaldi et al., 2004), infecciones osteoarticulares y de orificio de salida de

catéter de diálisis peritoneal (Clark et al., 1999; Scholle, 2007; Roux et al., 2004), infección de

tejidos blandos (Adderson et al., 2008) destacando como la corinebacteria más frecuente en la

infección de pie diabético (Dowd et al., 2008) e infección nosocomial (Renom et al., 2007) que

puede ser mediante transmisión persona–persona (Leonard et al., 1994). Un aspecto a

destacar es la aparición de aislados multirresistentes en las referencias bibliográficas más

recientes (Otsuka et al., 2006; Scholle, 2007 ̧ Dowd et al., 2008) o niveles altos de CMI a

nuevos antimicrobianos (Salas et al., 2008).

C. sundsvallense. Se ha aislado de sangre, exudado vaginal, drenaje de senos

paranasales y absceso de ingle.

C. thomssenii. Es una especie rara en infecciones humanas. Además del aislamiento

descrito a partir de polvo medioambiental en Canadá, solo se ha descrito en un paciente

diagnosticado de neumonía y fallo renal, procedente de forma repetida de líquido pleural.

C. tuberculoestearicum. Se ha aislado de tejido mamario de mastitis granulomatosa

con predominio en mujeres polinesias, de nódulo inguinal (chancro blando), nódulo linfático,

orina, sangre, uretra, líquido peritoneal, médula ósea, lesión cutánea (lepra lepromatosa y

lesión no leprosa) y de úlceras de pie diabético (Dowd et al., 2008).

C. tuscaniae. El único aislado descrito fue en tres muestras de sangre en un caso de

endocarditis sobre válvula aórtica nativa.

C. ulcerans. Se ha descrito su implicación en infección de tejidos blandos (úlceras),

sinusitis necrotizante y faringoamigdalitis con pseudomembranas, semejante a difteria. Pueden

ser cepas productoras de toxina diftérica, como ocurre con C. diphtheriae y C.

pseudotuberculosis (con la que está estrechamente relacionada, <2% de diferencia genética).

En 2005 se identificó, por primera vez, cepas toxigénicas de C. ulcerans en secreción nasal de

60
Introducción

gatos domésticos, pudiendo ser reservorio de infección humana (De Zoysa et al., 2005) y se ha

descrito un caso de difteria en paciente inmunodeprimido y en su perro (Lartigue et al., 2005).

C. urealyticum. Es un patógeno oportunista (Marty et al, 1991) que causa infecciones

del tracto urinario (cistitis y pielonefritis aguda, cistitis y pielonefritis incrustante; asociación con

presencia de cristales de estruvita y pH alcalino de la orina), bacteriemias en pacientes con

pielonefritis, nefrolitiasis, nefrostomía percutánea (Chung et al., 2008) y sin patología urológica
(Soriano et al., 1993a; Fernández-Natal et al., 2001), HIV o neoplasias infección de tejidos

blandos, osteomielitis, pericarditis, neumonía, peritonitis y endocarditis. Por otro lado, es un

patógeno nosocomial, coloniza la piel de pacientes hospitalizados que han recibido tratamiento

con antibióticos de amplio espectro mediante transmisión aérea y contacto (Soriano y Tauch,

2008; Soriano, 2009).

C. ureicelerivorans. La primera descripción de esta especie se hizo a partir de una cepa

aislada de sangre en un paciente diagnosticado de sepsis (Yassin, 2007). Posteriormente se ha

publicado su aislamiento en seis pacientes adultos con patología digestiva,

inmunocomprometidos o no, en cinco bacteriemias y un caso de infección de líquido ascítico,

destacando el alto porcentaje de resistencia a antibióticos del grupo MLS​B ​(Fernández-Natal et

al., 2008).

C. xerosis. La mayoría de los casos publicados antes de 1996 pudieron tratarse en

realidad de cepas de C. amycolatum si no se identificaron por técnicas moleculares.

Infrecuente patógeno humano, constituye flora normal de piel y exudados vaginales sin

patología. Como causa de procesos infecciosos, se aisló en sangre (sepsis, endocarditis)

(Cattani et al., 2000; Pessanha et al., 2003), absceso cerebral (Wooster et al., 1999), artritis

séptica postquirúrgica (Booth et al., 1991), infecciones oculares por cuerpo extraño, lentes de

contacto o cirugía refractiva (Macedo et al., 2005; Oliveira et al., 2006) y desfibrilador

implantable (Marti et al., 2008).

 61
Introducción
1.3.2. Otras especies del género Corynebacterium
Se han descrito 32 especies del género Corynebacterium aisladas de animales, vegetales o
ambiente, 25 de las cuales recuperadas de muestras clínicas de animales sanos o enfermos.
Entre estas últimas, 10 especies también han sido aisladas de muestras clínicas humanas
(Tabla 17).
Tabla 17. Género Corynebacterium: 25 especies de origen animal.
Corynebacterium spp. Origen: Animal Referencia bibliográfica
C. aquilae Águila (tracto respiratorio) Fernández-Garayzábal et al., 2003 C. amycolatum* Vaca (mastitis) Hommez et al., 1999 C.
ammoniagenes a​ ​Rata y cabra. Ambiente
(vagina y placa subgingival)
62
Collins, 1987
C. auriscanis Perro Collins et al., 1999 C. bovis* Bóvidos (pielonefritis y mastitis) Bergey et al., 1923
Watt y Rossbach, 2000 Dutly et al., 2003 C. camporealensis Oveja Fernández-Garayzábal et al., 1998 C. capitovis Oveja Collins et
al., 2001 C. caspium Foca mar Caspio Collins et al., 2004 C. ciconiae Cigüeña negra (tráquea) Fernández-Garayzábal et al., 2004
C. cystitidis Vaca Yanagawa y Honda, 1978 C. falsenii* Águila Fernández-Garayzábal et al., 2003 C. felinum Gato salvaje Collins et
al., 2001 C. glucuronolyticum* Cerdo (tracto urogenital) Devries et al., 2000 C. jeikeium* Gato doméstico ITU b​ ​Puskar et al., 2007
C. kutcheri Rata y ratón
(abscesos subcutáneos)
Bergey et al., 1923
C. mastitidis Leche de oveja (mastitis subclínica) Fernández-Garayzábal et al., 1997 C. minutissimum* Vaca (mastitis) Hommez et
al., 1999 C. phocae Foca común Pascual et al., 1998 C. pilosum Vaca Yanagawa y Honda, 1978 C. pseudotuberculosis* Équidos,
bóvidos, óvidos Eberson, 1918 C. sphenisci Pingüino salvaje Goyache et al., 2003a C. spheniscorum Pingüino salvaje Goyache et
al., 2003b C. ulcerans* Vaca (mastitis).
Gato (nasofaringe) Perro (nasofaringe)
Hommez et al., 1999 De Zoysa et al., 2005 Lartigue et al., 2005 C. urealyticum* Perro y gato ITU​b ​Gómez et al., 1995
Bailiff et al., 2005 C. xerosis* Cerdo, cabra Vela et al., 2006 *También relacionada con medicina humana (10 especies); a​ ​antes,
Brevibacterium ammoniagenes; b​ ​infección del tracto urinario.
De las 10 especies de origen animal que comparten aislamiento en muestras de origen
humano, destacan C. urealyticum y C. jeikeium que pueden estar involucradas en ITU animal
(Bailiff et al., 2007; Puskar et al., 2007) y humana (así como no-urinaria) (Soriano et al.,1990;
Introducción
Soriano et al.,1993; Fernández-Natal et al., 2001; Tauch et al., 2005) y en infección nosocomial
por su transmisión a través del aire o por contacto, colonizar la piel de pacientes hospitalizados
y posteriormente ser causa de infección (Nieto et al., 1996; Rosato et al., 2001; Soriano y
Tauch, 2008).
No se han aislado 24 de estas especies a partir de muestras clínicas humanas: 15 solo
en animales y nueve solo en vegetales o ambiente (Tablas 17 y 18).
En la Tabla 18, se exponen las 14 especies aisladas de plantas o ambiente, seis de ellas
son agentes causales de patología infecciosa humana.
Tabla 18. Género Corynebacterium: 14 especies de origen vegetal y/o ambiental.
Corynebacterium spp. Origen: Vegetal y/o Ambiental Referencia bibliográfica
C. callunae Plantas Yamada y Komagata, 1972
C. casei Superficie de quesos Brennan et al., 2001
C. efficiens Plantas y suelo Fudou et al., 2002
C. glaucum Colorante de cosmético Yassin et al., 2003
C. glutamicum Plantas. Ambiente Abe et al., 1967
C. halotolerans Suelo en China Chen et al., 2004
C. jeikeium* Ambiente hospitalario Rosato et al., 2001;
Tauch et al., 2005 C. mooreparkensee (sinónimo de C. variabile)
63 ​Superficie de quesos Brennan et al., 2001
Gelsomino et al., 2005 C. mucifaciens* Polvo ambiente en granja Korthals et al., 2008
C. mycetoides* Plantas (Ex Castellani 1942)
Collins, 1983 C. terpenotabidum Suelo; degrada escaleno Takeuchi et al., 1999
C. thomssenii* Aire Bernard et al., 2002
C. tuberculoestearicum* Atún enlatado (alimento)
Polvo ambiente en granja
Feurer et al., 2004 Korthals et al., 2008
C. urealyticum* Ambiente hospitalario Nieto et al., 1996
​
Soriano y Tauch, 2008 C. vitaeruminis a​ Ecosistemas lácteos Trüper y De ́ Clari, 1997
*: También relacionado con medicina humana (seis especies). a​ ​antes, Brevibacterium vitarumen
Introducción

En la Tabla 19 se recogen los cambios taxonómicos en las especies y subespecies del

género Corynebacterium, por tratarse de sinónimos o ser excluidas de este género.

Tabla 19. Cambios en la taxonomía de especies del género Corynebacterium.

Taxonomía previa Taxonomía actual Año Origen
a

b​
Corynebacterium aquaticum ​ Leifsonia aquatica 2000 H

Corynebacterium beticola c​ ​Erwinia herbicola

Pantoea agglomerans (sin validación)
 1980
1989
V
V

64

Corynebacterium equi c​ ​Rhodococcus equi 1983 A, H

Corynebacterium fascians c​ ​Rhodococcus fascians 1984 A, H

 1984
1983
Corynebacterium flaccumfaciens subsp. betae ​c
1983
Corynebacterium flaccumfaciens subsp.oortii ​c
1984
Corynebacterium flaccumfaciens subsp. poinsettiae c​
1983
Curtobacterium flaccumfaciens
V
Curtobacterium flaccumfaciens
V
Curtobacterium flaccumfaciens
V
1983

Corynebacterium hoagii , Corynebacterium equi c​ ​Rhodococcus equi 1977 A, H

Corynebacterium ilicis​c ​Arthrobacter ilicis 1982 V

Corynebacterium insidiosum ​c ​Clavibacter michiganensis subsp. Insidiosus 1984 V

V ​V V
Corynebacterium michiganense​c ​Clavibacter michiganensis subsp.
michiganensis Clavibacter V
michiganensis subsp. nebraskensis V ​V V
Clavibacter michiganensis subsp.
sepedonicus Clavibacter V
michiganensis subsp. tessellarius
1984 V ​V V
1984
V
1984
1982

Corynebacterium iranicum ​c ​Rathayibacter iranicus 1993 V

Corynebacterium lilium c​ ​Corynebacterium glutamicum 1991 V

Corynebacterium mooreparkense Corynebacterium variabilis 2005 V

Corynebacterium paurometabolum c​ ​Tsukamurella paurometabola 1988 A

Corynebacterium pyogenes​c ​Arcanobacterium pyogenes 1997 H

Corynebacterium rathayi ​c ​Rathayibacter rathayi 1993 V

Corynebacterium sanguinis d​ ​Brevibacterium sanguinis 2004 H

Corynebacterium tritici b​ ​Rathayibacter tritici 1993 V

a​
humano (H), animal (A), vegetal o ambiental (V); b​ ​(Evtushenko et al., 2000); c​ ​Disponible en:
www.bacterio.cict.fr/c/corynebacterium.htlm; d​ ​(Wautters et al., 2004).
Introducción
1.4 IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DEL GÉNERO Corynebacterium
En taxonomía bacteriana, es necesaria la identificación polifásica (Tabla 20) que utiliza
conjuntamente criterios fenotípicos y genotípicos (Vandamme et al., 1996​; ​Rodicio y Mendoza,
2004; Bernard, 2005).
Tabla 20. Esquema de taxonomía polifásica propuesto por Vandamme et al., 1996.
Información FENOTÍPICA ​RASGOS EXPRESADOS MARCADORES QUIMIOTAXONOMICOS
Morfología Fisiología (API, Biolog, etc.) Enzimología Serología
65 ​Ácidos grasos celulares Ácidos micólicos Lípidos polares Quinonas Poliaminas Componentes de la pared celular
Exopolisacáridos ​Información GENOTÍPICA
Análisis de BIOMOLÉCULAS Análisis del perfil
ARN ​
PROTEICO ​ ADN Total Segmentos ​- Análisis electroforético de las proteínas celulares totales o las de la cubierta
(uni- o bidimensional) - Análisis electroforético enzimático
- Contenido G+C mol%
- Secuenciación de bases
- Análisis de restricción
- Perfiles de bajo peso
(RPLP, PFGE) molecular.
- Genoma - Hibridación ADN-ADN
- Fingerprinting (Ribotipado, ARDRA, RAPD, AFLP) - Sondas ADN - Secuenciación ADN
1.4.1 Identificación fenotípica
Atiende a aspectos morfológicos, bioquímicos y quimiotaxonómicos.
Identificación morfológica
La observación microscópica y macroscópica aporta la información inicial, básica y de
gran valor para la identificación del género Corynebacterium.
Tinción de Gram. Prueba capital, rápida y barata, que permite conocer la morfología
bacteriana, incluyendo/excluyendo en un determinado género, e, incluso, orientar o asignar una
especie. Se observan bacilos grampositivos, irregularmente teñidos en forma de maza,
“coryne”, a excepción de las cinco especies descritas anteriormente: C. durum (largos,
filamentosos, en ocasiones con ensanchamientos), C. matruchotii (filamentosos, semejante a
Introducción

un látigo), C. sundsvallense (protuberancias en los extremos), C. atypicum (pleomórficos,

cortos, agrupados en pares, extremo con extremo, cadenas, o filamentos curvados con

extremos engrosados) o C. tuberculoestearicum (bacilos grampositivos con uno de sus

extremos hinchados).

Características del cultivo. Velocidad de crecimiento (desde 18-24 h a 72-96 h).

Morfología de las colonias: húmedas o secas, pigmentación (Tabla 21), bordes lisos o rugosos,

brillante o mate, opaca o traslúcida como C. diphtheriae biotipo intermedius y C.

kroppenstedtii, tamaño, hemólisis (C. ulcerans), satelitismo (C. accolens), o adherencia al agar,
esta última característica solo presente en algunas especies: C. auris, C. aurimucosum, C.

durum, C. sundsvallense y C. thomssenii. Posibilidad de crecimiento en anaerobiosis, o a

diferentes temperaturas (20o, 37o o 42a), (Wauters et al.,1998) y en determinados medios de

cultivo utilizados en la práctica diaria o no como agar chocolate y manitol (rasgo infrecuente y

diagnóstico, la posibilidad de fermentar manitol en C. accolens, C. durum, C. macginleyi, C.

minutissimum y C. singulare) o formación de precipitados coraloides como C. aurimucosum, en

agar BHI con 1% de Tween 80, en atmósfera de aerobiosis o CO​2​. La observación de las

colonias nos permite dirigir su identificación.

Tabla 21. Clasificación fenotípica de corinebacterias atendiendo a la pigmentación y consistencia

de las colonias​.

Pigmentación Colonias húmedas, bordes lisos Colonias secas

freneyi (V) C. hansenii C. sundsvallence C. xerosis
a​
Amarilla C. aurimucosum ​ (en medio con sangre)
Marrón C. striatum ​b
C. falsenii (intenso, en incubación prolongada ) C.
lipophiloflavum C. mucifaciens (muy mucosa) C.
pseudotuberculosis (pigmento tenue) Negra C. aurimucosum
(sinónimo de C. nigricans) (muy adherentes)

Rosa C. aurimucosum
(precipitados coraloides en agar BHI con 1% de Tween
80)
C. macginleyi ​c

66
C. auris (incubación prolongada. Leve adherencia) C.
(V) Variable, también pueden ser gris-blanquecino. a​ ​En TSA, sin color. ​b ​Algunas cepas descritas en infección nosocomial, todas ellas CAMP
positiva (Leonard et al., 1994). c​ ​En medio de SBA suplementado con 0,1% de Tween 80.
Introducción

Identificación bioquímica

Los sistemas bioquímicos de identificación están basados en resultados previos del CDC

(Laboratorio especial de referencia de Bacteriología) (Hollis y Weaver, 1981). Estos sistemas

incluyen: ​Catalasa. Positiva en todas las bacterias del género Corynebacterium.

Oxidasa. Negativa en todas, excepto en C. bovis.

Movilidad. Todas las especies del género Corynebacterium médicamente relevantes

son inmóviles (Funke y Bernard, 2007).

Determinación del metabolismo fermentativo (F) u oxidativo, no fermentativo (O).

Mediante el medio semisólido CTA (Cistina Tripticasa Agar), o en tubo de TSI (Triple azúcar

hierro) o medio oxidación/fermentación. La interpretación: si producción de ácido en todo el

tubo, se trata de fermentación; si sólo en la superficie, de oxidación (Funke y Bernard, 2007).

Lipofilia. Se denomina como corinebacteria lipófila aquella que requiere la presencia de

ácidos grasos exógenos para su desarrollo en medios de cultivo. El crecimiento incipiente en

agar o en caldo a las 24 h de incubación orienta hacia una posible especie lipófila. Se puede

realizar en medio sólido SBA o suplementado con 0,1-1% de Tween 80, observándose colonias

de >2 mm de diámetro en la placa suplementada, o en medio líquido: BHI y BHI suplementado

con 1% de Tween 80, observando turbidez (crecimiento) sólo en el tubo suplementado en caso

de ser una cepa lipófila después de 24-72 h de incubación.

La combinación de lipofilia y tipo de metabolismo F/O, permite una clasificación

 fenotípica muy útil para el diagnóstico diferencial de las corinebacterias con relevancia médica

humana. Janda, en 1998, clasificó 24 diferentes especies atendiendo a estos parámetros. En la

Tabla 22 se exponen las 44 reconocidas en la actualidad, 15 de ellas lipófilas.

67
Introducción
Tabla 22. Clasificación fenotípica de las corinebacterias con relevancia en patología infecciosa humana
en función del metabolismo oxidativo/fermentativo y la lipofilia.
FERMENTATIVO OXIDATIVO (no fermentativo)
NO LIPOFILIA
68 C. amycolatum C. argentoratense C. atypicum C. aurimucosum C. confusum C. coyleae C. diphtheriae
biotipo gravis, mitis y belfanti C. durum C. falsenii C. freneyi C. glucuronolyticum C. hansenii C. imitans C.
matruchotii C. minutissimum C. pseudotuberculosis C. riegelii C. simulans C. singulare C. striatum C.
sundsvallense C. thomssenii C. ulcerans C. xerosis
C. afermentans subsp. afermentans C. auris C. mucifaciens C. propinquum C. pseudodiphtheriticum C.
tuscaniae
C. appendicis ​a
LIPOFILIA ​
C. accolens CDC grupo F1 CDC grupo G C. diphtheriae biotipo intermedius C. kroppenstedtii C.
macginleyi C. resistens C. tuberculoestearicum C. ureicelerivorans
C. afermentans subsp. lipophilum C. bovis C. jeikeium C. lipophiloflavum C. urealyticum
a​
​ ​V2.0 durante siete ​días, fermenta
C. appendicis presenta un metabolismo fermentativo muy lento, en incubación de API Coryne TM
glucosa y maltosa.
Introducción
Hidrólisis de urea (24 h de incubación). Su positividad orientará hacia un número
reducido de especies, 15 en total (Tabla 23) y cinco de ellas lipófilas (Tabla 10). Destacan por
su expresión rápida C. riegelii, C. urealyticum y C. ureicelerivorans, esta última, de lectura en la
galería API CoryneTM V2.0 en aproximadamente 60 seg.
Hidrólisis de esculina (48 h de incubación). Solo cuatro corinebacterias (Tabla 23)
tienen esta capacidad. Es una prueba positiva constante en C. kroppenstedtii, dato diagnóstico
importante para esta especie.
Tabla 23. Características fenotípicas de corinebacterias que proporcionan información importante para su
discriminación.
 Hidrólisis ​ Hidrólisis
Hidrólisis de urea​a ​69 ​ de esculina a​ ​
Hidrólisis
de tirosina a​ ​
de hipurato ​a ​C. amycolatum V C. appendicis CDC gr. F1 C. durum V C. falsenii (+) C. glucuronolyticum V C.
pseudodiphtheriticum C. pseudotuberculosis C. riegelii C. singulare C. sundsvallense C. thomssenii C. ulcerans C.
urealyticum C. ureicelerivorans
C. durum V C. glucuronolyticum V C. kroppenstedtii C. matruchotii V
C. aurimucosum C. minutissimum C. propinquum C. pseudodiphtheriticum V C. singulare C. striatum
C. aurimucosum C. tuscaniae C. ureicelerivorans
a​
variable (V). Reacción positiva lenta o débil (+)
Reacción de CAMP (Christie-Atkins-Munch-Peterson​) (​ 24 h de incubación o menos) con
una cepa β-hemolítica de Staphylococcus aureus (cepa ATCC 25923). El resultado de esta
prueba puede ser positivo, inverso o inhibido y negativo. En caso de positividad, se observa un
aumento de la hemólisis completa de S. aureus en forma de punta de flecha. En la Tabla 24 se
recogen las 10 especies en que esta reacción puede ser positiva o inversa. Solo una
corinebacteria lipófila, C. afermentans subsp. lipophilum, puede presentar esta reacción
positiva y de forma variable.
Reducción de nitratos (24 h de incubación).
Reducción de nitritos. La única especie que da positiva esta prueba es C. simulans.
Introducción
Tabla 24. Diagnóstico diferencial de corinebacterias partiendo de la reacción de CAMP positiva o
invertida, en combinación con otras pruebas.
Otras pruebas bioquímicas.
Corynebacterium spp. Reacción CAMP ​a 70
​
​
C. auris + Glucosa, ribosa negativa a las 48 h C. afermentans subsp. afermentans V Glucosa, ribosa negativa a las 48 h C.
afermentans subsp. lipophilum V Lipófila C. coyleae + Glucosa, ribosa positiva y maltosa negativa a las 48 h C. glucuronolyticum +
βGUR positiva. Hidrólisis de esculina V C. imitans + Maltosa positiva. PYZ débilmente positiva C. minutissimum (​ muy pocas cepas) ​+
DNAsa positiva. Hidrólisis de tirosina positiva. Sensible a O/129​b ​C. striatum V Reducción de nitrato positivo. Hidrólisis de tirosina
positiva
Asimilación de PAC positiva. Crecimiento en agar sangre 20oC/ 3 d C. pseudotuberculosis INV Hidrólisis de urea, maltosa positiva.
TD puede ser positiva.
Resistente a O/129 b​ ​C. ulcerans INV Hidrólisis de urea, maltosa y glucógeno positiva. TD puede ser

positiva. Sensible a O/129 ​b ​a​: p

​ ositiva (+), variable (V), inversa (INV). b​ ​Factor vibriostático (disco de 150 g)
Producción de pirazinamidasa. En todas las corinebacterias está presente excepto en:
C. atypicum, C. macginleyi, C. resistens y las tres especies con capacidad de producir TD: C.
diphtheriae, C. pseudotuberculosis y C. ulcerans.
Producción de ácido a partir de hidratos de carbono, principalmente: glucosa,
maltosa, sacarosa, manitol y xilosa. Los resultados se interpretarán a las 48 h de incubación
para evitar falsos negativos e identificaciones erróneas. Cuando se sospecha C. appendicis se
prolongará la incubación hasta 7 días. Un rasgo distintivo importante en la orientación
identificativa es la infrecuente fermentación de glucógeno. Es positiva en C. diphtheriae biotipo
gravis, C. ulcerans y variable en C. freneyi (Funke y Frodl, 2008).
Otras pruebas individuales complementarias:
Hidrólisis de tirosina. Prueba diferencial en determinadas especies que comparten
otros rasgos fenotípicos (Tabla 23).
Detección de DNAsa. La positividad de esta prueba en C. minutissimum, sirve para
descartar C. striatum, ambas fermentativas, no lipófilas, de colonias húmedas y bordes lisos,
que hidrolizan tirosina.
Fermentación de fructosa. Esta prueba es útil en la discriminación fenotípica entre
cuatro especies lipófilas, con ácidos micólicos y TBSA en su pared, capacidad ureásica y
colonias pequeñas de crecimiento lento: C. urealyticum, C. ureicelerivorans, C. appendicis y C.
Introducción

bovis siendo únicamente positiva en esta última. Por otro lado, sirve para diferenciar a otras

dos especies lipófilas que pueden presentar multirresistencia antibiótica: C. jeikeium (negativa)

y CDC gr G (positiva).

Hidrólisis del hipurato. Puede servir para diferenciar C. aurimucosum (positiva) de C.

minutissimum (negativa); C. ureicelerivorans (positiva) de C. urealyticum, C. bovis y C.

appendicis (negativa) y a C. tuscaniae (positiva) de C. coyleae y C. minutissimum (negativa)

(Tabla 23).

Sensibilidad al factor vibriostático O/129 (2,4-diamino-6,7-diisopropilpteridina), disco

de 150 g. (Renaud et al., 1998). Orienta en la diferenciación fenotípica, junto con otros rasgos,

de corinebacterias fermentativas no lipófilas estrechamente relacionadas tanto desde el punto

de vista bioquímico como en la clínica. Puede servir para discriminar C. amycolatum

(resistente) de C. freneyi, C. hansenii y C. xerosis, (sensibles) todas de colonias secas y bordes

irregulares, y de C. minutissimum y C. striatum, (sensibles) de colonias húmedas y bordes

enteros (Tablas 8 y 9). Se ha mostrado útil en la diferenciación entre cuatro especies que

pueden ser el agente etiológico de cuadros clínicos de manifestación similar: C. diphtheriae y

C. ulcerans (sensibles) de C. pseudotuberculosis y C. imitans (resistentes), las tres primeras

pueden producir TD (Tabla 14).

Otros rasgos fenotípicos, no bioquímicos ni de sensibilidad, como la multirresistencia

antimicrobiana puede orientar hacia la identificación de C. amycolatum, C. jeikeium, C.

urealyticum, CDC gr G, C. glucuronolyticum, C. striatum (Otsuka et al., 2006) o C. resistens.

Sistemas comerciales de identificación bioquímica

Existen, al menos, seis sistemas comerciales para la identificación bioquímica de

corinebacterias y han sido evaluados a excepción de MicroScan​TM​.

​
API Coryne TM
​ V2.0 (bioMérieux, Marcy l ́Etoil, Francia). Su base de datos contiene 49

taxones. Los resultados de un estudio multicéntrico demostraron que el 90,5% de las cepas

estudiadas fueron correctamente identificadas, el 55,1% necesitaron pruebas complementarias,

el 5,6 % no se identificaron y el 3,8% la identificación fue errónea. (Funke et al., 1997e).

Identifica 16 especies individuales de corinebacterias, en 3 ocasiones no discrimina por sí sólo

71
Introducción

entre dos especies y en un caso entre dos biotipos de la misma especie. No están incluidas en

su base de datos 25 especies, no actualizada/revisada desde 1994 (Soto et al., 1994), debido

fundamentalmente a la frecuente descripción de nuevas especies (Tabla 25).

Sin embargo, aunque una especie no conste en su base de datos o no la identifique

individualmente, el resultado de una determinada prueba enzimática o producción de ácido a

partir de un azúcar (positivo/negativo), en este sistema ampliamente utilizado, orienta hacia un

reducido número de especies a la vez que se valoren otros datos fenotípicos y se realicen

pruebas complementarias. Esto es así con la presencia de enzima αGLU, βGUR, N- Acetal-β-

Glucosaminidasa (βNAG), y la fermentación de manitol y glucógeno (Tabla 26).

Tabla 25. Identificación de corinebacterias mediante el sistema API Coryne​TM ​V2.0 (bioMérieux)
 (núm.).

Identificación individual (16) Identificación con dualidad (4) No identificación (25)

C. lipophiloflavum C. matruchotii C.
minutissimum C. mucifaciens C.
C. accolens C. argentoratense resistens C. riegelii C. singulare C.
C. bovis C. diphtheriae biotipo simulans C. sundsvallense C.
gravis C. glucuronolyticum CDC tuberculoestearicum C. thomssenii C.
grupo F1 CDC grupo G C. tuscaniae C. ureicelerivorans C.
jeikeium C. kutcheri C. xerosis
macginleyi C. propinquum C. C. atypicum C. appendicis C.
pseudodiphtheriticum C. aurimucosum C. confusum C.
pseudotuberculosis C. renale C. diphtheriae biotipo intermedius C.
ulcerans C. urealyticum durum C. falsenii C. freneyi C.
7 hansenii C. imitans C. kroppenstedtii
entans/coyleae C. auris/T. C. lipophiloflavum C. matruchotii C.
striatum/amycolatun C. minutissimum C. mucifaciens C.
e biotipos mitis/belfanti resistens C. riegelii C. singulare C.
C. atypicum C. appendicis C. simulans C. sundsvallense C.
aurimucosum C. confusum C. tuberculoestearicum C. thomssenii C.
diphtheriae biotipo intermedius C. tuscaniae C. ureicelerivorans C.
durum C. falsenii C. freneyi C. xerosis
hansenii C. imitans C. kroppenstedtii
Introducción

Tabla 26. API Coryne TM ​ ​V2.0: identificación de especies de corinebacterias en función de la

infrecuente positividad o negatividad de ciertas pruebas enzimáticas o fermentación de hidratos de
carbono.

αGLU
positiva
 Manitol a​ ​Glucógeno a​ ​PYZ negativa

C. amycolatum V C.
diphtheriae C. freneyi C.
pseudotuberculosis C.
sundsvallense C. ulcerans
C. xerosis

ccolens C. freneyi V
chotii C. macginleyi
singulare
ccolens C. freneyi V
chotii C. macginleyi
singulare
C. diphtheriae
biotipo gravis ​b ​C.
​
ulcerans b​ C. freneyi
V
C. diphtheriae
biotipo gravis ​b ​C.
​
ulcerans b​ C. freneyi
V
C. diphtheriae
biotipo gravis b​ ​C.
​
ulcerans b​ C. freneyi
V
C. atypicum C. macginleyi C.
resistens C. diphtheriae b​ ​C.
​
pseudotuberculosis ​b C.
ulcerans b​
C. atypicum C. macginleyi C.
resistens C. diphtheriae b​ ​C.
​
pseudotuberculosis b​ C.
ulcerans b​
C. atypicum C. macginleyi C.
resistens C. diphtheriae ​b ​C.
​
pseudotuberculosis b​ C.
ulcerans b​
C. atypicum C. macginleyi C.
resistens C. diphtheriae b​ ​C.
​
pseudotuberculosis b​ C.
ulcerans b​

73
α-glucosidasa (αGLU). β-Glucuronidasa (βGUR). N-acetil-β-Glucosaminidasa (βNAG). a​ ​Fermentación Pirazinamidasa (PYZ),

b​
Producción de toxina diftérica.

Biolog GP​TM ​(Biolog, Hayward. California. Estados Unidos). La versión 3.50 identificaba

el 60% a nivel de género o género y especie después de 24 h de incubación (Linndemann et

al., 1995). Su base de datos y aspectos tecnológicos han sido mejorados recientemente con la

versión 3.70, con incubación de 4 h e identificación de taxones que no se logran con API

Coryne TM​
​ . Puede servir como procedimiento adjunto en la investigación taxonómica de

bacterias corineformes.

BBL Crystal​TM ​(Becton Dickinson. Franklin Lakes. NJ.Estados Unidos). (Bernard, 2005).

Se trata de un sistema de identificación manual o semiautomático que dispone de diferentes

paneles cerrados, uno de ellos para bacterias aerobias Grampositivas pertenecientes a 24

géneros incluyendo Corynebacterium.

​ ​(Remel, Lenexa, Kansas. Estados Unidos). Identifica correctamente el

RapID CB Plus TM

80,9% de las cepas a nivel de género y especie, y un 12,2% a nivel de género (Funke et al.,

1997e). ​Vitek 2 TM ​
​ (bioMérieux, Marcy l ́Etoil. Francia). Sistema automático con una base de

datos limitada para bacterias corineformes. Versión actualizada recientemente que utiliza una

nueva tarjeta (ANC) válida para anaerobios y corinebacterias (ocho especies individualizadas).

Se ha realizado un estudio comparativo entre los resultados de identificación obtenidos

mediante esta nueva tarjeta frente a los obtenidos por secuenciación del gen 16S rADN de 365

corinebacterias aisladas de muestras clínicas y otras nueve cepas ATCC. La identificación

fenotípica mediante este sistema automático coincidió con la genotípica en el 95,1%, no

Introducción
coincidió en el 4,9% y no identificó el 0,3% de las cepas. Se observó fallo en la identificación

de C. striatum ATCC 6940 de manera repetida (Rennie et al., 2008).

MicroScan ​TM ​(Siemens Healthcare Diagnostics. Deerfield, IL. Estados Unidos). Sistema

automático con una base de datos limitada para bacterias corineformes. No ha sido evaluado.

Algunos sistemas comerciales, aunque normalmente se utilizan para la identificación de

bacterias Gramnegativas, modificando su procedimiento pueden dar información de pruebas

complementarias útiles para el diagnóstico diferencial de corineformes. Así como, API 50 CH

(bioMérieux), permite diferenciar Brevibacterium spp. y algunos Arthrobacter spp. (Funke et al.,

1997e) y API NE (bioMérieux, Marcy l ́Etoil. Francia) que permite diferenciar corinebacterias

fermentativas no lipófilas estrechamente relacionadas y no reconocidas individualmente en API

​ ​V2.0, como C. striatum, C. amycolatum y C. minutissimum, mediante la observación

Coryne TM

de la asimilación de maltosa, N-acetil-glucosamina (NAG) y de fenilacetato (PAC) (Renaud et

al., 1998).

Para la interpretación y validación de los resultados obtenidos mediante sistemas

comerciales, es importante la correlación con las características macroscópicas del cultivo y la

tinción de Gram, y en ocasiones es necesario combinar esta información con pruebas

complementarias individuales, que no se adaptan a la rutina de un laboratorio asistencial,

consume tiempo y conlleva juicios subjetivos (Funke et al., 1997e; Funke et al., 1997f).

Técnicas quimiotaxonómicas o análisis de la pared celular

Se realizan en laboratorios de referencia para la caracterización de una nueva especie

de corinebacteria, establecer el diagnóstico diferencial con otro género o descartar que una
 bacteria sea del género Corynebacterium (Funke y Bernard, 2003). En la Tabla 27 se sintetiza

la caracterización quimiotaxonómica del género Corynebacterium.

La detección de ácidos micólicos se puede realizar mediante cromatografía en capa fina,

cromatografía de gas, espectrometría de masa, o cromatografía líquida de alta resolución (de

Briel et al., 1992; Barreau et al., 1993; Voisin et al., 2002). Sirve para diferenciar

Corynebacterium spp. (ácidos micólicos de 22 a 36 átomos de carbono) de bacterias

parcialmente ácido alcohol-resistentes (ácidos micólicos de 30 a 78 átomos de carbono).

74
Introducción
Tabla 27. Caracterización quimiotaxonómica para identificación de Corynebacterium spp. y su
diferenciación de otras bacterias corineformes.
Método Observación Comentario
Composición de ácidos grasos celulares
75 ​Permite diferenciar Corynebacterium sp. de otras bacterias corineformes a nivel de género
Corynebacterium spp.: La mayoría son saturados o monoinsaturados (16: 0, 18:1cis9). Otras corineformes: la mayoría son de
cadena ramificada (i15:0, a15:0)
Ácidos micólicos Todas las especies del género
Corynebacterium tienen ácidos corinomicólicos a excepción de: C. amycolatum C. atypicum C. kroppenstedtii
Otras corineformes: carecen de ácidos corinomicólicos.
Otros marcadores quimiotaxonómicos
Lípidos polares Menaquinonas Tipos de azúcar de la pared celular. Especies de ácido diaminopimélico.
Para identificación a nivel de género de las bacterias corineformes es útil la detección de
ácido meso-diaminopimélico (m-DAP), (presente en Corynebacterium, Turicella, Brevibacterium
y Dermabacter), tipo de menaquinonas o presencia de arabinogalactano (positiva en los
géneros Corynebacterium y Turicella).
El análisis de ácidos grasos celulares mediante cromatografía gas-líquido con el sistema
Sherlock de MIDI (Newark, DE), es muy útil para la identificación de corinebacterias a nivel de
género, aunque a nivel de especie puede resultar más difícil, debido a que estos perfiles de las
bacterias corineformes del mismo género están estrechamente relacionadas y los perfiles
cuantitativos dependen de las condiciones de incubación. La evaluación recientemente
realizada con este sistema en 21 especies del género Corynebacterium concluye que la
mayoría de ellas presentan un perfil cualitativo diferente y que C. coyleae (subgrupo 1), C.
riegelii, C. simulans y C. imitans difieren sólo cuantitativamente. C. afermentans subsp.
afermentans y C. coyleae (subgrupo 2) presentaron un perfil cualitativo y cuantitativo similar
(Van den Velde et al., 2006), creando una nueva base de datos, CLIN 40.
La determinación de TBSA es útil para el diagnóstico de género ya que sólo está
presente en el género Turicella (T. otitidis, única especie) y algunas especies del género
Corynebacterium: C. appendicis, C. bovis, C. confusum, C. kroppenstedtii, C. minutissimum
(algunas cepas), C. mucifaciens, C. urealyticum y C. ureicelerivorans.
1.4.2 Identificación genotípica

Los sistemas de identificación de corinebacterias basados en la genética molecular están

en continuo desarrollo y se están utilizando de manera creciente en los laboratorios de

Microbiología. Permiten identificar y diferenciar especies estrechamente relacionadas. El más

utilizado es el análisis de la secuencia del gen 16S rADN (Drancourt et al., 2000).

Secuenciación del gen 16S ADN ribosomal (16S rADN).

Es la más utilizada en el diagnóstico genotípico bacteriano en general. La comparación

de las secuencias de los genes 16S rADN o de los que los codifican, permite:

a) Establecer las relaciones filogenéticas existentes entre los organismos procariotas.

Este hecho ha tenido una gran repercusión en la taxonomía bacteriana, dando lugar al sistema

de clasificación vigente en los tratados fundamentales de Bacteriología, Bergey ́s Manual of

Systematic Bacteriology y The Procaryotes. Disponibles en http://www.springer-

ny.com/bergeysoutline/main.htm y http://www.prokaryotes.com respectivamente.

b) La identificación rápida y precisa de las bacterias. En Microbiología Clínica, la

identificación molecular basada en la secuenciación del gen 16S rADN se utiliza para bacterias

cuya identificación por otro tipo de técnicas resulta imposible, difícil o requiere mucho tiempo,

hecho que sucede en difteromorfos en general y en corinebacterias en particular.

El ribosoma bacteriano (Figura 4) tiene un coeficiente de sedimentación de 70S

(unidades Svedberg), y puede disociarse en dos subunidades, la grande (50S) y la pequeña

(30S). Cada subunidad es un complejo ribonucleoproteico constituido por proteínas

ribosómicas y moléculas de ARN ribosomal específicas.

Figura 4. Ribosoma bacteriano. Esquema de su estructura y componentes (Rodicio y Mendoza,

2004)
Introducción
 En bacterias, los genes que codifican los ARNr están organizados en operones (conjunto

de genes que se transcriben a partir de la misma región promotora). Cada operón ribosómico

(rrn) (Figura 5) incluye genes para los ARNr 23S (rrl), 16S (rrs) y 5S (rrf), separados por

regiones espaciadoras o intergénicas (IG), y contiene además genes para uno o más ARN de

transferencia (ARNt). El producto de la transcripción del operón a partir de dos promotores, P1

y P2, situados en la región anterior a rrs, está procesado por la enzima ARNasa III mediante

cortes en sitios específicos que separan las tres clases de ARNr, el/los ARNt y las dos IG.

Figura 5. Operón ribosómico (rrn).A. Representación esquemática de sus genes estructurales, los
promotores P1 y P2, y las regiones intergénicas (IG).B. Amplificación del gen rrs (ADNr 16S). Se
indica la posición de los iniciadores I1 (directo), I e I 3 (reversos) utilizados para la amplificación y
posterior secuenciación del gen completo (I1-I3; amplicón de 1.500pb aproximadamente) o de un
fragmento menor (I1-I2; 500 pb correspondientes al extremo 5 ̈del gen). C. Visualización de ambos
fragmentos por electroforesis en gel de agarosa (Rodicio y Mendoza, 2004).

El método molecular de identificación bacteriana mediante secuenciación del 16S rADN

incluye tres etapas: i) Amplificación del gen a partir de una colonia o muestra clínica directa. ii)

Determinación de la secuencia de nucleótidos del amplicón. iii) Análisis de la secuencia:

comparación de la secuencia con las depositadas en bases de datos, unas públicas de acceso
libre a través de Internet, como: GenBank y NCBI (Nacional Center for Biotechnology

Information. Los Alamos National Laboratory; Los Alamos, NM, USA).

Por tanto, 16S rARN es un polirribonucleótido de aproximadamente 1.500 pb codificado

por el gen rrs, también denominado ADN ribosomal 16S (16S rADN), a partir de cuya

secuencia se puede obtener información filogenética y taxonómica.

Introducción