SUBVENCIÓN ESPECIAL Nº 308-2006-C0NCYTEC-0AJ

PROTOCOLOS

PROYECTO:

Innovación tecnológica de los procesos de producción masiva de ovas y

alevinos de trucha (Oncorhynchus mykiss) en la Región de Puno.

Consultor:
Prof. Dr. Iván Valdebenito Isler
UNIVERSIDAD CATÓLICA DE TEMUCO
CHILE

Marzo de 2007
 Protocolo para la extracción y fecundación de ovas de trucha arcoiris

I. Introducción

Determinar tempranamente el momento de la ovulación de una hembra de trucha arcoiris,

es clave para obtener altos porcentajes de fecundación, ya que la máxima fertilidad de los
gametos de salmónidos se produce cerca de cuatro días después de la ovulación y en trucha
arcoiris se obtienen porcentajes de fecundación altos hasta 70 Unidades Térmicas
Acumuladas (UTA) después de la salida de los oocitos del ovario, lo que implica cerca de 7
días si se cultiva con 10°C. Luego de este tiempo, las ovas se sobremaduran y su fertilidad
es baja. Por esta razón, si se mantienen reproductores a temperaturas cercanas a 10°C,
bastará con que se evalúe una vez a la semana la madurez de las hembras.

II. Actividades
Las actividades que se deben realizar para extraer y fecundar las ovas de trucha arcoiris se
pueden dividir en las siguientes etapas:

1. Determinación de madurez
2. Desove
3. Evaluación de calidad
4. Fecundación artificial

III. Materiales:

Los materiales necesarios para la obtención y fecundación de los gametos femeninos de la

trucha arcoiris son: redes para la captura de reproductores, anestésico, tanque para
anestesiado, mangas para el traslado de reproductores, contenedores para ovas, guantes de
lana, incubadores.

IV. Desarrollo del proceso

Actividades a realizar en las diferentes etapas de la extracción y fecundación de ovas de

trucha arcoiris.

1. Determinación de madurez

Esta etapa es clave en el éxito de la fase de reproducción artificial de la trucha arcoiris, ya

que una hembra puede tener la mejor calidad de ovas desde el punto de vista nutricional y
genético, pero si sus gametos son extraídos después del periodo viable de ellos, la tasa de
fecundación podría ser de 0%. Por esto, regularmente los planteles que realizan esta etapa
del ciclo de vida de la trucha arcoiris, semanalmente están chequeando el estado de
madurez de los especímenes con el fin de utilizar la mejor calidad de gametos.
Los indicadores utilizados para identificar si una hembra está ovulada, son los siguientes:
 Abdomen blando
 Liberación de ovas a través del poro genital
 Vaciamiento de los márgenes del poro al poner a la hembra de “cabeza”.

Regularmente y dependiendo de la variedad de truchas utilizada, se produce un marcado

desarrollo del poro genital (Fig. 1), el que además adquiere un aspecto rojizo o hemorrágico
y se marcan notoriamente los colores nupciales.

Figura 1. Aspecto del abdomen y del poro genital (flecha) de una hembra de trucha
arcoiris después de la ovulación.

Una vez identificada la ovulación en una hembra, está será separada del plantel de
reproductores y trasladada a otro estanque a la espera de realizar el desove, el que
regularmente se realiza uno o dos días después de la identificación de la ovulación.

2. Desove

En la trucha arcoiris, el desove se realiza en forma manual, utilizando la yema de los dedos,
o bien, el antebrazo. Para esto se debe anestesiar los especímenes y luego de secarlos, con
una mano enguantada se toma firmemente la hembra desde el pedúnculo, con la otra mano,
se masajea (y presionando levemente) el abdomen desde la región anterior a la posterior
(Fig. 2). Si la hembra está ovulada, las ovas se liberarán suavemente acompañadas de un
líquido claro y transparente (el líquido celómico). Como se señaló en protocolo de manejo
de semen, este líquido es un activador espermático natural, por lo que si se encuentra en
buenas condiciones, se debe conservar las ovas en él con el fin evitar la deshidratación y
eventuales daños mecánicos a las ovas.
Se debe cuidar de mantener siempre la hembra con la cabeza hacia abajo, de lo contrario las
ovas serán liberadas a través del poro genital.
Las ovas deben ser recibidas en contenedores limpios y secos. Luego de su extracción
deben permanecer en un lugar sombrío y de baja temperatura a la espera de que sean
fecundadas.

Figura 2. Extracción de ovocitos de una hembra de trucha arcoiris mediante masaje

abdominal (stripping).

3. Evaluación de calidad

Después de la extracción, las ovas deben ser evaluadas macroscópicamente para determinar
su nivel de sobremadurez. Para esto se debe introducir suavemente la mano enguantada y
moverlas suavemente, si se detectan algunas ovas muy turgentes, de mayor tamaño que las
otras, con el vitelo separado en una porción anaranjada que contiene todo el pigmento y
otra, más transparente que contiene el material lipídico del ovocito. Este aumento de
tamaño y coloración, es producto de la sobremaduración y esas ovas no serán fecundadas.
Las ovas de buena calidad, son aquellas de color anaranjado homogéneo, de forma irregular
y poco turgentes (Fig. 3a y b).
Si el porcentaje de ovas sobremaduras en una hembra es muy alto, es recomendable
eliminar todas las ovas, ya que el porcentaje de fecundación será bajo y además de
inutilizar el incubador en que se dispongan, serán una fuente de materia orgánica para el
desarrollo de agentes patógenos como el saprolegnia. Además, de generar más trabajo al
personal de la piscicultura.

a b
Figura 3. a: Ovas de trucha arcoiris de aparente buena calidad y b: Ovas de truchas
arcoiris con signos de sobremadurez (flechas).
4. Fecundación artificial

La fecundación artificial se realiza siguiendo las siguientes etapas:

a. Mezcla de gametos
b. Reposo
c. Lavado
d. Hidratación

a. Mezcla de gametos

Para obtener altos porcentajes de fecundación, el espermatozoide requiere un medio líquido

para desplazarse y encontrar el micropilo (orificio existente en el corion del ovocito) para
tomar contacto con la membrana del ovocito. Para esto, se recomienda mantener las ovas
en el líquido celómico que las acompaña, siempre y cuando, este se observe transparente,
de aspecto homogéneo y bien líquido (Fig. 4). En caso contrario, se recomienda sustituirlo
con una solución salina al 0,98% de NaCl que evitará el choque osmótico del
espermatozoide y le permitirá desplazarse en busca del ovocito.

Figura 4. a: Ovas de trucha

arcoiris con líquido celómico
de buena calidad. b: Ovas
con líquido celómico alterado
(hemorrágico).

a b

Para mezclar los gametos, los más fácil y efectivo, es incorporar el semen sobre las ovas e
inmediatamente, trasvasijar con suavidad la mezcla a otro contenedor (Fig. 5). Una vez
realizado, volver al contenedor originar la mezcla y así sucesivamente por tres veces. Esto
permitirá una mezcla homogénea de los gametos y facilitará el encuentro del
espermatozoide con los ovocitos (ovas).

Figura 5. Aplicación del semen a ovas de

truchas arcoiris durante la fecundación
artificial. Se observa el contenedor vacío
para realizar la mezcla de los gametos.
b. Reposo

Después de la mezcla de los gametos, se deben dejar reposar por cinco minutos en un
ambiente de baja luminosidad y temperatura.

c. Lavado

Después del reposo, se debe agregar agua de cultivo al interior del contenedor de las ovas
con mucha suavidad. Tratando de hacer caer el agua con un ángulo para que adquiera una
fuerza centrípeta en el interior del contenedor. Una vez lleno, se debe eliminar el agua
agregada tratando que arrastre el exceso de semen y las impurezas (ovas reventadas,
material fecal, coágulos de sangre, ovas sobremaduras, etc.). Repetir este proceso cuantas
veces sea necesario para eliminar todas las impurezas. Una vez limpias las ovas, se debe
agregar agua en forma abundante y dejar reposar.

d. Hidratación

Después que las ovas han sido fecundadas, se produce la reacción cortical producto de la
liberación de los gránulos corticales. Esto produce que el agua ingrese a la ova por
osmosis, haciendo que esta aumente significativamente su tamaño y además, se vuelva muy
turgente.

Para esto, las ovas deben estar en reposo con abundante agua de la mejor calidad por al
menos 30min en un ambiente sombrío y a baja temperatura (Fig. 6).

Figura 6. Ovas de trucha arcoiris en

proceso de hidratación.
e. Incubación

Cumplido el tiempo de hidratación, las ovas están listas para ser incubadas, por lo que
deben ser trasladadas a los incubadores con flujo abierto. La cantidad de ovas por
incubador es muy variable y depende del tamaño de las ovas, del tipo de incubador
utilizado y de la calidad del agua. En los incubadores verticales (tipo head-tecna),
regularmente se incuba un litro de ovas por bandeja, o sea, aproximadamente 10.000 ovas.
Los flujos también son variables en función de la calidad y cantidad de agua de la que se
dispone, pero frecuentemente se debe disponer al menos de 1L/min de agua por cada
10.000 ovas que se incuban.

Hasta esta etapa, es conveniente mantener las ovas de cada hembra en forma individual.
De manera que al tomar contacto con el agua, las ovas sobremaduras se tornarán blancas
(Fig. 7). Es conveniente que antes de ingresar a los incubadores, las ovas blancas (muertas)
sean eliminadas. Si un alto porcentaje de las ovas de una hembra se tornan blancas, se
deberán eliminar todas, de manera que sólo comiencen el proceso aquellas ovas de aparente
buena calidad. Una identificadas las ovas en buenas condiciones y si no hay control
sanitario de por medio, se pueden mezclar las ovas de varias hembras para completar el
volumen a mantener en cada incubador.

Figura 7. Ovas de truchas arcoiris en el momento de la introducción en el incubador.

Se observan ovas blancas (muertas) y anaranjadas (vivas).
 Protocolo para el manejo del semen de trucha arcoiris

I. Introducción

En salmónidos, mientras el espermatozoide se encuentra en el fluido seminal, los iones de

K+ aquí presentes, hacen que el espermatozoide esté inmóvil, pero al tomar contacto con el
agua o líquido celómico de la hembra, los iones de Ca++ que contienen esta soluciones,
gatillan instantáneamenente la actividad flagelar del espermatozoide. Este posee un anillo
mitocondrial de sólo algunas mitocondrias, por lo que el tiempo de duración de la motilidad
en condiciones naturales es de aproximadamente 45 a 60s, dependiendo de la temperatura y
del pH del medio en que se diluyó. Después de este breve tiempo, se detiene su actividad
flagelar al agotarse su capacidad de generar ATP y, aunque vivos, son incapaces de
fecundar por carecer de energía para desplazarse. Esta es la razón por la que durante los
procesos productivos, los recipientes en los que se recibe el semen deben estar
extremadamente limpios y secos.

En la naturaleza, el factor que sí lleva a la destrucción del espermatozoide es el medio

hipoosmótico (agua dulce) en el que es eyaculado el semen, este hace que el
espermatozoide absorba agua por osmosis hasta reventar. Por esta razón, durante los
procesos artificiales de fecundación es recomendable utilizar el líquido celómico que
acompaña a las ovas (si este se encuentra de buen color y aspecto homogéneo), o bien,
sustituirlo por una solución salina.

El espermatozoide durante la fertilización artificial, debe encontrase a una temperatura

idealmente no mayor a los 10 ºC y en un pH óptimo de 8,8 a 9,0. Las temperaturas altas si
bien es cierto provocan una actividad flagelar mayor, lo hacen por un tiempo más corto. El
pH con valores muy ácido (menos de 6,5) pueden inhibir totalmente la motilidad
espermática y con ello, la fertilidad del espermatozoide. Esta es la razón por la cual los
activadores espermáticos mejoran la fertilidad del espermatozoide de salmónidos, ya que
estas soluciones mantienen el equilibrio osmótico, regulan el pH y mejoran la capacidad de
obtener energía del espermatozoide, esto prolonga su motilidad y con ello, los porcentajes
de fecundación.

Los factores ambientales también pueden afectar la viabilidad del espermatozoide del pez,
por ello se debe evitar el contacto directo con la luz, ya que éste es un potente espermicida.
Por lo anterior, el semen después de su extracción y durante el periodo de evaluación
temprana, debe mantenerse en ambiente de luz tenue u oscuro y a temperaturas no
superiores a 4ºC. En ausencia de un microscopio, la calidad del semen se puede estimar
preliminarmente al observar su viscosidad y color (muy blanco a levemente anaranjado), ya
que esto indica que no se ha contaminado con restos fecales o renales. El semen con estas
características es potencialmente de buena calidad, para verificarlo, se debe evaluar la
motilidad, que es uno de los mejores indicadores de la fertilidad del semen de peces.
II. Actividades

Las actividades a realizar se pueden dividir en:

1. Selección de peces maduros
2. Extracción del semen
3. Almacenamiento del semen
4. Evaluación de calidad (motilidad espermática)
5. Fecundación

III. Materiales
Para el manejo del semen se necesitan los siguientes materiales: redes para la captura de
especímenes, anestésico, mangas para el traslado de reproductores, contenedor para
anestesiar, toalla desechable o paños limpios para secar el cuerpo del pez, guantes,
recipientes para la recolección del semen, nevera para el almacenamiento del semen,
microscopio, porta y cubre objetos, gotario, solución activante y probeta.

IV. Desarrollo del proceso

1. Selección de peces maduros

La identificación de los peces maduros es muy fácil, ya que los especímenes que pueden ser
utilizados para la fecundación artificial son aquellos que liberan semen al recibir un leve
masaje abdominal (Fig. 1a). El semen de “aparente” buena calidad es aquel que se observa
bien fluido, de color blanco y “desaparece” rápidamente al tomar contacto con el agua.
Para esto, es recomendable que los peces se encuentren anestesiados, regularmente se
utiliza Benzocaína (BZ-20) en dosis de 15 a 20ml por metro cúbico de agua, o bien, MS222
en dosis de 1g por 20L de agua.
Para la etapa de selección los peces solo deben estar aletargados, de manera que se puedan
capturar con facilidad y evaluar la liberación de semen desde el poro genital. Los peces
considerados como maduros deben ser separados del estanque de los reproductores y
dispuestos en un estanque especial a la espera de la extracción, que puede ser el mismo día
de la selección, o el día siguiente.

2. Extracción del semen

Para la extracción del semen, los especímenes deben estar en estado de narcosis profunda,
con el fin de evitar dañarlos producto de caídas o movimientos bruscos producidos por el
manipulador En trucha arcoiris el semen de machos normales se extrae mediante masaje
abdominal, tomando el espécimen con una mano enguantada desde el pedúnculo y con la
mano libre, se realiza un suave masaje desde la región anterior hacia la posterior (Fig. 1b).
Una vez liberado el semen (aproximadamente 10ml por macho), se debe evaluar su calidad
bajo un microscopio y almacenar utilizando materiales limpios, secos e idealmente,
desechables a temperatura idealmente de entre 2-3°C (Fig. 2a y b).

a b

Figura 1. a: Características fenotípicas de una macho sexualmente maduro de Trucha

arcoiris. b: Extracción de semen mediante masaje abdominal.

3. Almacenamiento del semen

El semen se debe almacenar en tiestos plásticos de al menos 500ml de volumen y cuidando

que la película de semen tenga un grosor máximo de 2mm. Además, se debe evitar el
contacto del semen con el agua, ya que esto gatilla la motilidad espermática que se
prolonga sólo por un minuto aprox..

Una vez en los contenedores de almacenamiento, se debe proteger de las altas temperaturas
y exceso de luz, almacenándolo en una caja de pluma-vit que contenga una pequeña
cantidad de hielo para mantener la temperatura baja (entre 2-3°C), pero sin congelar (Fig.
2b). Si el semen se va a almacenar por más de un día, se le debe incorporar oxígeno al
interior del contenedor con el fin de evitar que los espermatozoides se asfixien. Para el
almacenamiento prolongado del semen, se debe diluir una parte de semen en dos partes de
diluyente espermático y mezclarlos suavemente. Luego se debe almacenar al interior de un
refrigerador a una temperatura de aproximadamente 2-3°C, cuidando que la película de
semen no sea mayor a 2mm. Diariamente se debe realizar una suave agitación con el fin de
evitar que los espermatozoides precipiten e inyectar oxígeno al interior del contenedor.

4. Evaluación de calidad (motilidad espermática)

Para evaluar la calidad del semen, lo más recomendable es determinar su nivel de motilidad
espermática. Para esto, se debe poner en un porta objeto ubicado en la platina de un
microscopio (Fig. 2a), una pequeña alícuota de semen muy próxima a una gota de agua o de
activador espermático. Con la ayuda de una aguja, se debe poner en contacto el semen con
el agua y observar el nivel de actividad flagelar que alcanzan los espermatozoides. Si se
observa que todos los espermatozoides se mueven vigorosamente (valor 5 en la Escala de
Evaluacion de Sanchez-Rodríguez y Billard, 1967, Tabla 1), quiere decir que éste es de
buena calidad y se puede utilizar para fertilizar.
El semen almacenado, debe ser evaluado nuevamente (rechequeado) antes de utilizarlo en
la fecundación de un grupo de ovas.

a b

Figura 2. a: Evaluación microscópica del nivel de motilidad del semen de Trucha

arcoiris. b: Frascos de cultivo utilizados para el almacenamiento de semen de
salmónidos.

5. Fecundación
a. Semen fresco (sin diluir)
En salmónidos, el semen tiene una densidad espermática de entre 10 y 25 x 109
espermatozoides/ml. Esto significa que con 1ml de semen, se podrían fecundar todas las
ovas de una temporada de desoves de cualquier piscicultura. Razón por la cual, bastará una
pequeña alícuota de semen para fecundar los ovocitos de una hembra. Sin embargo, para
dejar tranquilo al piscicultor, regularmente se utiliza aproximadamente 1ml de semen para
1L de ovas.

b. Semen almacenado (diluido)

Después del almacenamiento, se debe rechequear la motilidad espermática y determinar su
calidad. Si el semen presenta una alta actividad flagelar puede ser utilizado igual que el
semen fresco, sólo se debe considerar la dilución realizada, por lo que será necesario
utilizar aproximadamente 3ml de la mezcla de semen-diluyente para un litro de ovas.

Para obtener altos porcentajes de fecundación, el espermatozoide requiere un medio líquido

para desplazarse y encontrar el micropilo (orificio existente en el corion del ovocito) para
tomar contacto con la membrana del ovocito. Para esto, se recomienda mantener las ovas
en el líquido celómico que las acompaña, siempre y cuando, este se observe transparente,
de aspecto homogéneo y bien líquido. En caso contrario, se recomienda sustituirlo con una
solución salina al 0,98% de NaCl que evitará el choque osmótico del espermatozoide y le
permitirá desplazarse en busca del ovocito.

Para mezclar los gametos, los más fácil y efectivo, es incorporar el semen sobre las ovas e
inmediatamente, trasvasijar con suavidad la mezcla a otro contenedor. Una vez realizado,
volver al contenedor originar la mezcla y así sucesivamente por tres veces. Esto permitirá
una mezcla homogénea de los gametos y facilitará el encuentro del espermatozoide con los
ovocitos (ovas).

Tabla. 1. Escala de evaluación de motilidad espermática para peces según Sánchez-

Rodríguez & Billard (1967).

VALOR TIPO DE MOVILIDAD

5 Todos los espermatozoides se desplazan vigorosamente y es
imposible fijar la vista en uno de ello.

4 La mayoría de los espermatozoides se desplaza rápido, algunos lo

hacen lento.

3 Los espermatozoides presentan 3 comportamientos:

 Algunos se desplazan vigorosamente.
 Algunos se desplazan lentamente.
 Algunos están inmóviles.

2 Pocos espermatozoides se desplazan rápidamente, muchos lo hacen

lentamente la mayoría está inmóvil.

1 Algunos espermatozoides se agitan ligeramente, la mayoría está

inmóvil.

0 Ningún espermatozoide se mueve

 Protocolo para el traslado de ovas de trucha arcoiris.

I. Introducción

Para el traslado de gametos femeninos (ovas) de trucha arcoiris, se deben seguir las mismas
reglas señaladas para el traslado de semen. Es decir, estas deben ser trasladadas en
ambiente frío y a baja temperatura. Regularmente, las ovas deben ser trasladadas en el
líquido celómico que las acompaña para reducir impactos mecánicos producidos durante el
viaje.

II. Actividades

Las actividades que se deben realizar para el traslado de ovas de trucha arcoiris se pueden
dividir en las siguientes etapas:

5. Evaluación de calidad
6. Empaquetado
a. Inyección de oxígeno
b. Introducción en contenedor
3. Recepción

III. Materiales:

Los materiales necesarios son: cajas de tecnopor, bolsas de nylon, oxígeno, cinta de
embalaje y hielo.

IV. Desarrollo del proceso

Actividades en las diferentes etapas de la recepción de ovas

1. Evaluación de calidad

Regularmente, la calidad de las ovas se puede evaluar de dos maneras

a. Visualmente
Después de la extracción, las ovas deben ser evaluadas macroscópicamente para determinar
su nivel de sobremadurez. Para esto se debe introducir suavemente la mano enguantada y
moverlas suavemente, si se detectan algunas ovas muy turgentes, de mayor tamaño que las
otras, con el vitelo separado en una porción anaranjada que contiene todo el pigmento y
otra, más transparente que contiene el material lipídico del ovocito. Este aumento de
tamaño y coloración, es producto de la sobremaduración y esas ovas no serán fecundadas.
Las ovas de buena calidad, son aquellas de color anaranjado homogéneo, de forma irregular
y poco turgentes (Fig. 1a y b).
Si el porcentaje de ovas sobremaduras en una hembra es muy alto, es recomendable
eliminar todas las ovas, ya que el porcentaje de fecundación será bajo y además de
inutilizar el incubador en que se dispongan, serán una fuente de materia orgánica para el
desarrollo de agentes patógenos como el saprolegnia. Además, de generar más trabajo al
personal de la piscicultura.

a b

Figura 1. a: Ovas de trucha arcoiris de aparente buena calidad y b: Ovas de truchas

arcoiris son signos de sobremadurez (flechas).

b. Salinidad del líquido celómico

Las ovas de truchas, siempre están acompañadas del líquido celómico que es una solución
que en la naturaleza ayuda a prolongar la motilidad espermática. Por esto, se recomienda
mantener las ovas en el líquido celómico que las acompaña, siempre y cuando, este se
observe transparente, de aspecto homogéneo y bien líquido (Fig. 2a y b). Cuando las ovas
se sobremaduran, la salinidad del líquido celómico aumenta, por esto se puede medir la
salinidad con un refractómetro y determinar su calidad (Fig. 3). Regularmente, valores
cercanos a 18ppt se asocian a ovas de buena calidad. Valores superiores a 50ppt, están
asociados a ovas sobremaduras.

Figura 2. a: Ovas de trucha

arcoiris con líquido celómico
de buena calidad. b: Ovas
con líquido celómico alterado
(hemorrágico).

a b
 Figura 3. Evaluación de la salinidad
del líquido celómico en salmónidos.

2. Empaquetado
a. Inyección de oxígeno
Una vez determinada la calidad de las ovas, se deben preparar para el traslado, para esto se
debe inyectar abundante oxígeno al interior de la bolsa de nylon que contiene las ovas (Fig.
4), luego de esto, se deben sellar adecuadamente con el fin de que el oxígeno no se pierda
durante el viaje.

a b

Figura 4. a. Inyección de oxígeno a la bolsa con ovas para su traslado. b: Disposición

de las bolsas con ovas para el traslado.
b. Introducción en contenedor
Una vez inyectado el oxígeno a las bolsas, se deben disponer en el interior de las cajas de
transporte, debidamente selladas para evitar el aumento de temperatura (Fig. 4b). Si las
ovas son muy pocas, se deben acompañar de bolsas con hielo en el interior, pero sin que las
ovas tomen contacto con el hielo. Las ovas deben ser separadas del hielo utilizando
material aislante como el tecnopor. Se debe procurar mantener la temperatura interior de la
caja con temperaturas de entre 2 a 4°C.

3. Recepción
Al recibir las ovas, se deben disponer en un lugar sombrío y de baja temperatura. Una vez
abierta la caja, se debe medir la temperatura interior y corroborar que no vienen bolsas
rotas.

Una vez realizado esto, se debe abrir las cajas y extraer las ovas y disponer las ovas en los
contenedores de fecundación (Fig. 5) y proceder según protocolo de fecundación.

b c

Figura 5. Recepción de ovas. a: apertura de las cajas. b: Apertura de las bolsas con
ovas. c: Disposición de las ovas en contenedores de fecundación.
 Protocolo para incubación de ovas de trucha arcoiris.

I. Introducción

La etapa de incubación es una etapa clave en la producción piscícola. Corresponde a la

etapa del desarrollo embrionario de los peces. En peces, el desarrollo no se mide en días
sino en función del calor acumulado, o Unidades Térmicas Acumuladas (UTA), que no es
otra cosa que la suma del promedio diario de temperatura a la que son incubadas las ovas
(embriones). En truchas, el estado de embrión de ojos pigmentados (“ova con ojos”) se
alcanza aproximadamente a las 210UTA, eso significa que si se incuba a 10°C se alcanzará
este estado a los 21 días. Pero si se incubara a 5°C, se alcanzaría a los 42 días,
aproximadamente porque existen otros factores que modelan el desarrollo, como el nivel de
oxígeno y la salinidad, por ej. De manera que existe una relación invesamente proporcional
entre el tiempo de duración del desarrollo de la trucha y la temperatura del agua a la que
son incubadas.

Para esta etapa, se requiere agua de la mejor calidad física y química. Debe estar saturada
de oxígeno y sin partículas en suspensión. Idealmente, la temperatura debe encontrarse
entre 8 y 10°C. Durante toda la etapa de incubación, los embriones (ovas) deben ser
mantenidos bajo oscuridad.

Esta etapa del desarrollo de las truchas es la más críticas frente a las acciones mecánicas,
especialmente entre los 5-10 días de incubación, pero en la práctica se asume que mientras
los embriones no pigmenten sus ojos (o se transformen en “ovas con ojos”) a las 210UTA,
no deben ser movidos o manipulados.

II. Actividades
Las actividades que se deben realizar durante la incubación de ovas de trucha arcoiris se
pueden dividir en las siguientes etapas:

7. Estimación del número de ovas iniciales.

8. Incubación
9. Schoking
10. Reincubacion

III. Materiales:

Los materiales necesarios para la incubación de ovas de truchas son: incubadores, regla de
Von Bayer, pipetas de limpieza, desinfectante, baldes y mangueras.
IV. Desarrollo del proceso

Las actividades que se deben realizar en las diferentes etapas del proceso de incubación se
inician asignando a cada hembra un número, el que será registrado en una planilla en la que
se consignará: La especie, grupo de reproductores al que pertenece, fecha del desove,
ubicación (número de incubador en que se ubicarán las ovas), volumen de ovas producido,
número de ovas en reglilla Von Bayer, fecundidad, sobrevivencia a “ojos”, sobrevivencia a
la eclosión.

Las actividades que se deben realizar son:

1. Estimación del número de ovas iniciales

Existen dos métodos para estimar el número de huevos en peces. El Método Directo, que
implica contar individualmente las ovas de una hembra o contenedor. Esto se realiza
manualmente mediante paletas que contienen 100 o hasta 1000 orificios del diámetro de las
ovas que se van a contar. De manera que cada “paleteo” realizado significa que se han
contado el número de orificios (ovas) que contiene la paleta. Por lo laborioso del proceso,
este es poco utilizado y regularmente se utilizan Métodos Indirectos de cuantificación de
huevos. Los más utilizados son los métodos de Von Bayer, de Burrows o gravimétrico.

El Método de Von Bayer consiste de cuantificar el número de ovas hidratadas y sin

presionar que entran en la regla de Von Bayer (reglilla en forma de canal de 30cm de
longitud). Con este valor se busca en la Tabla de Von Bayer el diámetro que tienen las
ovas y el número de ovas por litro (Tabla 1).

Tabla 1. Tabla de Von Bayer utilizada para estimar el número de ovas por litro en
peces. El número de ovas es estimado en una reglilla de 30cm.
Número Diámetro Número / Número Diámetro Número / Número Diámetro Número /
de ovas (cm) litro de ovas (cm) litro de ovas (cm) litro
31 0.98 1232 61 0.50 9386 91 0.33 31161
32 0.95 1355 62 0.49 9855 92 0.33 32200
33 0.92 1486 63 0.48 10340 93 0.33 33262
34 0.90 1625 64 0.48 10840 94 0.32 34346
35 0.87 1773 65 0.47 11356 95 0.32 35454
36 0.85 1929 66 0.46 11888 96 0.32 36585
37 0.82 2095 67 0.45 12437 97 0.31 37741
38 0.80 2269 68 0.45 13002 98 0.31 38920
39 0.78 2453 69 0.44 13584 99 0.31 40124
40 0.76 2647 70 0.44 14184 100 0.30 41352
41 0.74 2850 71 0.43 14800 101 0.30 42605
42 0.73 3064 72 0.42 15434 102 0.30 43883
43 0.71 3288 73 0.42 16087 103 0.30 45186
44 0.69 3523 74 0.41 16757 104 0.29 46515
45 0.68 3768 75 0.41 17445 105 0.29 47870
46 0.66 4025 76 0.40 18152 106 0.29 49251
47 0.65 4293 77 0.40 18878 107 0.28 50658
48 0.64 4573 78 0.39 19624 108 0.28 52091
49 0.62 4865 79 0.39 20388 109 0.28 53552
50 0.61 5169 80 0.38 21172 110 0.28 55039
51 0.60 5485 81 0.38 21976 111 0.27 56554
52 0.59 5814 82 0.37 22800 112 0.27 58096
53 0.58 6156 83 0.37 23644 113 0.27 59666
54 0.56 6511 84 0.36 24509 114 0.27 61294
55 0.55 6880 85 0.36 25395 115 0.27 62891
56 0.54 7262 86 0.35 26302 116 0.26 64546
57 0.53 7658 87 0.35 27230 117 0.26 66229
58 0.53 8068 88 0.35 28180 118 0.26 67942
59 0.52 8493 89 0.34 29152 119 0.25 69684
60 0.51 8932 90 0.34 30145 120 0.25 71456
El método de Burrows consiste en estimar por desplazamiento (principio de Arquímedes) el
volumen que ocupan 50 ovas. Luego se determina el volumen total de ovas mediante un
jarro graduado y por medio de una regla de tres simple, se estima el número de ovas
contenidas en el volumen total. De igual forma, con el método gravimétrico se estima el
peso de 50 ovas, luego se pesa el total y por regla de tres simple, se estima el número total
de ovas que contiene esa biomasa.

Luego de conocer el número de ovas de cada hembra y de saber que sanitariamente, las
ovas están sanas, se puede iniciar el proceso de incubación propiamente tal.

2. Incubación

Como se señaló anteriormente, todo el proceso, desde la fecundación en adelante, se debe

realizar en ausencia de luz, ya que los rayos UV pueden matar a un porcentaje importante
de los embriones. Además, se reitera la necesidad de usar agua de la mejor calidad térmica
y física, es decir, en ausencia de sólidos en suspensión.

Se debe recordar además, que durante esta etapa los embriones son muy débiles y no deben
ser sometidos a estrés mecánicos (movimientos bruscos), razón por la cual no deben ser
movidos hasta que se alcance el estado de embrión de ojos pigmentados, comúnmente
denominado “ova con ojos”.

Para incubar, se recomienda utilizar un flujo de agua de al menos 1L/min por cada 10.000
ovas y día por medio, aplicar algún tratamiento antimicótico con algún producto autorizado.
En la actualidad, en Chile el producto que asegura mejores resultados es el Bronopol que se
utiliza en dosis de 50ml/m3 de agua durante una hora (corroborar tratamiento con
recomendaciones del fabricante).

Cuando los embriones alcancen cerca de 70UTA, se debe determinar el porcentaje de

fecundación de las ovas. Para esto se debe preparar una solución de ácido acético al 10%
(si no se dispone de este ácido, se puede utilizar vinagre de vino al 5%) y agregar esta
solución en un tubo de ensayo hasta la mitad de su capacidad. De cada bandeja de
incubación, se debe tomar cerca de 20 embriones e introducirlos en la solución. Agitar
algunos minutos y esperar a que en los embriones se evidencie: Una línea de color blanco
si las ovas han sido fecundadas y la línea observada corresponde al tubo neural. O bien, se
observará un disco blanco, que indica que la ova no fue fecundada y lo que se observa es el
disco embrionario (Fig. 1).

Cuando los embriones acumulen 230UTA, pueden ser manipulados con el fin de eliminar
las ovas sin fecundar, los embriones débiles o muertos.
 a b

Figura 1. Metodología para determinar el porcentaje de fecundación de ovas de

trucha arcoiris. a. Introducción de ovas en ácido acético. b: Ovas
embrionadas con el tubo neural en formación (flechas).

3. Schoking

Este proceso no es más que someter a los embriones a un golpe hídrico una vez que han
alcanzado el estado de “ova con ojos”. Para esto se debe esperar que los embriones se
pigmenten muy bien, una vez observado esto, las “ovas con ojos” son sacadas de su
incubador mediante sifoneo y dejadas caer en el interior de un balde que inicialmente se
encuentra con un 25% de su capacidad. Una vez que se ha succionado a todas las ovas del
incubador (y que ahora se encuentran en el interior del balde) se deben filtrar en un colador
y llevar al sitio en el que se separarán las ovas vivas (naranjas) de las muertas (blancas). En
este momento se debe cuantificar con un frasco graduado el volumen total de ovas.

La separación de las ovas vivas de las muertas se puede realizar manualmente mediante
“picaje”, que consiste en tomar con una bombilla o cánula las ovas muertas del interior del
incubador. Una vez separadas, se cuantifica el volumen de ovas vivas y muertas, con el
método de Von Bayer, se puede estimar el número total de ovas sobrevivientes y comenzar
con ellas la próxima etapa. Si las cantidades de ovas cultivadas son muy altas, se
recomienda el uso de una seleccionadora de ovas, máquina que mediante un haz de luz, es
capaz de separar las ovas vivas de las muertas a una velocidad de hasta 100.000ovas por
hora, incluso algunas máquinas realizan el recuento de las ovas vivas y muertas.
4. Reincubacion

Si se quiere comercializar “ovas con ojos”, se deben despachar después de realizar el

schoking. Si la empresa pretende producir alevines, se debe disponer los sistemas de
eclosión que permitan obtener las larvas sin manipular en exceso a los especímenes
cultivados, disponiendo los embriones en estanques o bateas de alevinaje. Lo más
recomendable es utilizar incubadores con fondo de rejilla de 2-3mm de abertura y que
deben ser dispuestos a media agua, de manera que cuando se produzca la eclosión, las
larvas al manifestar su geotactismo positivo, pasarán al fondo del estanque o la batea en que
se encuentran los incubadores. Los embriones muertos o que no fueron capaces de
eclosionar, quedarán sobre la rejilla y podrán ser sacados fácilmente cuando finalice la
eclosion. La columna de agua durante la eclosión no debe superar los 20cm de altura y la
intensidad luminosa debe ser baja o nula.

En trucha arcoiris, regularmente la absorción del saco vitelino de la larva se prolonga por
cerca de 150UTA, lo que equivale a 15 días si la temperatura de cultivo se encuentra
cercana a 10°C. Regularmente, se debe estar extrayendo la mortalidad y alevines deformes
que se encontrarán en esta etapa.
 Protocolo para la fase de alevinaje de trucha arcoiris.

I. Introducción

Las larvas de peces (comúnmente llamadas “alevines de saco”) no requieren alimentarse

porque se nutren en forma endógena con las reservas alimenticias contenidas en el saco
vitelino. Una de las etapas más críticas en el ciclo de vida de una especie, es cuando debe
pasar de la alimentación endógena a la exógena. De hecho, se ha demostrado que en
salmónidos silvestres, cerca del 80% de los especímenes muere en esta etapa. Sin embargo,
en cultivo esta mortalidad no debiera superar el 5%.

La alimentación exógena debe comenzar en forma gradual cuando la larva aún conserva
cerca de un 20% del saco vitelino, en este momento aunque la larva aún se nutre de su saco
vitelino, ya tiene su boca funcional y puede comenzar a adaptarse al sabor, color, textura y
forma de captura del alimento inerte, de manera que cuando el saco ya está absorbido, se
tendrá un alevín que ya es capaz de alimentarse por sí solo.

Se debe considerar que en la primera y segunda fase del alevinaje se trabaja con
especímenes que tienen conductas absolutamente diferentes:
En la primera fase, la larva (que aún posee saco vitelino) no se alimenta, es gregaria, es
bentónica, tiene fototactismo negativo y geotactismo positivo. El objetivo de esta fase debe
ser que la mayor cantidad del saco vitelino se transforme en tejidos corporales del
espécimen, por lo que se debe trabajar con bajo flujo y luminosidad.

En la segunda fase, el alevín es pelágico, necesita luminosidad abundante para alimentarse

y tenderá a mantenerse lejos del fondo del estanque.

II. Actividades
Las actividades que se deben realizar durante el alevinaje se pueden dividir en las
siguientes etapas:

11. Larvicultura (alimentación endógena)

12. Alevinaje (alimentación exógena)

III. Materiales:

Los materiales necesarios para la fase de alevinaje son: estanques o artesas de fondo y
paredes muy suaves, útiles de aseo, alimento, etc..
IV. Desarrollo del proceso

Actividades en las diferentes etapas del alevinaje:

1. Larvicultura (alimentación endógena)

La fase de alimentación endógena y exógena se deben realizar en la misma unidad de

cultivo. El color de estanque más utilizado es el gris perla, aunque también son adecuados
de color celeste o verde claro.

 Una vez instaladas las larvas en los estanques se debe considerar que la etapa de
absorción del saco vitelino en la trucha arcoiris se prolonga por cerca de 150UTA,
o sea, cerca de 15 días si se mantienen a 10°C.
 Las larvas tenderán a quedarse en el fondo del estanque y por su conducta
gregaria, formarán grandes grupos en alguna porción del estanque
(frecuentemente cerca de la entrada del agua). Aunque en truchas no es relevante,
si la conducta gregaria es muy marcada, se puede agregar sustrato en el fondo del
estanque con el fin de reducir el apiñamiento de los especímenes.
 Durante esta etapa se debe mantener oscuridad absoluta.
 Regularmente, se debe trabajar a una tasa de cambio igual a uno. Esto dependerá
de la cantidad de oxígeno disponible, si fuera menor, se deberá aumentar
levemente.
 Se recomienda medir el oxígeno a la salida de los estanques. Idealmente no
debiera bajar de 5mg/L. Valores menores a 4mg/L ponen en riesgo la
sobrevivencia de las larvas.
 Regularmente, se debe retirar la mortalidad y alevines deformes. Cuantificando
adecuadamente los especímenes que se observan normales o deformes (cola de
violín, siameses, cíclopes, mandíbula deforme, lordosis, escoliosis, etc.).
 Sólo si el agua presenta sedimento, se debe limpiar el fondo del estanque. Para
esto se utiliza un suave flujo de agua (de la misma con la que se están cultivando
las larvas) y se comienza a arrastrar el sedimento o especímenes muertos hacia la
salida del estanque con la fuerza del flujo de agua.
 Cuando los especímenes comiencen a nadar en la columna de agua (a levantarse),
se debe comenzar aplicar una mayor luminosidad al interior del estanque. Esto se
logra levantando la protección del estanque, o aplicando luces de baja intensidad
luminosa sobre el estanque.
 En esta etapa se puede ofrecer pequeñísimas cantidades de alimento de arranque.
Idealmente con tamaños de partículas de 150 a 300µm de diámetro, con la mayor
flotabilidad posible con el fin de que permanezca el mayor tiempo posible en la
columna de agua y las larvas, aun lentas para nadar, puedan capturar pequeñas
cantidades de alimento.
 2. Alevinaje (alimentación exógena)

Una vez que la mayor parte de los especímenes se encuentra nadando en la columna de
agua, se comienza con la fase de alevinaje propiamente tal.

 Para facilitar la captura del alimento por los peces, se debe mantener una intensidad
luminosa de 400lux en la superficie del agua y si existe el recurso, se puede
mantener 24hr de luz.
 El alimento se debe suministrar “a libre disposición” la mayor cantidad de veces
posible (pero en pequeñas dosis, no necesariamente a saciedad) y las 24hr del día.
Esto implicará que se suministrará cerca de un 6 a 8%PC por día en alimento.
 La tasa de cambio se debe aumentar a no más de 1,5 veces por hora. Aunque se
debe revisar en forma periódica el oxígeno de salida de los estanques. Tratando
siempre de mantener 5mg/L de salida. Si el valor es mayor, se puede reducir
levemente el flujo, si es menor, se debe aumentar.
 Parte del alimento que se suministrará no será utilizado por los peces y se acumulará
en el fondo del estanque. Esto implicará que diariamente, se aplique la limpieza con
el flujo de agua con la manguera igual que en la etapa anterior. Se debe registrar
diariamente la mortalidad extraída y diferenciar sus malformaciones. Como ahora
no existen especímenes en el fondo del estanque (salvo los muertos), se puede
utilizar con mucho cuidado un cepillo o brocha para “barrer” el fondo del estanque
y eliminar partículas contaminantes que pudieran estar adheridas a las paredes.
 Durante esta fase, si se alimenta durante el día solamente, los especímenes por lo
menos duplicarán su peso cada 15 días aprox., por lo que no se recomienda realizar
controles de crecimiento antes del mes de cultivo. Si se alimenta las 24hr del día,
los especímenes presentarán crecimientos mucho mayores, fácilmente un 300% en
un mes.
 Si esta fase se realiza en estanques exteriores y no se cuenta con energía eléctrica, se
debe cubrir el estanque con malla negra que evite la luz directa sobre los peces, pero
que se mantenga una adecuada iluminación indirecta en el interior de los estanques.
Si se cuenta con energía eléctrica, se recomienda cubrir el estanque con malla de
mayor protección (80%) y aplicar sobre los estanques tubos fluorescentes que
puedan mantener cerca de 400lux en la superficie del agua. Como se señaló
anteriormente, pueden ser durante las 24hr del día para mejorar la alimentación.
 Cuando los especímenes alcancen dos gramo de peso, pueden ser trasladados a
sistemas de menor control como balsas jaulas y resistir traslados de varias horas de
duración.
 Cuando no se registran brotes de enfermedades infecciosas, esta fase no debiera
presentar mortalidades superiores al 5%.
Protocolo para la recepción, desinfección y reincubación de ovas de trucha arcoiris.

I. Introducción

Regularmente, los embriones de trucha arcoiris se pueden trasladar sin problemas una vez
que alcanzan el estado de embrión de ojos pigmentados (regularmente llamado “ova con
ojos”), estado del desarrollo en el que resisten acciones mecánicas fuertes como las
recibidas durante el traslado de un continente a otro.

El transporte se realiza en cajas de tecnopor (pluma-vit) nuevas en el interior de las cuales

se disponen las bandejas con ovas cubiertas con un paño húmedo. La bandeja superior
viene sin ovas y se encontrará llena de hielo, este debe ser preparado con la misma agua de
cultivo con el fin de que durante el viaje, este se derrita y el agua generada, escurra por
entre las bandejas que contienen las ovas. El número de bandejas con ovas dependerá de la
cantidad adquirida. La bandeja inferior debe venir vacía (sin ovas), con el fin de que el
agua generada durante el viaje, se acumule en el espacio del fondo de la caja y no mueva en
exceso a los embriones, lo que podría provocar la mortalidad de un porcentaje importante
de ellos.

II. Actividades
Las actividades que se deben realizar durante la recepción de ovas se pueden dividir en las
siguientes etapas:

13. Actividades anteriores a la apertura de las cajas.

14. Actividades posteriores a la apertura de las cajas:
c. Hidratación
d. Desinfección
e. Aclimatación
f. Reincubación

III. Materiales:

Los materiales necesarios son: Termómetro, jarros de plástico graduados, desinfectante

yodado, reloj o cronómetro, hielo (preparado con agua de cultivo o clorada, en este último
caso, debe estar dispuesto en bolsas de nylon que no estén rotas), tanque de desinfección
(con flujo cerrado), tanque de aclimatación (con flujo abierto), probetas e incubadores.
IV. Desarrollo del proceso

Actividades a desarrollar en las diferentes etapas de la recepción de ovas

1. Actividades anteriores a la apertura de las cajas.

Una vez recibidas las cajas con ovas se debe corroborar lo siguiente:

 Que se cumpla con toda la normativa vigente en relación al transporte de ovas

dentro o fuera del país.
 Que las cajas no vengan dañadas y debidamente etiquetadas.
 Que estén acompañadas con el correspondiente certificado sanitario.
 Que tengan señaladas las UTA que tenían los embriones al momento de ser
empacados en su piscicultura de origen.

2. Actividades posteriores a la apertura de las cajas.

Este proceso se debe realizar en el interior de una sala que tenga baja iluminación y su
temperatura ambiente esté bajo 10°C. Una vez abiertas las cajas, se debe retirar la bandeja
superior que solo contiene hielo y utilizarlo para bajar la temperatura del agua (si fuera
necesario) que se utilizará en la desinfección. Luego se debe introducir cuidadosamente un
termómetro entre las ovas con el fin de conocer la temperatura a la que se encuentran.

a. Hidratación: Durante el traslado, las ovas se deshidratan, razón por la cual se

debe recuperar el balance hídrico de los embriones una vez abierta las cajas.
Esto se realiza utilizando agua que se encuentre a la misma temperatura de las
ovas, agregándola en flujos intermitentes durante aproximadamente 15min.
b. Desinfección: Una vez hidratadas las ovas, deben ser desinfectadas con algún
compuesto yodado a una concentración de 100mg/L de yodo activo por un
tiempo de 10min. Idealmente en este proceso las ovas deben estar dentro de
incubadores cerrados, con el fin de que no se escapen de las bandejas y para
trasladar fácilmente los embriones de una solución a otra.
c. Aclimatación: Después de la desinfección, los embriones deben ser trasladados
rápidamente al sistema de aclimatación, el que contendrá agua a la misma
temperatura que las ovas. Una vez introducidas las ovas, se debe abrir
levemente el flujo del tanque o artesa, con el fin de que la temperatura del agua
se incremente en aproximadamente 1°C por hora. Así, si existe un gradiente
térmico de 4°C entre las ovas y el agua de cultivo, se deberá intentar que en
cuatro horas se alcance la temperatura de la piscicultura. Mientras se realiza la
aclimatación, se puede realizar la cuantificación del total de ovas recibido, ya
sea por el método de Von Bayer u otro.
d. Reincubación: Una vez que las ovas han alcanzado la temperatura del agua de
cultivo de la piscicultura, pueden ser trasladadas a los sistemas de reincubación
 según metodología estándar de la piscicultura, es decir, aproximadamente
incubar 10.000 ovas por cada bandeja de un incubador vertical.

Luego de 24hr de la recepción, extraer y cuantificar los embriones muertos y larvas

eclosionadas. Estos valores no debieran ser superiores al 1-2% del total de ovas.
 Protocolo para la producción de poblaciones monosexo (todas hembras) en trucha
arcoiris.

I. Introducción

En salmónidos, el sexo está determinado genéticamente por los cromosomas sexuales X e

Y. El genotipo de una hembra es XX, en cambio el de un macho es XY. Esto implica que
en un proceso reproductivo normal (al azar), donde se encuentren gametos masculinos y
femeninos en forma numerosa, siempre existirá la posibilidad de que la descendencia
presente un 50% de especímenes machos y 50% de especímenes hembras (Fig. 1).

hembra macho
Figura 1. Genotipos y descendencia probable de
xx x xy encontrar en un proceso reproductivo normal en
truchas.
x x x y

xx xx xy xy

50% Hembras 50% Machos

Estos cromosomas determinarán la presencia de caracteres sexuales primarios (ovarios o

testículos) y secundarios (forma de la mandíbula, tamaño de la cabeza, color externo,
conducta agresiva en los machos, etc.).

En los animales, la composición genética que determina el sexo de un individuo no se

puede modificar. Pero en peces, sí se puede modificar la expresión fenotípica del sexo.
Esto ocurre regularmente, poco después de la eclosión, si artificialmente, el cultivador
mantiene a sus peces en ambientes ricos en hormonas masculinas, las hembras de esa
población modificarán su desarrollo gonadal hacia un testículo. Este individuo llamado
productivamente “neomacho” (Fig. 2) ya que genéticamente es hembra, pero
fenotípicamente es macho, desarrollará un testículo que podrá producir espermatozoides,
pero todas estas células contendrán el cromosoma X. Por lo tanto, si se fecunda un grupo
de ovocitos (que solo contienen el cromosoma X) con este semen la descendencia será
100% hembras (Fig. 3), comúnmente denominadas “toda hembra”.

Figura 2. Espécimen “neomacho”

(XX) de trucha arcoiris de dos años de
edad con signos de maduración sexual.
hembra normal “neomacho” Figura 3. Genotipos y probabilidad de descendencia
entre una hembra normal y un “neomacho”.
xx x “xx”

x x x x

xx xx xx xx

100% Hembras
La problemática surge porque el testículo de los “neomachos” deriva de los esbozos de un
ovario, que en salmónidos carece de conducto, por lo tanto este nuevo “testículo” carecerá
de conducto para evacuar el semen producido, por lo tanto, deberá ser sacrificado para
obtener su semen (Fig. 4a). Luego se debe extirpar el testículo y macerarlo para extraer el
semen (Fig. 4b).

Figura 4. a: Vista macroscópica del testículo

de un “neomacho” de trucha arcoiris. b:
Maceración del testículo de un “neomacho”
para obtener el semen.
a

Los neomachos se demoran dos años en alcanzar la madurez sexual, por lo que este es el
tiempo que se debe esperar para producir por primera vez una población monosexo.
Existen métodos directos (ginogénesis) y más rápidos para obtener estas poblaciones
formadas solo por hembras, pero la técnica arroja menores sobrevivencias y genera una alta
homocigosis, por lo que productivamente es poco utilizada.

Si la aplicación de la hormona se realiza sobre larvas que provienen de una población “todo
hembra” se facilita la identificación de los neomachos adultos, ya que todos los machos que
se encuentren en la población, de seguro que son neomachos.
II. Actividades
Las actividades que se deben realizar para obtener poblaciones “todo hembra” utilizando
“neomachos” en truchas se pueden dividir en las siguientes etapas:

15. Preparación de la hormona

16. Suministro de la hormona
17. Evaluación de la eficiencia de la reversión
18. Utilización de “neomachos” (después de dos años)
g. Identificación de “neomachos”
h. Extracción de testículos y semen
i. Evaluación de calidad del semen
j. Fecundación

III. Materiales:

Los materiales necesarios para la producción de poblaciones todo hembras, son:

17αMetiltestosterona, alcohol absoluto, balanzas, alimento, pulverizador, microscopio,
material quirúrgico, diluyente espermático, etc.

IV. Desarrollo del proceso

Actividades a desarrollar en la producción de poblaciones monosexo en truchas

1. Preparación de la hormona

La hormona frecuentemente utilizada es la 17α Metiltestosterona. Como es de naturaleza

lipídica, debe ser disuelta en lípidos o alcohol. Lo más frecuente es utilizar alcohol etílico
absoluto. Para un kilogramo de alimento, se debe suministrar 3mg de hormona y diluirla en
250ml de alcohol. Con un pulverizador, la mezcla de hormona y alcohol se debe distribuir
lo más homogéneamente posible sobre el alimento, luego se mezcla bien para que todo el
alimento pueda recibir hormona. Antes de suministrar a los peces, el alimento hormonado
debe reposar por al menos 24hr en un lugar bien ventilado.

2. Suministro de la hormona

La hormona se debe suministrar desde el inicio de la primera alimentación hasta dos meses
después, según la estrategia normal de alimentación utilizada en la piscicultura.
3. Evaluación de la eficiencia de la reversión

Después de aprox. 10 meses de la eclosión de los peces, se debe evaluar el porcentaje de

eficiencia en la reversión. Para esto se toman 20 individuos y se les extrae la gónada
mediante una disección (Fig. 5). Se debe tomar la gónada de cada individuo y ponerla entre
dos portaobjetos y aplicar una fuerte presión con los dedos con el fin de reventar la gónada.
Una producido esto, se deben observar bajo un microscopio normal y observar con aumento
de 10 ó 20x. La gónada de los machos se observará formada sólo por filamentos, en
cambio, los ovarios se verán formados por abundantes ovocitos redondos en los cuales es
posible observar su vesícula germinal (Fig. 6a y b).

Figura 5. Desarrollo gonadal (flecha) en

un espécimen de trucha arcoiris de 10
meses de edad.

Figura 6. a: Microfotografía de un
aplastado “in toto” de un testículo de
trucha arcoiris de 10 meses de edad. b:
Microfotografía de un aplastado “in toto”
de un ovario de trucha arcoiris de 10
meses de edad con ovocitos en su interior.
a
10x

b
4. Utilización de “neomachos” (después de dos años)
a. Identificación de “neomachos”

Una vez alcanzada la pubertad de los “neomachos”, como se observa en la Fig. 2 estos
desarrollan caracteres sexuales secundarios similares a un macho normal, pero sin
expresarlos tan marcadamente. Si la cohorte a la que se aplicó hormona era “toda hembra”,
cualquier espécimen que se encuentre y que esté masculinizado, será un “neomacho”. En
cambio si la población tratada era normal (50% machos y 50% hembras), se encontrarán
individuos masculinizados que son machos normales y “neomachos”, para diferenciar con
seguridad unos de otros, se deben sacrificar todos aquellos individuos que estén
masculinizados, pero que al aplicar un masaje abdominal, no liberan semen.

Los “neomachos” son fácilmente reconocibles porque su testículo carece de conducto (Fig.
4a), es redondeado y además, frecuentemente se puede encontrar entre el tejido conectivo,
pequeños grupos de ovas en diferente estado de la vitelogénesis. En cambio los machos
normales tienen un testículo alargado con un conducto deferente que conecta el testículo
con el poro genital (Fig. 7).

Figura 7. Desarrollo testicular de forma

alargada y con conducto deferente (flecha)
de un macho normal de trucha arcoiris.

b. Extracción de testículos y semen

Una vez realizada la disección del neomacho, se debe extraer el testículo y macerarlo sobre
una malla o colador de apertura de malla superior a 2mm. Se debe realizar numerosos corte
sobre el testículo con el fin de que el “semen” que contiene en su interior sea liberado (Fig.
4b). También en esta etapa, el testículo puede ser sumergido en un diluyente espermático
para liberar las células espermáticas. El uso de un diluyente es muy recomendable ya que el
“semen” de “neomachos” es muy denso y difícil de dosificar, por lo tanto, el diluyente
facilita su uso y prolonga su viabilidad.
c. Evaluación de calidad del semen

Una vez extraído el semen, debe ser almacenado igual que el semen normal, es decir
protegido de la luz y a baja temperatura. Antes de ser usado, debe ser evaluado el nivel de
motilidad espermática que alcanza en forma similar a lo indicado para machos normales.

d. Fecundación

Después de corroborar el nivel de motilidad espermática, el semen de neomachos se debe

utilizar en forma similar al semen de un macho normal.
 Protocolo para el control de la reproducción en trucha arcoiris.

I. Introducción

El control de la reproducción en peces es realizado por una serie de factores ambientales

que regulan los ciclos hormonales que en definitiva son los que permiten a un pez realizar
sus procesos reproductivos. Dentro de los factores ambientales que juegan un rol
preponderante en regular la reproducción de los peces, se encuentran la temperatura y el
fotoperiodo. La regulación artificial de estos factores, permiten obtener desoves de las
especies cultivadas fuera de temporada. Regular la temperatura del agua de cultivo es de
gran costo, por lo que frecuentemente en piscicultura se utiliza la modificación del
fotoperiodo para obtener desoves fuera de temporada. Esto se basa fundamentalmente en
que controlar este factor ambiental es relativamente fácil y de bajo costo. A pesar de lo
anterior, la temperatura del agua en que se realizan los bioensayos, debe necesariamente
encontrarse dentro de los rangos adecuados para los procesos reproductivos, de lo contrario,
aunque los peces maduren sexualmente, la calidad de los gametos no será buena. Por otra
parte, los tratamientos deben ser aplicados adecuadamente, una escoto fase (oscuridad) NO
puede ser interrumpida por una iluminación brusca, o bien, una fase de luz no se puede
transformar en escoto fase de un momento a otro por un corte de energía eléctrica.

Además, se debe considerar que al someter a fotoperiodos modificados a los peces

cultivados, éstos no siempre responderán fácilmente. Siendo frecuente observar que los
peces que responden a los tratamientos no es toda la cohorte que se cultiva, o bien, se
pueden presentar problemas de baja fecundidad o fertilidad.

En condiciones naturales, un pez percibe el paso de un año a través del tiempo que
transcurre entre dos solsticios de verano (es decir 12 meses) (Fig. 1). Si artificialmente se
aplican fotoperiodos comprimidos y se producen estos solsticios entre un periodo de nueve
meses, el pez “creerá” que ya ha transcurrido un año (aunque solo han pasado nueve meses)
(Fig. 2). Lo mismo creerá si los periodos de máxima luminosidad (solsticios) se producen
entre seis meses, y en trucha arcoiris, incluso se han realizado experiencia con ciclos de 3
meses, los que productivamente, no son beneficiosos para el productor.

1 año Solsticio
de verano
Figura 1. Variaciones en las horas de
16hr luz natural (aprox) en el Hemisferio
Luz
Sur a lo largo de un año.

Solsticio
de invierno
9hr

E Jn E Jn Meses
 9 mese
Figura 2. Modelo de fotoperiodo
16hr
artificial comprimido de nueve
Luz
meses para controlar la madurez
sexual en trucha arcoiris.

9hr

E Jn E Jn Meses

Para que estos manejos sean exitosos, las fases de luminosidad y oscuridad, deben ser
respetadas rigurosamente, de lo contrario, los peces “no le creeran” al acuicultor que se
encuentra en un verano o invierno artificial. Además, como se señaló anteriormente, la
tempertura se debe encontrar idealmente en rangos cercanos a 10°C, porque el pez no
creerá que se acerca el invierno si detecta una reducción en las horas de luz, PERO LA
TEMPERATURA DELAGUA ESTÁS SUBIENDO ¡¡¡

II. Materiales:

19. Los materiales necesarios son: Peces de un año de edad, estanques cubiertos,
circuitos eléctricos, controladores de tiempo y materiales de uso rutinario en cultivo
de peces.

III. Actividades
Las actividades que se deben realizar controlar artificialmente la reproducción de la trucha
arcoiris mediante fotoperiodos comprimidos se pueden dividir en las siguientes etapas:

1. Selección de los peces a tratar

2. Selección de fotoperiodos comprimidos
3. Evaluación de madurez

IV. Desarrollo del proceso

Actividades a desarrollar en el control artificial de la reproducción de la trucha arcoiris.

1. Selección de los peces a tratar

Idealmente, estas experiencias se recomienda iniciarlas con peces que ya han tenido su
primera madurez sexual, esto con el fin de asegurarse que los especímenes utilizados no
son estériles o de madurez tardía. En el caso de Chucuito, esto es difícil de lograr por la
escasez de agua y de espacio, por lo tanto, excepcionalmente, se propone iniciar la
experiencia con peces de un año de edad, pero entre los cuales no se encuentren machos
precoces.

2. Selección de fotoperiodos comprimidos

Se recomienda trabajar con fotoperiodos comprimidos no menores a seis meses, ya que

hasta este tiempo las hembras pueden producir ovas de tamaño aceptable para el manejo en
cultivo, ya que cuanto más corto es el periodo entre un solsticio y otro, mayor gasto
energético tendrá la hembra en sus actividades reproductivas, por lo que se le deberá dar
una ración un poco mayor de alimento a los peces que se encuentren en fotoperiodos
comprimidos de 6 meses.

Como se señaló anteriormente, los estanques deben ser de 1m3 de capacidad útil y estar
cerrados en forma hermética al paso de la luz (Fig. 3). Con una cavidad en la parte central
de la tapa para poder instalar un tubo fluorescente, el que además, debe estar protegido con
una lámina de vidrio para evitar que los peces salpiquen agua al circuito eléctrico y dañen
la fuente de luz, lo que será perjudicial para el éxito del proyecto. Por esta razón, los
circuito eléctricos deben ser revisados diariamente, porque si se quema un tubo de
iluminación, los peces no pueden permanecer en oscuridad hasta que los técnicos se
percaten que el tubo está quemado. Por esto, se debe disponer de un stock de tubos de
repuestos para cuando se queme alguno de ellos.

Figura 3. Tipo de estanques recomendados

para la aplicación de fotoperiodos
comprimidos para la reproducción de
trucha arcoiris.

La experiencia debe comenzar cuando se produce el solsticio de invierno, ya que en ese

momento los peces tendrán una año de nacidos. Se debe disponer de un total de 30 peces
por estanque y someterlos a las condiciones rutinarias de cultivo. Suministrando una tasa
de alimentación del 1%PC por día.

Se contempla el inicio de la experiencia en el mes de abril, cuando se ha visto que las

truchas desovan masivamente en la piscicultura Chucuito.
Fotoperiodo artificial de 12 meses: Este tratamiento simulará el fotoperiodo natural y
permitirá evaluar la respuesta de los peces al sistema artificial de iluminación.

Fotoperiodo comprimido de 6 meses: Este tratamiento permitirá que los peces estén en
condiciones de desovar en el mes de octubre.

Fotoperiodo comprimido de 9 meses: Este tratamiento permitirá que los peces estén en
condiciones de desovar en el mes de diciembre.

Para controlar las horas de luz, se debe regular semanalmente los controladores de tiempo
con el fin de ir ajustando las horas de luz diaria al fotoperiodo que se quiere aplicar.

3. Evaluación de madurez

Idealmente, se debiera sacrificar mensualmente al menos diez peces para determinar el

estado de madurez sexual que llevan los especímenes. Considerando el escaso volumen de
agua del que se dispone en Chucuito, lo que obliga a trabajar con un bajo número de
especímenes, la evaluación deberá realizarse sólo en forma visual, siguiendo los criterios
señalados en el protocolo de desove indicados en este informe. Esto implica básicamente,
evaluar la coloración externa que se volverá más oscura cuando se aproxime la madurez, el
desarrollo del poro genital y la expresión de los colores nupciales.

Una vez detectados especímenes con signos de maduración, deben ser desovados siguiendo
los protocolos señalados anteriormente. Una vez terminado un ciclo de fotoperiodo, se
debe continuar con su aplicación, ya que se ha observado que los peces con el tiempo se
van adaptando a los fotoperiodos artificiales.