Ruth Abish González Hernández
ES1822030585
QUIMICA ANALITICA
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SANDRA MARIA ARMIDA MACIAS LUEVANO
UNIDAD 4
Espectrofotometría
La Espectrofotometría. Utiliza el espectrofotómetro, que es un
instrumento que permite comparar la radiación absorbida o
Principios
transmitida por una solución que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia.
odas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun
el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe
Principios
radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro
visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e
infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es
característica para cada sustancia química. Cuando la luz
atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la
Ley de Beer Aplicaciónes
La de Beer Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un
energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser cuerpo depende de la concentración en la solución. Por ejemplo, en un vaso
absorbida. El color de las sustancias se debe a que éstas
absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide de vidrio tenemos agua con azúcar diluida y en otro tenemos un vaso con la Las aplicaciones principales son:
sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes misma cantidad de agua pero con más azúcar diluida. El detector es una Aplicaciones
de onda no absorbidas. La espectrofotometría ultravioleta- celda fotoeléctrica, y la solución de azúcar es la que se mide en su
visible usa haces de radiación del espectro electromagnético, en Determinar la cantidad de concentración en una
concentración. Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz solución de algún compuesto utilizando las
el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria
en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran fórmulas ya mencionadas.
utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta mayor que si repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las Para la determinación de estructuras moleculares.
y visible del espectro. Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y
La identificación de unidades estructurales
conoce también como rango de uv cercano , la moléculas y son absorbidos por estos. especificas ya que estas tienen distintos tipos de
espectrofotometría visible solamente usa el rango del campo absorbancia (grupos funcionales o isomerías).
electromagnético de la luz visible , de 400 a 800 nm. Además, no Ley de Lambert
está de menos mencionar el hecho de que la absorción y
trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la Se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la
concentración y de la distancia recorrida. distancia recorrida por la luz. Por ejemplo, retomando el ejemplo de los
vasos, pero ahora, pensemos que ambos tiene la misma cantidad de agua y
la misma concentración de azúcar, pero, el segundo tiene un diámetro
mayor que el otro.
Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el
primer vaso, la cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si
repitiéramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas
electromagnéticas chocan contra un mayor número de átomos o/y
moléculas y son absorbidos por estos; de la misma forma que se explicó en
la ley de Beer.
Ley de Bouguer-Beer-Lambert
Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert (también
conocida como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinación
de las citadas anteriormente.
Espectrofotómetro.
instrumento que tiene la capacidad de proyectar un haz
de luz monocromática (de un largo de onda particular) a través de una
Funciones
muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.
Nos da información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.
Esto podemos lograrlo midiendo la absorbancia (Abs) a distintos largos
Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa está presente
en la muestra. La concentración es proporcional a la absorbancia, según
Funciones
la Ley Beer-Lambert: a mayor cantidad de moléculas presentes en la
de onda (l) y graficar estos valores en función del largo de onda,
muestra, mayor será la cantidad de energía absorbida por sus
formando un espectrograma. Como cada sustancia tiene unas
electrones. El espectrofotómetro mide la absorbancia de una muestra en los
propiedades espectrales únicas, distintas sustancias producen distintos
espectrogramas. Esto se debe a que cada sustancia tiene un arreglo de Abs = K C L espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda es
átomos tridimensional particular que hace que cada sustancia tenga determinado por un prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo
Abs: absorbancia
características únicas. Al ser expuestos a la luz del especrofotómetro, al largo de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que
algunos electrones de los átomos que forman las moléculas absorben K: coeficientes de extinción molar determina la intensidad del haz. Este haz atraviesa la muestra y llega a
energía entrando a un estado alterado. Al recuperar su estado original, C: concentración un tubo fotográfico, donde es medido. La cantidad de luz que atraviesa
la energía absorbida es emitida en forma de fotones. Esa emisión la muestra es el porcentaje (%) de trasmitancia. Podemos usar esta
L: distancia que viaja la luz a través de la muestra. (normalmente es de 1 unidad o cambiarla a absorbancia usando la siguiente ecuación.
de fotones es distinta para cada sustancia, generando un patron
cm)
particular, que varía con el largo de onda usado. Dependiendo del largo %T = - Log Abs.
de onda, será la cantidad de energía absorbida por una sustancia, lo que La cubeta promedio, que guarda la muestra, tiene dimensiones internas
logra generar un espectro particular al graficar Abs vsl. de un centímetro (L). La ecuación describe una línea recta, donde el
origen es cero. Si L es constante (1.0 cm) y se conoce el valor de K, El espectrofotómetro nos puede dar ambos valores a la misma vez,
podemos calcular C en base a Abs: ahorrando la necesidad de hacer los cálculos. (Trasmitancia= cantidad
Abs / K L = C de luz que atraviesa la mezcla). Una característica del instrumento es la
necesidad de "blanquear" el aparato antes de cada lectura. Esto se hace
colocando una cubeta con una solución control que tenga todos los
componentes de la reacción menos la sustancia que va a ser medida en
el instrumento y ajustando la lectura a cero absorbancia. El propósito de
esto es eliminar el registro de absorbancia (background) que puedan
presentar los demás componentes de la reacción a ese largo de onda
particular. Todas las moléculas presentan absorbancia porque todas
interfieren con el paso de la luz. Sólo que la absorbancia será óptima a
un largo de onda de luz específico para cada tipo de sustancia.
* Espectrometría de emisión atómica. Este método usa la * Espectrometría de emisión atómica. Este método usa la excitación de la llama; los
excitación de la llama; los átomos son excitados por el calor de la átomos son excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este método suele usar
llama para emitir luz. Este método suele usar un quemador de un quemador de consumo total con una salida de incineración redonda. Se utiliza una ESPECTROMETRÍA DE ABSORCIÓN
consumo total con una salida de incineración redonda. Se utiliza llama de temperatura más alta que la usada en la espectrometría de absorción
una llama de temperatura más alta que la usada en atómica para producir la excitación de átomos de analito. Ya que los átomos de analito La espectrometría de absorción es una técnica
la espectrometría de absorción atómica para producir la excitación están excitados por el calor de la llama, no es necesaria ninguna lámpara elemental en la cual la energía de un haz de luz se mide
de átomos de analito. Ya que los átomos de analito están excitados especial. Puede usarse un policromador de alta resolución para producir una intensidad antes y después de la interacción con una
por el calor de la llama, no es necesaria ninguna lámpara de emisión contra el espectro de longitud de onda por encima de un rango de muestra. Cuando se realiza con láser de diodo
elemental especial. Puede usarse un policromador de alta longitudes de onda que muestran líneas de excitación de elementos múltiples. O bien ajustable, se la conoce como espectroscopia
resolución para producir una intensidad de emisión contra el puede usarse un monocromador en una longitud de onda determinada para de absorción con láser de diodo ajustable.
espectro de longitud de onda por encima de un rango de longitudes concentrarse en el análisis de un solo elemento en una cierta línea de emisión. La También se combina a menudo con una
de onda que muestran líneas de excitación de elementos múltiples. espectrometría de emisión de plasma es una versión más moderna de este método.
O bien puede usarse un monocromador en una longitud de onda
técnica de modulación, como la
determinada para concentrarse en el análisis de un solo elemento espectrometría de modulación de longitud de
en una cierta línea de emisión. La espectrometría de emisión de onda, y de vez en cuando con la
ESPECTROMETRÍA DE LLAMA espectrometría de modulación de frecuencia a
plasma es una versión más moderna de este método.
fin de reducir el ruido en el sistema.
Las muestras de solución líquidas son aspiradas en un quemador o
* Espectrometría de fluorescencia atómica. Este método usa un una combinación de nebulizador/quemador, desolvatadas,
quemador con una salida de incineración redonda. La llama se usa para atomizadas, y a veces excitadas a un estado electrónico de energía
solvatar y atomizar la muestra, y una lámpara emite luz a una longitud de más alta. El uso de una llama durante el análisis requiere
onda específica en la llama para excitar los átomos de analito. Los átomos combustible y oxidante, típicamente en forma de gases. Los gases
ESPECTROMETRÍA DE FLUORESCENCIA
de ciertos elementos pueden entonces fluorescer, emitiendo luz en combustibles comunes que se usan son el acetileno (etino) o el
diferentes direcciones. La intensidad de esta luz fluorescente sirve para La espectrometría de fluorescencia usa fotones de
hidrógeno. Los gases de oxidante suelen ser el oxígeno, el aire, o el
cuantificar la cantidad del elemento analizado en la muestra. También energía más elevada para excitar una muestra, que
óxido nitroso. Estos métodos son a menudo capaces de analizar
puede usarse un horno de grafito para la espectrometría de fluorescencia emitirá entonces fotones de inferior energía.
atómica. Este método no es tan común como el de absorción atómica o el elementos metálicos en partes por millón, billones, o posiblemente
Esta técnica se ha hecho popular en aplicaciones
de emisión de plasma. rangos más bajos de concentración. Son necesarios detectores de luz
bioquímicas y médicas, y puede ser usada con
para detectar la luz con información que viene de la llama.
microscopía confocal, transferencia de energía entre
partículas fluorescentes, y visualización de la vida
ESPECTROMETRÍA DE CHISPA O ARCO media de fluorescencia.
Se usa para el análisis de elementos metálicos en
Tipos de espectrofotometría.
muestras sólidas. Para materiales no conductores, ESPECTROMETRÍA DE RAYOS X
se usa polvo de grafito para hacer conductora la ESPECTROMETRÍA DE EMISIÓN DE PLASMA
muestra. En los métodos de espectroscopia de Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energía) interaccionan con una
arco tradicionales se usa una muestra sólida que Es similar a la emisión atómica por llama, y la ha sustituido sustancia, los electrones de las capas interiores del átomo se excitan a orbitales
es destruida durante el análisis. Un arco eléctrico en gran parte. vacíos externos, o bien son eliminados completamente, ionizándose el átomo. El
o chispa se pasan por la muestra, calentándola a * Espectrometría de plasma de corriente contínua (DCP).
"agujero" de la capa interior se llena entonces con electrones de los orbitales
alta temperatura para excitar los átomos. Los Un plasma de corriente contínua se crea por una descarga
externos. La energía disponible en este proceso de excitación se emite como
átomos de analito excitado emiten luz en varias eléctrica entre dos electrodos. Es necesario un gas de
apoyo al plasma, y el más común es el argón. Las muestras radiación (fluorescencia) o quitará otros electrones menos enlazados del átomo
longitudes de onda que pueden ser detectadas (efecto Auger). La absorción o frecuencias de emisión (energías) son
pueden ser depositadas en uno de los electrodos.
mediante métodos espectroscópicos comunes. Ya características de cada átomo específico. Además, para un átomo específico se
* Espectrometría de emisión óptica por descarga
que las condiciones que producen la emisión por luminiscente (GD-OES) producen pequeñas variaciones de frecuencia (energía) que son características
arco no son controladas cuantitativamente, el * Espectrometría de emisión plasma-atómica acoplada del enlace químico. Con un aparato apropiado pueden medirse estas frecuencias
análisis de los elementos es cualitativo. Hoy día, inductivamente (ICP-AES) de rayos X características o energías de electrones Auger. La absorción de rayos X
las fuentes de chispa con descargas controladas * Espectrometría de ruptura inducida por láser (LIBS), y la espectroscopia de emisión se usan en química y ciencias de los materiales
bajo una atmósfera de argón permiten que este también llamada espectrometría de plasma inducida por para determinar la composición elemental y el enlace químico.
método pueda ser considerado eminentemente láser (LABIOS) La cristalografía de rayos X es un proceso de dispersión. Los materiales cristalinos
cuantitativo, y su uso está muy extendido en los * Espectrometría de plasma inducida por microondas(MIP) dispersan rayos X en ángulos bien definidos. Si la longitud de onda de los rayos X
laboratorios de control de producción de incidentes es conocida, se pueden calcular las distancias entre planos de átomos
fundiciones y acerías. dentro del cristal. Las intensidades de los rayos X dispersados dan información
sobre las posiciones atómicas y permiten calcular la organización de los átomos
dentro de la estructura cristalina.
ESPECTROMETRÍA INFRARROJA
ESPECTROMETRÍA VISIBLE ESPECTROMETRÍA ULTRAVIOLETA
La espectrometría infrarroja ofrece la posibilidad de
Muchos átomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener Todos los átomos absorben en la región ultravioleta (UV) ya
medir tipos diferentes de vibraciones en los enlaces
un espectro lineal fino, los átomos deben estar en fase gaseosa. que estos fotones son bastante energéticos para excitar a los
atómicos a frecuencias diferentes. En química orgánica,
Esto significa que la sustancia tiene que ser vaporizada. El electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante alta, se
el análisis de los espectros de absorción infrarroja indica
espectro se estudia en absorción o emisión. La espectroscopia de produce la fotoionización. La espectrometría UV también se
qué tipo de enlaces están presentes en la muestra.
absorción visible a menudo se combina con la de absorción usa para la cuantificación de proteínas y concentración de
ultravioleta (espectroscopia UV/Vis). Aunque esta forma pueda ADN, así como para la proporción de proteínas y ADN en una
ser poco común al ser el ojo humano un indicador similar, solución. En las proteínas se encuentran generalmente
todavía se muestra útil para distinguir colores. varios aminoácidos, como el triptófano, que absorben la luz
ESPECTROMETRÍA RAMAN
en el rango de 280nm. El ADN absorbe la luz en el rango de
260nm. Por esta razón, la proporción de absorbancia
La espectrometría Raman usa la dispersión inelástica de la
260/280nm es un buen indicador general de la pureza
luz para analizar modos vibracionales y rotatorios de las
ESPECTROMETRÍA DE RESONANCIA MAGNÉTICA relativa de una solución en términos de estas dos
moléculas. Las "huellas digitales" que resultan son una
NUCLEAR (RMN) macromoléculas. También pueden hacerse estimaciones
ayuda para el análisis.
razonables de la concentración de ADN o proteínas aplicando
La espectrometría de resonancia magnética nuclear analiza las la ley de Beer.
propiedades magnéticas de ciertos núcleos atómicos para
determinar diferentes ambientes locales electrónicos del ESPECTROMETRÍA DE FOTOEMISIÓN
hidrógeno, carbono, u otros átomos en un compuesto orgánico u
otro compuesto. Se usa para determinar la estructura del La fotoemisión puede referirse a:
compuesto. * Emisión de electrones a partir de la materia después de la absorción de fotones energéticos (efecto fotoeléctrico).
* Emisión de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los electrones que fluyen en el material pierden
energía mediante deceleración o recombinación.
ESPECTROMETRÍA MÖSSBAUER
La espectrometría de transmisión o conversión electrónica OTROS TIPOS DE ESPECTROMETRÍA
(CEMS) de Mössbauer prueba las propiedades de los núcleos de
isótopos específicos en ambientes atómicos diferentes, * Fotoacústica. Mide las ondas sonoras producidas por la absorción de radiación.
analizando la absorción resonante de rayos gamma de energía * Fototermal. Mide el calor desarrollado por la absorción de radiación.
característica, lo que se conoce como efecto de Mössbauer. * De dicroismo circular.
* De actividad óptica Raman. Usa los efectos de la actividad óptica y la dispersión para revelar información detallada sobre los
centros quirales de las moléculas.
* De terahertzios. Usa longitudes de onda por encima de la espectrometría infrarroja y por debajo de las microondas o medidas de
onda milimétricas.
* De dispersión inelástica de neutrones, como la espectroscopia Raman pero con neutrones en vez de fotones.
* De túnel de electrones inelásticos. Usa los cambios de corriente debidos a la interacción de vibraciones electrónicas inelásticas a
energías específicas que también pueden medir transiciones ópticamente prohibidas.
* Auger. Se usa para estudiar superficies de materiales a microescala. A menudo se usa en relación con la microscopía de
electrones.
* De cavidad en anillo.
* De transformación de Fourier. La transformación Fourier es un método eficiente para tratar datos de espectros obtenidos usando
interferómetros. Casi toda la espectrometría infrarroja (FTIR) y la resonancia magnética nuclear (RMN) se realizan con la
transformación de Fourier.
* De tiempo resuelto. Se usa en situaciones donde las propiedades cambian con el tiempo.
* Mecánica. Implica interacciones con vibraciones macroscópicas, como los fotones. Un ejemplo es la espectrometría acústica, que
implica ondas sonoras.
* De fuerza. Usa una técnica analítica basada en AFM.
* Dieléctrica.
* Infrarroja termal. Mide la radiación termal emitida por materiales y superficies, y se usa para determinar el tipo de enlaces
presentes en una muestra, así como su ambiente reticular. Estas técnicas son muy usadas por los químicos orgánicos,
mineralogistas y geólogos.
Conclusión:
En esta actividad se ha llegado a la conclusión de que la espectrofotometría es un método analítico indirecto porque se basa en la medición de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad en la actualidad para
la identificación de un analito en una muestra problema.
La espectrofotometría es el método más usado, debido a que es sencillo, específico y sensible.-
Bibliografía
Skoog, Douglas A. – West, James F. “QUÍMICA ANALÍTICA”, Editorial Mc Graw Hill.
Morrison – Boyd. “QUÍMICA ORGÁNICA”
UnADM (s.f.) Métodos espectrofotométricos. México.
