Unidad 1. INTRODUCCIÓN A LA BACTERIOLOGÍA CLÍNICA.

1.1 La Microbiología.

Se puede definir, como la ciencia que estudia los seres vivos microscópicos, concretamente de
aquellos cuyo tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano, deriva de 3
palabras griegas: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente significan el
estudio de la vida microscópica.

Los microorganismos son diminutos seres vivos que individualmente son demasiado pequeños
como para verlos a simple vista. En este grupo se incluyen las bacterias, hongos (levaduras y
hongos filamentosos), virus, protozoos y algas microscópicas.

1.2 Campos de aplicación de la Microbiología.

Normalmente tendemos a asociar a los microorganismos con infecciones, enfermedades o con el

deterioro de los alimentos. Sin embargo, la mayoría de los microorganismos contribuyen de una
forma crucial en nuestras vidas.

Medio ambiente y Energía: Los microorganismos de agua dulce y salada son la base de la
cadena alimenticia en océanos, lagos y ríos; ciertas bacterias y algas juegan un papel importante
en la fotosíntesis, que es un proceso que genera nutrientes y oxígeno a partir de luz solar y CO2
siendo un proceso crítico para el mantenimiento de la vida sobre la Tierra. Las bacterias también
juegan un papel muy importante en la Bioremediación como ejemplo tenemos el uso de bacterias
para combatir los derrames de petróleo ya que este es susceptible a la acción bacteriana. La
actividad metabólica de los microorganismos permite obtener combustibles alternos como el etanol
y el metanol.

Industria: Los microorganismos tienen impacto en la industria debido a que se utilizan en la

síntesis de productos químicos como son acetona, ácidos orgánicos, enzimas y medicamentos. En
la industria alimentaria se usan microorganismos en la producción de vinagre, bebidas
alcohólicas, aceitunas, mantequilla, queso, yogurt y pan. Además, las bacterias y otros
microorganismos ahora pueden ser manipulados para producir sustancias que ellos normalmente
no sintetizan. A través de esta técnica, llamada ingeniería genética, las bacterias pueden producir
importantes sustancias terapéuticas como insulina, hormona de crecimiento humana e interferón.
En la industria farmacéutica su importancia radica en la obtención de antibióticos y vacunas.

Agricultura. Los microorganismos del suelo destruyen los productos de desecho e incorporan el
gas nitrógeno del aire en compuestos nitrogenados que las vegetales pueden utilizar para crecer.
Los microorganismos también desempeñan funciones de importancia crítica en el reciclaje de
nutrientes que son importantes para los vegetales, particularmente en lo que se refiere al carbono,
nitrógeno y azufre, transformando estos elementos a formas que son más fácil de asimilar por los
vegetales.
Salud. Los microorganismos cumplen un papel muy importante no solo como agentes etiológicos
de enfermedades de origen infeccioso, el control, prevención y tratamiento de este tipo de
padecimiento ha sido el resultado de un profundo estudio y conocimiento de los procesos de
enfermedad, de la mejora en las prácticas de aislamiento, tratamiento y prevención.

1.3 Divisiones de la microbiología.

Microbiología Médica. Se encarga del estudio de los microorganismos patógenos para el hombre.
Microbiología Veterinaria. Se encarga del estudio de los microorganismos patógenos para los
animales.
Microbiología Sanitaria. Estudia a los microorganismos patógenos de los productos alimenticios y
presentes en los servicios sanitarios.
Microbiología Agrícola. Se encarga del estudio de los microorganismos de las plantas y del suelo.
Microbiología Industrial. Estudia a los microorganismos que se utilizan en la industria del vino, la
cerveza, fermentación de vinagre, yogurt, etc.

1.4 Ramas de la microbiología.

Bacteriología. Se encarga del estudio de las bacterias.

Micología. Se encarga del estudio de los hongos.
Virología. Se encarga del estudio de los virus.
Parasitología. Se encarga del estudio de los parásitos.

1.5 Bacterias.

Las bacterias son organismos procariotas unicelulares, consideradas el más simple y abundante de
los organismos con la capacidad para vivir en tierra, agua, materia orgánica o en plantas y
animales. Las bacterias pertenecen a la clase procariota debido a que su núcleo no está rodeado
por una membrana y consiste de una sola molécula de ADN cuya división es no-mitótica.

Estructura bacteriana.

Los elementos bacterianos se dividen en:

Elementos obligados:
Pared bacteriana.
Membrana citoplasmática.
Citoplasma.
Ribosomas.
Cromosoma bacteriano.
Elementos facultativos:
Capsula.
Flagelos.
Fimbrias o Pili.
Esporas.
Glicocalix.
Plásmidos.
Transposones.
Elementos obligados.

1. Pared bacteriana.

 Se pone de manifiesto con la tinción de Gram.

 Es una estructura compleja y fundamental para la bacteria formada por peptidoglicanos

(mureína o glucopeptido).

 El peptidoglicano representa el 5-20 % de la composición de la pared de las bacterias

Gram negativas y el 90 % en las Gram positivas.
 Por su rigidez le da su forma peculiar a la bacteria.
 La protege de los cambios de la presión osmótica del medio que la rodea.
 Es el lugar donde se localizan numerosos determinantes antigénicos que permiten
diferenciar a las bacterias entre sí.
 Es el sustrato donde actúan antimicrobianos como los beta-lactámicos.

2. Membrana citoplasmática.

 Está formada por fosfolípidos y proteínas, y a diferencia de las eucariotas, no contiene

esteroles (excepto el mycoplasma).
 Las enzimas del transporte electrónico se encuentran aquí (produce energía).
 Componentes de la capsula y la pared celular son sintetizados aquí.
 Es una barrera osmótica, selectiva y activa:
o Actúa como barrera osmótica para la célula.
o Contiene sistemas de transporte para los solutos y regula el transporte de productos
celulares hacia el exterior.
 Las bacterias Gram negativas tienen dos membranas: una interna y otra externa, mientras
que las Gram positivas, solo poseen una membrana (interna).
 Es sitio de acción de detergentes y antibióticos polipeptídicos como la polimixina.

3. Citoplasma.

 Formado 85 % por agua. Contiene los ribosomas y el cromosoma bacteriano.

4. Ribosomas.

 Compuestos por RNA ribosomal. Su importancia radica en ser el sitio de acción de

numerosos antibióticos como: Aminoglucósidos, tetraciclinas, cloranfenicol, macrolidos y
lincosamidas.

5. Cromosoma Bacteriano.

 Está formado por un único filamento de DNA apelotonado (superenrollado). Confiere sus
peculiaridades genéticas a la bacteria. Regula la síntesis proteica.

Elementos facultativos.

1. Capsula.
 Estructura polisacárida de envoltura. Factor de virulencia de la bacteria. Protege a la
bacteria de la fagocitosis y facilita la invasión. Permite la diferenciación en tipos
serológicos.

2. Flagelos.

 Estructuras proteicas, responsables de la motilidad bacteriana. Según la posición de los

flagelos tenemos bacterias: Monotricas: un flagelo en un extremo o ambos. Logotricas:
varios flagelos en un extremo o ambos. Peritricas: flagelos en toda la superficie.

3. Fimbrias o Pili.

 Son estructuras cortas parecidas visibles solo al Microscopio Electrónico, carentes de

motilidad, los poseen fundamentalmente las Gram negativas. Intervienen en la adherencia
de las bacterias al huésped. Facilitan el intercambio de ADN durante la conjunción
bacteriana. Tiene capacidad antigénica.

4. Esporas.

 Estructura presente en algunas especies bacterianas exclusivamente bacilares. Le permite

a la bacteria sobrevivir en condiciones extremadamente estresantes. El material genético
se concentra y es rodeado por una capa protectora, que hace que la bacteria sea
impermeable a la desecación, al calor y numerosos agentes químicos. Bajo esta condición
las bacterias se encuentran en una condición metabólica de inercia. Pueden permanecer
meses o años así. Cuando las condiciones son más favorables se produce la germinación,
con la formación de una célula única que después se reproduce con normalidad. Las
esporas no se tiñen con los colorantes habituales y se identifican como una zona clara,
redondeada u ovalada, que contrasta con el resto de la bacteria que aparece coloreada.

5. Glucocalix.

 Entramado de fibrillas polisacáridas situadas en posición extracelular. Facilita la

adherencia.

6. Plásmidos y Transposones.

 Los plásmidos son elementos extracromosómicos compuestos por ADN de doble cadena,
con frecuencia circular, autoreplicativos y autotransferibles.
 Los transposones (genes móviles) son elementos compuestos de ADN que pueden
moverse de forma autosuficiente a diferentes partes del genoma bacteriano. No poseen la
capacidad de autoreplicarse pero pueden transferirse a través de plásmidos. El transposon
al cambiar de posición puede arrastrar una secuencia de ADN contigua y originar cambios
fenotípicos en la bacteria.
Reproducción Bacteriana.

Generalmente las bacterias se reproducen por bipartición o Fisión binaria como se ve en

el siguiente esquema:

Además de este tipo de reproducción asexual, las bacterias poseen unos mecanismos de
reproducción parasexual, mediante los cuales se intercambian fragmentos de ADN.
TRANSFORMACIÓN: Consiste en el intercambio genético producido cuando una bacteria
es capaz de captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que se encuentran dispersos en el
medio donde vive.

CONJUGACIÓN: En este proceso, una bacteria donadora F+ transmite a través de un

puente o pili, un fragmento de ADN, a otra bacteria receptora F-. La bacteria que se llama
F+ posee un plásmido, además del cromosoma bacteriano.
TRANSDUCCIÓN: En este caso la transferencia de ADN de una bacteria a otra se realiza a través
de un bacteriófago, que se comporta como un vector intermediario entre las dos bacterias.

a, el virus se acopla a
la bacteria
b., el virus rompe la
Morfología pared bacteriana
Bacteriana. c, el virus inyecta su
ADN
Las bacterias se pueden
clasificar teniendo en cuenta
varios criterios. Uno de
ellos es clasificarlas
por su forma y la manera en que se agrupan; Pueden ser esféricas (Cocos, diplococos,
estreptococos, estafilococos, sarcinas); alargadas como bacilos; en forma de coma (vibriones), o
en forma de espiral (espirilos).
Clasificación bacteriana.
Las bacterias se pueden clasificar en relación a la estructura de su pared celular mediante una
tinción diferencial denominada Tinción de Gram. Se puede discriminar entre dos grandes grupos de
bacterias: Gram positivas (se tiñen de violeta) y Gram negativas (se tiñen rosadas).

Hay otro grupo de bacterias denominadas bacilos ácido alcohol resistentes (BAAR+) que son
diferenciados utilizando la tinción de Ziehl Nielsen o la modificación de Kinyoun, éstos son
resistentes a la decoloración ácida por lo que permanecen teñidos de rojo por acción de la fuccina
fenicada.
Según la temperatura óptima de crecimiento las bacterias se clasifican en:

Termófilas: se desarrollan entre 25 y 80°C, óptima 50 y60°C

Mesófilas: se desarrollan entre 10 y 45°C, óptima 20 y 40°C
Psicrofílicos: se desarrollan entre -5y 30°C, óptima 10 y 20°C.

Según el pH en el que se desarrollan las bacterias se clasifican en:

Acidófilos: Se desarrollan a pH entre 1.0 y 5.0

Neutrófilos: Se desarrollan a pH entre 5.5 y 8.5
Basófilos: Se desarrollan pH entre 9.0 y 10.0

Según su metabolismo interno, las bacterias presentan requerimientos nutricionales diversos y se

clasifican en:

Fotoautótrofos: Obtienen la Energía de la luz y su fuente de carbono es el C02. Bacterias

purpúreas.
Fotoheterótrofos: Obtienen la Energía de la luz y su fuente de carbono son los compuestos
orgánicos. Ejemplos como Rodospirillum y Cloroflexus.
Quimioautótrofos: Obtienen la Energía de las substancias químicas y su fuente de carbono es el
C02. Como, por ejemplo, Nitrobacter, Thiobacillus.
Quimioheterótrofos: Utilizan un compuesto químico como fuente de carbono, y a su vez, este
mismo compuesto es la fuente de energía. La mayor parte de las bacterias cultivadas en
laboratorios y las bacterias patógenas son de este grupo.
Basado en el requerimiento de Oxígeno las bacterias se pueden clasificar en:

Aerobias estrictas: Dependen de O2 para su crecimiento.

Anaerobios estrictos: se desarrollan en ausencia total de O2, utilizan una atmósfera anaeróbica
de CO2,H2 y N2.
Anaerobios Facultativos: pueden desarrollarse en presencia o ausencia de O2.
Microaerofílicos: sólo se pueden desarrollar en presencia de bajas tensiones de O2 (menor del
12%) y altas tensiones de CO2.

El potencial Redox es crítico para el desarrollo de los microorganismos. Es la capacidad del medio
a la transferencia de electrones y depende en gran medida del oxígeno disuelto en el medio. Los
anaerobios estrictos necesitan un medio carente de oxígeno ya que se desarrollan en medios
reductores y son inhibidos a potenciales mayores de -0,100mV.

Considerando la relación entre las bacterias y nuestro organismo podemos clasificarlas de la

siguiente manera:

Microbiota normal. Grupo de microorganismos que habitan de manera equilibrada el cuerpo

humano sin causar enfermedad, se estima que la cantidad de microorganismos que pueden habitar
el cuerpo humano es 1014, habitando principalmente la piel, las mucosas, las cavidades en contacto
con la superficie (Boca, cavidad vaginal), tracto gastrointestinal.

La microbiota normal beneficia al organismo ya que impide la colonización de bacterias patógenas

y participan en la obtención de nutrientes para el organismo como en el caso de la vitamina K en la
cual participan las bacterias del tracto intestinal. Ejemplo Piel; Staphylococcus epidermidis,
Staphylococcus aureus, Corynebacterium sp, etc.

Microbiota comensal. Grupo de microorganismos que pertenecen a la microbiota normal pero

cuando se alteran las condiciones fisiológicas del organismo huésped se altera la virulencia del
microorganismo adquiriendo la capacidad de producir enfermedad. Ejemplo Candida albicans,
Staphylococcus aureus, etc
Microbiota patógena. Microorganismos que por naturaleza tienen la capacidad de producir
enfermedad al ser humano. En algunas ocasiones estos microorganismos pueden alojarse en el
organismo sin causar enfermedad debido a la acción protectora de la microbiota normal. Ejemplos
Salmonella typhi, Streptococcus pyogenes Beta hemolítico, Neisseria gonorrhoeae, Bacillus
anthracis, Shigella dysenteriae, etc.

1.6 Taxonomía de la Bacterias.

La ciencia de clasificación de los seres vivos recibe el nombre de taxonomía y atiende a dos
aspectos:
 Identificar y describir de la manera más completa posible, las unidades taxonómicas
básicas, las especies.
 Desarrollar un sistema para ordenar y catalogar estas unidades
Taxonomía: (taxis = orden, rango). Es la rama de la biología que se ocupa de la clasificación de los
seres vivos.
Una especie constituye un grupo de individuos (o poblaciones clonales, en el caso de los
microorganismos) que presentan un grado elevado de semejanza fenotípica, siendo, al mismo
tiempo, claramente diferenciable de los integrantes de otros conjuntos del mismo tipo general.
De un modo ideal, las especies deberían caracterizarse basándose en la descripción completa de
sus fenotipos o incluso de sus genotipos. La práctica taxonómica no llega a estos ideales ya que en
la mayor parte de los grupos de seres vivos la descripción del fenotipo es fragmentaria y la
caracterización del genotipo es incompleta.
Los caracteres fenotípicos de más fácil determinación son los estructurales y anatómicos que
pueden observarse directamente. La clasificación de las bacterias constituye una excepción dada
su extrema simplicidad estructural, esto hace que se disponga de un rasgo demasiado reducido de
caracteres para poder hacer una caracterización adecuada.
Por ello, los taxónomos bacterianos se vieron forzados a buscar otros tipos de propiedades,
bioquímicas, fisiológicas, ecológicas, para añadir a las propiedades estructurales.
La clasificación de las bacterias se basa en atributos funcionales, la mayor parte de las bacterias
sólo pueden identificarse por lo que hacen y no simplemente por su apariencia.
Las bacterias se clasifican en grupos taxonómicos siendo la familia, el género, la especie y la
subespecie los más operativos desde el punto de vista médico. La clasificación bacteriana más
aceptable particularmente en lo referente a nomenclatura, grupos, familias, generes y descripción
de especies se encuentra descrita en el Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey.

Grupos principales de bacterias

I. Aeróbicas y Gram negativas, cocos y bacilos
Familias
1. Pseudomonaceae. Son bacilos curvos o rectos, móviles por flagelo polar, catalasa y oxidasa
positiva. Contribuyen a degradar substancias químicas en el suelo, como por ejemplo pesticidas.
Aquí encontramos el género Pseudomonas que se encuentra ampliamente distribuido en la tierra
y en el agua. En este grupo incluimos la especie P. syringae que es un patógeno vegetal y
causante de tumores a plantas.
Xanthosomas todas las especies de este género son patógenas vegetales.
2. Rhizobiaceae Esta familia ocasiona hipertrofia en plantas, además de la formación de nódulos
en raíces. Algunas especies pueden ocasionar tumores.
Rhizobium forma nódulos en raíces de leguminosas y fija N2 atmosférico.
Agrobacterium es importante en la ingeniería genética. Esta posee un plásmido con una región
llamada T DNA que se inserta en el genoma de la planta huésped.
3. Methylococcaceae posee la habilidad para usar gas metano como fuente de carbono y energía
bajo condiciones aeróbias o microaerofílicas.
4. Acetobacteraceae esta familia oxida etanol a ácido acético.
Acetobacter y Gluconobacter son saprófitos que se encuentran en medios acídos enriquecidos
con azúcar o alcohol como flores, frutas, cervezas, vino, vinagre y otros. Poseen importancia
industrial, ya que Azotobacter produce vinagre y Gluconobacter se utiliza para la manufactura de
productos químicos.
5. Legionellaceae. Legionella son oportunistas en humanos, pueden causar la muerte. Se
transmiten por vía aérea
6. Neisseriaceae. Neisseria son parásitos que habitan en las membranas mucosas de humanos y
animales. N. gonorrhoeae y N. meningitidis son altamente patógenos, y este último causa
meningitis cerebroespinal.
Acetobacter son saprófitos que se encuentran en tierra, agua y basura. Son patógenos
oportunistas que ocasionan una variedad de infecciones particularmente en pacientes
hospitalizados.
II. Anaeróbico facultativo, bacilos y gram negativo.
Familia
1. Enterobacteriaceae.
Escherichia
E. coli se encuentra en la parte inferior del intestino de humanos y animales de sangre caliente. Es
parte de la flora normal. Algunas cepas pueden causar gastroenteritis y otras cepas causan
infecciones en el tracto urinario.
Shigella está relacionada a Escherichia y todas sus cepas son patogénicas causando disentería
bacilar en humanos.
Salmonella todas las cepas son patógenas a humanos causando fiebre entérica, gastroenteritis y
septicemia.
Enterobacter crece mejor a 35°C al contrario de las demás Enterobacteraceas. Se encuentra en
agua, tierra, plantas y algunas especies se encuentran en humanos. Pueden ser patógenos
oportunistas en humanos.
Erwinia generalmente es patógena de plantas causando diversas lesiones.
Serratia ampliamente distribuida en tierra, agua y superficie de plantas. Es patógena oportunistas
de humanos, particularmente en pacientes hospitalizados.
Proteus puede deslizarse sobre el medio de agar. Se encuentra en el intestino humano y de otros
animales. Es patógeno oportunista en humanos.
Yersenia son parásitos de animales pero pueden causar infección en humanos como por ejemplo
Yersenia pestis, esta es la causante de la plaga o peste bubónica y Yersenia enterocolitica
causa gastroenteritis en niños.
2. Vibronaceae. ésta se encuentra en ambientes marinos y agua dulce en asociación con animales
que viven en esos ambientes.
Vibrio algunas especies emiten bioluminicencia (Vibrio fischeri se localiza en un órgano
luminiscente especializado en ciertos peces de agua profunda). Vibrio cholera causa la colera.
3. Pasteurellaceae. Pasteurella son parásitos en las membranas mucosas del tracto respiratorio
de mamíferos y aves.
Haemophilus requiere factores nutricionales inusuales. Haemophilus influenzae causa meningitis
en niños.

III. Otros géneros de bacterias anaeróbias facultativas, Gram negativas, bacilos y no

asignados a ninguna familia.
Familia
1. Gardnerella se encuentra en el tracto genitourinario de humanos, es la mayor causa de vaginitis
no específica bacteriana.
2. Streptobacillus tienen una pared celular defectuosa que al formar colonias parecen huevos
fritos. Aquí encontramos a S. moliniformis que es un parásito de ratas.

IV. Bacilos helicoidales, curvos o lineales, Gram negativos y anaeróbias.

Familia
1. Bacteroidaceae los géneros que se incluyen en esta familia se diferencian a base de su
morfología y a los diferentes productos que sintetizan. Algunas especies son patógenas a humanos
por ejemplo, Bacteroides fragilis.

V. Bacterias que reducen sulfato o azufre.

Estas son bacterias anaeróbicas que usan compuestos de azufre inorgánico como aceptador de
electrones con la consecuente formación de H2S. Se pueden encontrar en barro de agua dulce,
ambiente marino, tracto intestinal de humanos y de animales. Incluye los géneros
Desulfuromonas, Desulfovibrio y Desulfococcus.

VI. Cocos anaeróbicos y Gram negativo.

Familia
1. Veillonellaceae
Veillonella
Acidoaminococcus habitan en la cavidad oral, tracto respiratorio y tracto intestinal de humanos,
rumiantes y roedores.
Megasphaera

VII. Rickettsias y Chlamydias

Muchos son parásitos obligados, son Gram negativos, no mótiles y de tamaño muy pequeño que
puede aproximarse a un virus grande.
Orden Rickettsiales: aquí se incluyen las rickettsias; éstas se encuentran asociadas a varios
artrópodos que le sirven de huésped y su vez de vectores. Estos vectores los transmiten a
vertebrados, donde en algunos de ellos se observan relaciones mutualistas.
Familia Rickettsiaceae
1. Rickettsias: éstas son patógenos de humanos y su transmisión ocurre vía vectores artrópodos.
La bacteria se multiplica dentro del citoplasma y algunas veces en el núcleo. En el laboratorio se
necesitan células vivas para su cultivo.
2. Coxiella se distingue del género anterior por que resiste temperaturas bien altas, y en la mayoría
de las veces la infección ocurre por inhalación de los organismos que se encuentran en el polvo o
en leche sin pasteurizar contaminada. Incluye una sola especie Coxiella burnetii responsable de
la fiebre Q.
Familia Bartonellaceae consiste de parásitos de las células rojas de humanos y otros vertebrados.
Familia Anaplasmataceae: Estos organismos crecen dentro o sobre los eritrocitos. Pueden
encontrarse libres en el plasma de varios animales salvajes o domésticos.
Orden Chlamydiales: éstos son parásitos intracelulares. Incluyen una sola familia y un sólo
género. El género Chlamydia contiene especies patógenas al hombre como por ejemplo
Chlamydia trachomatis, ésta causa queratoconjuntivitis que a veces resulta en ceguera. Otras
especies de Chlamydia causan enfermedades sexualmente transmisibles.

VIII. Micoplamas.
No poseen pared celular, por lo que pueden asumir diferentes formas. Pueden combatirse por
tetraciclinas o cloranfenicol, no por penicilinas, ya que no poseen pared celular. Sus colonias
parecen huevos fritos. Y son mucho más pequeñas que las bacterias comunes. Requieren medios
nutricionales complejos y tienen habilidades biosintéticas limitadas.
Familia Mycoplasmataceae
Mycoplasma pneumoniae causa pulmonía atípica primaria.
Familia Spiroplasmataceae
Spiroplasma son patógenos de cítricas y otras plantas, pueden aislarse de los fluídos de plantas o
de su superficie.

IX. Cocos Gram positivos.

Cocos anaeróbios o aeróbios facultativos
Aquí incluimos los géneros Staphylococcus y las especies Staphylococcus aureus y
Staphylococcus epidermidis.
Cocos que llevan a cabo fermentación y son aerotolerantes
Streptococcus pyogenes, Streptococcus mutans, Streptococcus faecalis, Streptococcus
lactis, y Streptococcus pneumoniae.
Cocos Gram positivos anaeróbios
Sarcina

X. Gram positivos que forman endoesporas.

Bacillus thuringiensis y B. anthracis
Bacillus anthracis con esporas

XI. Bacilos que forman esporas anaeróbias.

Clostridium botulinum y Clostridium tetani
Endoespora bacterial

XII. Mycobacterias.
Incluye un sólo género Mycobacterium, dentro de éste tenemos a Mycobacterium lepra y
Mycobacterium tuberculosis.

1.7 Nomenclatura.
De acuerdo con la convención que establece el sistema binomial de nomenclatura, cada especie
biológica lleva un nombre latinizado que consiste en dos palabras: la primera indica el género y la
segunda palabra indica la especie: por ejemplo, Escherichia coli, Escherichia (nombre genérico –
género) y coli (nombre específico – especie). Cuando se requiere indicar la existencia de una
subespecie se escribe después de la especie.
Categorías de clasificación según la subespecie.

 Serovariedad o serotipo (Antígenos distintos).

 Fagovariedad (Tipificación por Bacteriófagos).
 Biovariedad (Diferencias bioquímicas y fisiológicas).
 Patovariedad (Patogenecidad).
 Morfovariedad (Diferencias morfológicas).
 Genovariedad (Grupos con DNA similar).

1.8 Bioseguridad.
Bioseguridad. Disciplina encargada de prevenir accidentes biológicos, para ello se vale de un
conjunto de medidas y controles destinados a disminuir el riesgo de exposición a agentes
infecciosos o patógenos en clínicas, hospitales, industrias, etc.

Objetivos Primarios:
 Proteger la vida del individuo, la comunidad y el medio ambiente.
 Evitar el contagio y/o infección del operador o terceros en un laboratorio que maneje
material biológico
 Alertar sobre los riesgos potenciales
 Brindar conocimientos necesarios sobre las que permitan adoptar las normas de
conducta apropiadas para medidas preventivas y de acción inmediata manejar material
biológico frente a un accidente biológico.

Material biológico. Material orgánico o inorgánico que pueda contener o ser reservorio de
agentes patógenos.

Exposición. Contacto de: Piel y las mucosas por tiempo prolongado con un material biológico.

Accidente biológico. Toda exposición accidental de un individuo a un material biológico.

Los procedimientos básicos ante un accidente biológico son:

1.- Manejo adecuado del personal expuesto

2.- Reporte del accidente (en ficha epidemiológica)
3.- Evaluación clínica del personal expuesto
4.- Tratamiento del personal expuesto

Medidas de prevención de accidentes biológicos en el laboratorio.

TIPOS DE ACCIDENTE PRECAUCIONES UNIVERSALES

BIOLÓGICO
Por Herida Cortante o Punzante 1. Considerar toda muestra como peligrosa y tratarla
como tal.
Por contacto con piel lesionada 2. Tener la vacunación específica
Por Inoculación Parenteral 3. Cubrir correctamente cualquier lesión cutánea
4. Lavarse meticulosamente las manos después de
Por Inhalación manipular muestras y antes de salir del laboratorio (al
concluir la tarea)
Por Ingesta 5. Uso de protectores de barrera (guantes, máscaras,
bata, etc.)
Por Rotura de Recipiente 6. Esterilizar correctamente los instrumentos y
contenedor de material infeccioso desinfectar las superficies.

Niveles de bioseguridad en el manejo de microorganismos:

NIVEL de TIPO de AGENTE

MEDIDAS a ADOPTAR
BIOSEGURIDAD a MANIPULAR

NIVEL 1 No patógenos para el hombre Medidas Generales o de precaución

(de Bajo Riesgo) Es aquél que resulta poco probable que universales
cause una enfermedad en el hombre y en la
comunidad.

Procedimientos de Riesgo Moderado :

- Exhibir visiblemente en los accesos, las debidas
señales de Riesgo Biológico y los requerimientos
para ingresar.
- Trabajar en Campanas de Flujo laminar.
- Personal con vacunación específica
NIVEL 2 Patógenos de riesgo moderado - Usar guantes y bata (quitárselos antes de
(de Riesgo Moderado) Es aquél que puede causar una
abandonar la zona de trabajo)
enfermedad en el hombre y puede suponer
- Residuos y animales de experimentación deben
un peligro para los trabajadores, siendo poco
Acceso sólo a personal de ser descontaminados antes de su eliminación
probable que se propague a la
laboratorio, Prohibir el - Evitar el uso de jeringas, agujas y las prácticas
comunidad y existiendo
ingreso a la población de generalmente profilaxis o tratamiento que generen aerosoles
alto riesgo (Ancianos, eficaz. - Realizar control de roedores e insectos y no
Niños, Embarazadas e - VHB (Virus de la Hepatitis B) permitir el acceso a animales que no sean los de
inmunodeprimidos). - Salmonella tiphy experimentación.

Procedimientos de Riesgo Moderado y

de Alto Riesgo para la Vida :
- Exhibir en los acceso las señales de peligro
recomendadas y registrar el ingreso de visitas
NIVEL 3 Patógenos de riesgo moderado y autorizadas.
(de Alto Riesgo) que por el tipo de procedimiento - Inicial y periódicamente tomar muestras de suero
empleado adquieren alto riesgo del personal involucrado (para detectar posibles
Acceso restringido sólo a Aquél que puede causar una enfermedad contaminaciones).
personal autorizado del grave en el hombre y presenta un - Trabajar en cabinas de seguridad y emplear filtros
laboratorio. serio peligro para los trabajadores, Hepa interpuestos en la línea de vacío.
Registro obligatorio de pudiendo causar la muerte con riesgo de - Usar indumentaria protectora y sistemas de
accidentes que se propague a la comunidad, existiendo protección contra aerosoles.
Registrar visitas y el frente a él generalmente profilaxis o - Sellar tapas y rotores en centrífugas.
acceso del personal de tratamiento eficaz. - Utilizar cajas de contención para animales
servicio. - Mycobacterium tuberculosis infectados.
- HIV y Virus oncogénicos - Limpiar y desinfectar meticulosamente las
Patógenos capaces de causar la superficies de trabajo al finalizar la tarea.
muerte :
- Bacillus Antrhacis.
Procedimientos de alto Riesgo para la
Vida :
- Exhibir en los accesos las señales de peligro
NIVEL 4 Agentes Patógenos Exóticos y correspondientes y llevar registro de visitas
(de Alto Riesgo para la Altamente Peligrosos autorizadas.
Vida) Aquél que causando una enfermedad grave - Trabajar en áreas especiales donde existan
 en el hombre supone un serio peligro para barreras de aire con el exterior y cabinas de alta
Acceso Altamente los trabajadores, con muchas posibilidades seguridad.
Restringido , sólo personal de que se propague a la comunidad y - El personal debe ducharse y cambiarse
especializado sin que exista generalmente frente a íntegramente al ingresar y al salir.
Registro Obligatorio él profilaxis o tratamiento eficaz. - El pasaje de material limpio y/o contaminado se
Accidentes efectuará por canales especiales donde se puede
- Virus del Ebola. efectuar la descontaminación.
- Uso obligatorio de vestimenta especial con
respirador automático.
- Realizar descontaminación Periódica.

1.9 Técnicas de Tinción Bacteriana.

Los colorantes fueron usados por los microscopistas para mejorar el contraste entre los objetos que
se observaban y el medio que los rodea. Los colorantes son substancias que originalmente se
derivaron de las anilinas o del alquitrán: químicamente están constituidos por uno o más anillos
aromáticos, los cuales tienen diversos sustituyentes llamados cromóforos que le dan la cualidad
del color, estos compuestos tienen la capacidad de transferir el color a otras estructuras por lo que
reciben el nombre de cromógenos; además tienen un grupo funcional ionizable, llamado
auxócromo, que les permiten la unión con estructuras de carga contraria presentes en las células,
tejidos o bacterias a teñir.

La mayoría de los colorantes tienen alguna afinidad específica por algún componente celular.
Existen varios tipos de colorantes, pero los más usados en microbiología son: las sales colorantes y
los colorantes liposolubles;

a) Sales colorantes:
Los colorantes más usados son sales que pueden ser de tipo ácido o básico, términos que no
indican necesariamente su pH en solución, sino que una parte significativa de la molécula sea
aniónica o catiónica. Los colorantes básicos consisten en un catión coloreado unido a un anión
incoloro. Ej: clorhidrato (-) de azul de metileno (+). Los colorantes ácidos tienen el catión incoloro
unido a un anión coloreado. Ej: eosinato (-) de sodio (+). Los colorantes se combinan químicamente
con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto, el proceso de tinción la mata. La célula
bacteriana posee constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos, y ellos son los más usados en citología bacteriana. Las
bacterias son ricas en ácidos nucleicos que poseen cargas negativas en forma de grupos fosfatos. Los
colorantes básicos tiñen la célula bacteriana uniformemente, a menos que antes sea destruido el
ARN del citoplasma. Los colorantes ácidos no tiñen la célula bacteriana, y por lo tanto, pueden
usarse para impartir al fondo un color de contraste (coloración negativa).Desde el punto de vista
práctico entonces, los colorantes básicos tiñen estructuras de naturaleza ácida, como la cromatina
nuclear de las células eucariotas y procariotas; los colorantes ácidos reaccionan con sustancias
básicas, como las estructuras citoplasmáticas de las células eucariotas.

b) Colorantes liposolubles
Los colorantes liposolubles se combinan con los componentes lipídicos de la célula, usándose a
menudo para revelar la localización de los depósitos de grasa. Ej. Negro Sudán. En algunos casos se usan
mordientes con la finalidad de engrosar estructuras muy finas, con el propósito de hacerlas visibles
al microscopio óptico; uno de ellos es el ácido tánico que se emplea en la coloración de flagelos y
espiroquetas.

Las técnicas de tinción se usan en bacteriología se desarrollaron como una necesidad para poner
de manifiesto a las bacterias y sus estructuras.

Elaboración de un Frotis bacteriano.

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo
con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la
preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente
fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la
observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos
lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y
adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles
agrupaciones de células que pudiera haber.

Preparación del frotis bacteriano a partir de diferentes muestras.

El frotis bacteriana debe representar fina monocapa representativa de la muestra:

Hisopos: Hacer rodar ligeramente sobre el porta para evitar la destrucción de elementos celulares
y bacterias. Dejar secar al aire.

Aspirados, exudados, esputos, heces (muestras sin hisopo): seleccionar las partes más
purulentas y/o hemáticas, y tras depositar una pequeña fracción de muestra sobre el portaobjetos,
con una asa, hisopo o aplicador estéril realizar el frotis.

LCR y otros líquidos que requieren centrifugación: tras centrifugación (2.500-3.000 rpm durante
15 min.), desechar el sobrenadante y utilizar el sedimento (0,5 ml), homogeneizándolo, verter una
gota en un portaobjetos y dejar secar al aire. Puede añadirse, opcionalmente, una segunda gota a
la primera ya seca para aumentar la sensibilidad.

Orina: sin centrifugarla, homogeneizar y depositar una gota sobre el portaobjetos realizar frotis
con el asa y dejarlo secar al aire.

Cultivos líquidos (hemocultivos, cultivos bifásicos de Castañeda): depositar con una pipeta
Pasteur o con jeringa-aguja estériles, 1 ó 2 gotas en el portaobjetos y hacer una extensión fina con
la ayuda de otro porta y dejar secar al aire. Los cultivos en medio líquido solo requieren introducir el
asa estéril al tubo tomar una asada y realizar el frotis sobre el portaobjetos dejándolo secar al aire.

Colonias en medio sólido: colocar 1 gota de agua o solución salina en un portaobjetos,

depositar con un asa una carga bacteriana representativa y realizar el frotis, dejar secar al aire.

Métodos de fijación.

Los métodos de fijación que se pueden utilizar son el calor al pasar directamente a la flama del
mechero tres veces con un movimiento rápido sin dejar el portaobjetos por más de un segundo.
Otro método para fijar un frotis es cubrirlo con etanol o metanol al 70% y dejarlo al menos por 5
minutos y seguir la tinción hasta que se evapore por completo y el frotis y quede completamente
seco.

Tinción simple.

En este tipo de tinción se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se
tiñen con la misma tonalidad. (Azul Metileno de Loëffler, Azul de lactofenol). Esta tinción es utilidad
para poder observar la presencia de bacterias así como para poder observar su morfología
microscópica.

Tinciones Diferenciales.
Estos tipos de tinción nos permiten clasificar a las bacterias en grupos dependiendo de sus
características estructurales de la pared bacteriana.

Tinción de Gram.

Debe su nombre al Bacteriólogo Danés Christian Gram que la desarrollo en 1844. La tinción de
Gram se utiliza para clasificar bacterias en dos grandes grupos bacterias Gram positivas y
Bacterias Gram negativas. A nivel del laboratorio es útil como test para un rápido diagnóstico
presuntivo de agentes infecciosos, tanto en muestras como en cultivos en crecimiento, y
adicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clínica.

Las bacterias se tiñen gram positivas (+), gram negativas (–) o no se tiñen debido a sus diferencias
en la composición de su pared bacteriana.

Las bacterias gram (+) tienen una gruesa capa de péptidoglucano por lo que no son afectadas por
la decoloración con alcohol-acetona, reteniendo el complejo colorante-mordente (cristal violeta-
lugol) y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violeta al azul claro, dependiendo de
si la naturaleza de su pared celular está intacta o dañada por tratamientos con antibióticos o edad
celular.

Las bacterias gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de péptidoglucano ligada a una
membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana permite la decoloración con
por el alcohol-acetona, permitiendo que el complejo cristal violeta-lugol salga de las bacterias y sea
reemplazado por el colorante de contraste (safranina) adquiriendo una tonalidad rosa o rojiza.

Técnica de tinción

1. Colorante primario Cristal violeta, 1 minuto y enjuagar con agua.

2. Mordente Lugol, 1 minuto y enjuagar con agua.
3. Decolorante, alcohol-acetona, 20 segundo o hasta ver los últimos hilos de color morado.
Enjuagar con agua.
4. Colorante de contraste, Safranina 1 minuto, enjugar con agua y dejar secar.
 Bacteria Gram Positiva Bacteria Gram Negativa

Tiene una capa gruesa de peptidoglicano (mureina) y dos

clases de ácidos teicóicos. Ácido Lipoteícoico que está en la Tiene una capa delgada de peptidoglicano (mureina) unida
superficie, empotrado en la capa de peptidoglicano y unido a a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana
la membrana citoplásmica. Y ácido teicoico de la pared que exterior está hecha de proteína, fosfolípido y
está en la superficie y se une sólo a la capa de lipopolisacárido.
peptidoglicano.
Tinción de Ziehl Neelsen.

También es una tinción diferencial. Se denomina tinción ácido-alcohol resistente y es específica

para una serie de bacterias con estructura de pared particular, las Mycobacterias. La pared de las
Mycobacterias no está basada en peptidoglicano como las bacterias gram positivas y gram
negativas, la diferencia radica en la presencia de ácidos grasos (ácidos micólicos). Esta
particularidad las hace resistentes a la decoloración con alcohol-ácido. Esta característica también
se puede observar en bacterias del genero Nocardia sp y en algunos parásitos (Coccidias
intestinales).

Las bacterias BAAR (+), adquieren una coloración rojiza por retener a la fuccina fenicada, mientras
que las bacterias BAAR (-) se observan de color azul por acción del azul de metileno.

La tinción clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentar la fuccina fenicada hasta emisión de vapores
para que el colorante atraviese la pared bacteriana. Se ha desarrollado una modificación a la
técnica de tinción tradicional de Ziehl-Neelsen, la técnica de Kinyoun en la que se sustituye el
calentamiento hasta emisión de vapores de la fuccina fenicada, colocan el frotis en un vaso para
tinción con fuccina fenicada durante 20 a 25 minutos o cubrir el frotis durante 5 minutos con fuccina
Kinyoun (Carbolfuccina), colocando un trozo de papel filtro para evitar la precipitación del colorante,
una vez transcurrido este tiempo se continua la tinción de la misma manera que en la técnica de
Ziehl-Neelsen.
 En ambas imágenes se observan bacilos BAAR(+) de color rojo y cocos
BAAR (-) de color azul.

Técnica de tinción.

Tinciones especiales.

Las tinciones especiales nos permiten poner de manifiestos elementos estructurales de las
bacterias:

Tinción negativa

Este procedimiento consiste en la tinción del fondo del campo visual con un colorante ácido para
dejar las células incoloras en contraste. Comúnmente se utiliza el colorante negro llamado
nigrosína o tinta china. El método sirve para observar bacterias o estructuras que difícilmente se
tiñen con las técnicas diferenciales, como los espirilos y las espiroquetas.

Tinción de los flagelos

Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles en el microscopio de luz. Sin
embargo si se tratan con una suspensión coloidal inestable de sales de ácidos tánico para formar
un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden poner de manifiesto su
presencia y disposición en las células. De esta manera el diámetro aparenta que la estructura
aumento de tamaño con fuccina básica los hace visibles en el microscopio óptico.

Tinción de la cápsula

Uno de los métodos de ´´ tinción de la cápsula ´´ incluye el tratamiento de las bacterias con un
solución caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solución de sulfato de cobre. El
sulfato de cobre también imparte color al fondo y esto resulta en que la célula y el fondo aparezcan
teñido en color azul oscuro mientras la cápsula aparece de color azul pálido. Otro método utilizado
para observar capsula es la tinción negativa o tinta china, mediante la cual se realiza la
observación de muestras de líquido cefalorraquídeo para la búsqueda de levaduras de
Cryptoccocus neoformas, hongo dimórfico causante de la Criptococosis.

Tinción del núcleo

Los núcleos se pueden teñir por la tinción de Feulgen la cual es específica para el ADN.

Tinción de esporas

Las esporas se observan de la manera más simple como cuerpos refringentes intracelulares en
suspensiones de bacterias sin teñir, la parte de las esporas relativamente impermeable, las esporas
comúnmente se tiñen con verde de malaquita y carbolfuccina.

1.10 Medios de Cultivo bacterianos.

Medio de cultivo. Son ambientes que contienen los elementos nutritivos y las condiciones físico-
químicas que permiten el desarrollo, crecimiento, conservación y estudio de los microorganismos.

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie
de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.

1- Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica debe contener, como mínimo,
carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas
vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las
sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para que las
reacciones metabólicas se puedan llevar acabo.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos

de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su
aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona
que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría
de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen
capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la
peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchos medios
sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos
carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y
sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, como indicadores de ciertas
actividades metabólicas o bien por su capacidad de ejercer un efecto inhibidor selectivo de ciertos
microorganismos.

2- Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como

albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de
este solidificante y que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay
también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente extendido en el laboratorio.

3- Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal.
Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos
anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno
ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en
condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los
anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas
condiciones.

4- Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un

buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el
mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando
una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los
cultivos y evitar así que se deseque el medio.

5- Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz
solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.
6- pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque
los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos
o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o
incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

7- Temperatura

Los microorganismos patógenos humanos crecen en un rango de temperatura alrededor de 37ºC, y

los saprófitos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo deben estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas
de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de
los especímenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de
cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

Clasificación de los medios de cultivo.

Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más importantes son
aquellos que se basan en:

SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA).

1) Medios líquidos: A estos medios de cultivo se les denomina caldos. El medio líquido más
utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y
agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana
de una determinada concentración.

2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente

gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida
de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su
uso está muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente) razón por
la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera óptima de crecimiento para
muchos microorganismos. El Agar es un polímero de azúcares obtenido de algas marinas. Se trata
de una molécula soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y
39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez fundido alrededor de los
45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgánicos indefinidos que pueden
falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunque el agar es una
mezcla de polisacáridos, Araki, en 1937, los dividió en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre
de ácido pirúvico, y- agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporción de
agarosa a agaropectina en el agar varía según el alga de origen. El agar puede utilizarse para
diferentes fines, aunque los más importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar
bacteriológico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente
la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiológico, por lo que es
importante la ausencia de metales tóxicos.

3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente
solidificante en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la
investigación de la movilidad de las bacterias

SEGÚN SU UTILIZACIÓN.

1) Medios comunes o simples: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que
pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio
más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de agar al
caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar soya tripticaseina, etc.

2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas normales,
incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos
exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros productos biológicos
(sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible
añadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej.
Polivitex, Isovitalex, etc). El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cisteína para su crecimiento.
Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar
chocolate).

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar
nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un ejemplo de medio
selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el
del resto de enterobacterias.

4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo impiden totalmente
el crecimiento de una población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podrían
considerarse como una variante más restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se
consiguen habitualmente por adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba
completamente el desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey
que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram
positivos.

5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que

ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un sustrato
metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite
distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el
C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el SS (que es doblemente
diferencial), etc.

6) Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad específica que
puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer
los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato
específico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler,
el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya añadido un elemento
diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en identificación. Actualmente están
apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios específicos de identificación para ciertos
microorganismos, con lo cual se consigue simultáneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de
identificación. Son ejemplos de esto último los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux), utilizados
para identificar los gérmenes urinarios más importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la
utilización de sustratos cromogénicos específicos.

7) Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de células a partir de un
microorganismo ya aislado. Se emplean en la obtención de vacunas, en la investigación y en la
industria. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. El caldo-infusión
cerebro-corazón (BHI), es un ejemplo típico de estos medios.

8) Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos
interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y
reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiología. En el laboratorio se pueden conservar las
cepas de tres formas:

a) haciendo pases periódicos de placa a placa,

b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana, y

c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0,1%.

9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clínicas que no pueden

sembrarse inmediatamente. Su utilización debe hacerse introduciendo la torunda con la que se
obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Son ejemplos típicos de este
grupo los medios de Stuart, Amies, Cary-Blair, etc.

ATENDIENDO A SU COMPOSICIÓN.

Según las sustancias que entren a formar parte en su composición, los medios de cultivo pueden
ser clasificados en:

1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los más empleados se preparan a partir de
tejidos animales, y más raramente de vegetales. Su composición no es exactamente definida, y por
consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en
condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podrá ser exacta. En la práctica corriente
estos medios dan excelentes resultados y son los más empleados.

2) Medios sintéticos: Son aquellos que contienen en su composición exclusivamente sustancias

químicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un
medio de composición perfectamente definida.

3) Medios semisintéticos: El gran número de factores de crecimiento exigidos para ciertos

gérmenes hace que la fabricación de un medio sintético para estos gérmenes sea imposible o
demasiado cara. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto
orgánico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos gérmenes no crecen en
ningún medio por muy enriquecido que esté éste, haciéndolo exclusivamente en células vivas con
unas características determinadas. Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias,
Rickettsias, etc.

SEGÚN SU ORIGEN:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal
como extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.

b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cualitativa y
cuantitativamente.

c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una
forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

BIBLIOGRAFÍA

Microbiologia medica de Jawetz; Melnick Brooks,Geo F; Manual moderno 2005

Microbiologia medica;PRATS, GUILLEM; Mcgraw hill/ intera (medicina) 2004

Microbiología medica; Murray,Patrick R; Elsevier España 2006

Introducción A La Microbiología; Tortora, Gerard J; Panamericana 2007

Microbiología Clínica; Prats; Panamericana 2006

Imágenes.

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