"AÑO DE LA LUCHA CONTRA LA CORRUPCIÓN E IMPUNIDAD"
UNIVERSIDAD NACIONAL DE BARRANCA
FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
“INVESTIGACIÓN Y RECUENTO DE ENTEROBACTERIACEAE
LACTOSA-POSITIVAS (COLIFORMES)”
DOCENTE:
TOLEDO ACOSTA HECTOR HUGO
ALUMNOS:
QUIROZ CARHUACHIN, ROGGER
GUTIERREZ CALUA, LISBETH ADELA
ONCOY SIFUENTES, LEONELA ANDREA
CURSO:
MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS
BARRANCA - PERÚ
2019
Microbiología de Alimentos
I. Introducción
Las Enterobacteriaceae lactosa-positivas o grupo coli-aerogenes constituyen un grupo de
bacterias que se definen más por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios
taxonómicos. Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su
capacidad para fermentar la lactosa con producción de ácido y gas, más o menos
rápidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubación
comprendida entre 30-37ºC.
En general, niveles altos de Enterobacteriaceae lactosa-positivas (coliformes) indican
manipulación y elaboración deficientes de los alimentos.
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II. Objetivos:
Objetivo General
Realizar métodos de recuento en medio líquido.
Estudiar la presencia de coliformes en muestras de agua.
Objetivos Particulares
Evaluar la producción de ácidos y gases.
Diferenciar microorganismos lactosa positivos de negativos.
Utilizar tablas de lectura de resultados del Número Mas Probable (NMP).
Preparar diluciones decimales.
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III. Marco Teórico
La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del
Número más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo
microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos
a 35°C 1 C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales
biliares. Esta determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase
confirmativa.
En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato
de sodio el cual permite la recuperación de los microorganismos dañados que se
encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa
como fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de
cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el
desarrollo de aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares
como el verde brillante.
La determinación del número más probable de microorganismos coliformes
fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se
fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir
gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 ± 0.1ºC por un periodo de
24 a 48 h.
Finalmente, la búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos
positivos de caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios
selectivos y diferenciales (Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y
posteriormente realizando las pruebas bioquímicas básicas a las colonias típicas.
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IV. Materiales y Equipos
Material por equipo:
3 tubos de ensayos Gradilla Estufa de cultivo
Pipetas estériles Mechero Pinza
Rejilla Fosforo
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Material Biológico (proporcionado por el alumno)
Muestra: agua potable
Reactivos:
Medio de cultivo:
Caldo lactosado biliado verde brillante (Brilliant Green Bile Lactose: BGBL).
Composición:
Peptona 10 g.
Lactosa 10 g.
Bilis de buey 20 g.
Verde brillante 0.0133 g.
Agua destilada 1.000 ml.
Disolver. Ajustar el pH a 7,4. Distribuir en tubos de ensayo con campana
Durham a razón de 10 ml. Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 20 minutos.
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V. Metodología
Campana Durham
Se preparan en una gradilla tres series de tres tubos cada una. Cada tubo contendrá
10 ml. de BGBL.
En cada uno de los tubos de la primera serie, se vierte 1 ml. de la dilución de la
muestra al 1:10.
En cada uno de los tubos de la segunda serie, se vierte 1 ml. de la dilución de la
muestra al 1:100.
En cada uno de los tubos de la tercera serie, se vierte 1 ml. de la dilución de la
muestra al 1:1.000.
Incubar las tres series a 37 °C, haciendo lecturas a las 24 y 48 horas.
La reacción es positiva cuando se produce desprendimiento de gas en la campana
Durham, por lo menos en 1/10 parte de su volumen, como consecuencia de la
fermentación de la lactosa con formación de ácido y gas en presencia de sales
biliares a una temperatura comprendida entre 30 - 37 °C.
Con el número de tubos positivos en cada serie, se recurre a la Tabla del Número
Más Probable (NMP), donde se obtendrá el recuento por gramo o mililitro de
muestra.
Finalmente se obtuvo como resultado los tres tubos positivos, observando que ahí
desprendimiento de gas.
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VI. Resultados
Resultado positivo:
• Turbidez + gas en la campana.
Turbidez:
• Crecimiento.
Gas en la campana:
• Fermentación de la lactosa con formación de ácido y gas.
Lectura usando la tabla NMP
• Recuento de coliformes totales por ml en muestra analizada.
Resultado: > 2.400 / gr
Tubos positivos:
N.º de tubos
1/10 3
1/100 3
1/1000 3
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VII. Conclusión
Los coliformes se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa.
Los coliformes se caracterizan por su producción de ácido y gas.
Se suelen utilizar como índice de contaminación fecal su número en aguas es
proporcional al grado de contaminación fecal.
VIII. Bibliografía:
[Link]
Kornacki J.L. & Johnson J.L. (2001) “Enterobacteriaceae, Coliforms, and
Escherichia coli as Quality and Safety Indicators”. In: Compendium of
Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P.
& Ito K. (Eds.) APHA. Washington. 69-82.
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