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Contenido
LA ESTERILIZACION ................................................................................................................... 2
INTRODUCCION: ........................................................................................................................... 2
OBJETIVOS:..................................................................................................................................... 3
METODOLOGÍAS DE ESTERILIZACIÓN PREPARATIVA ................................................... 3
Autoclave (Calor Húmedo) ........................................................................................................... 3
Tindalización (calor húmedo) ...................................................................................................... 5
Horno Pasteur (calor seco) ........................................................................................................... 5
Flameado (calor seco).................................................................................................................... 6
Filtración ........................................................................................................................................ 6
Filtros de profundidad. ................................................................................................................. 7
Filtros HEPA ................................................................................................................................. 7
Radiaciones .................................................................................................................................... 8
Esterilizantes gaseosos .................................................................................................................. 8
METODOLOGÍAS DE ESTERILIZACIÓN FINAL ................................................................... 9
CONTROL DE LA ESTERILIZACIÓN ........................................................................................ 9
CONCLUSIÓN Y DISCUSIÓN..................................................................................................... 10
Bibliografía ........................................................................................................................................ 11
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LA ESTERILIZACION
INTRODUCCION:
La esterilización es un mecanismo por el que se consigue la muerte o eliminación de todos
los microorganismos vivos de una muestra, medio, superficie o material de trabajo. Entre
los microorganismos vivos se incluyen bacterias, hongos, protistas, virus y sus formas de
resistencia. quedan libre de microorganismos incluyendo sus formas de resistencia
La esterilización se consigue generalmente por métodos físicos y excepcionalmente por la
aplicación de compuestos químicos. Entre los métodos físicos más comunes está la aplicación
de calor (calor húmedo o calor seco), la filtración o las radiaciones. La esterilización sin
embargo también se puede conseguir mediante la aplicación de algunos productos químicos,
como el óxido de etileno, formaldehído o glutaraldehído. (Novais, 2010)
En el laboratorio de Microbiología la esterilización se puede utilizar como esterilización
preparativa o como esterilización final.
La esterilización preparativa es la que se realiza para mantener libre de
microorganismos el material que vamos a utilizar antes de empezar el trabajo en sí
mismo o durante el proceso de trabajo (placas Petri, pipetas, medios de cultivo, asas
de siembra, hisopos, etc.).
La esterilización final, tiene como único fin destruir los microorganismos con los que
se ha estado trabajando. En el primer caso, la elección del proceso se debe adecuar
para preservar las características de los diversos materiales a esterilizar, pues algunos
pueden ser susceptibles de ser destruidos, durante los mecanismos de esterilización.
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OBJETIVOS:
Comprender el proceso de esterilización de materiales, referido a la prevención y control de
Infecciones Asociadas a la Atención de Salud.
METODOLOGÍAS DE ESTERILIZACIÓN PREPARATIVA
La esterilización preparativa o final se puede realizar, como se ha indicado por mecanismos
físicos o químicos El mecanismo físico más utilizado es el calor, ya sea húmedo o seco. Sin
embargo, cuando estas metodologías físicas no son aplicables, por las características del
material o medio a esterilizar, la filtración o la radiación son los mecanismos a elegir.
Excepcionalmente y sobre todo en aplicaciones a material de uso sanitario, donde no se
pueden utilizar las metodologías ya reseñadas, se utiliza generalmente algún tipo de
esterilización fría. La esterilización fría se lleva a cabo en dispositivos cerrados donde se
emplea un agente químico gaseoso, como el óxido de etileno, el formaldehído o líquidos
como el glutaraldehído.
Agente esterilizante Equipo
Calor húmedo Autoclave
Calor seco Horno pasteur
Mechero
Filtración Filtros Membrana
Equipos Filtración
Filtro HEPA
Radiación Fuente Rayos gamma
Fuente Rayos x
Oxido etileno Cámara
Glutaraldehido Cámara
Autoclave (Calor Húmedo)
El calor húmedo por medio de utilización de vapor de agua es el agente esterilizante más
frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye eficazmente los microorganismos por
desnaturalización de proteínas y enzimas, y desestabilización de membranas. La
esterilización con calor húmedo, se utiliza principalmente con la autoclave.
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La autoclave, constituido por una caldera, que se puede cerrar herméticamente con una tapa
metálica y que presenta una resistencia eléctrica en su interior (antiguamente por gas) que
calienta el agua. Este aparato permite que en el interior de la caldera se desplace el aire por
una válvula de purga, dejando que se acumule posteriormente vapor saturado a presión, que
alcanza temperaturas superiores a los 100ºC sin que se produzca ebullición
El material a esterilizar se introduce en el interior de la cámara, se somete al vapor de agua
con sobrepresión hasta alcanzar temperaturas adecuadas para la eliminación de los
microorganismos y todas las formas de resistencia, sin que se produzca ebullición de los
medios líquidos. Las temperaturas y los tiempos de exposición pueden variar dependiendo
del material a esterilizar.
Actualmente, los autoclaves controlan automáticamente la temperatura, la presión y el
tiempo de exposición, para esto están provistos de un manómetro que permite regular la
presión y por lo tanto la temperatura, y un temporizador que permite ajustar el tiempo de
exposición automáticamente, El equipo suele incluir además una válvula de seguridad.
La autoclave se puede utilizar para la esterilización de medios de cultivo ya sean sólidos
(agares) o líquidos, soluciones, material de vidrio, gomas o ciertos tipos de plásticos
(policarbonato o polipropileno), acero inoxidable y también material de trabajo como ropas,
algodón, gasas, etc. También es un mecanismo que se utiliza para esterilización final de
medios de cultivo. (Lewis,2002)
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Tindalización (calor húmedo)
La tindalización es un método de esterilización fraccionada con calor que se aplica para
esterilizar materiales y medios de cultivo termosensibles, que no pueden someterse a
temperaturas superiores a los 100ºC. La denominación de este proceso es un homenaje al
físico que describió formas bacterianas con una elevada resistencia al calor, diseñando esta
metodología para su eliminación. Actualmente el proceso de tindalización se lleva a cabo en
autoclave con la válvula abierta de modo que no se produzca sobrepresión y por lo tanto, no
se alcanzan temperaturas superiores a las de ebullición (100ºC).
Horno Pasteur (calor seco)
La esterilización puede llevarse a cabo mediante calor seco y en este caso se realiza en una
estufa denominada horno Pasteur, en cuyo interior se disponen los materiales que van a ser
esterilizados debidamente protegidos con papel satinado, o en contenedores especiales para
evitar la contaminación ambiental una vez finalizado el proceso y hasta su utilización. La
destrucción microbiana se produce por oxidación de los componentes celulares y
desnaturalización de proteínas. Este es un proceso menos eficaz por la ausencia de agua y
por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los tiempos de exposición.
El horno Pasteur se utiliza para esterilizar productos u objetos de porcelana o vidrio como
pipetas, probetas, embudos, y generalmente aquellos materiales metálicos que no se pueden
esterilizar en autoclave por problemas de corrosión y también fluidos oleaginosos. En general
material o medios que resisten las temperaturas más elevadas que se utilizan en este aparato.
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Flameado (calor seco)
La esterilización rápida durante los procedimientos de trabajo en microbiología se realiza
por flameado, mediante la exposición directa y breve de los materiales a la llama de un
mechero. Este procedimiento está especialmente indicado para la esterilización de agujas y
asas de siembra, o para la boca de los tubos y matraces, ya estériles o con cultivos, durante
los procedimientos habituales de manipulación de microorganismos y/o medios estériles.
Filtración
Las aplicaciones de la esterilización por filtración son diversas en el campo de la
microbiología, se puede aplicar para eliminar microorganismos de soluciones, fluidos o gases
o para la esterilización del ambiente de trabajo, en todos los casos los microorganismos no
son destruidos, sino que son retenidos físicamente o adsorbidos por los filtros con un tamaño
de poro adecuado. El tamaño de poro que se considera en la actualidad esterilizante es el de
0,22 m aunque más recientemente se tiende a la utilización de poros de 0.1 m Se describen a
continuación los tipos de filtros más utilizados y sus aplicaciones más relevantes. (JORNITZ,
2006)
Previamente a la filtracion se debe esterilizar todo el equipo que va a estar en contacto con
la solución a esterilizar, como el soporte y embudo para filtros y el kitasato que recibirá el
medio estéril. Todo este material puede ser de vidrio o de policarbonato o polietileno
esterilizables.
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Mecanismo de filtración de volúmenes grandes. A. Filtros sin esterilizar. B. Filtros estériles
por radiación gamma. C Soporte para filtros. D. Bomba de vacío.
Filtros de profundidad.
Son columnas de materiales fibrosos o porosos (tierra de diatomeas, lana de vidrio, materiales
cerámicos porosos) que permiten retener las partículas, en este caso microorganismos y que
normalmente se utilizan para la esterilización de gases o como prefiltros para otros filtros
esterilizantes. Los filtros de seguridad son importantes para las aplicaciones de bioseguridad.
Estas pueden desarrollarse en una cabina de seguridad biológica con flujo de aire que pasa
previamente a través de un filtro de profundidad llamado filtro de aire particulado de alta
eficacia (HEPA).
Filtros HEPA
Buena parte de las manipulaciones propias de la microbiología deben realizarse en
condiciones de esterilidad total para evitar la contaminación de los medios o cultivos y la
seguridad de los trabajadores, para ello se usan las cabinas de seguridad biológica con flujo
de aire campanas o cámaras de flujo laminar, se trata de equipos que crean un área de trabajo
libre de partículas contaminantes, pasando el aire ambiente a través de filtros y produciendo
un flujo laminar sobre la zona de trabajo que provoca una presión positiva constante que
previene la infiltración de aire contaminado y se mantiene así la zona en esterilidad.
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Las cámaras suelen estar provistas además de lámparas UV que mantienen el interior estéril,
mientras no se utilizan, o inmediatamente antes de su uso. Externamente suelen presentar
unos indicadores con las horas de utilización (para el control de la vida útil del filtro HEPA),
luz ultravioleta, luz visible, etc.
Radiaciones
Las radiaciones de distinto tipo se utilizan también en microbiología con la finalidad de la
esterilización La más utilizada en el laboratorio de microbiología es la radiación ultravioleta
(UV) de una longitud de onda de unos 260 nm. Aunque suele ser poco eficaz debido a su
escaso poder de penetración en los materiales, tales como vidrio, agua, películas de suciedad,
sin embargo, es muy útil para esterilizar el aire y las superficies, así, se suelen colocar en
cabinas de flujo laminar, en habitaciones estériles, quirófanos, etc.
Esterilizantes gaseosos
fase gaseosa generalmente. Entre estos compuestos ya hemos mencionado el óxido de etileno
o el formaldehído. Estos suelen utilizarse para esterilizar materiales sensibles al calor o que
no pueden someterse a radiaciones. Sus aplicaciones suelen darse en la industria farmacéutica
o en medicina. El compuesto más utilizado es el óxido de etileno, que actúa por medio de su
actividad alquilante sobre los hidrógenos lábiles en ácidos nucleicos y otras macromoléculas,
inactivándolas.
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METODOLOGÍAS DE ESTERILIZACIÓN FINAL
Su finalidad es destruir los microorganismos con los que se ha trabajado y descontaminar el
material utilizado antes de que sea desechado. Generalmente se hace por calor húmedo en
autoclave, o por incineración.
Cuando se utiliza el calor húmedo en autoclave, por ejemplo, a 121ºC, durante 20 minutos;
la temperatura y tiempo de elección son irrelevantes, siempre que sean esterilizantes, ya que
las precauciones para evitar la alteración de medios de cultivo y materiales en este caso, ya
no tienen importancia.
CONTROL DE LA ESTERILIZACIÓN
Los procesos de esterilización deben disponer de sistemas o mecanismos que nos permitan
garantizar y controlar que el proceso se ha realizado con éxito. Existen diferentes
mecanismos para ello:
Sistemas de control físico. Lo más básico es el control mecánico de las temperaturas (sensor
de temperatura) que permita realizar un registro de las temperaturas alcanzadas en el interior
durante todo el proceso. Son sistemas requeridos en los laboratorios acreditados.
Sistemas de control químico. Son habitualmente sistemas constituidos por cintas adhesivas
impregnadas en compuestos químicos termosensibles, sensibles a radiaciones o al óxido de
etileno que cambian de color si el proceso se ha desarrollado de forma correcta, es decir, si
se ha alcanzado la temperatura adecuada, si ha sido irradiado, o si ha estado expuesto a óxido
de etileno. Estás tiras se adhieren al material a esterilizar de forma que el cambio de color
supone una garantía de la temperatura alcanzada. Se utiliza de forma rutinaria en los
laboratorios de microbiología
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Cinta adhesiva termosensible para el control de esterilización por calor.
Sistemas de control biológico. Se refieren a la utilización de microorganismos o esporas
resistentes a distintos procesos de esterilización, como temperaturas elevadas, óxido de
etileno, etc. Estas bacterias vienen preparados en tiras impregnadas o en suspensiones en
ampollas cerradas que se exponen al proceso de esterilización, por ejemplo, en autoclave,
junto con el material que se va a esterilizar. Una vez finalizado el proceso, se cultiva el
microorganismo en las condiciones habituales en microbiología. La ausencia de crecimiento
después de un tiempo prudencial de incubación en las condiciones adecuadas significa que
el proceso de esterilización es correcto. Para este fin se suele trabajar con bacterias que
forman endosporas por su especial característica de resistencia (especialmente
termorresistencia) a distintos procesos de esterilización.
CONCLUSIÓN Y DISCUSIÓN
Al someter cada uno de los materiales de laboratorio a su respectivo método de esterilización
se obtuvo la destrucción completa y una posterior inhibición de los microorganismos
presentes, obteniendo como resultados materiales completamente desinfectados.
Para evitar cualquier tipo de contaminación podemos utilizar diferentes técnicas de
esterilización que garanticen una completa eliminación de agentes patógenos Presentes en
los materiales utilizados en la práctica de laboratorio
Un aspecto importante a tener en cuenta con los microorganismos es conocer la naturaleza
de estos para saber cuál es el método que favorece su eliminación; de esa manera podemos
obtener muestras con alta confiabilidad
Y también Es importante para la protección de cada uno de nosotros es esta ocasión se
emplea principalmente la esterilización para eliminar microorganismos de los elementos de
trabajo evitando así la contaminación de la muestra, recipientes y materiales de trabajo
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Bibliografía
JORNITZ, M. y. (2006). Filtración en la industria biofarmacéutica. Obtenido de
[Link]
ml?id=Bon3-BuHa2EC&redir_esc=y
Novais, J. A. (2010). Metodología de esterilización en el laboratorio microbiológico. Obtenido de
[Link]
Lewis, R.E. 2002. Practical guide to autoclave validation. Pharmaceutical Engineering. ISPE 2002.
[Link]
